Name: 약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼 In Vivo 및 체외에서 실험 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 학습하세요 Er-Xian 달임법과 혈청 제조법을 통해 골 형성 촉진 효과를 평가하는 방법을. 이 프로토콜은 전통 한약의 표준화된 실험 적용을 가능하게 합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (81573992)의 지원을 받았다. 그들의 언어 편집 지원에 대해 Emily K. Lo와 Kathleen DiNapoli에게 감사드립니다.

이 프로토콜은 상하이 한의대의 동물 관리 지침을 따르며 동물 실험 상하이 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 1. 프로토콜 I : EXD 준비 <ol><li> 계산 <ol><li> EXD를 6 주령의 ICR (female Imprinting Control Region) 마우스 (0.02 kg / mouse) 10 마리의 치료 그룹에 12 주 동안 주 5 회 투여하십시오. 참고 : 총 1.702 EXD가 필요합니다. EXD는 개별 증분으로 측정되기 때문에 실제로는 2 개의 EXD를 관리해야합니다. </li><li> 마우스 당 EXD 부피를 계산하십시오 ( 예 : V = (0.1418 EXD / kg • 일) * (0.02 kg / 마우스) * 50 mL / EXD = 0.14 mL / 마우스 • 일). </li></ol></li><li> 몸을 담그다 <ol><li> 두 가지 EXD ( 즉, Curculigo orchioides Gaertn (18g), Herba Epimedii (18g), Radix Morindae Officinalis (18g), RAdix Angelicae Sinensis (18g), Cortex Phellodendri (12g), Rhizoma Anemarrhenae (12g), 총 96g)를 뚜껑이 달린 용기에 넣습니다. 참고 : 세라믹 용기를 사용하는 것이 좋습니다. </li><li> 생 약초를 500 mL의 증류수로 1 시간 동안 담그고; 물은 허브를 약 1 인치까지 덮어야합니다. 모든 허브가 완전히 흡수되도록하십시오. </li></ol></li><li> 첫 번째 물 추출 <ol><li> 물이 끓을 때까지 (약 5 ~ 10 분, 시간은 가열 력, 용기 및 허브와 물의 양에 따라 달라질 때까지) 가스 밥솥이나 고주파 밥솥을 사용하여 약초를 가열하십시오. 2 시간 동안 낮은 끓는 물로 전원을 끕니다. </li></ol></li><li> 첫 번째 여과 <ol><li> 일반 여과지 또는 거즈와면을 사용하여 500mL 유리 비이커를 덮으십시오. 조심스럽게 필터를 통해 비누에 달걀을 붓습니다. 컨테이너에 허브를 남겨주세요. </li><li> 남은 허브 잔여 물을 반환하십시오.용기에 걸러진 여과지. </li></ol></li><li> 2 차 수분 섭취 <ol><li> 허브와 함께 증류수를 용기에 넣으십시오. 약 1 인치 정도의 약초를 가려야합니다. </li><li> 단계 1.3을 반복하십시오. </li></ol></li><li> 2 차 여과 <ol><li> 1.4.1 및 1.4.2 단계를 반복하십시오. </li><li> 같은 비이커에 두 번째 달인을 붓는다. 첫 번째와 두 번째 즙을 함께 섞는다. </li></ol></li><li> 집중 <ol><li> 비누를 사이에 석면이없는 철제 거즈가 달린 가스 밥솥에 올려 놓고 낮은 끓인 물로 가열하고 천천히 연속적으로 유리 막대로 저어 준다. </li><li> 달임이 200 mL로 줄어들면 500 mL 비이커로 옮긴다. </li><li> 달여가 100 mL가 될 때까지 1.7.1 단계를 반복하십시오. </li></ol></li><li> 보관 및 관리 <ol><li> 농축 된 달걀을 멸균 유리 병에 옮기십시오. 그것은 room temperatu로 식도록 내버려둬 라.re (RT). 장기간 보관할 경우 1 주일 이내에 -70 ° C에서 사용하는 경우 4 ° C에서 보관하십시오. </li><li> 위관 (gavage) 바늘을 사용하여 1 일 1 회, 12 주 동안 1 주일에 1 회, 난소 절제 (OVX) 마우스에 0.14 mL / 마우스 췌장을 투여하십시오. </li></ol></li></ol> 2. 프로토콜 II : EXD 함유 세럼의 제조 <ol><li> 계산 <ol><li> 각 쥐 ​​(1 개월)의 체중으로 0.15 kg을 사용하여 쥐 - 등가 선량 (RED)을 계산하십시오 : dB = (1/60) * (90/100) * (60 / 0.15) 1/3 = 0.111 EXD / kg / 일. 참고 : 100 mL의 배지 (10 % EXD 함유 혈청)를 준비하기 위해 총 10 mL의 EXD 함유 혈청이 필요합니다. 각 쥐는 2 mL의 혈청을 제공해야합니다. 따라서 하루 3 회 EXD 투여를 위해서는 6 마리의 쥐 (20 %의 손실을 감안)가 필요합니다. EXD의 수는 다음과 같습니다 : (0.111 EXD / kg • day) * (0.15 kg / rat) * (6 마리) * (3 일) = 0.300 EXD. 다시, EXD는 이산 증분으로 측정되기 때문에,1 EXD를 사용하십시오. </li><li> 쥐 ( 즉, V = (0.111 EXD / kg • day) * (0.15 kg / rat) * (50 mL / EXD) = 0.83 mL / rat • day) 당 적용된 EXD의 부피를 계산합니다. </li></ol></li><li> 몸을 담그다 <ol><li> 1 EXD 용 원료를 뚜껑이 달린 용기에 넣으십시오. 생약을 증류수에 1 시간 동안 담가 두십시오. 물은 허브를 약 1 인치까지 덮어야합니다. 모든 허브가 완전히 흡수되도록하십시오. </li></ol></li><li> 첫 번째 물 추출 <ol><li> 물이 끓을 때까지 고전력의 유도 밥솥을 사용하여 약초를 가열하십시오 (약 5 ~ 10 분, 시간은 화력, 용기 및 허브와 물의 양에 따라 다릅니다). 2 시간 동안 낮은 끓는 물로 전원을 끕니다. </li></ol></li><li> 첫 번째 여과 <ol><li> 일반 여과지 또는 거즈와면을 사용하여 500mL 유리 비이커를 덮으십시오. 조심스럽게 필터를 통해 비누에 달걀을 붓습니다. 컨테이너에 허브를 남겨주세요. </li><li&gt; 여과지에있는 생약 잔여 물을 용기에 넣으십시오. </li></ol></li><li> 2 차 수분 섭취 <ol><li> 허브와 함께 증류수를 용기에 넣으십시오. 약 1 인치 정도의 약초를 가려야합니다. </li><li> 2.4 단계를 반복하십시오. </li></ol></li><li> 2 차 여과 <ol><li> 2.5.1 및 2.5.2 단계를 반복하십시오. </li><li> 두 번째 달인을 2.4.1 단계에서와 같은 비이커에 붓고 첫 번째와 두 번째 데오스를 함께 섞는다. </li></ol></li><li> 집중 <ol><li> 비누를 사이에 석면없는 철사 거즈가 달린 가스 밥솥에 올려 놓고 낮은 끓인 물로 가열하고 유리 막대로 천천히 연속적으로 저어 준다. </li><li> 달이기가 100 mL가 될 때까지 100 mL 비이커에 옮긴다. </li><li> 달임이 50 mL가 될 때까지 2.7.1 단계를 반복하십시오. </li></ol></li><li> 보관 및 관리 <ol><li> 농축 된 달걀을 증기로 옮기십시오.ile 유리 병입니다. 그것을 RT로 식히자. 장기간 보관할 경우 1 주일 이내에 -70 ° C에서 사용하는 경우 4 ° C에서 보관하십시오. </li><li> 1 일 1 회, 0.83 mL / 래트를 3 일간 위내에 투여한다. </li></ol></li><li> EXD 함유 혈청 제제 <ol><li> EXD의 마지막 투여 후 1 시간에 300mg / 100g의 80mg / kg ketamine과 10mg / kg xylazine을 복강 내 주사하여 쥐를 마취시킨다. 발끝으로 적절한 마취를 확인하십시오. </li><li> 메스를 사용하여 쥐의 피부와 복막을 복부에서 흉부 바닥으로 절개하십시오 (또는 가위를 똑바로 세우십시오). 각각 약 5cm와 0.5cm의 길이와 깊이의 절개를 만듭니다. 티슈 페이퍼를 사용하여 복부 내장을 왼쪽으로 움직입니다. </li><li> 휴지를 사용하여 복부 대동맥의 결합 조직을 제거하여 혈관을 명확하게 노출시킵니다. </li><li> 10 ML, 22 게이지 주사기를 사용하여 복부 대동맥에서 천천히 혈액을 그리십시오. 전송 대상 :바늘을 제거한 후 15mL 멸균 튜브; 한 마리의 쥐가 8-10 mL의 혈액을 생산할 수 있습니다. 참고 : 쥐는 혈액이 채워지기 시작할 때 ( 즉, 복부 대동맥이 맥박이있는 상태에서) 살아 있어야합니다. </li><li> 방 RT에서 30-60 분 동안 똑바로 세워 혈액을 채 웁니다. 20 분 동안 500-600 XG에서 원심 분리기. 조심스럽게 모든 상등액 (혈청)을 50 mL 멸균 튜브 1 개에 넣고 여러 동물의 모든 혈청을 함께 섞으십시오. </li><li> 30 분 동안 56 ° C 수조에서 혈청을 배양하여 열 불 활성화를 수행하십시오. 0.22 μm의 공극 크기의 친수성 폴리 에테르 설폰 막을 가진 주사기 필터를 사용하여 혈청을 여과합니다. 신선한 혈청을 사용하거나 -20 ° C에서 보관하십시오. </li></ol></li><li> 대조군 약물 함유 혈청 제제 (대조군에서 사용) <ol><li> 1 일 1 회 3 일 동안 동일한 용량의 생리 식염수 (0.83 mL)로 각 랫트를 투여하십시오. 다른 단계는 2.9 단계와 동일합니다.</li></ol></li><li> 신청 <ol><li> EXD 함유 혈청 또는 약물 함유 혈청 10 mL를 각 100 mL의 배지에 첨가하고 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 (PS) 23을 첨가합니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+in+vitro+effects+and+interactions+of+active+fractions+in+a+Chinese+medicinal+formula+%28Yaotongning+Capsule%29+on+rat+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes.</a> J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).</li>
<li>Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+seven+crude+drug+components+in+the+sleep-promoting+effect+of+Yokukansan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan.</a> J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).</li>
<li>Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Medicinal+Categorization+of+Atractylodes+japonica+Koidz.+by+Using+Internal+Transcribed+Spacer+Sequencing+Analysis+and+HPLC+Fingerprinting+Combined+with+Statistical+Tools%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819(2016).</li>
<li>Sheridan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+metabolic+fingerprinting+as+a+tool+for+the+modernisation+of+TCM+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations.</a> J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).</li>
<li>Planas, G. M., Kucacute, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17744732">Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana.</a> Science. 162 (3857), 1007(1968).</li>
<li>Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).</li>
<li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).</li>
<li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439(2016).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism%3A+Erxian+Decoction%2C+a+Chinese+medicine+formula%2C+for+relieving+menopausal+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome.</a> J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Erxian+decoction%2C+a+Chinese+medicinal+formulation%2C+on+serum+lipid+profile+in+a+rat+model+of+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause.</a> Chin Med. 6, 40(2011).</li>
<li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+double-blind%2C+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+%28Er-Xian+decoction%29+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women%5BTitle%5D)+AND+%22Menopause%22%5BJournal%5D)">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li>
<li>Wang, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+effect+of+Erxian+decoction+for+relieving+menopause+via+the+p-Akt%2FPKB+pathway+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo.</a> J Ethnopharmacol. , (2016).</li>
<li>Lin, L., Wu, S., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+and+experimental+study+of+the+treatment+of+aplastic+anemia+by+warming+and+tonifying+the+spleen+and+kidney%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney].</a> Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).</li>
<li>Nian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+activity+of+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats.</a> J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+chemical+constituents+from+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula.</a> J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+HNMR-based+metabonomics+study+of+postmenopausal+osteoporosis+and+intervention+effects+of+Er-Xian+Decoction+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats.</a> Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).</li>
<li>Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+of+bushen+er%27xian+decoction+in+treating+premature+ovarian+failure%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation of bushen er'xian decoction in treating premature ovarian failure].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-angiogenic+activity+of+Erxian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish.</a> Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).</li>
<li>Chu, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+the+antimetastatic+effects+of+a+Chinese+medicinal+decoction%2C+erxian+decoction%2C+on+human+ovarian+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models.</a> Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).</li>
<li>Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+intervening+early+in+hypothalamic-pituitary+axis+of+male+rats+with+delayed+puberty%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogn+Mag%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty.</a> Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).</li>
<li>Miao, M. S. Experimental animals and technology. 1997, Chinese Modical Publisher. Beijing. 145(1997).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction+Stimulates+Osteoblastic+Differentiation+of+Bone+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Ovariectomized+Mice+and+Its+Gene+Profile+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis.</a> Stem Cells International. 2016, 4079210(2016).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+seven+flavonoids+in+dog+plasma+by+ultra-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+its+application+to+a+bioequivalence+study+of+bioactive+components+in+Herba+Epimedii+and+Er-Xian+Decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction.</a> J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).</li>
<li>Hu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+major+chemical+constituents+and+their+metabolites+in+rat+plasma+and+various+organs+after+oral+administration+of+effective+Erxian+Decoction+%28EXD%29+fraction+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Chromatogr%22%5BJournal%5D)">Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+interaction+of+icariin%2C+curculigoside%2C+and+berberine+in+er-xian+decoction%2C+a+traditional+chinese+medicinal+formula%2C+on+osteoclastic+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption.</a> Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Basic+Clin+Pharm%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li>
<li>Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).</li>
<li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors%27+expression+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).</li>
<li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BEffect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood%2C+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li>
<li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK%2FSTAT+signaling+of+HSC-T6+cells%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Gan+Zang+Bing+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li>
<li>Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).</li>
<li>Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).</li>
<li>Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li>
</ol>

저자는 경쟁적인 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

최근 몇 년 동안 동부 지역의 임상 환경에서 수천 년 동안 적용 되어온 대체 의학의 한 유형 인 한약에 많은 관심이 쏟아졌습니다. 전통적인 약초 의학은 현대 의학의 &quot;벤치에서 침대로&quot;패턴과는 달리 처음에는 &quot;bed to bench&quot;패턴을 통해 자신의 메커니즘을 설명해야합니다. 이것은 벤치 단계에서 수행 된 검증과 새로 최적화 된 약물의 개발을위한 처리에 이어 수행 될 수 있습니다. 지금까지 전체 수식이나 허브에서 활성 성분을 방출하는 것으로보고 된 몇 가지 추출 방법이 있습니다. 그 중에서도 물 추출이 가장 널리 사용됩니다. 한약의 물 추출에는 4 가지 기본 단계가 있습니다. 첫 번째 단계는 몸을 담글 수 있습니다. 복잡한 한약은 물에서 일정 시간 (일반적으로 0.5 ~ 1 시간) 침수됩니다. 담그는 시간은 원료 약초의 양과 특성에 달려 있습니다. 에생 약초가 완전히 적셔 졌는지 확인하십시오. 모든 조각이나 블록의 중앙 부분을 가려야합니다....

전통적인 약초의 연구와 응용에 대한 관심이 현재 커지고 있습니다. 화학 성분이 확실한 현대 의약품과는 달리, 허브 성분에는 미지 성분이 포함되어 있으며 활성 성분을 전달할 수 있도록 추출 과정이 필요합니다. 많은 연구가 잘 알려진 구조를 가진 하나의 작은 화합물을 전체 약초 또는 허브 공식의 대표자로 선택하려고 시도하지만 약리학 적 효능이나 메커니즘은 동등한 것으로 간주 될 수 없다. 핑거 프린팅 (fingerprinting)은 복잡한 허브 수식의 구성 성분을 분석 할 수 있지만, 일부 성분은 아직 명확하게 분석되지 않아 연구 3에서 모든 추출물을 결합 할 때 어려움을 겪습니다. 수많은 성분 / 추출물의 상호 작용은 약초의 치료 효과를 중재합니다. 이러한 장점을 유지하기 위해 전통적인 추출물 형태이온은 여전히 ​​클리닉에서 널리 사용됩니다. 추출 과정은 치료 효능에 큰 영향을 미치기 때문에, 특히 생체 내 연구 4,5 에서 전통적 물 추출법의 표준 프로토콜이 필요합니다. 반면에, 약리학 적 기작을 탐색 할 때, 생체 외 또는 생체 외 연구 중에 약초를 처치하는 것은 도전 과제입니다. 약물 함유 혈청의 개념은 1988 년 Tashino에 의해 처음 제안되었다. 그 이후로 점점 많은 연구자들이 한약 7 , 8 , 9 에 그것을 적용 해왔다. 약물 함유 혈청의 방법은 혈청의 특정 성분의 영향과 같은 몇 가지 제한이 있지만, 여전히 생리 학적 조건을 밀접하게 모방하는 방법으로 간주됩니다. 10 , 11 , 12 , 13 을 완화하기 위해 1950 년대 초에 개발되었습니다. 또한 재생 불량성 빈혈 14 , 폐경기 골다공증 15 , 16 , 17 , 조기 난소 부전 18 , 유방암 19 , 난소 암 20 및 사춘기 지연 21에도 적용 되었습니다. 여기, 우리는 에르 - 시안 (erxian) 추출 (EXD)과 그 약물 함유 혈청의 제조를위한 상세한 프로토콜을 제시합니다. 또한 폐경기 골다공증 모델에 EXD 및 EXD를 함유 한 혈청을 적용하는 방법을 설명합니다. EXD는 Curculigo orchioides Gaertn , Herba Epimedii </eRadix Morindae Officinalis , Radix Angelicae Sinensis , Cortex Phellodendri 및 Rhizoma Anemarrhenae 각각 6 g을 하루에 성인 1 인당 투여한다. 마우스의 등가 선량은 다음 식 22 에 따라 0.1418 EXD / kg / day입니다. dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . dA와 dB는 각각 사람과 마우스의 체중 당 투여 량 (mg / kg)을 의미합니다. 용량 (mg / kg)은 EXD / kg의 수로 대체됩니다. RA와 RB는 각각 신체 표면적 (m 2 ) / 체중 (kg) 2/3 ( 표 1 참조)에 비례하는 인간 신체 계수와 마우스 몸 계수를 나타냅니다. WA 및 WB는 각각 사람 ​​및 마우스의 체중 (kg)을 나타낸다.

<table><tbody><tr><td>Curculigo orchioides Gaertn (9&thinsp; g), Herbaa Epimedii (9&thinsp; g), 기수 Morindae Officinalis (9&thinsp; g), Radix Angelicae Sinensis (9&thinsp; g), Cortex Phellodendri (6&thinsp; g), Rhizoma Anemarrhenae (6&thinsp; g)</td> <td>Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co., Ltd (Shanghai, CN)</td> <td>160922</td><td>EXD 구성 요소</td></tr><tr><td>여과지</td><td>GElifesciences</td><td>99-103-952</td><td>필터 EXD 달인 농도</td></tr><tr><td>각인 제어 영역 (ICR) 마우스</td><td>상하이 실험실 동물 센터</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>생체 내 연구</td></tr><tr><td>Sprague Dawley 쥐</td><td>상하이 실험실 동물 센터</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>EXD 함유 혈청 제제</td></tr><tr><td>주사기 필터</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>0.22 &micro; m</td></tr><tr><td>gavage 바늘 (10 ml)</td> <td>상하이 BO Ge 무역 영업 부서</td><td>59104274</td><td>EXD</td></tr><tr><td>케타민 (80 mg / kg) 관리&nbsp;</td><td>Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td><td>H35020148</td><td>마취</td></tr><tr><td>자일라진(10mg/kg)</td> <td>Sunway Pharma Co. Ltd</td><td>CB07591</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>Dulbecco' Eagle'의 변형 s 배지 Dulbecco (DMEM) 배양 배지</td><td>Gibco</td><td>12800-116</td><td>DMEM, 2mM L-글루타민 및 리보뉴클레오티드 미함유</td></tr><tr><td>스트렙토마이신</td><td>Sigma</td><td>1277</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr><tr><td>페니실린</td><td>시그마</td><td>4687</td><td>100 &마이크로; G / ml</td></tr></tbody></table>

약초의 준비 : er-xian의 달임과 er-xian 함유 세럼<em&gt; in vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

임상 약제로 사용되는 대체 의학 인 한약은 최근 몇 년 동안 주목을 받아 왔습니다. 인체에 전달하기 전에 원료 약초에서 활성 성분을 방출하기 위해 일반적으로 추가 추출 절차가 필요합니다. 수분 섭취는 여전히 임상 환경에서 광범위하게 사용되는 고전적인 추출 과정입니다. 여기에서는 실험적 연구에 약초 즙을 적용하기 위해 erxian decoction (EXD)에 대한 상세한 프로토콜을 제안합니다. EXD의 4 가지 주요 단계 (수적, 수분 섭취, 여과 및 농축)뿐만 아니라 동물에 적합한 용량의 계산이 기술되어있다. 또한, 혈청 함유 EXD는 생체 외 검증을위한 수단으로 쥐에게 도입됩니다. 여기에 쥐에게 EXD를 3 일간 경구 투여 하였다. 혈액 샘플을 채취하고, 불 활성화시키고, 원심 분리하고, 여과시켰다. 배양 배지로 희석 된 혈청은 세포 또는 조직 을 vitro. 예를 들어, EXD는 in vivo 및 in vitro 연구에 모두 적용되었으며 EXD가 골 형성을 향상시키는 것으로 나타났습니다. 이 프로토콜은 약초의 제조 및 응용에 대한 참고 자료로 사용할 수 있습니다.

EXX가 OVX 마우스의 골밀도에 미치는 영향 요추 척수 절편의 Hematoxylin과 eosin (H &amp; E) 염색은 OVX 군 ( 그림 1A , 왼쪽 패널)과 비교하여 생체 내 EXD 치료 후 증가 된 골소주 ( 그림 1A , 오른쪽 패널)를 보여줍니다. 그림 1B 는 OVX 마우스 ( 그림 1B , 왼쪽 패널)와 EXX 치료 12 주 ( 그림 1B , 오른쪽 패널) OVX 마우스의 4 번째 요추의 대표적인 μCT 이미지를 보여줍니다. EXD 처리 된 마우스의 요추 내에서보다 많은 골질 뼈가 대조 OVX 마우스의 것보다 많이 보인다. μCT 영상에서 얻은 데이터는 제 4...

여기에서는 4 가지 단계 (담금질, 달인, 여과 및 농축)의 erxian decoction (EXD) 준비 과정을 제시하고 준비된 EXD 함유 혈청을 쥐에게 투여하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 생약과 생체 외 연구에 적용 할 수 있습니다.

약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em&gt; In Vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

본 절차의 전반적인 목적은 체내(in vivo) 및 체외(in vitro) 응용을 위해 전통 중약인 이현탕(er-xian decoction)을 조제하는 것입니다. 이 방법은 전통 중약의 조제 및 응용에 관한 한방 의학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 수성 추출 단계가 임상 환경에서 사용되는 방식과 유사하다는 점입니다.단일 회분의 이선탕(er-xian decoction) 조제에 필요한 원료를 뚜껑이 있는 용기에 넣고, 약재가 약 1인치 정도 잠길 만큼의 증류수를 추가합니다. 용기의 뚜껑을 닫고 약재를 1시간 동안 침전시킵니다. 그 후 가스레인지의 강불을 사용하여 물이 끓을 때까지 약재를 가열합니다.화력을 낮추어 약불에서 뭉근히 끓이며 허브를 2시간 동안 전탕합니다. 1차 수전탕이 끝나면 500-milliliter 유리 비커를 거즈와 솜으로 덮고, 필터를 통해 전탕액만 비커에 조심스럽게 붓습니다. 필터 종이에 남은 허브 찌꺼기를 다시 용기에 넣고, 허브가 완전히 잠긴 후 위로 1인치가 더 올라올 정도로 충분한 양의 신선한 증류수를 추가합니다.방금 시연한 것과 같이 두 번째 물 전탕을 마친 후, 전탕액을 1,000-milliliter 비커에 여과하고, 석면이 없는 와이어 가우즈 가스로 덮인 가스레인지 위에 비커를 올립니다. 유리 막대를 사용하여 용액을 천천히 그리고 지속적으로 저어주면서 전탕액을 약한 불로 가열합니다. 전탕액이 200 milliliters로 농축되면 용액을 500-milliliter 비커로 옮기고, 방금 시연한 것처럼 부피를 100 milliliters로 농축합니다.발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 적절한 수준의 진정 상태를 확인한 후, 마지막 전탕액 처치 1시간 뒤에 전탕액으로 처리된 동물의 복부에서 흉부 하단까지 직선 수술 가위를 사용하여 피부와 복막에 길이 5cm, 깊이 0.5cm의 절개를 가합니다. 티슈 페이퍼를 사용하여 복강 내 장기를 이동시키고, 복부 대동맥의 결합 조직을 제거하여 혈관을 노출시킵니다. 다음으로, 22-gauge 바늘이 장착된 10-milliliter 주사기를 사용하여 복부 대동맥에서 8~10 milliliters의 혈액을 천천히 채취한 후, 이 혈액을 15-milliliter 멸균 튜브로 옮깁니다.실온에서 30분에서 60분 동안 혈액을 응고시킨 후, 원심분리를 통해 세포를 수집합니다. 각 동물로부터 얻은 혈청을 멸균된

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

본 품은 동물 연구를 위한 구슈강 과립 및 시험관 내 실험을 위한 혈청을 함유하는 GSK 과립의 작동 용액을 준비하기 위한 상세한 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 한방 의약품의 약리학적 조사뿐만 아니라 생체 내 및 시험관 내 실험 모두에 대한 처방에 적용 할 수 있습니다.

구슈강(GSK) 생체내 및 체외 실험을 위한 과립 준비

이 프로토콜은 손상된 PC12 세포를 치료하기 위해 두 허브의 조합 전략을 제공합니다. 이 프로토콜은 중국 전통 의학(TCM)의 최상의 적용 모드를 최적화하기 위한 참조를 제공합니다.

손상된 PC12 세포를 치료하기 위한 두 가지 허브 조합 전략 탐색

이 프로토콜에서는 Box-Behnken 실험 설계-반응 표면 방법론을 적용하여 Epimedii folium(EF)의 양고기 오일 가공 기술을 최적화하고, 제브라피쉬 배아 발달에 대한 조잡하고 최적화된 물 추출 EF의 영향을 예비 조사했습니다.

Epimedii Folium 양고기 오일 가공 기술의 최적화 및 제브라피쉬 배아 발달에 미치는 영향 테스트

우리는 생체 표지 세포와 마우스 모델에서 MRI를 사용하여 생체 내 세포 추적을위한 일반적인 프로토콜을 설명합니다. 셀 라벨, 이미지 수집 처리 및 정량화를위한​​ 일반적인 프로토콜이 포함되어 있습니다.

세포 추적을위한 생체 19 F MRI에서

이 방법은 마우스 모델에서 신규 한 약물의 약물 동력학을 평가하기 위해, 경동맥을 통해 정상 약액을 공급할 목적으로 개발되었다.

마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

여기에서는 전이의 in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane(CAM) 모델과 결합된 종양 세포 대사의 실시간 모니터링을 사용하여 종양 세포를 DNA를 손상시키는 화학 요법에 감작하는 능력에 대해 새로운 항암 표적/제제를 평가하는 데 사용됩니다.

암 약물 과민 반응의 효과를 평가<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

이 프로토콜은 형광단 표지 나노체 및 기존 항체를 사용하여 마우스에서 생체 내 근적외선 형광 이종 이식 이미징 실험의 생체 외 검증을 수행하는 데 필요한 단계를 간략하게 설명합니다.

나노 바디 및 항체 기반의 검증<em&gt; 생체</em마우스에서&gt; 종양 이종 이식 NIRF 이미징 실험 사용<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 유동 세포 계측법 및 현미경

인간 종양 이종 이식은 생체 혈관의 성장 단계 중 마우스 유래의 세포에 의해 함침된다. 하류 분석시 이러한 세포의 오염에 의한 바이어스를 회피하기 위해, 자기 세포 선별에 의해 모든 마우스 세포의 광범위한 공핍을 허용하는 방법을 개발 하였다.

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

여기에서는 간 지방증의 생체 내 및 체외 모델을 생성하고 지방질 표현형 및 관련 생리학적 매개변수를 분석하기 위한 최적화된 방법에 대해 설명합니다.

의 최적화 분석<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 체외</em&gt; 간 지방증

이 원고는 PEI / MNP 벡터와 자신의 자화에 의해 내피 세포 수 미르 효율적인 비 바이러스 성 전달을 설명합니다. 따라서, 유전자 변형뿐만 아니라,이 방법은 자기 세포 안내와 MRI의 검출 능력 수 있습니다. 이 기술은 치료 세포 제품의 특성을 개선하는 데 사용할 수 있습니다.

준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자화 특성의 내피 세포를 미르 변성

학습하세요 Er-Xian 달임법과 혈청 제조법을 통해 골 형성 촉진 효과를 평가하는 방법을. 이 프로토콜은 전통 한약의 표준화된 실험 적용을 가능하게 합니다.

약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼

더 많은 동영상 탐색