Name: 뇌의 세포 외 공간의 부피비와 비틀림을 정량화하기위한 테트라 메틸 암모늄을 이용한 실시간 이온 도입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 45 s
Description: 학습하세요 실시간 이온 도입법을 이용하여 뇌 조직의 세포 외 공간 부피비와 비틀림을 정량화하는 방법을. TMA를 사용한 이 기술은 생체 뇌에서 ECS 물리적 매개변수를 실시간으로 측정하여 뇌 생리학 및 질병 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Sykova, E., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+in+brain+extracellular+space%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Diffusion in brain extracellular space.</a> Physiol Rev. 88 (4), 1277-1340 (2008).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/230904011_Diffusion_and_related_transport_mechanisms_in_brain_tissue">Diffusion and related transport mechanisms in brain tissue.</a> Rep Prog Phys. 64 (7), 815-884 (2001).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-selective+microelectrodes+and+diffusion+measurements+as+tools+to+explore+the+brain+cell+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Ion-selective microelectrodes and diffusion measurements as tools to explore the brain cell microenvironment.</a> J Neurosci Methods. 48 (3), 199-213 (1993).</li>
<li>Nicholson, C., Phillips, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+diffusion+modified+by+tortuosity+and+volume+fraction+in+the+extracellular+microenvironment+of+the+rat+cerebellum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ion diffusion modified by tortuosity and volume fraction in the extracellular microenvironment of the rat cerebellum.</a> J Physiol. 321, 225-257 (1981).</li>
<li>Nicholson, C., Sykova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+space+structure+revealed+by+diffusion+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Extracellular space structure revealed by diffusion analysis.</a> Trends Neurosci. 21 (5), 207-215 (1998).</li>
<li>Xie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sleep drives metabolite clearance from the adult brain.</a> Science. 342 (6156), 373-377 (2013).</li>
<li>Hrabetova, S., Nicholson, C. Biophysical properties of brain extracellular space explored with ion-selective microelectrodes, integrative optical imaging and related techniques. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Biophysical+properties+of+brain+extracellular+space+explored+with+ion-selective+microelectrodes%2C+integrative+optical+imaging+and+related+techniques">Electrochemical Methods for Neuroscience Neuroscience</a>. Michael, A. C., Borland, L. M. , CRC press. 167-204 (2007).</li>
<li>Rice, M. E., Okada, Y. C., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+and+heterogeneous+diffusion+in+the+turtle+cerebellum%3A+implications+for+volume+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Anisotropic and heterogeneous diffusion in the turtle cerebellum: implications for volume transmission.</a> J Neurophysiol. 70 (5), 2035-2044 (1993).</li>
<li>Vargova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+parameters+of+the+extracellular+space+in+human+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Diffusion parameters of the extracellular space in human gliomas.</a> Glia. 42 (1), 77-88 (2003).</li>
<li>Haack, N., Durry, S., Kafitz, K. W., Chesler, M., Rose, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double-barreled+and+concentric+microelectrodes+for+measurement+of+extracellular+ion+signals+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Double-barreled and concentric microelectrodes for measurement of extracellular ion signals in brain tissue.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>Xiao, F., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+extracellular+space+of+aquaporin-4-deficient+mice+does+not+enhance+diffusion+of+Alexa+Fluor+488+or+dextran+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enlarged extracellular space of aquaporin-4-deficient mice does not enhance diffusion of Alexa Fluor 488 or dextran polymers.</a> Neuroscience. 161 (1), 39-45 (2009).</li>
<li>Sherpa, A. D., Pvan de Nes,, Xiao, F., Weedon, J., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gliotoxin-induced+swelling+of+astrocytes+hinders+diffusion+in+brain+extracellular+space+via+formation+of+dead-space+microdomains%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Gliotoxin-induced swelling of astrocytes hinders diffusion in brain extracellular space via formation of dead-space microdomains.</a> Glia. 62 (7), 1053-1065 (2014).</li>
<li>Kume-Kick, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independence+of+extracellular+tortuosity+and+volume+fraction+during+osmotic+challenge+in+rat+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Independence of extracellular tortuosity and volume fraction during osmotic challenge in rat neocortex.</a> J Physiol. 542 (Pt 2), 515-527 (2002).</li>
<li>Saghyan, A., Lewis, D. P., Hrabe, J., Hrabetova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+diffusion+in+laminar+brain+structures+exemplified+by+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Extracellular diffusion in laminar brain structures exemplified by hippocampus.</a> J Neurosci Methods. 205 (1), 110-118 (2012).</li>
<li>Fedirko, N., Svichar, N., Chesler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+use+of+high-speed%2C+concentric+H%2B-+and+Ca2%2B-selective+microelectrodes+suitable+for+in+vitro+extracellular+recording%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Fabrication and use of high-speed, concentric H+- and Ca2+-selective microelectrodes suitable for in vitro extracellular recording.</a> J Neurophys. 96 (2), 919-924 (2006).</li>
<li>Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+from+an+injected+volume+of+a+substance+in+brain+tissue+with+arbitrary+volume+fraction+and+tortuosity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diffusion from an injected volume of a substance in brain tissue with arbitrary volume fraction and tortuosity.</a> Brain Res. 333 (2), 325-329 (1985).</li>
<li>Nicholson, C., Tao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindered+diffusion+of+high+molecular+weight+compounds+in+brain+extracellular+microenvironment+measured+with+integrative+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Hindered diffusion of high molecular weight compounds in brain extracellular microenvironment measured with integrative optical imaging.</a> Biophys J. 65 (6), 2277-2290 (1993).</li>
<li>Thorne, R. G., Nicholson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+diffusion+analysis+with+quantum+dots+and+dextrans+predicts+the+width+of+brain+extracellular+space%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo diffusion analysis with quantum dots and dextrans predicts the width of brain extracellular space.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (14), 5567-5572 (2006).</li>
<li>Wolak, D. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+of+macromolecules+in+the+brain%3A+implications+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Diffusion of macromolecules in the brain: implications for drug delivery.</a> Mol Pharm. 10 (5), 1492-1504 (2013).</li>
</ol>

저자는 경쟁적인 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

<img alt="그림 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55755/55755fig10.jpg" /> 도표 10 : 일반적인 기술적 인 문제점을 설명하는 비 이상적인 자료. ( a ) iontophoresis microelectrodes와 함께 일반적인 기술적 인 문제의 다이어그램 : 기능적인 iontophoresis microelectrode에서 TMA의 정상적인 릴리스와 기술적 인 문제를 보여주는 세 가지 소스의 비교. [고배율, a1] 이상적인 이온 삼투압 소스의 전류는 TMA 방출과 염화물 흡수에 의해 동등하게 전달됩니다. N 개의 로우 t 릴리스 이하 TMA와 [고배율, (A2)]은 이온 삼투압 미세 전극은 정상보다 클로라이드를 차지한다. [고배율, a3] 전기 침투를 나타내는 이온 삼투압 미세 전극은 TMA, 염화물 및 용매를 방출합니다. [High ma...

<html> 세포 외 공간 (ECS)은 모든 뇌 세포 외부의 상호 연결된 채널의 네트워크이며 간질 액과 세포 외 기질 모두를 포함합니다 ( 그림 1a 및 그림 1b ). 영양소, 호르몬 및 신경 전달 물질을 포함한 뇌 세포 기능에 필요한 많은 물질의 분포는 ECS를 통한 확산에 의해 발생합니다. 체적, 기하학 및 세포 외 기질을 포함한이 공간의 물리적 매개 변수의 변화는 뇌 세포 기능에 중대한 영향을 미치는 뇌 세포를 목욕시키는 ECS 및 국소 이온 농도를 통한 확산에 크게 영향을 미칠 수 있습니다 1 , 2 . 실시간 이온 삼투압 (RTI)은 뇌 영역의 두 가지 구조적 특성을 결정하는 데 사용됩니다 : 체적 분율과 비틀림 3 , 4 ,&quot;xref&quot;&gt; 5. 부피 분율 ( α )은 대표적인 기본 부피의 총 조직 부피 ( V 조직 )에 대한 ECS ( V ECS )가 차지하는 조직 부피의 비율입니다. <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq1.jpg" /> 구불러움 (tortuosity, λ )은 방해물이없는 매체에 비해 뇌 영역을 통해 확산 될 때 물질이 마주 친 상대적인 장애입니다. <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq2.jpg" /> D의 * (cm 2 초 -1) 뇌 및 D의 물질의 유효 확산 계수이고 (cm 2 초 -1) 아가로 오스 겔을 희석 같은 자유 매질 물질의 자유 확산 계수이다. 오늘날 R에서 가장 일반적으로 사용되는 프로브 물질TI 법은 작은 양이온의 테트라 메틸 암모늄 (TMA)이다. TMA는 74g / mol의 분자량을 가지며 용액에서 완전히 해리되고 하나의 양전하를 띤다. 이 이온을 이용한 RTI 연구는 α <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq3.jpg" /> 0.2 및 λ <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55755/55755eq3.jpg" /> 1.6 1 , 2 . 이것은 ECS 작은 불활성 분자의 확산 장애물 3 중간 ECS보다 대략 2.5 배 더 느리게 발생하는 뇌 전체 부피의 약 20 % 인 것을 의미한다. 그러나 α 와 λ는 모두 뇌의 나이, 지역, 상태 및 병리학 적 조건에 따라 다양합니다 1 . 이러한 매개 변수의 변경은 뇌 발달, 노화, 수면, 간질 및 기타 여러 근본적인 과정과 뇌의 질병과 관련되어 있습니다 1, 6 . 다른 기술은 α 와 λ를 측정하지만, RTI는 실시간으로 살아있는 조직의 국부적 인 영역에서 양자를 측정 할 수 있습니다. 이러한 이유로 RTI는 급성 및 가역적 인 챌린지 기간 동안 α 와 λ의 변화를 조사하는 데 필수적인 도구가되었습니다. RTI지지 이론은 원래 니콜슨 필립스에 의해 확인하고,이 기법은 시간 4,7 이후 광범위하게 사용되어왔다. RTI를 사용하는 실험은 희석 된 아가로 오스 겔로 이온 삼투압에 의해 근원 미세 전극으로부터의 TMA 펄스의 방출로 시작된다. 일단 방출되면, 이온은 잠재적으로 무한 수의 무작위 경로 ( 그림 1d )에서 선택하여 점원으로부터 자유롭게 확산됩니다. 이온의 변화하는 농도는 대략적으로 위치 된 이온 선택적 미세 전극 (ISM)을 사용하여 시간에 걸쳐 측정된다100 μm의 거리 ( 그림 1c ). TMA 농도의 변화를 그래프로 표시하고 이온 삼투압 미세 전극 (프로토콜에서 논의 된 매개 변수)의 D 와 운송 번호를 모두 계산할 수있는 곡선에 맞 춥니 다. 이 값을 사용하여 D * 를 구하고 α 와 λ를 모두 계산하기 위해 뇌의 관심 영역에서 절차를 반복합니다. 이온 삼투압 미세 전극의 제어, 데이터 수집, TMA 농도 곡선의 그래프 및 피팅 및 실험 매개 변수의 계산은 일반적으로이 목적을 위해 특별히 설계된 Wanda 및 Walter 프로그램에 의해 수행됩니다 (소프트웨어 및 설명서는 저자의 요청에 따라 자유롭게 이용 가능). 이 리뷰의 의정서 섹션은 설치류 뇌 조각을 RTI로 설계하고 수행하는 데 필요한 기본 절차를 설명합니다. 이 기술은 또한 비로드 (non-rod)생체의 뇌 제제 1, 4, 6, 8, 9, 인간의 뇌 조각을 포함하고있는 ENT 모델. 대표 결과 섹션에서는 데이터 해석의 뉘앙스를 강조하기 위해 이상 및 비 이상적인 결과를 제공합니다. 마지막으로, 토론 섹션에서는 문제 해결 기법, RTI의 한계, ECS를 연구하는 데 사용 된 대체 기술 및 RTI의 향후 적용에 대해 간략하게 설명합니다. <img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55755/55755fig1.jpg" /> 그림 1 : ECS를 통한 확산의 다이어그램. ( a ) ECS 다이어그램 : 일반적인 뇌 영역에서 ECS의 크기와 위치를 보여줍니다. 노란색은 회색 뇌 세포 과정 사이의 ECS를 표시합니다. ECS의 부피는 전체 조직 부피의 약 20 %입니다 ( 즉, 부피비 = 0).2). ( b ) ECS의 확대 된 다이어그램 : 뇌 세포 기하학 (회색)과 세포 외 기질 (다색성 글리코 사 미노 글리 칸과 프로테오글리칸의 그물망으로 그려져 있음)을 포함하여 왜곡에 기여하는 물리적 매개 변수를 강조합니다. ( c ) 점 소스로부터의 확산의 3D 다이어그램 : 이온 주입 소스에서 ISM으로의 불활성 분자의 순 움직임을 보여줍니다. 확산 장벽과 세포 흡수를 제외하면, 분자는 모든 방향으로 바깥쪽으로 확산되어 구형의 집중 전면을 생성합니다. ISM은 이온 삼투압 소스로부터 방출 된 불활성 분자의 국소 농도를 정량화합니다. ( d ) 뇌의 ECS에서 확산의 컴퓨터 시뮬레이션 : [먼 왼쪽] 몬테카를로 시뮬레이션을위한 설정; 녹색 구체는 뇌 세포 과정을 나타내고 적십자는 점 근원을 나타냅니다. 이 설정은 그림 1a 에 표시된 뇌 조직을 모델링합니다. [중간 이미지] 3 및6 분자는 2 차원으로 나타낸 뇌의 세포 외 공간을 통해 확산 될 때 무작위 운동을 수행합니다. 점원에서 방출 된 많은 분자가 무작위로 걷습니다. 그림 1c 에서 묘사 된 것처럼 점원으로부터 모든 분자의 순수 이동은 바깥 쪽입니다. 누적 된 무작위 걷기는 세포 사이의 공간을 개괄합니다 ( 예 : ECS, 자세한 설명은 참고 자료 5 참조). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55755/55755fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table><tbody><tr><td>A/D 및 D/A 컨버터</td><td>National Instruments Corporation</td><td>NI USB-6221 DAQ</td><td>NI USB-6221은 여전히 NI에서 '레거시' 디바이스로 판매되고 있습니다. 새로운 설치에는 NI USB-6341 X 시리즈 DAQ를 사용하는 것이 좋지만, 우리는 최신 유닛을 테스트하지 않았습니다. NI USB-6221을 MATLAB 및 Windows 7 (32비트)에서 사용하는 방법에 대해 설명합니다. 대안: BNC-2090 BNC 커넥터 패널 및 SH68-68-EP 케이블이 있는 훨씬 오래된 PCI-MIO-16E-4 A/D 컨버터(Windows XP 또는 이전 OS에서만 사용됨). Wanda Manual에 명시된 바와 같이 Axon Binary Files를 사용하는 실험적인 MATLAB 프로그램을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>아가로스</td><td>Lonza</td><td>NuSieve GTG 아가로스 #50081</td>, <td>RTI 측정을 위한 묽은 아가로스 겔을 준비하기 위한</td></tr><tr><td>ISM</td><td>Dagan</td><td>모델 IX2-700 이중 세포 내 전치 증폭기</td><td>이온 및 기준 전압 증폭기, N=0.1(기준 배럴용) 및 N=0.001(이온 배럴용), 헤드스테이지</td></tr><tr><td>생물학적 화합물 현미경(4x 및 10x 대물렌즈 포함)용</td><td></td><td></td> <td>증폭기미세 전극 팁을 치핑하고 미세 전극을 검사하기 위해; 다양한 공급 업체, 예 : AmScope</td></tr><tr><td>붕규산 세타 모세관 유리 튜브</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Warner Instruments 모델 TG200-4; 주문 # 64-0811</td><td>이온 선택적 미세 전극 및 이온 영동 미세 전극 용 이중 배럴 유리 튜브; O.D. 2.0 mm, I.D. 1.4 mm, 격막 0.2 mm, 길이 10 cm</td></tr><tr><td>브러시</td><td>Winsor & Newton</td><td>University Series 233, 크기 0</td><td>원형 쇼프트 핸들 브러시, 아마존</td></tr><tr><td>분젠 버너</td><td></td>에서 사용 가능 마이크로피펫 시각화를 위한 Fisher <td></td><td></td></tr><tr><td>카메라</td><td>Olympus</td><td>OLY-150</td>에는 <td>모니터가 필요하며, 서브스테이지 조명기의 IR 필터는 옵션</td></tr><tr><td>차트 레코더</td><td></td><td></td><td>입니다.테트라메틸암모늄 표준물질에서 보정하는 동안 및 RTI 실험 중에 이온 선택성 미세전극의 전압을 지속적으로 기록합니다. 예: Kipp & Zonen 유형 BD112 이중 캐넬 차트 기록, 사용 가능한 리퍼브</td></tr><tr><td>클로로 트리메틸 실란, 퓨리스., > 99 %</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>카탈로그 # 92360</td><td>실란 화; 주의: 가연성, 급성 독성(경구, 피부, 흡입), 피부 부식, 눈 손상, 물과 격렬하게 반응, 전체 설명은 Sigma-Aldrich 안전 정보 참조</td></tr><tr><td>상용 소프트웨어</td><td>MathWorks</td><td>MATLAB,</td><td>Wanda 및 Walter 프로그램을 사용한 데이터 수집 및 분석을 위한 데이터 수집 도구 상자. 교육용 라이센스를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>눈 보호 고글</td><td>Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고정 스테이지 복합 현미경</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td>는 고정 스테이지 겸자 Fine Science Tools#11251-10<td>이 있는 다른 복합 현미경을 사용하여</td></tr> <tr><td></td><td></td><td></td><td>유리 모세관을 깎을 수 있습니다. Dumond #5, 바람직하게는 사용되며 더 이상 필요하지 않습니다</td></tr>. <tr><td>실란화 및 이온 선택성 배럴의 팁을 액체 이온 교환기로 채우기 위한 미세 작업 흄 후드; 다양한 supliers, e.g. Erlab</td><td></td> 유리 현미경 슬라이드 Fisher#12-550A에서 판매하는 적절한 필터가 있는 Captair, 미세 전극 팁 히터/교반기 칩, Fisher Corning PC-420D <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>묽은 아가로스 겔 및 교반 용액을 준비하기 위해</td></tr><tr><td>이온 영동 장치</td><td>Dagan</td><td>ION-100 및 PS-100</td><td>ION-100은 단일 채널 이온 영동 장치 +/- 130V 준수입니다. PS-100은 외부 전원 공급 장치입니다. 대안 : 예 : Axon Instruments (현재 Molecular Devices)에서 만든 Axoprobe-1A, 생산 중단, 리퍼브 장치 (eBay 및 기타 사이트)</td></tr><tr><td>의 가용성 확인 테트라 메틸 암모늄 용 액체 이온 교환기 (LIX)</td><td>World Precision Instruments</td><td>IE190 칼륨 이온 교환기</td><td>참고 : 이것은 테트라 펜리 보레이트를 기반으로하는 원래의 Corning 칼륨 교환기 477317와 동일합니다 - 중성 캐리어 칼륨 교환기와 혼동하지 마십시오. 테트라메틸암모늄을 감지하지 못하는 취리히 ETH Simon 박사의 실험실에서 유래했으며 Fluka에서 판매합니다. 테트라메틸암모늄에 대한 액체 이온 교환기를 직접 만들 수도 있습니다 : 2,3- 디메틸 니트로 벤젠에 용해 된 칼륨 테트라 키스 중량 3 % = (p- 클로로 페닐) 붕산염. Fluka(현재 Sigma의 일부)에서 화학 물질을 구입하십시오. Oehme and Simon (1976) Anal. Chim을 참조하십시오. 악타 86 : 21-25; 주의: 이 액체 이온 교환기의 독성학적 특성은 완전히 결정되지 않았습니다. 섭취하거나 인체에 접촉하는 것은 해로울 수 있습니다. 적절한 주의를 기울이십시오! 액체 이온 교환기는 직사광선을 피해 서늘한 곳에 보관해야 합니다.</td></tr><tr><td>microelectrode 홀더</td><td>WPI</td><td>는</td><td>silanization를 위한 이온 선택적인 microeletrode prefabricate를 보전하고 액체 이온 교환기로 이온 선택적인 배럴의 끝을 채우기 위하여 M3301EH합니다; WPI는 이 홀더의 두 가지 버전, 즉 클리어 M3301EH와 블랙 M3301EH를 판매합니다. 우리의 경험에 따르면 맑은 M3301EH이 검은 M3301EH보다 더 견고한 것 같습니다.</td></tr><tr><td>micromanipulator</td><td>Narishige</td><td>MM-3</td><td>은 실란화 중에 이온 선택성 미세 전극을 prefabricatelyly하고 이온 선택형 배럴의 팁을 액체 이온 교환기로 채우는 동안 prefabricate를 배치합니다. 양호한 작동 조건의 3 축 micromanipulator로 대체 할 수 있습니다</td></tr><tr><td>micropipette puller</td><td>Sutter Instruments</td><td>모델 P-97</td><td>이중 배럴 유리관을 당기는 것; 다른 풀러는 큰 직경의 이중 배럴 유리 튜브를 수용 할 수있는 한 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>마이크로 프로브 온도계</td><td>Physiotemp</td><td>모델 BAT-12R</td><td>미세 프로브이 온도계의 기록 사이트</td></tr><tr><td>바늘</td><td>BD</td><td>주사기 및 바늘 # 305122 (25 게이지)</td> <td>silanization에 가깝게 배치됩니다. BD PrecisionGlide 바늘 25 G x 5/8 in (0.5 mm x 16 mm)</td></tr> <tr><td>대물렌즈 5X 건조</td><td>Olympus</td><td>MPlan N</td><td></td></tr><tr><td>대물렌즈 10X 침수</td><td>Olympus</td><td>UMPlan FL N</td><td>10X 대물렌즈는 침수, 개구수는 0.3, 작동 거리는 3.3mm</td></tr><tr><td>플라스틱 용기(뚜껑 포함)</td><td>Fisher</td><td>#14-375-148</td>은 <td>테트라메틸암모늄 표준 용액 및 미세 전극을 보관합니다.</td></tr><tr><td>고정 스테이지 현미경을 위한 플랫폼 및 x-y translation stage</td><td>EXFO</td><td>Gibraltar Burleigh</td><td>플랫폼은 슬라이스 챔버, 미세 조작기 및 액세서리를 보유하며, x-y translational stage</td></tr>는 <tr><td>묽은 아가로스 겔에서 RTI 측정을 위한</td>기록 안정성 다<td>공성 미니컵</td><td></td><td></td>을</tr> 손상시키지 않고 현미경을 움직입니다. 집에서 만든 <tr><td>재사용 가능한 접착제</td><td>Bostik</td><td>Blu-Tack</td><td>용기 및 기타 용도를 유지하기 위해 미세 전극을 고정하기 위해; </td></tr><tr><td>정확한 x, y, z 포지셔닝을 갖춘 Amazon 로봇 미세 조작기</td>에서 구할 수 있는 다양한 공급업체 <td>Sutter Instruments</td><td>MP-285</td><td>이온 선택성 미세 전극과 이온 영동 미세 전극을 별도로 고정하려면 두 개의 미세 조작기가 필요합니다. 또한 마이크로피펫을 간격 배열로 접착할 수 있습니다(텍스트 참조).</td></tr><tr><td>저역 통과 필터가 있는 신호 조정 장치</td><td>Axon Instruments</td><td>CyberAmp 320 또는 380</td><td>은 제조업체에서 더 이상 사용할 수 없지만 E-Bay에서 구할 수 있습니다. 대안: 예: Cygnus Technology의 FLA-01 필터/증폭기. 이 기기는 다극 베셀 필터를 사용하여 10Hz에서 최소 차단이 가능한 단일 채널 기기이지만, 필요한 경우 더 낮은 차단 주파수(2Hz)로 수정할 수도 있습니다.</td></tr><tr><td>은선</td><td>A-M 시스템</td><td>#7830</td><td>직경 0.015", 베어 (코팅 없음)</td></tr><tr><td>슬라이스 챔버</td><td>하버드 장치</td><td>워너 모델 RC-27L</td><td>이것은 침수 슬라이스 챔버입니다; 실란화를 위해 인터페이스 슬라이스 챔버</td></tr><tr><td>실현미경</td><td></td><td></td>을 사용하지 마시<td>고 이온 선택형 배럴의 끝을 액체 이온 교환기로 채우지 마십시오; 수평으로 장착; 다양한 공급업체</td></tr><tr><td>의 주사기, 10 mL</td><td>BD</td><td>Syringes and Needles #309604</td><td>미세전극을 되메우고 실란화합니다. BD Luer-Lok 팁</td></tr><tr><td>주사기 필터 0.22 &마이크로; m pore</td><td>Whatman</td><td>#6780-1302</td><td>는 백필 솔루션을 필터링합니다. Fisher</td></tr><tr><td>주사기 바늘, 28게이지, 97mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>MicroFil MF28G-5</td>에서 미세전극 테프론(=PTFE) 튜빙<td>을 백필하기 위해</td></tr> 사용 가능 <tr><td></td><td>구성 요소 공급</td><td>STT-28 PTFE 튜브 라이트 월(28게이지)</td><td>이온 선택성 배럴의 실란화를 위해; BD PrecisionGlide 바늘 25G x 5/8인치에 맞습니다. 참고 : 테프론은 필수적이며 PVC 튜브는 뜨거운 왁스로 녹습니다.</td></tr><tr><td>온도 제어 시스템</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Warner 모델 TC-344B 및 SH-27A</td><td>TC-344B는 이중 자동 온도 컨트롤러이고 SH-27A는 인라인 히터입니다.컨트롤러 및 히터는 Warner 슬라이스 챔버</td></tr><tr><td>테트라메티암모늄(TMA) 염화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-3411</td><td>5M 솔루션과 함께 작동합니다. 주의: 급성 독성(경구, 피부, 흡입), 발암성, 수생 환경에 유해함, 전체 설명은 Sigma-Aldrich 안전 정보 참조</td></tr><tr><td>진동 블레이드 마이크로톰</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td>뇌 슬라이스</td></tr><tr><td>절단 자일렌</td><td>Fisher</td><td>X5-1</td><td>실란화; 주의: 가연성, 급성 독성(경구, 피부, 흡입), 피부 부식, 눈 손상, 발암성, 전체 설명은 Fisher Safety Information 참조</td></tr></tbody></table>

뇌의 세포 외 공간의 부피비와 비틀림을 정량화하기위한 테트라 메틸 암모늄을 이용한 실시간 이온 도입

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

이 리뷰에서는 살아있는 두뇌의 세포 외 공간 (ECS)을 탐구하고 정량화하기위한 금 이온 표준 인 실시간 이온 삼투압 (RTI) 방법을 수행하기위한 기본 개념과 프로토콜에 대해 설명합니다. ECS는 모든 뇌 세포를 둘러싸고 있으며 간질 액과 세포 외 기질 모두를 포함합니다. 신경 전달 물질, 호르몬 및 영양소를 포함한 뇌 활동에 필요한 많은 물질의 운반은 ECS를 통한 확산에 의해 발생합니다. 이 공간의 부피와 기하 구조의 변화는 수면과 허혈과 같은 병리학 적 상태와 같은 정상적인 뇌 과정에서 발생합니다. 그러나, 특히 병이있는 상태에서 뇌 ECS의 구조와 조절은 아직 미개척이다. RTI 방법은 살아있는 두뇌의 두 가지 물리적 매개 변수, 즉 체적 분율과 비틀림을 측정합니다. 부피 분율은 ECS가 차지하는 조직 부피의 비율입니다. 구불 구불 한 (tortuosity)은 뇌를 통해 확산 될 때 물질이 마주 치는 상대적인 방해의 척도이다장애물이없는 매체에 비해 RTI에서 불활성 분자는 근원 미세 전극에서 뇌 ECS로 펄싱된다. 분자가이 소스에서 멀리 확산함에 따라 이온의 변화하는 농도는 약 100 μm 떨어진 이온 선택 미세 전극을 사용하여 시간에 따라 측정됩니다. 결과적인 확산 곡선으로부터 부피 분율 및 비틀림을 계산할 수 있습니다. 이 기술은 여러 종 (인간 포함)의 뇌 조각과 생체 내 에서 ECS의 급성 및 만성 변화를 연구하는 데 사용되었습니다. 다른 방법과 달리 RTI는 실시간으로 두뇌 ECS의 가역적 및 비가 역적 변화를 검사하는 데 사용할 수 있습니다.

RTI 기법의 유용성은 α 와 hypoosmolar challenge 동안 변화를 측정하기 위해 고안된 실험에서 입증된다 ( 그림 8 과 그림 9 ). hypotonic ACSF를 세척하여 ECS의 삼투압을 줄이면 α 가 감소하고 λ 13이 증가한다는 것이 이전에 밝혀졌습니다. 이 실험에서, RTI는 저온 ACSF의 세척 조건 동안 및 제어 조건 모두 하에서 래트 뇌 절편에서 수행되었다. ISM을 제작하고, 교정 파라미터를 Wanda에 입력하여 Nicolsky 방정식에 맞추어서 58.21mV의 기울기 ( M )를 계산했습니다. ISM과 iontoph...

이 프로토콜은 살아있는 두뇌의 세포 외 공간 (ECS)의 물리적 매개 변수를 측정하는 방법 인 실시간 이온 삼투압을 설명합니다. ECS로 방출 된 불활성 분자의 확산은 ECS 부피 분율 및 비틀림을 계산하는 데 사용됩니다. 그것은 뇌의 ECS에 대한 급격한 가역적 인 변화를 연구하는데 이상적입니다.

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

이 절차의 전반적인 목표는 뇌 조직에서 세포 외 공간의 부피, 분율 및 비틀림을 정량화하는 것입니다. 이 방법은 세포 외 공간과 생리학 및 질병 사이의 관계에 관한 주요 질문에 답합니다. 이 기술의 주요 장점은 세포 외 공간의 두 가지 중요한 매개변수를 실시간으로 특성화할 수 있다는 것입니다.일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 이온 동동 미세전극이 실험 중에 특성을 변경하는 경향을 보이고 실험 중에 문제 해결이 자주 필요하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 성공적인 기록을 얻기 위해 여러 단계에 걸쳐 이온 선택성 미세 전극인 이온 선택 미세 전극의 정밀한 조작이 필요하기 때문에 매우 중요합니다. 이 절차를 시작하려면 테트라메틸암모늄(TMA)이 포함된 ACSF를 침수 챔버를 통해 분당 2밀리리터로 실행합니다.온도 조절기를 원하는 온도로 설정하고 실험 기간 동안 ACSF에 95%의 산소, 5%의 이산화탄소를 거품을 일으킵니다. 다음으로, 접지 전극을 홀더에 장착하고 침수 챔버를 통과하는 ACSF에 팁을 담그십시오. 그런 다음 다공성 컵에 이전에 준비한 TMA가 함유된 0.3% 아가로스를 채우고 침수실에 넣습니다.이제 iontophoresis microelectrode를 하나의 micromanipulator의 피펫 홀더에 고정합니다. iontophoresis microelectrode wire를 iontophoresis 장치의 헤드 스테이지에 연결합니다. 다음으로, 보정된 ISM을 두 번째 마이크로 매니퓰레이터에 고정하고 ISM을 헤드 스테이지에 연결합니다.그런 다음 Wanda 및 Walter 프로그램이 포함된 컴퓨터를 켭니다. Wanda GUI에서 Calibrate(보정)를 클릭합니다. 그런 다음 Calibration(교정) 상자에 ISM 교정 중에 측정된 전압을 입력하고 Fit Data(데이터 맞춤)를 클릭합니다.그런 다음 Calibrate 상자에서 Accept를 클릭하여 생성된 기울기와 간섭을 기본 GUI로 자동으로 전송합니다. GUI의 왼쪽에서 모든 실험 매개변수가 해당 항목에 설정되어 있는지 확인합니다. 다음으로, 한천 컵에 온도 프로브를 놓습니다.GUI의 Measuring Electrode(측정 전극) 상자의 Temperature 항목에 측정된 온도를 기록합니다. 그런 다음 미세 전극을 아가로스 속으로 최소 1, 000마이크로미터 깊이로 낮추고 컵의 중앙에 놓습니다. 10X 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 시각화합니다.2채널 증폭기에서 ISM 채널 커넥터를 전압 감산 출력으로 수동으로 이동하여 기준 채널과 ISM 채널 사이의 감산을 설정합니다. 세 방향 축 모두에서 팁을 서로 중앙에 맞춥니다. 다음으로, 미세 조작기 제어 상자에서 두 미세 전극의 상대 위치를 영점으로 설정하고 미세 전극이 정확하고 정밀하게 중앙에 있는지 확인합니다.그런 다음 ISM을 한 축에서 iontophoresis 미세 전극에서 120μm 떨어진 곳으로 이동합니다. 그런 다음 GUI에서 Acquire를 클릭하여 녹음을 시작하고 프로그램이 전체 녹음을 위해 실행되도록 합니다. 이 절차에서는 컴퓨터에서 Walter 프로그램을 엽니다.Zero Records From 메뉴에서 Wanda Voltoro 버튼을 클릭하여 Wanda에서 생성된 레코드를 읽습니다. 다음 팝업 창에서 읽을 레코드를 하나 이상 선택하고 열기를 클릭합니다. One Write Excel 메뉴에서 Sheet 1.3을 클릭하고 레코드가 자동으로 그래프로 표시될 때까지 프롬프트를 따릅니다.피팅 절차를 시작하려면 두 가지 옵션(Two Options) 메뉴에서 선택 버튼을 클릭합니다. 그런 다음 그림 2 팝업 창에서 마우스를 사용하여 처리할 첫 번째 레코드 위로 십자선을 이동하고 마우스 버튼 중 하나를 눌러 레코드를 선택합니다. 그런 다음 메뉴에서 맞춤 곡선을 클릭하고 최소 20회 반복을 사용하여 데이터의 정확한 맞춤을 얻습니다.다음으로, 모든 데이터 포인트에 맞게 모두를 선택하고 계속을 선택합니다. 프로그램이 표시된 곡선에 맞습니다. 그런 다음 7개의 결과 메뉴에서 Excel을 클릭하여 적절한 스프레드시트 프로그램에 결과를 쓰는 옵션을 선택합니다.Excel 파일의 이름을 지정합니다. iontophoresis microelectrode의 기능을 결정하는 데 사용될 생성된 데이터를 기록하고 기록합니다. iontophoresis 미세전극이 실험에 적합한 것으로 간주되는 경우 Wanda GUI의 TransportNum 끝 필드에 모든 시도의 평균 수송 횟수를 기록합니다.이 절차에서는 400마이크로미터 두께의 뇌 절편을 기록실에 놓고 흐르는 ACSF에 완전히 잠기도록 합니다. 다음으로, 이온토영동 미세전극과 ISM을 모두 뇌 절편의 관심 영역 위로 이동합니다. 두 전극을 흐르는 ACSF에 담그되 슬라이스 위에 담그십시오.그런 다음 레퍼런스 및 이온 감지 채널 모두의 전압을 0밀리볼트로 오프셋합니다. 두 채널의 전압이 안정화될 때까지 기다립니다. 차트 레코더에서 ISM의 이온 감지 채널에서 측정된 전압을 표시합니다.다음으로, ISM과 iontophoresis 미세전극을 슬라이스에 200마이크로미터 깊이, 서로 120마이크로미터 떨어진 곳에 놓습니다. 흐르는 ACSF와 뇌에서 측정된 TMA 신호 간의 전압 차이를 계산하고 이 값을 Wanda GUI의 측정 전극 상자의 Baseline Volt Millivolt 필드에 입력합니다. GUI의 왼쪽에서 모든 실험 매개변수가 올바르게 입력되었는지 확인합니다.Acquire(획득)를 클릭하여 녹음을 시작하고 전체 녹음을 허용합니다. 슬라이스에서 두 미세 전극을 모두 이동한 후 차트 레코더를 사용하여 vol 사이의 변화를 확인합니다.tage 지금 측정한 값과 이전에 측정한 값입니다. 뇌의 기록을 분석하려면 Walter 프로그램을 사용하여 아가로스 데이터 분석 절차를 반복합니다.Walter 메뉴에서 Excel을 클릭하여 스프레드시트 프로그램에 데이터를 씁니다. 그런 다음 뇌 ECS의 부피 분율, 뇌 ECS의 비틀림 및 비특이적 청소율을 기록합니다. 운송 번호를 확인하려면 agarose에서 새 녹음을 수행하고 Walter 프로그램의 절차를 반복하여 운송 번호를 얻습니다.스프레드시트를 검사하고 뇌 측정 전에 얻은 운송 번호에서 10% 이상 변경된 운송 번호가 있는지 확인합니다. 그렇다면 이온 동동 미세 전극으로 얻은 데이터는 신뢰할 수 없습니다. 이 단계에서 측정된 수송 횟수는 뇌 측정 전에 얻은 수치와 거의 일치해야 하며, 그렇지 않으면 부피 분율이 정확한 것으로 간주될 수 없습니다.새로 얻은 ISM 교정 데이터를 Wanda Calibrate 상자의 입력으로 사용하고 기울기 값이 이전 교정과 10% 미만 차이가 나는지 확인합니다. 다음은 한천에서 얻은 단일 시험의 대표적인 데이터로, TMA의 농도 곡선을 입증합니다. 이것은 Walter의 데이터 처리에서 얻은 적합 곡선입니다.피팅 곡선에서 데이터가 중복된다는 것은 Walter가 수행한 곡선 피팅이 이 시험에서 확산을 정확하게 모델링했음을 보여줍니다. 다음은 뇌에서 실험하기 전의 한천 측정 표입니다. 다음은 대조군 및 실험 조건 하에서 쥐의 뇌 절편에서 수행된 측정치를 요약한 것입니다.알파는 저삼투압 챌린지 동안 감소한 반면 비틀림은 예상대로 증가했습니다. Alpha가 복구 조건에서 컨트롤 값을 초과했습니다. 그리고 다음은 뇌에서 실험한 후의 아그라 측정 표입니다.실험 전후의 평균 수송 횟수는 서로 10% 이내였으며, 이는 뇌에 기록된 값이 신뢰할 수 있음을 나타냅니다. 이 절차를 마스터하면 이틀에 걸쳐 14시간 만에 수행할 수 있습니다. 첫째 날에는 ISM이 제작되고 보정됩니다.2일차에는 ISM을 재보정하고 실시간 이온영동을 수행합니다. 이 절차를 시도하는 동안 먼저 전극의 간격을 정확하게 하는 것이 중요합니다. 둘째, 이온 영동 미세전극의 수송 수가 실험 과정 전반에 걸쳐 안정적으로 유지되는 경우에만 실험을 수락하는 것이 중요합니다.세포 외 공간에서 작은 양이온의 확산을 특징짓는 이 절차를 따라 세포 외 공간에서 큰 미세분자가 어떻게 움직이는지에 대한 질문에 답할 수 있는 통합 광학 이미징 방법과 같은 다른 기술을 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 건강 및 질병에서 살아있는 뇌의 뇌 세포 외 공간 부피 및 비틀림을 정량화하기 위해 실시간 이온 영동 방법을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 지켜봐 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 쥐의 관상 해마 뇌 절편의 전기 자극에 대한 유발 칼륨 이온 농도 역학을 보여줍니다. 바이폴라 자극 전극은 해마의 CA3 영역의 방사선층에 삽입되고, 칼륨-이온 선택 전극은 CA1 방사선층에 배치됩니다. 전기 자극은 활동 전위를 일으켜 칼륨 이온 방출을 일으킵니다. 마지막으로, 억제 분자의 존재 하에서 유발된 칼륨 이온 반응의 부족은 칼륨 이온 농도 역학이 Schaffer 담보의 활동 전위 생성에 기인한다는 것을 확인합니다.

Coronal Hippocampal Slices에서 유발된 칼륨 이온 농도 역학 측정

이 동영상은 이온 선택성 및 이온 영동 미세전극을 사용하여 전기 신호를 측정하고 비교함으로써 뇌 절편의 세포 외 공간을 특성화하는 방법을 보여줍니다. 이 프로세스는 공간의 부피 분율과 비틀림 정도를 결정하는 데 도움이 됩니다.

Ion-Selective and Iontophoresis microelectrodes를 사용한 뇌 절편의 세포외 공간 특성화

출처: Moye, S. L., et.al.  Lucifer Yellow Iontophoresis를 사용한 성상세포 형태 시각화. J. Vis. Exp. (2019).  이 비디오는 고정된 뇌 절편에서 성상세포 형태를 연구하기 위해 형광 염료 이온 영동을 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 연구는 저전압 전류 하에서 음이온성, 친수성 염료를 세포질로 전달하기 위해 전극으로 성상세포체(astrocyte soma)를 뚫는 방법을 자세히 설명하여 염료가 체세포(soma)와 가지를 확산시키고 표지할 수 있도록 합니다. 그런 다음 컨포칼 현미경을 사용하여 표지된 성상세포를 시각화하여 형태학적 통찰력을 제공합니다.

Visualizing Astrocyte Morphology Using Fluorescent Dye Iontophoresis in a Fixed Mouse Brain Slice

이 문서에서 우리는 높은 공간과 시간적 정밀도 시냅스 신호의 통합을 조사하는 기술로 신경 전달 물질의 빠른 마이크로 이온 도입을 소개합니다.

글루타민산 염과 GABA의 빠른 마이크로 이온 도입 : 시냅틱 통합을 조사하는 유용한 도구

우리는 뇌 조직의 이온 농도 측정을 위한 두 가지 유형의 이온 선택성 미세 전극(이중 배럴 및 동심원)의 제조, 보정 및 특성을 보여줍니다. 그런 다음 이들은 쥐 해마 절편 준비에 사용되어 흥분 활동이 세포 외 칼륨과 나트륨 농도를 모두 변화시킨다는 것을 보여줍니다.

뇌 조직에서 측정 세포 외 이온의 신호에 대한 두 번 질주과 동심 미소 전극

깨어 있는 쥐의 기록 부위 부근에서 세포 외 신경 활동을 동시에 기록하고 여러 신경 활성 물질을 방출하는 전극 구성 방법을 제시합니다. 이 기술을 사용하면 관심 있는 뉴런에 대한 추정 국소 시냅스 입력값을 자세히 분석할 수 있습니다.

깨어 마우스의 신경 활성 물질의 Microiontophoretic 응용 프로그램과 결합하여 신경 활동의 세포 외 기록

여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

이 문서에서는 마이크로-CT 영상, 어떤 병 변 양이 정해질 수 있다와 전극 전체 뇌의 맥락에서 높은 정밀도와 위치에 대 한 작은 동물 두뇌를 준비 하는 간단한 방법을 설명 합니다.

병 변 특성화 및 작은 동물 두뇌에 전극을 위치에 대 한 마이크로-CT 기반 방법

성상 세포는 형태학적으로 복잡한 세포이며, 여러 과정과 덤불 영토에 의해 예시됩니다. 그들의 정교한 형태를 분석하기 위하여는, 우리는 가볍게 고정한 조직에서 세포내 Lucifer 황색 이온 포레시스를 능력을 발휘하기 위하여 믿을 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

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우리는 뇌 전기장 측정 및 관련 바이오마커-대뇌 혈류의 관점에서 두개외 자극에 대한 용량-반응 곡선을 평가하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 뇌에 침습적인 전극 배치를 포함하기 때문에 전신 마취가 필요하며 통제된 호흡보다는 자발적 호흡이 선호됩니다.

두개외 자극 전극의 배치 및 마취된 마우스의 대뇌 혈류 및 두개내 전기장 측정

학습하세요 실시간 이온 도입법을 이용하여 뇌 조직의 세포 외 공간 부피비와 비틀림을 정량화하는 방법을. TMA를 사용한 이 기술은 생체 뇌에서 ECS 물리적 매개변수를 실시간으로 측정하여 뇌 생리학 및 질병 연구에 활용됩니다.

뇌의 세포 외 공간의 부피비와 비틀림을 정량화하기위한 테트라 메틸 암모늄을 이용한 실시간 이온 도입

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