마우스 5/6^일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도

이 절차의 전반적인 목표는 기존 모델보다 더 나은 생존율로 극 결찰이 있는 간단한 마우스 5-6번째 부분 신장 절제술 모델을 설정하는 것입니다. 이 방법은 요독 심근병증의 개발 및 잠재적 치료 치료에 대한 만성 신장 질환 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 인간 환자의 만성 신장 질환의 병리학을 모방하는 쉽고 일관되게 재현 가능한 동물 모델이라는 것입니다.

일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 마우스의 신장, 혈관 및 요관이 훨씬 작기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 발가락 꼬집기에 대한 반응이 부족하여 적절한 진정 수준을 확인하고 마우스의 눈에 윤활제를 바르는 것으로 시작합니다. 마우스를 보온 패드에 놓고 직장 체온계를 삽입하여 시술 중 체온을 섭씨 37도 정도로 유지합니다.

그런 다음 동물을 오른쪽으로 눕히고 수술 부위의 털을 면도합니다. 탈피 크림으로 남아있는 머리카락을 제거하고 폴리 하이드 록시 다인 용액과 70 % 에탄올로 노출 된 피부를 소독합니다. 수술 부위에 오토클레이브 수술용 린넨을 정렬합니다.

그리고 피부와 근육 조직을 통해 약 1cm 요추를 절개합니다. 메스와 집게를 사용하여 근육과 근막을 분리하여 왼쪽 신장을 노출시킵니다. 그런 다음 작고 뭉툭한 집게를 사용하여 신장 주위 지방을 부드럽게 당겨 복강에서 신장을 추출합니다.

결합 조직과 부신을 신장의 상부 끝에서 혈관이 신장 조직으로 들어오고 나가는 장기의 중간 유문으로 부드럽게 놀립니다. 결합 조직 내에서 신장의 아래쪽 절반 주위의 요관을 분리하고 신장에서 결합 조직을 부드럽게 분리하여 요관이 결찰되지 않도록 합니다. 요관이 손상되지 않고 출혈이 발생하지 않도록 결합 조직을 조심스럽게 분리하는 것이 중요합니다.

결합 조직 내에서 신장의 아래쪽 절반 주위의 요관을 분리하십시오. 그런 다음 3개의 제로 실크 봉합사 끈을 사용하여 상부에서 유문 중앙을 향해 약 0.4cm, 하부에서 유문 쪽으로 0.4cm 떨어진 곳에서 신장을 결찰합니다. 봉합사를 조일 때는 양쪽에 출혈을 일으키지 않고 신장의 원위 부분에 혈액 공급을 방해할 만큼만 장력을 가하십시오.

2분 후에도 출혈이 관찰되지 않으면 신장을 원래의 해부학적 위치로 부드럽게 되돌리고 4개의 0 봉합사와 3개의 0 봉합사를 사용하여 근육층과 피부층을 각각 봉합합니다. 그런 다음 수술 부위에 항생제 연고를 바르고 흉골이 누울 때까지 열 램프와 모니터링으로 마우스를 개별적으로 수용합니다. 극성 결찰술 후 7일 후, 방금 보여준 대로 오른쪽 신장을 노출시킵니다.

뭉툭한 집게를 사용하여 주변 지방과 결합 조직을 제거하고 신장 동맥과 정맥 주위에 두 개의 3 제로 실크 봉합사를 느슨하게 놓습니다. 결합 조직과 부신을 신장의 상부에서 중간 유문으로 부드럽게 괴롭힙니다. 조직의 아래쪽 끝에서 요관을 부드럽게 옮기고 출혈을 일으키지 않고 모든 혈관을 함께 풀어냅니다.

다음으로, 느슨한 결찰 매듭 하나를 복부 대동맥 쪽으로, 두 번째 느슨한 결찰을 신장 쪽으로 이동합니다. 그리고 복부 대동맥 결찰을 이중 매듭으로 묶습니다. 단단한 매듭은 오른쪽 신장의 색을 변화시킵니다.

두 번째 합자 매듭을 이중 매듭으로 묶고, 매듭 사이에 공간을 남겨 혈관을 절단할 수 있도록 하고, 신장 혈관을 절단합니다. 신장을 제거한 후 방금 설명한 것처럼 근육과 피부층을 닫습니다. 그런 다음 멸균 거즈로 신장을 말리고 적출된 신장 조직의 무게를 잰다.

수술 후 4주가 지난 시점에, 부분 신절제술을 시행한 마우스는 가짜 수술을 받은 동물에 비해 혈장 내 사이클타틴 C, 크레아티닌 및 혈액 요소 질소 수치가 유의하게 증가한 것으로 나타났습니다. 부분적 신절제술에 의한 자극성 빈혈 또한 명백한데, 이는 극성 결찰 동물에서 현저히 낮은 헤마토크릿 수치에 의해 입증되었다. 부분적으로 신장 절제술을 받은 마우스의 심장 비대 기능 장애는 심장 대 체중 비율의 증가와 경흉부 심장 초음파 분석에 의해 나타나며, 이는 후방 및 전방 벽 두께, 심근 성능 지수 및 좌심실 질량 지수의 현저한 증가를 보여줍니다.

부분 신절제술 매개 심장 섬유증은 좌심실 균질화 및 좌측 잔여 신장 균질화에서 제1형 콜라겐 발현의 증가에 의해서도 입증됩니다. 또한, 산화제 스트레스는 실험적 요독 심근병증에 중요한 역할을 하며, 좌심실 균질화에서 여러 단백질의 직접 단백질 카르보닐화 변형 및 원발암유전자 티로신-단백질 키나아제 활성화를 크게 자극합니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 40분 안에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 시도하는 동안 동물의 호흡 수를 확인하고 이소플루란을 적절하게 조정하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 부분 신장 절제술 회복에 대한 특정 약물 치료의 효과를 비교하는 것과 같은 다른 실험을 수행하여 관심 있는 특정 치료 치료에 대한 기존 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 만성 신장 질환 분야의 연구자들이 요독 심근병증의 병리학 및 잠재적인 약물 스크리닝을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 마우스에서 부분 신장 절제술 모델을 설정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.