상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

이 점막 내막액 샘플링 방법의 전반적인 목표는 자극 절차 없이 기도의 국소 면역 신호를 연구하는 것입니다. 이 방법을 사용하면 감염, 천식 및 알레르기와 같은 소아 호흡기 질환 분야의 핵심 질문을 연구할 수 있습니다. 이 방법의 장점은 생체 내에서 자극되지 않은 기도 점막에서 매우 낮은 수준의 면역 매개체를 측정할 수 있다는 것입니다.

시연은 Dr.Wolsk가 수행합니다. 신생아 샘플 채취의 경우, 먼저 섬유질 수산화 폴리에스테르 필터 시트에서 최소 2개, 3 x 15mm 스트립을 절단합니다. 다음으로, 신생아를 침대에 눕히고 기도 감염 증상을 기록한다.

그런 다음 집게를 사용하여 약 1cm 크기의 여과지 한 장을 아기의 각 콧구멍의 하부 비갑개 앞쪽에 삽입하고 필요에 따라 신생아에게 설탕물을 투여하여 편안함을 제공합니다. 샘플링 기간 동안 발생하는 재채기, 지속적인 울음 또는 비명주성을 기록하십시오. 2분 동안 흡수한 후 여과지를 라벨이 붙은 튜브에 옮겨 섭씨 영하 80도에서 즉시 보관합니다.

실험 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 기술자인 Lisbeth Rosholm입니다. 기도 면역 매개체 정량화를 위해 섭씨 80도의 음의 얼음 위에 보관된 샘플을 최대 10개까지 놓고 식별 번호를 기록합니다. 샘플이 해동되면 피험자당 두 여과지를 여과지당 150마이크로리터의 새로 준비된 완충액에 담그고 완충지 원액 25ml당 완전한 프로테아제 억제제 정제 1정을 보충합니다.

샘플을 400rpm의 플레이트 셰이커로 5분 동안 옮깁니다. 버퍼와 여과지를 개별 셀룰로오스 아세테이트 튜브 필터의 컵으로 옮깁니다. 샘플을 원심분리하여 미세 원심분리기 튜브 바닥에 여과된 비강 추출물을 수집합니다.

그런 다음 컵을 제거하고 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 비강 추출물의 150마이크로리터 분취액을 저단백질 결합 저장 플레이트의 개별 웰로 옮기고 분석할 때까지 플레이트를 섭씨 마이너스 80도에서 보관합니다. 그런 다음 표준 분석 프로토콜에 따라 고감도 전기화학발광 기반 다중화 어레이로 관심 비강 면역 매개체의 농도를 측정합니다.

620명의 신생아를 대상으로 한 이 대표적인 분석에서, 측정된 대부분의 면역 매개체들은 낮은 수준의 검출을 보였다. IFN 감마 수치는 샘플의 거의 절반에서 검출 하한보다 낮았으며, TNF 알파, CCL4 및 TGF 베타 수치는 샘플의 1% 미만에서 검출 한계 미만이었습니다. 히트 맵(heat map)에 표시된 바와 같이 20개의 감지된 매개체 수준에 대해 강력한 다중 공선성(multicollinearity)이 분명했습니다.

무증상 피코르나바이러스에 감염된 신생아에서 주로 제1형 면역 매개체가 손상된 상향 조절된 프로필이 관찰되었는데, 이는 생애 초기에 박테리아와 바이러스에 군집화하는 면역 유발 역할을 시사합니다. 출생 시 가족 내 형제자매의 존재와 특정 1형 17형 유도 점막 면역 반응 사이의 연관성도 확인되었으며, 이 현상과 마지막 출산 이후의 시간과 반비례하는 자궁 내 면역 프라이밍 효과의 상관관계에 대한 증거가 확인되었습니다. 또한, 위약 보충제를 많이 섭취한 산모에게서 태어난 자녀는 특정 면역 매개체가 상향 조절되는 특징이 있었는데, 이는 비타민 D가 바이러스, 박테리아, 형제자매 또는 모계 아토피에 의해 유발되는 반응과는 무관하게 항균 면역 반응을 촉진한다는 것을 시사합니다.

이 마이크로 샘플링 방법은 기관지 내시경을 통해 사용할 수도 있으므로 하기도의 면역 매개체를 연구할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 신생아 및 나이가 많은 어린이의 생체 내에서 자극되지 않은 기도 점막의 매개체를 측정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.