Name: 상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: 배우세요 상부 기도 점막 내액 비침습 샘플링 기법으로 사이토카인 및 케모카인과 같은 면역 매개체를 정량화하는 방법입니다. 이 기술은 자극 없이 생체 내 기도 면역 특성을 연구하여 소아 호흡기 질환 연구에 활용됩니다.

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우리는 어린이 가족 COPSAC2010 코 호트 연구의 그들의 지원 및 헌신에 대 한 우리의 감사를 표현 한다. 우리는 인정 하 고 COPSAC 연구 팀과 cytokines와 발산의 측정 기술자 Lisbeth Buus Rosholm, 덴마크의 기술 대학에서에서 기술 도움의 독특한 노력을 주셔서 감사 합니다.

헬싱키의 선언의 원칙에 따라 연구 했다. 코펜하겐 (KF 01-289/96 COPSAC2000 )와 H B-2008-093 COPSAC2010및 덴마크어 데이터 보호 기관에 대 한 윤리 위원회에서 승인, 확인 하 고 등록 하기 전에 각 과목의 두 부모 로부터 서 면된 동의 얻어.
1. 실험 설치
<ol>
	<li>필터 종이 시트를 사용 하 여 (섬유 hydroxylated 폴리에스터 시트 참조 테이블의 재료)6,7.<ol>
		<li>나이가 어린이 성인 (5 x 20 x 10 m m (L의 짧은 팔))에 대 한 스트립 3 x 15 m m 1 개월 된 아이 대 한 크기와 L-모양에 잘라.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>집게를 사용 하 여 유아의 각 콧구멍에 필터 종이의 한 조각을 삽입 합니다. 열 등 한 비 (신생아에 대 한 콧구멍 및 다른 모든 연령대에 1.5 cm 대략 1 cm)의 앞쪽 부분에 필터 종이 놓습니다.<ol>
		<li>신생아를 침대에 놓고 그들에 게 편안 함을 위해 설탕 물. 참고: 다른 모든 연령대의 어린이 위한 샘플링 수행 됩니다 가장 쉽게의 자에 앉아 주제.</li>
		<li>더 오래 된 아이 들에 대 한 각 콧구멍에 L 모양 필터 종이의 긴 팔을 삽입 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>불편을 최소화 하 고 필터 종이의 실수로 손실을 방지 하기 위해 콧구멍 주위 코 클립을 적용 합니다.</li>
	<li>흡수의 2 분 후 필터 종이 제거 합니다.</li>
	<li>레이블이 지정 된 튜브에 필터 종이 놓고-80 ° c.에 즉시 그들을 멈추게합니다</li>
	<li>샘플링의 날에는 아이 의해 표시 된 기도 감염의 증상의 기록을 합니다.</li>
	<li>어떤, 재채기, 지속적인 울고, 또는 샘플링의 2 분 동안 발생 하는 비 출혈을 기록 합니다.</li>
</ol>
2입니다. 기도 면역-중재자의 정량화
<ol>
	<li>냉동 실에서 10 무작위로 샘플을 가져가 라. Id 번호를 기록 합니다. 전체 작업 과정에서 얼음에 샘플을 유지.</li>
	<li>얼음에 녹고 후 담가 (주제) 당 필터 종이 양쪽 콧구멍에서 300 µ L 갓의 버퍼 ( 재료의 표참조) 포함 한 완전 한 protease 억제제 태블릿 ( 재료의 표참조) 버퍼의 25 mL 당.<ol>
		<li>필터 종이의 크기에 따라 버퍼의 볼륨을 조정 합니다.<ol>
			<li>버퍼의 300 µ L를 사용 하 여 필터 용지 크기에서 3 x 15 m m에 대 한.</li>
			<li>하나의 필터 종이 사용할 수 있는 경우에 절반 버퍼 볼륨 (150 µ L)을 사용 합니다.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>타이머를 5 분 사용에 대 한 접시 통 (400 rpm)에 샘플을 전송.</li>
	<li>전송 촉촉한 필터 서류 및 분석 결과 버퍼는 microcentrifuge 배치는 셀 루 로스 아세테이트 튜브 필터 (0.22 μ m 기 공 크기)의 컵으로 튜브 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>필터링 된 코 추출 튜브를 5 분 (4 ° C)에서 냉각된 원심 분리기에서 16000 x g에서 원심.</li>
	<li>컵을 제거 하 고 낮은 단백질 바인딩 스토리지 접시 ( 테이블의 자료를 참조)의 우물에 비 추출 물 aliquoting 동안 얼음에 튜브를 유지.</li>
	<li>분석까지-80 ° C에 저장 합니다.</li>
	<li>Cytokines와 높은 감도, electrochemiluminesce 기반 다중화 어레이 시스템을 사용 하 여 비 강 추출 물에 발산의 농도 결정 ( 재료의 표참조). 참고: 인간의 10-플렉스 TH1/TH2 cytokine 분석 결과, 9-플렉스 chemokine 분석 결과, 및 단일-플렉스 IL-17A, TGF-β1, 및 TSLP 수행 했다 여기.<ol>
		<li>분석, 대 한 코 추출 물 4 ° c.에 하룻밤을 품 어 ( 재료의 표참조) 프로토콜 표준 제조 업체 당으로 측정을 수행 합니다. 참고:는 immunoassays 1 사이 배열 하는 측정에 대 한 높은 동적 범위는 일반적으로 ( 테이블의 자료를 참조) &#38; 10000 pg/mL, 일부 분석에 대 한 100000 pg/mL 될 수 있습니다. 즉, 같은 희석, 따라서 건강 하 고 병에 걸린 주제에 서로 다른 희석의 영향을 제한 하는 다른 유사한 immunoassays에서 경우에서 모든 샘플을 실행할 수 있습니다. 모든 cytokines에 대 한 검색의 하한값 1 pg/mL 또는 1 사이 배열, 그리고 발산, &#38; 50 pg/mL. TSLP 나이의 1 달에서 샘플의 98%에서 감지 되지 않았습니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3입니다. 통계
<ol>
	<li>로그 변환 cytokine 및 chemokine 레벨의 일반적으로 분산된 오차를 분석 하기 전에 데이터입니다.</li>
	<li>샘플 하나 이상의 일괄 처리에서 분석 되는 경우 batch-wise 로그 변환 데이터 중심으로 대 한 cytokine 및 chemokine 데이터를 수정 합니다.<ol>
		<li>전체 평균 및 안티 로그 변환 원래 측정 단위로 데이터를 통합 합니다. 참고: 분석 완료의 모든 집합에 대 한 cytokines 및 발산의 수준에 영향을 주는 변수를 조절 보십시오. 이 샘플링, 형제, 가정, 등등 있는 애완 동물 중 모성 영향 (예를 들어, 알코올 소비와 흡연 임신 중), 모유 수 유, 불리 한 이벤트 수 있습니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Bousquet, J., van Cauwenberge, P., Khaltaev, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+Rhinitis+and+Its+Impact+on+Asthma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma.</a> J Allergy Clin Immunol. 108 (5), Supplement 147-334 (2001).</li>
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<li>Nakano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1+level+in+epithelial+lining+fluid+of+patients+with+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1 level in epithelial lining fluid of patients with acute respiratory distress syndrome.</a> Respirology. 12 (5), 740-743 (2007).</li>
<li>Komaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine-mediated+xanthine+oxidase+upregulation+in+chronic+obstructive+pulmonary+disease%27s+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Cytokine-mediated xanthine oxidase upregulation in chronic obstructive pulmonary disease's airways.</a> Pulm Pharmacol Ther. 18 (4), 297-302 (2005).</li>
<li>Moeller, A., Franklin, P., Hall, G. L., Horak, F., Wildhaber, J. H., Stick, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+exhaled+breath+condensates+in+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Pulmonol%22%5BJournal%5D)">Measuring exhaled breath condensates in infants.</a> Pediatr Pulmonol. 41 (2), 184-187 (2006).</li>
</ol>

모든 저자는 아무 잠재적인, 인식, 또는 진짜 상충이이 원고 내용에 관한 선언합니다. 자금 지원 기관 설계 및 연구;의 행위에 어떤 역할을 없 었 어 요 수집, 관리, 및 해석 데이터; 나는 준비 검토을 원고의 승인. 제약 회사는 연구에 참여 했다.

여기에 제시 된 기술로, vivo에서 위 기도 점 막 면역 프로필 1 개월 이전 완료 하지 않은 나이 일찍부터 어린이 확인할 수 있었습니다. 우리는 신생아의 기도 면역 프로필에 특정 기도 박테리아의 그 존재와 感7,11, 뿐 아니라 다른 전과 perinatal 노출, 미러 했다 관찰 했다. 또한, 우리는 높은 복용량 비타민 d의 무작위 미 량 재판의 행동의 메커니즘을 연구를 이러한 기도 면역 프로필 데이터 사용 이러한 결과 유효성과 기도 면역 중재자의 후속 vivo에서 정량화에 대 한 비 침 투 적인 샘플링 기법으로 점 막 내벽 유체 기술의 유틸리티를 밑줄.
다음 방법 구현 하기 전에 고려 가치가 있다: 점 막 내벽 액체 매트릭스에서 cytokines를 측정 하기 위해 electrochemiluminescence 프로토콜에 의해 제공 하는 등 ...

코의 점 막 내벽 액체 위 기도 시스템의 액체 부분을 게. 복잡 한 매트릭스 상피와 미생물 침입에 대 한 방어의 첫 번째 라인을 구성 하는 면역 세포 사이 상호 작용에서 파생 하는 중재자의 그것에 의하여 이루어져 있다. 비 강 점 막이 쉽게 접근할 수 있는, 그리고 코와 기관지1사이의 강력한 기능과 면역 관계 있다. 이 구획은 어린 시절에, 인생에서 나중에 더 널리 다른 호흡기 질환의 범위 뿐만 아니라 천식과 알레르기 비 염 등 일반적인 기도 질병에 관하여 특별 한 관심의 이다.
여기, 우리는 샘플 그대로 점 막 비 강에서 액체를 안 감 후속 추출 절차 뿐 아니라 필터 종이, 비 침 투 적인 기법을 사용 하 여, 하는 데 사용 그들의 정량화 하기 전에 필터 논문에서 단백질 기반 analytes elute 메서드의 구현을 설명 합니다. 이 기술은 예를 들어 vivo에서 모두 건강 한 개인과 다양 한 호흡기 질환과 개인의 면역 시그니처를 사용할 수 있습니다. 또한, 특정 면역 서명에 대 한 중요성의 노출을 확인 하 고 예측 또는 중재자 나중 질병 개발의 경우 평가를 가능 하다.
점 막 내벽 액체 이전 코 게2는 종종 앞 코 도전 테스트는 알레르기 염증 반응을3,4자극을 높은 수준에서 소개 된다에 의해 획득 되었습니다 했다. 그러나, 코 게 기술은 어린 아이에서 가능 하지 않습니다 하 고 수준 분석 결과5의 검출 한계 보다 낮을 수 있습니다 희석된 중재자로 서, 결과 혼동 한다 한 알 수 없는 희석 요소를 소개 합니다. 또한,이 알 수 없는 희석 요인 때문 코 도전 테스트에서 측정 된 실정이 응답 설정 일대에 코 게 기술의 유용성을 제한 함으로써 개인 간의 비교 되지 않습니다. 마지막으로, 알레르기 도전만 민감하게 과목에 적용 이며 히 스타 민 도전 등 기타 문제는 순수, 잠재적으로 중재자 릴리스에 천장 효과 일으키는. 이러한 문제는 어디 체액과 분석 수준을 개별 분 비 간 개별 분산에 영향을 주는 유일한 요소는 점 막 내벽 유체 컬렉션에 대 한 표시 필터 종이 기반 기술에서 피할.
추출 프로시저 동안 analytes는 eluted 필터 논문에서 버퍼의 동일한 볼륨의 추가 후 모든 샘플. 이 모든 샘플의 비슷한 비보 전 희석 하시 더군요. 알 부 민-기반 isotonic 소금 솔루션의 추출 버퍼 추출 단계;에 사용 그것은 단백질 기반 중재자의 추출 가능 하 게 하 고 단백질 제한 이후 동결 중 정량화 이전 eluted 단백질의 변성을 안정 시킨다. 추출 단계 단백질 저하를 방지 하려면 protease 억제제의 칵테일 추출 버퍼에 추가 됩니다.
그대로, vivo에서정량화를 허용 하는 기술의 구현-점 막 사이트에서 생성 된 면역 중재자는 최대 중요성 이다. 첫째, 점 막 사이트는 신체에서 가장 큰 면역 기관 최대 수 있습니다. 둘째, 코 위치 공중 노출의 주 사이트 이며1폐 호흡기 면역 구획에 밀접 하 게 연결 된. 셋째, 비 침 투 적인 기법으로이 중요 한 장기를 측량의 가능성 건강과 질병 기도에 관하여 중요 한 미생물 면역 상호 작용 축에 과다 한 정보를 제공 하는 가능성을 엽니다. 넷째, 약물과 미 량 영양소의 무작위로 고르 곤, 통제 된 실험에서 로컬 면역학 변경 공부 등이 기술의 다른 많은 가능한 응용 프로그램 있다.
우리 처음 우리 7 세 어린이 건강 한 컨트롤13대 알레르기 비 염으로 점 막 내벽 액체의 면역 프로필을 결정 하는 어린 시절2000 (COPSAC2000) 일대에에 코펜하겐 예비 연구에의 기술 구현. 그 후, 우리가 성공적으로 적용이 기술을 경도 COPSAC2010 코 호트 및 평가 기도 면역 프로필에 1 달, 2 년, 그리고 나이의 6 년 및 급성 호흡기 증상의 인스턴스. 1 개월 된 신생아 결과 면역 서명 및 초기 생활 환경 노출7,8,9,10,,1112사이 중요 한 연결을 설명 했다.

<table><tbody><tr><td>섬유질 하이드록실화 폴리에스터 시트</td><td>Accuwik Ultra&nbsp;</td><td>SPR0730</td><td>여과지</td></tr><tr><td>Milliplex 분석 버퍼&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>L-AB</td><td>버퍼</td></tr><tr><td>저단백질 결합 보관 플레이트&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>CLS8161</td><td>플레이트</td></tr><tr><td>프로테아제 억제제</td><td>Roche</td><td>11873580001</td><td>완전한 EDTA-free 프로테아제 억제제 칵테일</td></tr><tr><td>리더 멀티-스폿 플레이트</td><td>Mesoscale</td><td>NA</td><td>섹터 이미저 6000</td></tr><tr><td>어세이&nbsp;</td><td>중규모</td><td></td><td>인간 10-plex TH1/TH2 사이토카인 분석 및 9-플렉스 케모카인 분석 및 싱글플렉스 IL-17A, TGF-&베타; 1및 TSLP. 설명은 www.mesoscale.com 에서 온라인으로 찾을 수 있습니다.</td></tr></tbody></table>

상부 기도 면역 중재자 수준 vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

이 프로토콜 설명 그대로 상부 기도 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링을 합니다. 그것은 또한 기도 국 소 면역 서명, 자극 절차 (종종 다른 기술에서 사용)에 대 한 필요 없이 연구에 대 한 유체 있다 면역 중재자의 분석 전에 사용 추출 절차를 자세히 설명 합니다. 점 막 내벽 액체 필터 종이의 스트립에 샘플링 비와 흡수의 2 분 왼쪽 열 등의 앞쪽 부분에 배치. Analytes는 eluted 필터 논문에서 그리고 추출 된 단백질 기반 있다 동일한 샘플에 낮은 및 높은 레벨 analytes의 높은 감도 정량화에 대 한 수는 electrochemiluminescence 기반 immunoassay에 의해 분석 된다. 상부 기도 점 막에 통로 신호 하는 특정 면역에 관련 된 20 미리 면역 중재자의 비보에 레벨 측정 하지만 기술은 그 특정 패널 또는 샘플링 사이트에 국한 되지 않습니다. 기술은 처음 알레르기 비 염으로 어린 시절2000 (COPSAC2000) 일대에 7 세 어린이 천식에 코펜하겐 예비 연구에서 구현 되었습니다. 그것은 그 후 경도 COPSAC2010 출생 코 호트, 1 달, 2 년, 그리고 나이의 6 년에와에서 급성 호흡기 증상의 경우에에서 사용 되었다. 우리는 성공적으로 얻은 및 700 1 개월 어린이의 620 (89%)에서 샘플을 분석; (중간값 (간 사분 위 수 범위 (IQR))로 보고 분석 결과 검출 한계 아래 몇 가지 샘플 했다 합니다. 각 중재자에 대 한 검출 한계 (즉, 0에서 탐지의 낮은 제한 세트 포인트를) 아래에 샘플의 번호 29 (7.25-119.5) 이었다. 이 기술은 수 에 비보 기도 점 막 면역 프로 파일의 출생에서 정량화, 경도, 적용 될 수 있다 그리고 유전학 및 초기 생활 환경 노출, 이상, endotyping, 및 호흡기 질환, 그리고 개발 및 새로운 치료제의 평가의 효과 대 한 연구에 적용할 수 있습니다.

기도 면역 프로파일의 기초 특성: 
COPSAC2010 코호트에 등록된 아동 700명 중 620명(89%)에 대해 생후 1개월 시점의 상기도 점막 면역 매개체 수치에 대한 전체 데이터를 확보했습니다. 신생아 10명은 기술이 확립되기 전에 등록되었으며, 19명은 1개월 방문 시점에 참석하지 않았습니다. 또한, 파일럿 연구에 사용된 다른 실험실에서 추출 및 측정된 샘플 47개가 제외되었고, 4개의 샘플은 운송 중에 분실되었습니다(그림 1의 연구 흐름도 참조). 코호트의 기초 특성은 표 1에 제시되어 있습니다.
대부분의 매개체는 검출 수준이 낮았습니다. &lt;10 pg/mL (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10...

이 프로토콜에서는 위 항공에서 그대로 점 막 안 대기의 샘플링에 대 한 비 침 투 적인 기법을 설명합니다. 그것은 모든 연령대의 주제에 vivo에서 단백질 중재자, cytokines, 발산, 등의 레벨의 정량화를 수행 하기 위해 사용할 수 있습니다.

상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

본 점막 내층액 샘플링 방법의 전반적인 목표는 자극 절차 없이 기도의 국소 면역 특성을 연구하는 것입니다. 이 방법을 통해 감염, 천식 및 알레르기와 같은 소아 호흡기 질환 분야의 핵심 질문들을 연구할 수 있습니다. 이 방법의 장점은 자극되지 않은 기도 점막 내에서 매우 낮은 수준의 면역 매개체들을 in vivo로 측정할 수 있다는 점입니다.시연은 Wolsk 박사가 진행합니다. 신생아 시료 수집을 위해, 먼저 섬유성 수산화 폴리에스테르 필터 시트에서 최소 2개의 3 by 15 millimeter 조각을 자릅니다. 다음으로 신생아를 침대에 눕히고 기도 감염 증상이 있는지 확인합니다.그런 다음, 핀셋을 사용하여 각 콧구멍의 하비갑개 전방으로 여과지 한 조각을 약 1cm 정도 삽입하고, 필요에 따라 신생아에게 안정을 위해 설탕물을 투여합니다. 샘플링 기간 동안 재채기, 지속적인 울음 또는 비출혈이 발생하는지 확인하십시오. 2분 동안 흡수시킨 후, 여과지를 라벨이 부착된 튜브로 옮겨 즉시 -80 °C에서 보관합니다.실험 절차 시연은 저희 실험실의 기술자인 Lisbeth Rosholm이 진행하겠습니다. 기도 면역 매개체 정량을 위해, -80 °C 보관소에서 최대 10개의 샘플을 꺼내 얼음 위에 두고 식별 번호를 기록하십시오. 샘플이 해동되면, 대상당 2장의 여과지를 각각 150 µL의 갓 조제한 완충액에 담그십시오. 이때 완충액 스톡 용액 25 mL당 1정의 protease inhibitor tablet이 첨가되어 있어야 합니다.샘플을 플레이트 셰이커로 옮겨 400 rpm에서 5분 동안 흔들어 줍니다. 버퍼와 여과지를 각각의 셀룰로오스 아세테이트 튜브 필터 컵에 넣습니다. 샘플을 원심분리하여 필터링된 비강 추출물을 마이크로원심분리 튜브 바닥에 수집합니다.그런 다음, 컵을 제거하고 튜브를 얼음에 둡니다. 이어서, 비강 추출물 150 µL씩을 저단백 결합 보관 플레이트의 개별 웰로 옮기고 분석 시까지 -80 °C에서 보관합니다. 그 후, 표준 분석 프로토콜에 따라 고감도 전기화학발광 기반 멀티플렉스 어레이를 사용하여 관심 있는 비강 면역 매개체의 농도를 측정합니다.620명의 신생아를 대상으로 한 이 대표 분석에서, 측정된 대부분의 면역 매개체는 낮은 검출 수준을 보였습니다. IFN gamma 수치는 샘플의 거의 절반에서 하한 검출 한계 미만이었으며, TNF alpha, CCL4 및 TGF beta 수치는 샘플의 1% 미만에서 하한 검출 한계 미만이었습니다. 히트맵에 나타난 바와 같이, 검출된 20가지 매개체 수치에서 강한 다중공선성이 확인되었습니다.무증상 피코나바이러스(picornavirus) 감염 신생아에서 주로 제1형 면역 매개체로 구성된 상향 조절 프로파일이 관찰되었으며, 이는 생애 초기 단계에서 정착 박테리아와 바이러스가 면역 유발 역할을 한다는 것을 시사합니다. 또한 출생 시 가정 내 형제자매의 존재와 특정한 제1형 및 제17형 유도 점막 면역 반응 사이의 연관성이 확인되었으며, 이러한 현상이 마지막 출산 이후의 시간과 반비례하는 자궁 내 면역 프라이밍 효과와 상관관계가 있다는 증거가 발견되었습니다. 아울러, 위약군에 비해 고함량 보충제를 섭취한 어머니에게서 태어난 아이들은 특정 면역 매개체의 상향 조절이 특징적으로 나타났으며, 이는 비타민 D가 바이러스, 박테리아, 형제자매 또는 모성 아토피에 의해 유도되는 것과는 독립적으로 항균 면역 반응을 촉진한다는 점을 시사합니다.이 미세샘플링 방법은 기관지경을 통해 사용할 수도 있으며, 이를 통해 하기도의 면역 매개체를 연구할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 신생아 및 소아의 비자극 기도 점막 내 매개체를 생체 내(in vivo)에서 측정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

noninvasive-sampling-mucosal-lining-fluid-for-quantification-vivo

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

쥐 호흡 생리학과기도 염증 세포의 샘플링의 반복 측정이 바람직하지만, 일반적으로 가능하지 않습니다. 여기 구두기도 염증 세포의기도 기능 항 진성과 샘플링의 반복 측정을 허용 쥐를 intubating에 대한 반복 방법을 설명합니다.

에어웨이 저항 측정 및 마우스에 Bronchoalveolar 세척 유체 샘플링에 대한 가역, 비침습 방법

알레르기 천식의 실험 마우스 모델은 질병 pathogenesis를 공부하고 새로운 치료제 개발에 새로운 가능성을 제공합니다. 이러한 모델은 잘 알레르기 면역 반응,기도 염증과 폐의 pathophysiology을 규제하는 측정 요소에 적합합니다.

알레르기 항원 유도 천식의 Murine 모델

이 비디오는 신생아 인간 비강 점막 내막 유체 추출물의 면역 매개체 수치를 정량화하는 방법을 보여줍니다. 전기화학발광 기반 멀티플렉스 분석 시스템은 매개체가 여기될 때 방출되는 빛의 강도를 평가하여 이러한 매개체를 측정합니다.

Quantification of immune mediaator levels in human mucosal lining fluid(인간 점막 내막액의 면역 매개체 수치 정량화)

내피 내피 / glycocalyx 표면 층은 이상적인 intravital 현미경을 사용하여 공부하고 있습니다. Intravital 현미경은 기술적 같은 폐 등 움직이는 장기에 도전하고 있습니다. 우리는 동시 brightfield 및 형광 현미경은 자유롭게 - 이동에 내피 표면 층의 두께를 추정하는 데 사용할 수 있습니다 방법을...

마우스 폐 내피 표면 층의 생체 측정

인간의 수지상 세포(DC)를 포함한 폐 상주 면역 세포는 흡입된 병원체와 알레르겐에 대한 방어에 매우 중요합니다. 그러나 인간의 폐 조직이 부족하기 때문에 연구가 제한적입니다. 이 연구는 면역조직화학 및 유세포 분석을 사용하여 폐 DC를 연구하기 위한 인간 점막 기관지 내 생검을 처리하는 프로토콜을 제시합니다.

면역 및 유동 세포 계측법을 사용하여 기관지 생검의 공간 분포 및 표현형 확인 : 인간의 폐 수지상 세포

이 원고는 위와 더 낮은 기도의 점 막 내벽 액체 (MLF)을 합성 흡수 성 행렬 (SAM)를 사용 하 여 특히 비 강 및 기관지 흡수 기술의 사용을 설명 합니다. 이 메서드는 더 나은 표준화 및 기존 호흡기 샘플링 기법 보다 내성 제공합니다.

비 강 및 기관지 체액의 흡수: 인간의 호흡기 점 막 및 실험실 처리 샘플의 정밀 샘플링

이 연구에서 임상 기도 분 비 물이 나선형 관성 마이크로의 폐쇄 루프 작업에서 레이블 없는 호 중구 분리 방법을 설명 합니다. 제안된 된 방법 분석 실험 임상 생체 외에서 다양 한 호흡기 질환에 대 한 확장 이라고 합니다.

폐쇄 루프 관성 마이크로 사용 하 여 환자 파생 기도 분 비에서 레이블 없는 호 중구 농축

여기 소개 된 프로토콜 vivo에서 염증 성 조건 하에서 기본 인간 림프 톨의 폐 유도 용량 특성을 수 있습니다. 알레르기 염증의 마우스 모델에서 adoptively 전송된 인간의 면역 세포의 폐 침투 몇 군데 하 고 화학적으로 허가 폐 조직의 빛 시트 형광 현미경 검사 법에 의해 측정할 수 있습니다.

고급 폐 유도 빛 시트 현미경 검사 법에 따라 알레르기 염증의 Vivo 모델에서 실험에서 인간 림프 톨의 이미징

점액의 점탄성 특성은 점액 제거에 중요한 역할을합니다. 그러나 전통적인 점액 유변학 기술은 복잡하고 시간이 많이 걸리는 접근법이 필요합니다. 이 연구는 점탄성 측정을 신속하고 안정적으로 수행할 수 있는 벤치탑 레오미터의 사용에 대한 상세한 프로토콜을 제공합니다.

벤치탑 레오미터를 이용한 기도 점액의 신속한 점탄성 특성화

본 프로토콜은 쥐 비강 세척액(NLF)의 혈액 오염을 방지하기 위한 새로운 방법을 설명합니다. 이 방법은 혈액 오염 없이 NLF 수집을 보장하기 때문에 면역학적 성분과 다양한 호흡기 병원체를 보다 정확하게 검출할 수 있습니다.

혈액 오염이 없는 Murine Nasal Lavage Fluid Collection

본 연구는 전체 마운트 장 조직과 다광자 현미경을 사용하여 분비된 점액을 정량화하여 카르바모일콜린 클로라이드와 같은 자극에 대한 점액 역학의 정밀한 체적 분석 및 시각화를 가능하게 하는 3D 이미징 방법을 제시합니다.

전체 마운트 조직 이미징을 사용한 장 점액의 3차원 정량화

배우세요 상부 기도 점막 내액 비침습 샘플링 기법으로 사이토카인 및 케모카인과 같은 면역 매개체를 정량화하는 방법입니다. 이 기술은 자극 없이 생체 내 기도 면역 특성을 연구하여 소아 호흡기 질환 연구에 활용됩니다.

상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

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