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DOI: 10.3791/55728-v
Rongli Zhang*1,2,3, Jonathan W. Ray1,2, Mukesh K. Jain1,2, Shuxin Han*1,2
1Department of Medicine, Case Cardiovascular Research Institute,Case Western Reserve University, 2Harrington Heart and Vascular Institute,University Hospitals Cleveland Medical Center, 3Institute for Transformative Molecular Medicine, Case Western Reserve University School of Medicine,University Hospitals Cleveland Medical Center
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
소장-종속 담 즙 산 재흡수 및 간 담 즙 산 합성의 피드백 저해 조직의 항상성 및 건강에 대 한 중요 하다. 이 연구에서 우리는 ileal 절제술 ileectomy 유도 담 즙 흡수 장애, overaccumulation, 그리고 마우스 소장에서 독성 평가를 위한 마우스 모델을 설명 합니다.
이 수술의 전반적인 목표는 쥐 장에서 ileectomy로 인한 담즙 흡수 장애, 과다 축적 및 독성을 평가하는 것입니다. 크론병, 암, 자가면역 질환 또는 감염과 같은 징후 상태인 회장 질환은 이환율과 사망률의 중요한 원인입니다. 회장의 분절 제거와 관련된 이 모델의 개발은 생물학에 대한 통찰력과 치료에 활용될 수 있다고 생각합니다.
이 기술의 의미는 회장 절제술이 잠재적으로 간의 담즙산 과잉 생산과 장의 흡수 장애 및 과잉 축적을 유발할 수 있기 때문에 담즙산 설사 치료로 확장됩니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 이 수술에서 가장 중요하고 어려운 부분인 장 문합으로 어려움을 겪을 것입니다. 발가락 꼬집기로 적절한 진정 수준을 확인하고 마우스의 복부에 제모 크림을 바르는 것으로 시작합니다.
수술용 스펀지로 털을 제거하고 섭씨 37도로 설정된 온도 조절이 가능한 소형 동물 수술대에 동물을 놓습니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 포비돈 요오드와 70% 에탄올 스크럽으로 노출된 피부를 소독합니다. 복부의 수술 부위를 멸균 수술용 거즈로 덮고 메스를 사용하여 복부의 정중선을 절개하고 근육층을 절단합니다.
장을 보호하기 위해 솜 끝이 있는 애플리케이터를 사용하여 견인기로 마우스의 복부 근육을 완전히 열어 복강을 노출시킵니다. 맹장에서 시작하여 연결된 회장과 제주넘의 일부를 복강 밖으로 조심스럽게 옮기고 7-0 실크 봉합사를 사용하여 상장간막 동맥의 상부 가지를 접합합니다. 조직 색상이 분홍색에서 어둡게 변하면 완전한 폐색을 나타내므로 가위를 사용하여 실험의 매개변수에 따라 회장의 50% 또는 90%를 절제합니다.
양쪽 회장 말단의 내강을 0.9%식염수로 플러시합니다. 양쪽 회장 말단의 측면에 장간막을 배치한 후, 절제된 조직의 양쪽 끝에 장간막을 정렬하고 8-0 끝을 함께 결합하는 봉합사. 회장의 반대쪽 면을 봉합하여 회장이 자연스럽게 문합된 상태를 유지하고 두 개의 원래 봉합사 사이의 위쪽과 아래쪽을 봉합하여 두 회장 말단을 완전히 결합합니다.
문합 부위에서 누출이 없는 것을 확인한 후 맹장과 소장을 원래의 해부학적 위치로 되돌리고 무딘 바늘을 사용하여 따뜻한 0.9%의 식염수로 수술 부위를 씻습니다. 6-0 봉합사로 복부 근육층을 봉합하고 복부 절개 부위를 정렬하여 피부를 봉합하고 최적의 상처 치유를 촉진합니다. 그런 다음 마우스를 온도 조절 가열 패드의 종이 침구 케이지에 있는 중환자실로 옮겨 일반 음식과 물 외에 부드러운 음식으로 밤새 회복합니다.
수술 후 하루 만에 동물 전체의 체중을 잰다. 그런 다음 위장관 또는 위장관을 채취하고 장 조직에 무게를 실어줍니다. 위장관 조직을 15ml 원뿔형 튜브에 옮기고 가위를 사용하여 조직을 짧은 부분으로 자릅니다.
그런 다음 원심분리로 조직 조각을 펠렛으로 만들고 담즙염이 함유된 상등액을 새 튜브로 옮깁니다. 정량적 실시간 중합효소 연쇄 반응 분석은 회장 내에서 섬유아세포 성장 인자 15, 정점 나트륨-담즙산 수송체, 회장 담즙산 결합 단백질 및 유기 용질 수송체 베타 mRNA의 풍부한 발현을 보여주며, 회장과 장의 나머지 부분 내에서 발현이 적거나 극히 낮습니다. 음성 대조군으로 측정되는 선종성 용종증 대장균 mRNA 수치는 장 전체에 걸쳐 유사하게 유지됩니다.
24시간 후, 가짜 수술로 인한 장은 정상으로 나타나 비수술 동물과 비슷한 크기와 형태를 보입니다. 체액량은 0%에서 90%로 기울기 향상을 나타내며, 이는 90% 절제 후 관찰된 체중 대비 GI 비율이 크게 증가한 것에 해당합니다. 수술 후 위장관에서 채취한 위장관액과 위장관 중량 대 위장관 중량 비율도 절제 후 구배 증가를 보여줍니다.
또한, 담즙산 분석법은 회장 절제술의 크기가 증가함에 따라 상층액에서 검출되는 담즙산의 양이 증가함을 확인했으며, 이는 50% 회장 절제술이 상대적으로 중등도의 부작용으로 인해 더 적합한 마우스 회장절제술 모델임을 시사합니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 30분 안에 완료할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 미세 수술 분야의 연구자들이 회장 생물학과 작은 동물의 담즙 증후군을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.
이 비디오를 시청한 후에는 회장 분절을 올바르게 식별하고 제거하는 방법과 장 문합을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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