Name: 마우스 5/6일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: 배우세요 마우스 5/6 신절제술 모델을 이용하여 만성신장질환과 요독성 심근병증을 연구하는 방법을. 이 기법은 생존율을 높이고 인간 질환을 모방하는 재현 가능한 동물 모델을 제공합니다.

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이 작품은 NIH R15 1R15DK106666-01A1 (J. Liu) 하 고 NIH RO1 HL071556 (J.I. 샤 피로)에 의해 지원 되었다.

모든 동물 관리 및 실험 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 마샬 대학 제도 동물 보호와 사용 위원회 (IACUC) 국립 보건원 (NIH) 가이드에 의해 승인 했다. 남성 C57BL/6 마우스 (10-12 주 이전) 지정 객실 12 h 명암 주기에서 공기를 정화 제공 연습장을 갖추고 병원 체 무료 동물 시설에 보관 되어 있었다. 음식과 물 공급된 광고 libitum 했다.
 1. 수술 준비 참고: 수술 도구와 재료 수술 작업에 특정 하지 않은 다른 소스에서 얻을 수 있습니다. 악기와 다른 소스 로부터 자료 또한 동일한 목적을 위해 사용할 수 있습니다. 수술 악기의 목록에 대 한 테이블의 자료를 참조 하십시오.
<ol><li>수술에 대 한 준비 <ol><li>장소 운영 곳 다음 테이블: 온난화 패드, 할로겐 램프, 산소 탱크 및 isoflurane 탱크, isoflurane 기화 기, 머리 깎기, 제 모 크림, 비늘, 살 균 세트, 소독된 외과 넨, 면봉, 70% 알코올, polyhydroxydine 솔루션 (1% 요오드 포함), 0.9 %NaCl 용액, 1 mL 주사기 및 바늘 (30 G), 3-0와 4-0 비단 봉합 buprenorphine, 페니실린, 항생제 연 고를 운영 하 고 윤 활 유 눈 연 고.</li>
		<li>감 금 소를 청소 하 고 수술 후 주택 마우스 침구 아래 열 패드 배치.</li>
	</ol></li></ol> 2. 단계 1 수술: 극 결 찰의 왼쪽 신장 참고: 수술 동안 멸 균 상태를 유지. 압력가 마로 소독 외과 기구 살 균 패드와 함께 커버. 수술 동안 교차 오염을 방지 하기 위해 더 이상의 수술 외과 악기의 하나 이상의 세트를 손에 계속. 악기를 다시 사용 해야, 여러 수술의 경우 betadine 솔루션 및 70% 에탄올, 악기를 소독 하 고 5 분 소독 70% 에탄올과 운영 지역에 대 한 germinator 유리 구슬 소독 기에 소독. (커버 코 입)를, (헤드 커버)에 모자, 마스크, 가운을 착용 하 고 멸 균 장갑 한 켤레. 각 수술 후 장갑 변경.
<ol><li>세척 및 손 소독 및 멸 균 수술 장갑을 착용. 머리 모자와 마스크 착용.</li>
	<li>테이블 70% 알코올로 소독. 마 취에서 눈 건조를 방지 하기 위해 마우스의 두 눈에 윤활제 눈 연 고를 적용.</li>
	<li>Isoflurane 기화 기 시스템의 유도 실에서 마우스를 배치 하 고 2.5% isoflurane 1-2 분에 대 한 100% 산소 (0.8-1.2 L/min)의 혼합물으로 마 취 유도 
	참고: 마 취의 효능 통증 반사 종을 반사의 부재에 의해 뿐만 아니라, 꼬리를 곤란 하 게 하 여 눈 꺼 풀을 만져 elicited의 부재에 의해 결정 되었다.</li>
	<li>페니실린 (40000 단위/kg 몸 무게, 임)과 buprenorphine (0.02 mg/kg 몸 무게, 사우스 캐롤라이나) 수술 중 통증과 감염을 방지 하기 위해 주입.</li>
	<li>유지 절차 동안 체온 37 ° C의 주위를 감시 하는 직장 온도계로 지구 온난화 패드 (처음에 42 ° C에서 설정)에 마우스를 놓습니다. 마우스 코 코 콘으로 놓고 0.8-1.2의 혼합물으로 환기 % isoflurane 100% 산소 (0.8-1.2 L/min) 수술 하는 동안.</li>
	<li>는 오른쪽에 마우스를 놓습니다. 머리 깎기로 외과 영역의 머리를 면도 하 고 제 모 크림으로 제거. 뒤에 70% 에탄올 (1% 요오드 포함) polyhydroxydine 솔루션 사이트를 소독. 외과 영역에 압력가 수술 린 넨 정렬.</li>
	<li>~1.0 cm 허리 절 개를 하 고 근육과 근 노출 메스 집게 ( 그림 1a)를 사용 하 여 왼쪽된 신장 분리.</li>
	<li>당겨 왼쪽된 신장 밖으로 아주 부드럽게 perirenal 지방에 작은 무뚝뚝한 집게와. 과정에서 부 신 샘을 방해 하기 위하여 이동 아드레날린 선 위쪽으로 신장에서 집게.</li>
	<li>무딘 집게를 사용 하 여, 부드럽게 결합 조직과 신장 혈관에 입력 하 고 출구의 중간 pylorus 향해 신장의 우수한 끝에서 아드레날린 선 애타게. 식별 하 고 격리 ureter. 
	참고: 열 등 한 결합 조직에 포함 된 및 빛에서 명확 하 게 보이는 신장 절반 주위 ureter 거짓말.</li>
	<li>부드럽게 잡아 결합 조직 및 ureter 출혈 되지 보장 하기 위해 신장 조직에서 분리.</li>
	<li>폴라 ligations 전에 신장의 뛰어난 및 하 부 1/3 부분을 식별 하는 메 마른 자를 사용. 마우스 신장은 일반적으로 1.25-1.5 cm 오래 주위</li>
	<li>Ligate 3-0 비단 봉합 문자열과 적절 한 힘을 사용 하 여, pylorus의 중앙으로 우수한 부분에서 약 0.4 c m와 마찬가지로, 0.4 cm pylorus ( 그림 1a, 점선으로 열 등 한 부분에서 라인).</li>
	<li>두 극 ( 그림 1b) ligating, 후 아니 출혈은 되도록 2 분 관측 시간 허용. 
	참고:이 과정에서 매우 중요 하다 부 신, 신장 동맥, 및 ureter 결 찰을 피하기 위해. 왼쪽된 ureter 출혈 하는 경우 마우스의 2 단계 수술에서 오른쪽 신장 제거 후 죽을 것 이다. 결 찰 힘 내 신장 출혈을 유발 하지 않고 폴란드에 혈액 흐름을 제한할 수 있습니다. 결 찰 후 1-2 분 이내 폴란드는 폴란드에 혈액 흐름의 제한으로 인해 변색.</li>
	<li>밀어 왼쪽된 신장 다시 원래 장소. 근육과 피부를 4-0와 3-0 비단 봉합 문자열에 각각 닫습니다. 더 나은 복구 및 소독에 대 한 외과 영역에 항생제 연 고를 적용.</li>
	<li>결 찰, 후 집에 별도로 마우스 열 램프와 감 금 소에는 침구 영역 (온도계와 모니터링), 37 ° C 가까이 개별 장에 동물을 배치 하기 전에. 
	참고: sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 마우스를 모니터.</li>
	<li>복구 하는 동안 물과 음식에 쉽게 액세스를 허용합니다. 페니실린과 buprenorphine 감염 및 고통을 방지 하기 위해 첫 3 일 후 수술에 대 한 모든 12 h. 
	참고: 마우스 2-3 일 이내 수술의 외상에서 회복 해야 하 고 다시 정상적인 식사, 음주와 이동 하는 것. 이 시간에서 전체 복구에 대 한 개별적으로 마우스를 집. 다음 모니터링 해야 합니다: 음주, 식사, 패턴, 어 색 한 걸음 걸이, 돌출, 눈 또는 비 강 방전 뒤로하고 공격적인 행동을 걸어. 발작, 혼 수 상태, untreatable 감염, 어려움 걷기, 걸음 걸이, 음식과 음료, 수 없습니다의 손실 및 15%의 손실의 어떤 표시 든 지 표시 하는 경우 마우스를 안락사 사전 작업 무게.</li>
</ol> 3. 단계 2 수술: 오른쪽 신장의 제거 <ol><li>7 일 후, 단계 2.1에 2.10, 마우스의 왼쪽된 측면에 배치를 제외 하 고 왼쪽된 신장에 대 한 설명 된 대로 오른쪽 신장 노출.</li>
	<li>리넨에 오른쪽 신장 고 무딘 집게와 주변 지방과 결합 조직 취소.</li>
	<li>신장 동맥과 정 맥, 식별 하 고 두 개의 합자 (3-0 실크) 각 단일 느슨한 매듭 혈관 주위 장소. 부드럽게 결합 조직과 부 신을 애타게 중간 pylorus 무딘 집게를 사용 하 여 신장으로 신장의 우수한 끝에서 선. 부드럽게 열 등 한 끝에서 ureter을 치환 하 고 모든 넥타이 혈관 함께 (3-0 실크) 출혈 발생 하지 않고.</li>
	<li>혈관을 따라 두 개의 느슨한 묶인 매듭을 이동합니다. 복 부 대동맥 쪽을 향해과 다른 하나 하나 신장 쪽을 향해.</li>
	<li>먼저 넥타이 (복 부 대동맥 측면)으로 묶인 매듭을 두 배 매듭, 단단한 매듭 오른쪽 신장의 색을 변경 합니다. 두 배 매듭 (신장 측)으로 묶인 매듭을 묶어. 합자 매듭을 절단 하지 않고 두 매듭 사이의 혈관을 잘라 수 있도록 이러한 두 개의 두 배 매듭 사이의 충분 한 공간을 두고.</li>
	<li>두 매듭 사이의 신장 혈관 고 오른쪽 신장 제거. 가능 신장 혈관의 출혈에 대 한 확인 하십시오.</li>
	<li>오른쪽 신장 멸 균 거 즈를 사용 하 여 건조 하 고 그것의 무게</li>
	<li>4-0 비단 봉합 문자열 근육 절 개를 닫고 다음 3-0 비단 봉합 문자열 피부 절 개를 닫습니다.</li>
	<li>복구에 적어도 24 시간을 위한 음식과 물에 쉽게 접근할 케이지 (단계 2.15) 동안 열 램프와 깨끗 한 독방에 별도로 마우스를 집. 페니실린과 buprenorphine 감염 및 고통을 방지 하기 위해 3 일에 대 한 모든 12 h. 
	참고: 마우스 2-3 일 이내 수술의 외상에서 회복 해야 하 고 다시 정상적인 식사, 음주와 이동 하는 것.</li>
	<li>수술 후 3 일, 그리고 하루에 실험의 기간에 대 한 다음 한 번에 대 한 마우스를 두 번 매일 모니터링. 수술 후 모니터링 및 치료 단계 2.16에서에서 설명한 절차에 따라.</li>
</ol> 4. 수술 가짜 <ol><li>가짜 수술에 대 한 노출의 신장, 조직, 그리고 상처 폐쇄, 하지만 왼쪽된 신장 극 결 찰 없이 해 부 또는 오른쪽 신장의 제거를 포함 하 여 동일한 수술 절차를 수행 합니다.</li></ol>
 5. 실험적인 신부전 심근 평가의 <ol><li>희생 하기 전에 1 일 transthoracic 심장 초음파 검사를 수행 하 고 캡처 이미지 18. 
	참고: 여기, transthoracic 심장 초음파 처리 테이블 고 직장 온도계 마우스와 함께 수행 되었다. Echocardiographic 이미지 이미징 시스템에 연결 된 동작 주파수 변환기는 18-38 MHz를 사용 하 여 점령 했다. 우리가 18 설명한 상대 벽 두께 (RWT), 심근 성과 지표 (MPI), 그리고 좌 심 실 질량 지 수 (LVMI) 계산 했다.</li>
	<li>희생의 때에 몸 무게를 측정. 제조 업체에 따라 HCT 원심 분리기가 (HCT) 측정 &#39; s 지시. 4 ° c 탁상 냉장된 원심 분리기에서 1500 x g에서 10 분 동안 혈액 샘플 centrifuging 여 헤 파 린 코팅 된 튜브를 사용 하 여 플라즈마 샘플을 준비 합니다. Cystatin C, 크와 벤 다음 제조 업체 키트를 사용 하 여 측정 &#39; s 지시. 중복에는 측정을 수행.</li>
	<li>실험의 끝에, anesthetize xylaxine (10 mg/kg, IP) 케 타 민 (90 mg/kg, IP)와 쥐와 thoracotomy 희생. 가슴에서 그것을 제거한 후 심장 무게를 측정 합니다. 18 , 19 전에 설명한 것 처럼 Type 1 콜라겐 (1 열), c-Src 및 단백질에서 인 산화의 결정 뿐만 아니라 심장 (LV) 및 신장 homogenates을 준비.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

쥐 5/6일 PNx 모델 널리 CKD를 공부 하는 데 사용 되었습니다. 크기 때문에 훨씬 작은 신장 마우스에서, 클래식 동맥 결 찰 및 극 절제 가능한 높은 사망률 및 예기치 않은 출혈/혈액 손실이 마우스 모델에서 매우 어려운 있습니다.
우리는 출혈/혈액 손실을 극복 하기 위해 극 결 찰 마우스 PNx 모델을 채택 했다. 이 PNx 모델 향상 된 생존 율 및 높은 재현성으로 시간이 적게 걸립니다. 이 극 결 찰 모델 4 주 수술 후, 당시의 인간의 신부전 심근의 phenotypic 변화를 개발 하 고 따라서 따라 장치를 마더보드 및 치료 대상을 연구 하는 모델을 제공 합니다.
이 PNx 모델에서 5/6일 PNx는 이후, 신장 질량 감소의 대략적인 추정 이며 지금까지, 정확 하 게 다른 크기/질량에 있는 두 콩 팥의 남은 신장 질량을 계산 하는 방법은 없습니다. 그러나,는 결 찰 작업 편차를 ...

CKD, 일컬어 만성 신부전, 신장 기능의 진보적인 손실 결국 영구적인 신부전으로 발전 하는 시간이 끝났습니다. CKD, 끝 단계 신장 질병 (ESRD)을 초기 단계 신장 질병 상태에서 심혈 관 질환 이벤트 및 사망률에 대 한 큰 위험 요소 이며 점차적으로 "신부전 심근"1, 라는 임상 표현 형을 개발 2,3. CKD 또는 ESRD 환자에서 신부전 심근은 심장 혈관 이상, 주로 좌 심 실 (LV) 압력 및/또는 볼륨, LV 비 대 (LVH), LV 팽창 및 LV 수축 부전4의 오버 로드로 인 한 연관 ,,56. 심장 섬유 증 심장 준수 LV 확장기 부전 결과로 감소 신부전 심근의 또 다른 일반적인 병 적인 과정 이다. 심각한 심장 섬유 증은 그 없이 심장 증상7에 갑작스런 심장 죽음으로 이어질 수 있습니다.
5/6일 PNx은 신부전 심장 근육 병 증, 고혈압, 신부전을 포함 하는 동물 연구에 대 한 일반적으로 사용 되 CKD 동물 모델 이다. PNx 5/6 신장 실질의 제거에 의해 달성 된다. 쥐 모델 처음 개발한 두와 함께 가장 일반적인 프로토콜 외과 절제술 또는 경색 되 고 고용. 쥐 PNx 모델은 혈압, 심장 비 대 및 장애인된 diastolic 기능에 상당한 고도 함께 신부전 심근을 공부 하는 매우 유용한 모델. 나중에, 마우스 PNx 모델, 쥐 모델로 비슷한 기술로 운영 넓은 가용성 및 마우스 시스템에 유전자 조작의 용이성으로 인해 개발 되었다.
그것은 잘 문서화 된 조직의 산화 스트레스는 모두 임상 및 실험 신부전 심근8,9의 일정 기능입니다. 게다가, 산화 스트레스 신부전 증후군10에 기여 하 고 신부전 심근11,,1213에서 심장 종양의 병 인에 중요 한 역할을 한다. 이 시점에, 우리가 보여준 그 설치류 5/6일 PNx 모델 발생 생리, 형태학, 생화학 기능과 신부전 심근14,,1516, 의 17. 여기에 설명 된 마우스 PNx 모델에서 운영 하는 PNx 마우스 개발 중요 한 산화 스트레스, Na/K-ATPase 함수를 PNx 중재 실험 신부전 심근에 중요 한 신호에 의해 적어도 부분적으로 중재. Na/K-ATPase 신호 감쇠 뿐만 아니라 산화 증폭 줄어들지만 또한 PNx 중재 실험 신부전 심근18phenotypical 변화를 살펴볼.

<table><tbody><tr><td>아이리스 가위, 11.5 cm, 스트레이트</td><td>월드 정밀 기기</td><td>501758</td><td></td></tr><tr><td>WPI 스위스 핀셋 #5 11 cm, 0.1x0.06 mm 팁</td><td>월드 정밀 기기</td><td>504506</td><td></td></tr><tr><td>보석상 #5 집게, 11cm, 스트레이트, 티타늄</td><td>월드 정밀 기기</td><td>555227F</td><td></td></tr><tr><td>아이리스 집게, 10cm, 스트레이트, 톱니 모양의</td><td>세계 정밀 기기</td><td>15914</td><td></td></tr><tr><td>트위저 #3, 11cm, 0.2x0.4mm 팁</td><td>World Precision Instruments</td><td>501976</td><td></td></tr><tr><td>Medesy Iris 4.5" 곡선 가위, 스테인레스 스틸</td><td>Net23</td><td>3512</td><td>www.Net32.com</td></tr><tr><td>Dr. Slick Iris 가위; 3.5"</td><td>Avid Max</td><td>220-1-965-IrisScsrs-P&nbsp;</td><td>www입니다. Avid Max.com</td></tr><tr><td>Miltex 아이리스 가위 4 1/8" 곡선</td><td>4mdmedical</td><td>V95-306</td><td>www.4mdmedical.com</td></tr><tr><td>5" 지혈 박수, 곡선 턱</td><td>PJTool</td><td>4355</td><td>www.pjtool.com</td></tr><tr><td>sklar Knapp 홍채 가위, 직선적이고 날카롭고 뭉툭한 4"</td><td>의료 기기 창고</td><td>64-3430</td><td>www.medicaldevicedepot.com</td></tr><tr><td>켈리 혈압 집게 직선 5.5"</td><td>Pilgtimmedical</td><td>FA710-50</td><td>www.pilgtimmedical.com</td></tr><tr><td>C57BL/6 마우스</td><td>Hilltop Lab Animals Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 마우스 취급 테이블 및 직장 온도계</td><td>Visualsonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MicroScan 변환기&nbsp;</td><td>Vevo 1100</td><td>MS400</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 1100 이미징 시스템&nbsp;</td><td>후지필름 비주얼소닉스 주식회사</td><td></td><td></td></tr><tr><td>시스타틴 C ELISA 키트 및 마우스 크레아티닌 키트&nbsp;</td><td>크리스탈 화학 Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스 BUN ELISA 키트&nbsp;</td><td>마이바이오소스 주식회사&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 5/6일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

만성 신장 병 (CKD) 심혈 관 질환 이벤트 및 사망률에 대 한 큰 위험 요소 이며 "신부전 심근" 라는 임상 표현 형에 점차적으로 발전 한다. 여기 극 결 찰, 수술 4 주 후에 신부전 심근 개발 5/6일 부분 신 (PNx) 라는 하는 실험적인 CKD 마우스 모델을 설명 합니다. 이 PNx 모델 2 단계 수술에 의해 수행 되었다. 단계 1 수술에서 왼쪽된 신장의 두 극 출혈 했다. 수행 단계 1 수술 후 7 일, 2 단계 수술에서 오른쪽 신장은 제거 되었다. 가짜 수술 같은 수술 절차 수행 하지만 없이 왼쪽된 신장 결 찰 또는 오른쪽 신장 제거 장 대. 수술 절차는 쉽고 보다 적게 시간이 걸리는 다른 방법에 비해. 그러나, 나머지 기능 신장 질량 신장 동맥 결 찰으로 쉽게 제어 되지 않습니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.

데이터 표시이 수정 5/6일 극 결 찰에 의해 PNx 모델은 신부전 심근을 조사 하는 간단 하 고 효과적인 모델. 수술 4 주 후,이 PNx 모델 선물 심장 섬유 증, 심장 비 대, 빈 혈, 신장 기능 장애 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소. 결과 아래에 요약 된다.
수술 4 주 후, PNx 쥐 인간의 신부전 심근의 phenotype과 일치 심장 형태학 및 생화학 적인 변화 뿐만 아니라 장애인된 신장 기능 개발. 이러한 PNx 중재 변경 포함 운영 하는 가짜 쥐에 비해 다음과 같은 관찰이 됩니다. 첫째, 예상 했던 대로, PNx 수술 신장 기능의 중요 한 장애를 발생 합니다. 그림 2에서 같이, PNx 수술 크게 증가 Cystatin C의 플라즈...

이 원고 마우스 5/6일 부분 신 (PNx) 극 결 찰과 수행에 상세한 2 단계 수술 절차를 제공 합니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 기존 모델보다 생존율이 더 높은 극 결찰 방식의 마우스 5/6 부분 신절제 모델을 구축하는 것입니다. 이 방법은 요독성 심근병증의 발생 및 잠재적 치료법에 관한 만성 신장 질환 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 인간 환자의 만성 신장 질환 병리를 모방하며, 쉽고 일관되게 재현 가능한 동물 모델이라는 점입니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 연구자들은 생쥐의 신장, 혈관 및 요관이 매우 작기 때문에 어려움을 겪습니다. 먼저 발가락 꼬집기(toe pinch)에 반응이 없는 것을 확인하여 적절한 진정 상태인지 확인하고, 생쥐의 눈에 윤활제를 도포하십시오. 생쥐를 가온 패드 위에 놓고 직장 체온계를 삽입하여 시술 중에 체온을 37 °C 정도로 유지하십시오.그 다음, 동물을 오른쪽으로 눕히고 수술 부위의 털을 깎습니다. 제모 크림으로 남은 털을 제거하고, 노출된 피부를 polyhydroxy dine 용액과 70% ethanol로 소독합니다. 수술 부위 위에 멸균된 수술용 린넨을 맞추어 덮습니다.피부와 근육 조직을 통해 약 1cm 크기의 요추 절개를 실시합니다. 메스와 포셉을 사용하여 근육과 근막을 분리해 왼쪽 신장을 노출시킵니다. 그다음, 작은 무딘 포셉을 이용해 신장 주변 지방을 부드럽게 잡아당겨 복강에서 신장을 추출합니다.신장 상단에서 혈관이 신장 조직으로 들어가고 나가는 기관의 중간 유문 방향으로 결합 조직과 부신을 조심스럽게 떼어냅니다. 결합 조직 내에서 신장의 하단 절반 주변에 있는 요관을 분리하고, 요관이 결찰되지 않도록 신장에서 결합 조직을 부드럽게 분리합니다. 요관이 손상되거나 출혈이 발생하지 않도록 결합 조직을 매우 주의 깊게 분리하는 것이 중요합니다.결합 조직 내에서 신장의 하부 절반 주변의 요관을 분리합니다. 그 다음, 3-0 실크 봉합사로 신장의 상단에서 약 0.4 centimeters 떨어진 유문 중앙 방향과, 하단에서 0.4 centimeters 떨어진 유문 방향을 결찰합니다. 봉합사를 조일 때는 양측에 출혈이 발생하지 않도록 주의하면서, 신장의 원위부로 가는 혈액 공급이 차단될 정도의 적절한 장력만 가합니다.2분 후에도 출혈이 관찰되지 않으면, 신장을 원래의 해부학적 위치로 조심스럽게 되돌려 놓은 다음, 4-0 및 3-0 봉합사를 사용하여 각각 근육층과 피부층을 봉합합니다. 그 후, 수술 부위에 항생제 연고를 바르고, 흉골 복위(sternal recumbency) 상태가 될 때까지 가열 램프를 설치하여 마우스를 개별 사육하며 모니터링합니다. 극 결찰(polar ligation) 7일 후, 앞서 시연한 것과 동일하게 오른쪽 신장을 노출시킵니다.뭉툭한 핀셋을 사용하여 주변의 지방과 결합 조직을 제거하고, 신동맥과 신정맥 주위에 3-0 실크 봉합사를 느슨하게 배치합니다. 신장의 상단에서 중간 문부 방향으로 결합 조직과 부신을 조심스럽게 떼어냅니다. 조직의 하단에서 요관을 부드럽게 밀어낸 후, 출혈이 발생하지 않도록 모든 혈관을 한꺼번에 묶어 끊어냅니다.다음으로, 풀려 있는 결찰사 매듭 하나를 복부 대동맥 쪽으로 옮기고, 두 번째 결찰사를 신장 쪽으로 옮깁니다. 그런 다음 복부 대동맥 결찰사를 이중 매듭으로 묶습니다. 단단하게 매듭을 지으면 오른쪽 신장의 색이 변하게 됩니다.두 번째 결찰 매듭을 이중 매듭으로 묶되, 혈관을 절단할 수 있도록 매듭 사이에 공간을 남겨두고 신혈관을 절단합니다. 신장을 제거한 후, 앞서 시연한 방식대로 근육층과 피부층을 봉합합니다. 그 다음, 멸균 거즈로 신장의 물기를 제거하고 채취한 신장 조직의 무게를 측정합니다.수술 4주 후, 부분 신절제술을 받은 마우스는 가짜 수술을 받은 동물에 비해 혈장 내 cystatin C, 크레아티닌 및 혈중 요소 질소 수치가 유의하게 증가한 것으로 나타납니다. 또한 극성 결찰을 시행한 동물의 헤마토크릿 수치가 유의하게 낮은 것으로 보아 부분 신절제술로 유발된 빈혈이 뚜렷하게 나타납니다. 부분 신절제술을 받은 마우스의 심비대 및 이완기 기능 장애는 증가된 심장-체중 비율과 경흉부 심초음파 분석을 통해 확인되며, 분석 결과 후벽 및 전벽 두께, 심근 성능 지수 및 좌심실 질량 지수의 유의한 증가가 관찰됩니다.부분 신절제술로 유도된 심장 섬유화는 좌심실 균질액과 좌측 잔존 신장 균질액 내 type 1 collagen 발현의 증가로도 확인됩니다. 또한, 산화 스트레스는 실험적 요독성 심근병증에서 중요한 역할을 하며, 좌심실 균질액 내 여러 단백질의 직접적인 단백질 카르보닐화 변형과 원종양유전자 티로신 단백질 키나아제 활성화를 유의미하게 자극합니다. 이 기술을 숙달하면 적절히 수행했을 때 40분 이내에 완료할 수 있습니다.본 절차를 수행하는 동안 동물의 호흡수를 확인하고 그에 따라 이소플루레인(isoflurane) 농도를 적절히 조절하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 부분 신절제술 회복에 미치는 특정 약물 치료의 효과를 비교하는 것과 같은 다른 실험들을 수행하여, 관심 있는 특정 치료법에 대한 전통적인 질문들에 답을 얻을 수 있습니다. 이 기술의 개발 이후, 만성 신장 질환 분야의 연구자들은 요독성 심근병증의 병리와 잠재적인 약물 스크리닝을 탐구할 수 있는 기반을 마련하게 되었습니다.이 영상을 시청하고 나면 마우스에서 부분 신절제 모델을 구축하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

perioperative 그리고 중요한 치료 관련 급성 신장 손상에 대한 강력한 모델이 제공됩니다. 그것이 거의 임상 아키의 histologic 및 기능 변경 내용을 복제할 수 있습니다 심장 마비에 의해 유도 온 몸이 hypoperfusion을 사용합니다.

Normothermic 심장 마비와 심폐 소생술의 : 국소 빈혈 - Reperfusion 상해의 마우스 모델

수술 신장 질량의 5/6th를 제거하여 루이스 쥐에서 만성 신장 질환 (CKD)을 설정하는 두 단계 방법을 설명합니다. 수술의 조합, NOS-억제와 높은 소금 다이어트 인과 관계 메커니즘과 새로운 치료 개입의 개발 연구를 허용, 인간의 CKD를 닮은 모델에 연결됩니다.

높은 소금 다이어트와 루이스 쥐에서 만성 신장 질환을 유발하는 산화 질소 합성 효소 억제와 함께 5/6th의 절제

비가역적 편측성 요관 폐색(unlateral ureteric obstruction, UUO)의 쥐 모델(murine model)은 절단된 요관을 방광으로 문합하여 요관 폐색이 완화되는 가역적 UUO 모델과 함께 제시됩니다. 이러한 모델은 신장 염증 및 흉터뿐만 아니라 조직 리모델링에 대한 연구를 가능하게 합니다.

돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델

변형된 2 신장 1 클립(2K1C) Goldblatt 마우스 모델은 폴리우레탄 튜브를 사용하여 신장 동맥 협착을 개시하여 레닌 발현 및 신장 손상의 증가를 유도하여 개발되었다. 여기에서는 재현 가능하고 일관된 2K1C 마우스 모델을 생성하기 위해 커프를 준비하고 신장 동맥 상에 배치하는 자세한 절차를 설명합니다.

신장 동맥 협착증에서 레닌 조절의 수정 된 두 신장 하나의 클립 마우스 모델

신장 허혈-재관류 손상은 입원 환자의 높은 이환률 및 사망률과 관련이 있다. 여기에서, 우리는 일방적 인 신장 허혈 재관류 손상의 간단하고 효과적인 마우스 모델을 제시하고 신장에서 관찰 된 대표적인 병리학 적 변화에 대한 순차적 인 개요를 제공합니다.

일방적 인 신장 허혈 - 재관류 손상의 효과적인 마우스 모델

이 프로토콜은 쥐 총장골 동정맥루 생성의 수술 단계를 자세히 설명합니다. 우리는 혈액 투석 접근 관련 사지 병태생리학을 연구하기 위해 이 모델을 개발했습니다.

혈액 투석 접근 관련 손 기능 장애의 쥐 모델

본 원고는 랫트 모델에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양극절제술에 의한 5/6 신절제술을 위한 표준화된 프로토콜을 소개하며, 체계적인 정밀도가 높고 기술적 오류 위험이 낮은 신실질 절제술을 통해 신부전 상태를 유도하는 것을 목표로 합니다.

5/6 쥐에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양족 절제술을 사용한 신장 절제술

이 프로토콜은 폐쇄성 신병증에서 조직 섬유증의 진행을 연구하기 위해 마우스에서 편측 요관 폐쇄(UUO)를 유도하는 방법을 설명합니다. 여기에는 수술 절차, 수술 후 관리 및 섬유증 평가 방법이 포함됩니다.

신장 간질성 섬유증(Kidney Interstitial Fibrosis) 조사를 위한 일측성 요관 폐쇄 모델(Unilateral Ureteral Obstruction Model for Investigating Kidney Interstitial Fibrosis)

이 논문은 연구자가 장기간의 요관 폐쇄 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 분석할 수 있는 표준화된 모델을 사용하여 마우스에서 가역적 편측 요관 폐쇄를 수행할 수 있도록 하는 자세한 지침을 제공합니다.

장기간의 일측성 요관 폐색의 역전 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 평가하기 위한 마우스 모델

본 글은 단측 신장 IRI를 이용한 허혈성 CKD 모델을 제시하고, 샘플 채취 하루 전에는 반대쪽 신장 절제술을 시행합니다; 이 프로토콜은 혈청 기반 기능 평가, 높은 생존율, 그리고 28일과 42일간의 CKD 병리 재현 가능성을 가능하게 하여, 기전 및 중재적 연구를 위한 다재다능한 플랫폼을 제공합니다.

신장 허혈/재관류 손상에 의해 유도된 급성 신장 질환에서 만성 신장 질환으로의 전환 마우스 모델

배우세요 마우스 5/6 신절제술 모델을 이용하여 만성신장질환과 요독성 심근병증을 연구하는 방법을. 이 기법은 생존율을 높이고 인간 질환을 모방하는 재현 가능한 동물 모델을 제공합니다.

마우스 5/6^일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도

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