Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

Rachel A. Battaglia; Parijat Kabiraj; Helen H. Willcockson; Melinda Lian; Natasha T. Snider

doi:10.3791/55655

노화 관련 post-translational 수정을 공부하기 위해 여러 마우스 조직에서 중간 필라멘트 단백질의 분리

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Biochemistry

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Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

노화 관련 post-translational 수정을 공부하기 위해 여러 마우스 조직에서 중간 필라멘트 단백질의 분리

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May 18, 2017

DOI: 10.3791/55655-v

Rachel A. Battaglia¹, Parijat Kabiraj¹, Helen H. Willcockson¹, Melinda Lian¹, Natasha T. Snider¹

¹Department of Cell Biology and Physiology, School of Medicine,University of North Carolina at Chapel Hill

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 방법에서는 여러 개의 마우스 조직에서 중간 필라멘트 (IF) 단백질을 신속하고 효율적으로 분리하기위한 생화학 적 절차를 제시합니다. 분리 된 IF는 질량 분광법 및 기타 생화학 적 분석법에 의한 번역 후 변형의 변화를 연구하는데 사용될 수 있습니다.

이 생화학적 절차의 전반적인 목표는 서로 다른 조직 특이적 중간 필라멘트 단백질의 번역 후 변형을 연구하기 위해 여러 마우스 조직에서 중간 필라멘트가 풍부한 분획을 분리하는 것입니다. 이 방법은 포유류의 노화 동안 이러한 중요한 스트레스 보호 세포골격 단백질의 기능 및 조절이 어떻게 영향을 받는지와 같은 중간 필라멘트 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 자동화된 조직 용해 단계를 통합하여 사용자가 여러 조직 샘플을 빠르고 효율적인 방식으로 처리할 수 있다는 것입니다.

먼저 프로테아제 억제제가 보충된 얼음처럼 차가운 Triton X-100 완충액 1ml를 유리관 균질기에 넣고 얼음 위에 놓습니다. 액체 질소 저장소에서 작은 조직 조각을 제거하고 유리 균질화기에 직접 놓습니다. 그런 다음 균질화기와 샘플을 항상 얼음 위에 유지하면서 폴리테트라플루오로에틸렌 파스틸을 약 50회 사용하여 기포 형성을 최소화하면서 샘플을 균질화합니다.

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