Name: 환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법 Drosophila melanogaster (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster에서 환경 화학 신호가 구애 및 짝짓기 행동에 미치는 영향을 정량화하는 행동 분석법을. 이 방법은 압축 공기 시스템을 통해 휘발성 화합물을 전달하여 유전자형과 환경 요인의 상호작용을 연구하는 데 활용됩니다.

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우리는 비행 주식에 대한 블루밍턴 Drosophila 주식 센터 감사드립니다; C. Gahr, JT Alkema 및 S. van Hasselt가 가압 공기 분석법 개발 초기 시도 재스퍼 보스 만 (Jasper Bosman) : 효모 배양에 대한 조언; 원래는 Drosophila 교배 행동의 저속 모니터링을 개발 한 Rezza Azanchi와 Joel Levine입니다. JA Gorter는 Neuroscience Research School BCN / NWO 대학원 프로그램 지원금으로 지원되었습니다. 이 작업은 JC Billeter에 대한 네덜란드 연구 기관 (NWO) (참고 : 821.02.020)이 부분적으로 지원했습니다.

<ol><li>Hileman, S. M., Pierroz, D. D., Flier, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptin+nutrition%2C+and+reproduction%3A+timing+is+everything%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Leptin nutrition, and reproduction: timing is everything.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2), 804-807 (2000).</li>
<li>Grosjean, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+olfactory+receptor+for+food-derived+odours+promotes+male+courtship+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila.</a> Nature. 478 (7368), 236-240 (2011).</li>
<li>Harshman, L. G., Hoffman, A. A., Prout, T. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/2409235?seq=1#page_scan_tab_contents">Environmental effects on remating in Drosophila melanogaster.</a> Evolution. 42 (2), 312-321 (1988).</li>
<li>Fricke, C., Bretman, A., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+nutritional+status+determines+the+magnitude+and+sign+of+responses+to+a+male+ejaculate+signal+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Female nutritional status determines the magnitude and sign of responses to a male ejaculate signal in Drosophila melanogaster.</a> J. Evol. Biol. 23 (1), 157-165 (2010).</li>
<li>Gorter, J. A., Jagadeesh, S., Gahr, C., Boonekamp, J. J., Levine, J. D., Billeter, J. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nutritional+and+hedonic+value+of+food+modulate+sexual+receptivity+in+Drosophila+melanogaster+females%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">The nutritional and hedonic value of food modulate sexual receptivity in Drosophila melanogaster females.</a> Sci. Rep. , 1-10 (2016).</li>
<li>Wigby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+signalling+regulates+remating+in+female+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin signalling regulates remating in female Drosophila.</a> Proc. Biol. Sci. 278 (1704), 424-431 (2011).</li>
<li>Ribeiro, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dilemmas+of+the+gourmet+fly%3A+the+molecular+and+neuronal+mechanisms+of+feeding+and+nutrient+decision+making+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The dilemmas of the gourmet fly: the molecular and neuronal mechanisms of feeding and nutrient decision making in Drosophila.</a> Front. Neurosci. 7, 1-13 (2013).</li>
<li>Walker, S. J., Corrales-Carvajal, V. M., Ribeiro, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postmating+circuitry+modulates+salt+taste+processing+to+increase+reproductive+output+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Postmating circuitry modulates salt taste processing to increase reproductive output in Drosophila.</a> Curr. Biol. 25 (20), 2621-2630 (2015).</li>
<li>Hussain, A., Üçpunar, H. K., Zhang, M., Loschek, L. F., Grunwald Kadow, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropeptides+modulate+female+chemosensory+processing+upon+mating+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuropeptides modulate female chemosensory processing upon mating in Drosophila.</a> PLoS Biol. 14 (5), e1002455-e1002428 (2016).</li>
<li>Avila, F. W., Sirot, L. K., LaFlamme, B. A., Rubinstein, C. D., Wolfner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+seminal+fluid+proteins%3A+identification+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Insect seminal fluid proteins: identification and function.</a> Annu. Rev. Entomol. 56 (1), 21-40 (2011).</li>
<li>Laturney, M., Billeter, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenetics+of+female+reproductive+behaviors+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22BS%3AADGEN%22%5BJournal%5D)">Neurogenetics of female reproductive behaviors in Drosophila melanogaster.</a> BS:ADGEN. 85, Elsevier. 1-108 (2014).</li>
<li>Liu, H., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-peptide+is+the+molecular+basis+of+the+sperm+effect+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Sex-peptide is the molecular basis of the sperm effect in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 100 (17), 9929-9933 (2003).</li>
<li>Ram, K. R., Wolfner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+post-mating+response+in+Drosophila+melanogaster+requires+multiple+seminal+fluid+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+gen%22%5BJournal%5D)">Sustained post-mating response in Drosophila melanogaster requires multiple seminal fluid Proteins.</a> PLoS gen. 3 (12), 2428-2438 (2007).</li>
<li>Yapici, N., Kim, Y. -J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li>
<li>Yang, C. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+postmating+behavioral+switch+in+Drosophila+females+by+internal+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Control of the postmating behavioral switch in Drosophila females by internal sensory neurons.</a> Neuron. 61 (4), 519-526 (2009).</li>
<li>Häsemeyer, M., Yapici, N., Heberlein, U., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+neurons+in+the+Drosophila+genital+tract+regulate+female+reproductive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Sensory neurons in the Drosophila genital tract regulate female reproductive behavior.</a> Neuron. 61 (4), 511-518 (2009).</li>
<li>Rezával, C., Pavlou, H. J., Dornan, A. J., Chan, Y. -B., Kravitz, E. A., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuitry+underlying+Drosophila+female+postmating+behavioral+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural circuitry underlying Drosophila female postmating behavioral responses.</a> Curr. Biol. , 1-11 (2012).</li>
<li>Haussmann, I. U., Hemani, Y., Wijesekera, T., Dauwalder, B., Soller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+pathways+mediate+the+sex-peptide-regulated+switch+in+female+Drosophila+reproductive+behaviours%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple pathways mediate the sex-peptide-regulated switch in female Drosophila reproductive behaviours.</a> Proc. Biol. Sci. 280 (1771), 20131938-20131938 (2015).</li>
<li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr. Biol. 18 (18), 1373-1383 (2008).</li>
<li>Billeter, J. C., Jagadeesh, S., Stepek, N., Azanchi, R., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+females+change+mating+behaviour+and+offspring+production+based+on+social+context%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.l+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster females change mating behaviour and offspring production based on social context.</a> Proc. Biol.l Sci. 279 (1737), 2417-2425 (2012).</li>
<li>Krupp, J. J., Billeter, J. -C., Wong, A., Choi, C., Nitabach, M. N., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pigment-dispersing+factor+modulates+pheromone+production+in+clock+cells+that+influence+mating+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Pigment-dispersing factor modulates pheromone production in clock cells that influence mating in Drosophila.</a> Neuron. 79 (1), 54-68 (2013).</li>
<li>Imhof, M., Harr, B., Brem, G., Schlötterer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+mating+in+wild+Drosophila+melanogaster+revisited+by+microsatellite+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Multiple mating in wild Drosophila melanogaster revisited by microsatellite analysis.</a> Mol. Ecol. , 915-917 (1998).</li>
<li>Ochando, M. D., Reyes, A., Ayala, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+paternity+in+two+natural+populations+%28orchard+and+vineyard%29+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Multiple paternity in two natural populations (orchard and vineyard) of Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 93 (21), 11769-11773 (1996).</li>
<li>Becher, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2435.2012.02006.x/abstract">Yeast, not fruit volatiles mediate Drosophila melanogaster attraction, oviposition and development.</a> Func. Ecol. 26 (4), 822-828 (2012).</li>
<li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+visual+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Drosophila visual transduction.</a> Trends Neurosci. 35 (6), 356-363 (2012).</li>
<li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+courtship+suppression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Prot%22%5BJournal%5D)">Assay for courtship suppression in Drosophila.</a> Cold Spring Harbor Prot. 2011 (2), 5575(2011).</li>
<li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposing+Dopaminergic+and+GABAergic+Neurons+Control+the+Duration+and+Persistence+of+Copulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Opposing Dopaminergic and GABAergic Neurons Control the Duration and Persistence of Copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li>
<li>Bretman, A., Fricke, C., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plastic+responses+of+male+Drosophila+melanogaster+to+the+level+of+sperm+competition+increase+male+reproductive+fitness%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Plastic responses of male Drosophila melanogaster to the level of sperm competition increase male reproductive fitness.</a> Proc. Biol. Sci. 276 (1662), 1705-1711 (2009).</li>
<li>Dukas, R., Jongsma, K. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003347212003727">Costs to females and benefits to males from forced copulations in fruit flies.</a> Anim. Behav. 84 (5), 1177-1182 (2012).</li>
<li>Yorozu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+sensory+representations+of+wind+and+near-field+sound+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct sensory representations of wind and near-field sound in the Drosophila brain.</a> Nature. 457 (7235), 201-205 (2009).</li>
</ol>

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이 프로토콜은 짝짓기 커플이 짝짓기 빈도를 결정하는 데 사용하도록 가정 된 환경 신호를 지속적으로 제어하면서 24 시간 동안 짝짓기 행위를 테스트하는 분석을 설명합니다. 배지에 효모가 들어있을 때 가압 공기 시스템을 통해 전달되는 효모 공기에 반응하여 결합 빈도를 높일 수 있습니다 ( 그림 2B ). 또한 짝짓기 빈도의 비슷한 반응은 배지에서 한천, 펩톤 및 아세트산 냄새만을 포함하는 간략한 식품 배지에서 관찰 할 수 있습니다 ( 그림 3B ) 여기에서 실험을 통해, 남녀가 동일한 환경 조건에 노출되기 때문에 부부의 일반적인 교미 행동에만 결론을 이끌어 낼 수 있습니다. 그러나 이전 연구에서 우리는 교미 빈도의 47 %가 여성에 의해 결정되지만 남성 기여는 단지 11 %에 불과하다는 것을 알고 있습니다20 . 따라서 관찰 된 교미 빈도의 변화의 대부분은 여성의 성적 수용성의...

생식 행동은 일반적으로 남성보다 큰 배우자를 생산하고 개발하는 자손을 키우기위한 조건을 신중하게 선택해야하는 여성에게 특히 높은 에너지 비용을 초래합니다. 에너지 비용 때문에 재생산이 영양 상태와 관련이 있다는 것은 놀라운 일이 아닙니다. 이것은 포유류를 포함한 대부분의 동물에서 마찬가지입니다. 포유 동물은 영양 부족으로 사춘기가 늦어 질 수 있으며 성행위가 식량 제한으로 인해 부정적인 영향을받을 수 있습니다 1 . 유전 모델 유기체 Drosophila melanogaster 의 번식은 영양 상태에 의해서도 영향을받습니다. 식품 휘발성이의 존재에 높은 수준의 남성 코트, 그리고 여성보다 성적 효모, 계란 생산 및 자손의 생존 3, 4, 5의 주요 영양소의 존재에 수용된다. 이진화 보존 된 식품에 대한 생식 적 반응은 환경 친화적 인 식품 이용 가능성을 유 전적으로 다루기 쉽고 시간이 절약되는 유기체에서 성 생식에 연결시키는 메커니즘을 연구 할 기회를 제공합니다. 실제로 D. melanogaster 에서의 연구는 인슐린 경로가 음식과 교미 행동 사이의 연관성에 대한 중요한 조절 자라는 것을 의미합니다 6 . 또한 자체를 정합하는 단계는 암컷의 음식 선호도뿐만 아니라 관련된 화학 감각 뉴런 7, 8, 9를 변경하는 것으로 나타났다. D. melanogaster 에서 음식 단서가 생식 행동에 영향을주는 것은 분명합니다. 이러한 효과는 주로 여성, 특히 이미 5를 짝 지어 준 여성에게 영향을 미치는 것으로 보입니다. 그러나 환경 조건의 급성 영향을 시험하기 위해 여성의 행동에 고전적으로 사용되는 분석법이짝짓기 에피소드 간의 오랜 중단으로 인해 적합하지 않습니다. 클래식 remating 분석에서 처녀 여성 먼저 남성과 짝짓기, 즉시 격리하고 새로운 남성과 함께 24 ~ 48 시간 후에 제공됩니다. 이 고전적 분석법은 여성의 행동과 여성 반응을 수정하는 남성 사정의 구성 요소를 확인하는 데 큰 성공을 거두었습니다 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 . 따라서 여기에서 입증 된 연속 교미 분석은 재생산 행동에 대한 환경 조건의 급성 효과를 연구하는 데 사용할 수있는 고전적 교미 분석법에 추가 된 것입니다. 여기에 설명 된 짝짓기 행동에 대한 연속 분석법을 사용하여 이전에 효모에 노출 된 한 쌍의 파리가24 시간 관찰 기간 5, 19, 20, 21 배 이상 everal, 파리만이 remate 한번 음식 (5)에 노출되지 않는 상태. 이 발견은 D. melanogaster 문헌의 많은 부분에 비추어 수수께끼 일 수 있습니다 . 암컷은 초기 교미 후 며칠 동안 remate하지 않는다는 것을 나타냅니다 (참고 문헌 10 , 11 에서 검토 됨). 그러나 이러한 불일치는 새로운 교미 기회가 제공되기 전에 암컷이 1 일에서 며칠 동안 격리 된 분석 조건에 의해 쉽게 설명 될 수 있습니다. 쌍이이 1 시간의 관측 기간에 짝짓기하지 않으면 암컷은 감수성이없는 것으로 특징 지어진다. 더욱이, 야생 잡힌 파리의 자료에 따르면 암컷에 저장 기관에 4 ~ 6 마리의 수컷이 들어있는 정자가 있다는 것을 감안할 때, 높은 교미 빈도는 놀랄만 한 일이 아니어야한다. 따라서여성 자연스럽게, 23 차례 (22) remate 것을 dicating. 여기에서 우리는 파리가 어떻게 모여지고 환경 조건에 대한 정보를 결합하여 짝짓기 빈도를 조절하는지에 대한이 연속 교배 분석법의 사용을 입증합니다. 이 분석을 통해 유전자 연구를 위해 비교적 많은 수의 교미 부부를 시험하고 휘발성 및 비 휘발성 환경 단서의 영향을 시험 할 수 있습니다. 이 분석은 일반적으로 24 시간 동안 실행되지만 48 시간까지 연장 될 수있어 명암주기 (light-dark, LD)주기와 같은 사이클링 환경 큐를 테스트 할 수 있습니다. 우리는 식품 기질에서 비 휘발성 효모 영양소의 가용성과 함께 가압 공기 시스템 내에서 효모 배양으로부터 휘발성 신호의 영향을 시험함으로써이 분석을 입증합니다. 가압 공기 시스템은 지속적으로 휘발성 큐를식품 기질 및 시험 커플 (그의 교미 행동이 모니터 됨). 효모가 짝짓기에 영향을주는 세부 사항을 더 결정하기 위해, 우리는 효모의 주요 휘발성 화합물, 즉 아세트산 24 를 펩톤 (아미노산)의 형태로 식품 기질의 효모에 상응하는 아미노산 함량과 함께 시험한다 동물성 단백질의 효소 소화에서 유래 된 산). 이 실험들은 함께 D. melanogaster 의 교미 작용에 대한 환경 신호의 영향이이 분석법으로 시험 될 수 있음을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>Cabinet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel kitchen cabinet</td><td>Horecaworld</td><td>7412.0105</td><td></td></tr><tr><td>백색 LED</td><td>럭키 라이트</td><td>ll-583wc2c-001</td><td>콜드 화이트, 20mAmp 및 2V</td></tr><tr><td>레드 LED</td><td>Lucky Ligt</td><td>ll-583vc2c-v1-4da</td><td>625nm, 20mAmp 및 6V</td></tr><tr><td>저항</td><td>사이의 파장 Royal Ohm</td><td>CFR0W4J0561A50</td><td>560 옴, 0.25 W, 250 V 및 5 % 허용 오차</td></tr><tr><td>스마트폰 빛 미터 앱</td><td>Patrick Giudicelli</td><td></td><td>빛/조도 미터 무료, 버전 1.1.1</td></tr><tr><td>전원 타이머</td><td>Alecto</td><td>TS-121</td><td></td></tr><tr><td>금속 브래킷</td><td></td><td></td><td>날카로운 각도 5 by 5 mm,&nbsp; 2 x 5450 및 1 x 1100 mm 길이</td></tr><tr><td>서리 유리 판</td><td></td><td></td><td>1190 x 545 x 5 mm</td></tr><tr><td>여과지 시트</td><td>LEE 필터</td><td>220</td><td>화이트 프로스트</td></tr><tr><td>소형 팬</td><td>Nanoxia 깊은 침묵</td><td></td><td>4260285292828 80mm 초소음 PC 팬, 1200 RPM</td></tr><tr><td>큰 팬</td><td>Nanoxia 깊은 침묵</td><td>4260285292910</td><td>120mm 초소음 PC 팬, 650-1500 RPM</td></tr><tr><td>웹캠 카메라</td><td>Logitech</td><td>950270</td><td>B910 HD 웹캠 OEM, 각도: 78도, 해상도: 500만 화소&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>카메라 소프트웨어</td><td>DeskShare</td><td></td><td>보안 모니터 pro</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Fly rearing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fly rearing bottles</td><td>Flystuff</td><td>32-130</td><td>6oz 초파리 주식 병</td></tr><tr><td>플라이 패드</td><td>Flystuff</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>와일드 타입 플라이</td><td></td><td></td><td>Canton-S</td></tr><tr><td>플라이 사육 바이알</td><td>Dominique Dutscher</td><td>789008</td><td>Drosophila 튜브 좁은 25x95mm</td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Sanyo</td><td>MIR-154</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 핫 플레이트</td><td>Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td>MR Hei-Standard</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Caldic 성분 B.V.</td><td>010001.26.0</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>게존드& 웰</td><td>1019155</td><td>덱스트로스/드루이벤수이커</td></tr><tr><td>설탕 반</td><td>길스</td><td></td><td>과립 설탕</td></tr><tr><td>옥수수 가루</td><td>플라이스터프</td><td>62-100</td><td></td></tr><tr><td>밀 배아</td><td>Gezond& wel</td><td>1017683</td><td></td></tr><tr><td>콩</td>가루 <td>Flystuff</td><td>62-115</td><td></td></tr><tr><td>당밀</td><td>Flystuff</td><td>62-117</td><td></td></tr><tr><td>활성 건조 효모</td><td>Red Star</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tegosept</td><td>Flystuff</td><td>20-258</td><td>100%</td></tr><tr><td>펩톤(bacto)</td><td>BD</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Merck</td><td>1000631000</td><td>빙하, 100% </td></tr><tr><td>작은 petridish</td><td>Greiner bio-one</td><td>627102</td><td>35 x 10 mm 통풍</td></tr>구 <tr><td>파라핀 필름</td><td>Bemis NA</td><td></td><td>Parafilm</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>효모 및 가압 공기 설정</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>큰 페트리디쉬</td><td>Gosselin</td><td>BP140-01</td><td>140 x 20.6 mm</td></tr><tr><td>초순수</td><td>Millipore corporation</td><td></td><td>MiliQ</td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>BD</td><td>212750</td><td></td></tr><tr><td>한천 (순수)</td><td>BD</td><td>214530</td><td>bacto</td></tr><tr><td>포도당 (0(+)-포도당 일수화물)&nbsp;</td><td>Merck</td><td>18270000004</td><td></td></tr><tr><td>오픈 캡</td><td>Schott</td><td>29 240 28&nbsp;</td><td>GL45</td></tr><tr><td>실리콘 격막</td><td>VWR</td><td>548-0662</td><td></td></tr><tr><td>가시 격벽 피팅</td><td>Nalgene</td><td>6149-0002</td><td></td></tr><tr><td>대형 PVC 튜브</td><td></td><td></td><td>직경 : 외부 1.2cm 및 내부 0.9cm</td></tr><tr><td>소형 PVC 튜브</td><td></td><td></td><td>직경 : 외부 0.8cm 및 내부 0.5cm</td></tr><tr><td>15ml 튜브</td><td>Falcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aquarium 펌프</td><td>혈청 정밀도</td><td></td><td>Sera air 110 plus, AC 220-240 V, 50/60 Hz, 3 W 및 압력 >100 mbar</td></tr><tr><td>활성탄</td><td>Superfish</td><td>A8040400</td><td>Norit 활성탄</td></tr><tr><td>일회용 필터 유닛</td><td>Whatman</td><td>10462100</td><td></td></tr><tr><td>혈청학 피펫</td><td>VWR</td><td>612-1600</td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>핫 글루</td><td>Pattex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>주사기 필터</td><td>Whatman</td><td></td><td>FP 30/기공 크기 0.45mm CA-S</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Analysis</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Statistics software</td><td>R</td><td></td><td>lme4 패키지</td></tr></tbody></table>

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; drosophila melanogaster</em

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

개인의 성행위는 유전자형, 경험 및 환경 조건의 영향을받습니다. 이러한 요인들이 어떻게 상호 작용하여 성적 행동을 조절하는지는 여전히 잘 알려져 있지 않습니다. Drosophila melanogaster 에서는 식량 가용성과 같은 환경 적 단서가 성적 행동을 조절하는 메커니즘을 조사 할 수있는 다루기 쉬운 시스템을 제공하는 교미 활동에 영향을 미칩니다. D. melanogaster에서 , 환경 단서는 종종 화학 감각 기관과 후각 시스템을 통해 감지됩니다. 여기에서는 짝짓기 행동에 환경 화학 신호의 영향을 테스트하는 방법을 제시합니다. 이 분석법은 식품 매체와 짝짓기 커플을 포함하는 작은 짝짓기 경기장으로 구성됩니다. 각 커플의 교미 빈도는 24 시간 동안 지속적으로 모니터링됩니다. 여기서 우리는 가청 공기 시스템을 통해 외부 소스로부터 환경 화합물을 시험 할뿐만 아니라 짝짓기 경기장에서 환경 성분을 직접 조작하는이 분석의 적용 가능성을 제시합니다. 너는가압 에어 시스템은 매우 휘발성 인 화합물의 효과를 테스트하는 데 특히 유용하며, 상대방의 구성 요소를 직접 조작하는 것은 화합물의 존재를 확인하는 데 가치가 있습니다. 이 분석은 유전 적 및 환경 적 단서가 짝짓기 행동과 생식력 및 기타 남성과 여성의 생식 행동에 미치는 영향에 대한 질문에 대답 할 수 있습니다.

이 연속 분석법을 사용하여 실험적 환경 조건 하에서 교미 행동 및 특정 주파수에서의 교미 빈도를 결정할 수 있습니다. 환경 조건을 제어하기 위해 우리는 스테인리스 스틸 주방 캐비닛을 자체 광원 및 확산 장치를 사용하여 테스트 영역으로 변형 시켰습니다.이 캐비닛은 결합 영역의 상단에서 높은 광량과 눈부심을 보장합니다 ( 그림 1A ) . 내부 테스트 영역은 헥산이나 에탄올과 같은 유기 용제로 세척 할 수있는 스테인리스 스틸과 유리로 완전히 덮여 있습니다. 또한 캐비닛에는 튜빙 용 입구 역할을하는 구멍이있어 압축 공기 시스템의 휘발성 큐를 가져옵니다 ( 그림 1A 및 1B 참조). 효모 냄새에 맞게 조정 된 가압 공기 시스템은 4 개의 피펫 스플리터를 통해 시험장에 들어가기 전에 액체 효모 배양을 통해 안내되는 기류로 구성됩니다.각각 10 개의 콘센트 ( 그림 1C</...

우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

이 행동 분석의 전반적인 목표는 구애 및 교미와 같은 생식 행동에 미치는 환경적 신호의 영향을 정량화하는 것입니다. 이 방법은 생식 행동에 영향을 미치는 유전적 및 환경적 요인의 추론과 그러한 행동을 조절하는 메커니즘과 같이, 행동 생물학 및 신경 유전학 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술은 생식에 영향을 미치는 광범위한 환경 신호를 테스트하는 데 있어 신속성과 유연성을 제공합니다. 또한 매우 많은 수의 반복 실험이 가능합니다. 본 절차의 시연은 저희 연구실의 대학원생인 Jenke Gorter가 진행하겠습니다.풍부한 초파리 배지 1L를 준비하며 실험을 시작합니다. 자석 교반 바가 들어있는 2L 유리 비커에 수돗물 1L를 붓습니다. 그리고 비커를 마그네틱 핫플레이트 위에 올립니다.교반을 중단하고 온도를 300 °C까지 높여 끓는점에 도달하게 합니다. 교반을 500 rpm으로 설정하여 켜고, 끓는 물에 성분들을 첨가합니다. 효모가 격렬하게 거품을 일으킬 때까지 기다립니다.그 다음 핫플레이트 온도를 120 °C로 낮춥니다. 10분 후 핫플레이트 온도를 30 °C로 낮춥니다. 그리고 혼합물이 48 °C로 식을 때까지 계속 교반합니다.온도계를 식품에 직접 삽입하여 온도를 모니터링하십시오. 2 g의 Tegosept을 10 mL의 96% ethanol에 녹입니다. 이 혼합물과 5 mL의 1 M propionic acid를 비커에 넣고 섞습니다.3분 동안 젓습니다. 분젠 버너로 바늘을 가열하여 붉게 달굽니다. 그리고 3.5 centimeter x 1.0 centimeter 크기의 플라스틱 페트리 접시 상단에 지름 0.3 centimeters의 구멍을 뚫습니다.취기 화합물이 포함된 먹이 배지를 준비할 때, 먼저 실험용 플레이트의 1/2 분량에 원하는 화합물 30 µL를 피펫으로 분주합니다. 비교를 위해 나머지 1/2의 플레이트는 빈 상태로 둡니다. 5 mL 세롤로지컬 피펫을 사용하여 먹이 배지 3 mL를 붓고 플레이트 바닥을 덮어줍니다.오염을 방지하기 위해 치즈클로스로 덮고, 실온에서 1시간 동안 배지가 굳을 때까지 둡니다. 다음으로, 디시에 뚜껑을 덮고 뚜껑의 양측면을 테이프로 고정합니다. 파라핀 필름을 0.2 cm 두께로 말아 작은 플러그를 만들어 디시의 구멍을 막아줍니다.그런 다음 이를 0.5 cm 세그먼트로 자릅니다. 격막에 바브형 벌크헤드 피팅이 딱 맞게 들어갈 수 있도록 작은 구멍 두 개를 뚫습니다. 0.32 cm 두께의 실리콘 격막이 장착된 4.5 cm 오픈 병 캡을 끼웁니다.작은 PVC 튜빙을 병에서 나오는 두 개의 배출구와 병으로 들어가는 입구 중 하나에 각각 연결합니다. 다음으로, 작은 튜빙을 사용하여 각 YPD 배양병의 배출구에 유리관을 연결합니다. 유리관 내부를 유리 섬유로 채웁니다.사용 전 오토클레이브로 멸균합니다. 장착된 캡과 튜브를 알루미늄 호일로 감쌉니다. 그 후 120 °C, 1 bar 압력에서 25분 동안 오토클레이브 멸균합니다.멸균된 100 µL 피펫 팁을 YPD Agar 플레이트의 효모 콜로니 중 하나에 담근 후, 이를 고압증기멸균된 YPD 액체 배지 병에 떨어뜨립니다. 효모가 접종된 YPD 액체 배지 병과 효모가 없는 YPD 배지 대조군 병의 뚜껑을 배출구에 장착된 고압증기멸균된 캡으로 닫습니다. 미생물에 의한 YPD 배지의 오염을 방지하기 위해, 필터 방향으로 향하는 플라스틱 푸시온 벌크헤드 튜빙 커넥터를 사용하여 작은 튜빙을 0.45 µm 멸균 시린지 필터에 연결합니다.그리고 필터에서 나가는 플라스틱 벌크헤드 커넥터를 조입니다. 그런 다음 튜브를 YPD 배양 병의 입구에 연결합니다. 병들을 각각 별도의 마그네틱 플레이트 위에 놓습니다.실험 시작 전, 실온에서 100 rpm으로 24시간 동안 용액을 교반합니다. 두 병의 입구를 가압 공기에 연결된 튜브에 연결합니다. 실험에 영향을 주는 것을 방지하기 위해, 실험용 효모 병의 배출구를 실험실 밖으로 효모 냄새를 배출하는 튜브에 연결하십시오.PVC 튜빙을 유리관의 배출구 쪽에 연결하고, 이를 실험 박스의 하단 구멍 쪽으로 유도합니다. 외경이 0.5 cm 이상인 T-분배기와 짧은 PVC 튜빙 조각들을 사용하여, 양쪽의 두 배출구 각각에 세롤로지컬 피펫을 하나씩 연결합니다. 스틸 박스 내부의 카메라 아래에 있는 흰색 종이 시트 위에 피펫들을 평평하게 테이프로 고정합니다.마우스 피펫을 사용하여 ZT 6에 실험군 암컷 한 마리를 작은 페트리 접시에 넣습니다. 그리고 파리가 교배 구역에 적응할 수 있도록 한 시간 동안 둡니다. 한 시간 후인 ZT 7에 야생형 수컷을 페트리 접시로 옮깁니다.그런 다음 24시간 동안 모니터링을 시작하기 위해 Start Monitoring을 클릭하십시오. 공기 펌프 실험의 경우, 피펫 배출구가 교미 구역의 입구 구멍과 연결되도록 디쉬를 배치하십시오. 커플의 교미 행동을 분석하려면 이미지 뷰어 소프트웨어에서 모든 사진 열기를 선택하십시오.그다음 시간순으로 페이지를 넘기며 확인하십시오. 날짜, 실험 번호, 디쉬 번호, 시작 시간을 동일한 행의 스프레드시트에 기록하십시오. 각 아레나의 시작 시간은 웹캠 아래에 놓인 순간으로 설정하십시오.사진에서 타임스탬프를 기록하십시오. 각 교미의 시작 시간을 스프레드시트의 동일한 행에 표시하십시오. 수컷이 암컷 위에 올라타고 한 쌍이 최소 5프레임 동안 연속적으로 어느 정도 정지된 상태로 동일한 자세를 유지할 때를 교미 1회로 산정하십시오.식품 배지와 분리된 효모 공기를 분석한 결과, 식품 배지에 효모가 없을 때는 교미 쌍이 효모 냄새에 반응하지 않는 것으로 나타났습니다. 하지만 식품 배지에 효모를 함께 첨가했을 때, 효모 공기 내에서 교미 빈도가 증가했습니다. 암컷의 수용성은 Acetic Acid가 존재할 때 증가합니다.하지만 이는 배지에 Peptone이 존재할 때만 나타나며, 이는 초파리가 교미 빈도를 높이기 위해 아미노산(Amino Acids)과 아세트산(Acetic Acid)을 동시에 감지해야 함을 보여줍니다. 숙달되면 이 기술은 6시간 만에 준비할 수 있습니다. 또한 적절히 수행될 경우, 행동 분석은 5시간 이내에 완료할 수 있습니다.

a-method-to-test-effect-environmental-cues-on-mating-behavior

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

이 비디오는 구애 조건화(courtship conditioning)라고 하는 초파리의 학습과 기억을 테스트하는 고전적인 조건화 분석법에 대해 설명합니다. 이 분석은 수용하지 않는 조산한 암컷에 의한 거부를 경험한 후 수컷의 구애 감소를 기반으로 합니다. 예제 프로토콜은 단기 및 장기 기억을 평가하는 데 사용할 수 있는 절차에 대한 설정을 보여줍니다.

초파리 구애 조건화: 파리의 학습과 기억을 테스트하는 방법

이 비디오 문서에서는, 우리는 초파리 비행 성인 과일의 후각에 의존 식품 검색 행동에 대한 배고픔이나 포만감의 효과를 측정 할 수있는 자동화 된 분석을 설명합니다.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에 초파리

우리는 Y-미로 분석을 사용하여 초파리의 행동에 냄새 물질의 영향을 나타 내기 위해 선택 테스트를 제시한다.

테스트<em&gt; 초파리</emY-미로 분석과&gt; 후각

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

이 프로토콜은 초파리 또는 다른 곤충을 개별적으로 식별하는 간단하고 비용 효율적인 방법을 설명합니다. 3종의 초파리에 대한 짝짓기 성공을 조사한 시연 데이터는 이 방법이 CO2 마취의 사용과 비슷하거나 더 우수하다는 것을 보여줍니다.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

기계감각에 영향을 미치는 새로운 돌연변이를 식별하기 위해 MARCM 방법에 의해 생성된 돌연변이 클론에서 파리 강모의 촉각 자극에 대한 행동 반응을 측정하는 분석을 설계했습니다. 이 기술의 결합을 통해 그렇지 않으면 치명적일 수 있는 기계민감성 돌연변이를 식별할 수 있습니다.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

이 프로토콜은 구애 조건 조절이라고 불리는 Drosophila 학습 및 기억 분석을 설명합니다. 이 고전적 분석은 비 수용성 전제 암컷에 의한 성적 거부 이후의 남성 구애 행동의 감소에 근거합니다. 이 자연적 형태의 행동 소성은 학습, 단기 기억 및 장기 기억을 시험하는데 사용될 수 있습니다.

학습과 기억의 척도 로서의 Drosophila Courtship 컨디셔닝

내분비 파괴 물질 (EDC)은 유기체와 자연 환경에 심각한 문제를 나타냅니다. 드로소필라 멜라노가스터는 생체 내에서 EDC 효과를 연구하는 이상적인 모델을 나타낸다. 여기에서, 우리는 Drosophila에 있는 내분비 중단을 조사하는 방법을 제시합니다, fecundity에 EDC 효력을, 비옥, 발달 타이밍 및 비행의 수명을 해결하.

초파리 멜라노가스터에서 내분비 장애를 테스트하는 방법

자폐 스펙트럼 장애(ASD)는 사회적 및 의사소통 행동의 장애 및 반복적 행동의 출현과 관련이 있습니다. 초파리 모델에서 ASD 유전자와 행동 결핍 사이의 상관 관계를 연구하기 위해 이 논문에서는 사회적 간격, 공격성, 구애, 그루밍 및 습관화 행동을 분석하기 위한 5가지 행동 패러다임을 설명합니다.

자폐 스펙트럼 장애의 초파리 모델에서 행동 평가를 위한 패러다임

배우세요 Drosophila melanogaster에서 환경 화학 신호가 구애 및 짝짓기 행동에 미치는 영향을 정량화하는 행동 분석법을. 이 방법은 압축 공기 시스템을 통해 휘발성 화합물을 전달하여 유전자형과 환경 요인의 상호작용을 연구하는 데 활용됩니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법

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