Name: Vestibular Schwannoma 연구를위한 통합 방법론 체계 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 배우세요 전정신경초종양 샘플 처리 및 원발세포 배양법을 최소 조작 방식으로. 이 기술은 종양 분비물 수집과 치료 후보 물질 직접 검증에 활용되어 신경종양학 연구에 기여합니다.

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이 작품은 국방부 보조금 W81XWH-14-1-0091 (KMS), Bertarelli Foundation (KMS), 국방부 보조금 R01DC015824 (KMS) 및 T32DC00038 (JES 및 SD 지원) , Nancy Sayles Day Foundation (KMS), Lauer Tinnitus Research Center (KMS) 및 Barnes Foundation (KMS)이 포함됩니다.

<ol><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+schwannomas+in+the+modern+era%3A+epidemiology%2C+treatment+trends%2C+and+disparities+in+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Vestibular schwannomas in the modern era: epidemiology, treatment trends, and disparities in management.</a> J Neurosurg. 119 (1), 121-130 (2013).</li>
<li>Gal, T. J., Shinn, J., Huang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+epidemiology+and+management+trends+in+acoustic+neuroma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Current epidemiology and management trends in acoustic neuroma.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (5), 677-681 (2010).</li>
<li>Propp, J. M., McCarthy, B. J., Davis, F. G., Preston-Martin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descriptive+epidemiology+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Descriptive epidemiology of vestibular schwannomas.</a> Neuro Oncol. 8 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Stangerup, S. E., Tos, M., Thomsen, J., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((True+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">True incidence of vestibular schwannoma?</a> Neurosurgery. 67 (5), 1335-1340 (2010).</li>
<li>Tos, M., Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P., Tos, T., Thomsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+real+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">What is the real incidence of vestibular schwannoma?</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 130 (2), 216-220 (2004).</li>
<li>Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+natural+history+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and natural history of vestibular schwannomas.</a> Otolaryngol Clin North Am. 45 (2), 257-268 (2012).</li>
<li>Mahaley, M. S., Mettlin, C., Natarajan, N., Laws, E. R., Peace, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+patterns+of+care+of+brain+tumor+patients+in+the+United+States%3A+a+study+of+the+Brain+Tumor+Section+of+the+AANS+and+the+CNS+and+the+Commission+on+Cancer+of+the+ACS%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Analysis of patterns of care of brain tumor patients in the United States: a study of the Brain Tumor Section of the AANS and the CNS and the Commission on Cancer of the ACS.</a> Clin Neurosurg. 36, 347-352 (1990).</li>
<li>Carlson, M. L., Link, M. J., Wanna, G. B., Driscoll, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+sporadic+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Management of sporadic vestibular schwannoma.</a> Otolaryngol Clin North Am. 48 (3), 407-422 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+vestibular+schwannomas+associated+with+good+hearing+secrete+higher+levels+of+fibroblast+growth+factor+2+than+those+associated+with+poor+hearing+irrespective+of+tumor+size%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Sporadic vestibular schwannomas associated with good hearing secrete higher levels of fibroblast growth factor 2 than those associated with poor hearing irrespective of tumor size.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 748-754 (2013).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+and+VEGF+receptor-1+concentration+in+vestibular+schwannoma+homogenates+correlates+to+tumor+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">VEGF and VEGF receptor-1 concentration in vestibular schwannoma homogenates correlates to tumor growth rate.</a> Otol Neurotol. 26 (1), 98-101 (2005).</li>
<li>Koutsimpelas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VEGF%2FVEGF-R+axis+in+sporadic+vestibular+schwannomas+correlates+with+irradiation+and+disease+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">The VEGF/VEGF-R axis in sporadic vestibular schwannomas correlates with irradiation and disease recurrence.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 74 (6), 330-338 (2012).</li>
<li>Dilwali, S., Roberts, D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+VEGF-A+and+cMET+signaling+in+human+vestibular+schwannomas+and+schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Interplay between VEGF-A and cMET signaling in human vestibular schwannomas and schwann cells.</a> Cancer Biol Ther. 16 (1), 170-175 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Kao, S. Y., Fujita, T., Landegger, L. D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+anti-inflammatory+medications+are+cytostatic+against+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal anti-inflammatory medications are cytostatic against human vestibular schwannomas.</a> Transl Res. 166 (1), 1-11 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+anti-nuclear+factor-kappa+B+therapy+to+inhibit+human+vestibular+schwannoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of anti-nuclear factor-kappa B therapy to inhibit human vestibular schwannoma growth.</a> Mol Oncol. 9 (7), 1359-1370 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Landegger, L. D., Soares, V. Y., Deschler, D. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secreted+Factors+from+Human+Vestibular+Schwannomas+Can+Cause+Cochlear+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Secreted Factors from Human Vestibular Schwannomas Can Cause Cochlear Damage.</a> Sci Rep. 5, 18599(2015).</li>
<li>Blakeley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+drug+treatments+for+neurofibromatosis+type+2-associated+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Development of drug treatments for neurofibromatosis type 2-associated vestibular schwannoma.</a> Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 20 (5), 372-379 (2012).</li>
<li>Schroeder, R. D., Angelo, L. S., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF2%2Fmerlin+in+hereditary+neurofibromatosis+2+versus+cancer%3A+biologic+mechanisms+and+clinical+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">NF2/merlin in hereditary neurofibromatosis 2 versus cancer: biologic mechanisms and clinical associations.</a> Oncotarget. 5 (1), 67-77 (2014).</li>
<li>Schularick, N. M., Clark, J. J., Hansen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human vestibular schwannomas.</a> J Vis Exp. (89), (2014).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+Schwann+and+schwannoma+cells%3A+improved+and+simplified+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human Schwann and schwannoma cells: improved and simplified protocol.</a> Hear Res. , 25-33 (2014).</li>
<li>Brown, C. M., Ahmad, Z. K., Ryan, A. F., Doherty, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+expression+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor expression in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 158-162 (2011).</li>
<li>Cioffi, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+overexpression+contributes+to+vestibular+schwannoma+cell+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 overexpression contributes to vestibular schwannoma cell proliferation and survival.</a> Otol Neurotol. 31 (9), 1455-1462 (2010).</li>
<li>Doherty, J. K., Ongkeko, W., Crawley, B., Andalibi, A., Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB+and+Nrg%3A+potential+molecular+targets+for+vestibular+schwannoma+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">ErbB and Nrg: potential molecular targets for vestibular schwannoma pharmacotherapy.</a> Otol Neurotol. 29 (1), 50-57 (2008).</li>
<li>Aguiar, P. H., Tatagiba, M., Samii, M., Dankoweit-Timpe, E., Ostertag, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+between+the+growth+fraction+of+bilateral+vestibular+schwannomas+in+neurofibromatosis+2+%28NF2%29+and+unilateral+vestibular+schwannomas+using+the+monoclonal+antibody+MIB+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">The comparison between the growth fraction of bilateral vestibular schwannomas in neurofibromatosis 2 (NF2) and unilateral vestibular schwannomas using the monoclonal antibody MIB 1.</a> Acta Neurochir (Wien). 134 (1-2), 40-45 (1995).</li>
<li>Cattoretti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+recombinant+parts+of+the+Ki-67+antigen+%28MIB+1+and+MIB+3%29+detect+proliferating+cells+in+microwave-processed+formalin-fixed+paraffin+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections.</a> J Pathol. 168 (4), 357-363 (1992).</li>
<li>Hung, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+study+of+human+vestibular+nerve+schwannoma+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry study of human vestibular nerve schwannoma differentiation.</a> Glia. 38 (4), 363-370 (2002).</li>
<li>Archibald, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+expression+in+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">B7-H1 expression in vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (6), 991-997 (2010).</li>
<li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li>
<li>Zinn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Silico+Reconstruction+of+the+Viral+Evolutionary+Lineage+Yields+a+Potent+Gene+Therapy+Vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">In Silico Reconstruction of the Viral Evolutionary Lineage Yields a Potent Gene Therapy Vector.</a> Cell Rep. 12 (6), 1056-1068 (2015).</li>
<li>Kim, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulforaphane%2C+a+natural+component+of+broccoli%2C+inhibits+vestibular+schwannoma+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Sulforaphane, a natural component of broccoli, inhibits vestibular schwannoma growth in vitro and in vivo.</a> Sci Rep. 6, 36215(2016).</li>
<li>Soares, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+derived+from+human+vestibular+schwannomas+associated+with+poor+hearing+damage+cochlear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles derived from human vestibular schwannomas associated with poor hearing damage cochlear cells.</a> Neuro Oncol. 18 (11), 1498-1507 (2016).</li>
<li>Lysaght, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+of+human+perilymph%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteome of human perilymph.</a> J Proteome Res. 10 (9), 3845-3851 (2011).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., Borup, R., Stangerup, S. E., Thomsen, J., Nielsen, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+genes+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Deregulated genes in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (2), 256-266 (2010).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+nerve+microenvironment+for+schwannoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The importance of nerve microenvironment for schwannoma development.</a> Acta Neuropathol. 132 (2), 289-307 (2016).</li>
<li>Torres-Martin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+profiling+in+vestibular+schwannomas+shows+critical+deregulation+of+microRNAs+and+upregulation+in+those+included+in+chromosomal+region+14q32%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Global profiling in vestibular schwannomas shows critical deregulation of microRNAs and upregulation in those included in chromosomal region 14q32.</a> PLoS One. 8 (6), e65868(2013).</li>
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이 원고는 VS 연구를위한 통일 ​​된 방법 론적 틀을 설명하며, 하류 연구 응용을위한 인간 VS와 GAN 표본의 동시 처리를 개괄합니다. VS 연구가 정밀 의학의 시대에 접어 들면서 수많은 연구 질문에 답할 수있는 형태로 동일한 샘플을 준비하면 개별 환자에게 특유한 분자, 세포, 유전 및 proteomic 통찰력을 발견 할 수 있습니다. 인간 Schwann 세포와 VS 배양의 순도는 S100 마커에 양성인 세포와 DAPI 핵 염색체에 양성인 세포의 비율을 사용하여 면역 세포 화학 법으로 시간이 지남에 따라 철저히 평가되었습니다. 따라서,이 세포의 순도가이 기간 동안 가장 높기 때문에, 세포를 플레이 팅 한 후 처음 2 주 이내에 일차 인간 슈반 세포 배양에 대한 실험을 수행하는 것이 권장된다. 이후에 섬유 아세포와 같은 세포가 우세하기 시작한다. 천개gh VS 세포 배양 물은 또한 배양 2 주에서 최대로 순수하며, VS 세포는 접촉 매개 저해가 없으며 이후 단계에서 계속 증...

Vestibular schwannomas (VSs)는 10 만명당 1 명꼴로 진단되는 소뇌 뼈의 각도에서 가장 흔한 신 생물입니다. 비 전이성이더라도이 종양은 환자의 삶의 질 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6에 심각한 영향을 미칩니다. 영향을받는 개인은 일반적으로 난청, 이명 및 청각 충만감을 느낍니다. 종양이 성장함에 따라 증상이 점점 쇠약하게되어 균형 문제, 안면 마비 및 다른 뇌 기능의 손상을 초래합니다. 뇌간 압박으로 인한 생명을 위협하는 합병증 또한 발생할 수 있습니다. 대장 증후군의 관리 옵션은 근본적으로 정적 종양 및 확립 된 방사선 요법 또는 성장하는 종양의 외과 적 절제를 기다리는 것에주의해야합니다 <sup class = &quot;xref&quot;&gt; 8. 연구 제휴 병원에서이 종양을 외과 적으로 제거하면 환자 수술 중에 수집 된 신선한 종양 조직을 수집하고 분석 할 수있는 기회가 제공됩니다. 관상 동맥 우회술 (translabyrinthine resection) 인 VS에 대한 한 가지 구체적인 외과 적 접근법은 귀와 외음부에서 귀중한 인간 감각 상피에 접근 할 수 있습니다. VS는 말초 감각 신경 ( 즉, 전정 신경)에서 발생하기 때문에 VS 관련 관찰을 인간의 위장 신경 (GAN)과 같은 적절한 제어 신경에서 유도 된 것과 비교하는 것이 중요합니다. 건강한 GAN은 뇌하수체 제거 또는 목구멍 파열시 정기적으로 희생되며 건강한 Schwann 세포 생리학을위한 견고한 모델로 사용될 수 있습니다. Sporadic VS의 치료 나 예방을위한 FDA 승인 의약품이 없기 때문에 연구원들이 근본적인 분자 메커니즘을 명료하게 밝혀야합니다치료 목표를 밝힐 질병의 진전. 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 시클로 옥 시게나 제 2 (COX-2), 핵 인자 카파 B (NF-κB), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α) , 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 및 관련 신호 분자 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17을 포함한다 . 최근의 진보는 일차 인간 전정 신경초와 건강한 신경 조직의 수집, 처리, 배양 및 하류 조사를위한 프로토콜을 확장하고 개선했습니다 18 , 19 . 그러나, 대부분의 기존의 프로토콜은 준비를 수용하도록 설계되었습니다단일 하류 연구 응용 ( 즉, 세포 배양 만)에 대한 그러한 조직의 배양. 이 기사는 세포 유형 특이 적 배양, 단백질 추출, RNA 보존, 종양 분비 수집 및 조직 고정과 같은 다중 다운 스트림 응용 분야에 대한 단일 기본 인간 VS 또는 GAN 시료의 동시 처리를위한 통일 ​​된 방법 론적 틀을 제시합니다. 이 작품은 translabyrinthine VS 절제술 동안 인간 뇌척수액 (CSF)과 외음근의 외과 수집 및 가공에 대해 자세히 설명합니다.이 밀접한 관련 조직은 VS에 대한 중요한 바이오 마커의 역할을 할 수 있습니다. 마지막으로,이 프로토콜은 유전자 치료에 사용하기 위해이 조직의 새로운 응용 프로그램으로 문화에서 기본 인간 VS 세포의 바이러스 성 전달을위한 단계를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>BioCoat Poly-D-Lysine/Laminin 12 mm #1 독일 유리 커버슬립</td><td>Corning</td><td>354087</td><td>또는 Corning Laminin (CB-40232) 및 Cultrex Poly-L-Lysine (3438-100-01)으로 커버슬립을 준비하십시오</td></tr>.<tr><td>CELLSTAR 15 mL 원심분리기 튜브, 원뿔형 바닥, 눈금, Sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188161</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR 50 mL 원심분리기 튜브, 원뿔형 바닥, 눈금, Sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR 세포 배양 접시,</td> Clostridium histolyticum의 60mm <td>Greiner Bio-One</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소, 멸균 여과</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1639</td><td></td></tr><tr><td>Costar 24 Well Clear TC 처리 다중 웰 플레이트, 멸균</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>DAPI(4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, 고포도당, 피루브산염, 글루타민 없음, 500mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10313-039</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, 500mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 겸자, Dumoxel</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>Dumont #5 겸자, 표준 팁, Inox</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>소 태아 혈청, 적격, USDA 승인 지역, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10437-028</td><td>분취액을 50 mL 튜브에 담아 -20°C에 보관; C 냉동고</td></tr><tr><td>소 고환에서 Hyaluronidase, 유형 I-S, 동결 건조 분말</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP 주사기 필터 장치, 0.22 & 마이크로; m, 폴리에테르설폰, 33mm, 멸균</td><td>EMD Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드, 시약 등급, 결정질</td><td>시그마-알드리치</td><td>P6148</td><td>사용 전: 온라인에서 사용 가능한 프로토콜에 따라 표준 작동 절차를 수립합니다</td></tr>. <tr><td>PBS, pH 7.4, 500mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td>오토클레이브 사용 전</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL), 100mL</td><td>열 Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PhosSTOP 인산가수분해효소 억제제 정제</td><td>Roche</td><td>04906845001</td><td></td></tr><tr><td>Pierce 프로테아제 억제제 정제</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88666</td><td></td></tr><tr><td>피펫 및 피펫 팁, 1.5/2.0 mL 마이크로튜브용 5/10/25 mL</td><td>가변</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가변 플라스틱 균질화 유봉</td><td>E& K Scientific</td><td>EK-10539</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide 바늘, 27 g x 1 1/2 in</td><td>BD</td><td>301629</td><td></td></tr><tr><td>RIPA 버퍼</td><td>Boston BioProducts</td><td>BP-115</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater(RNA 안정화 솔루션)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Safe-Lock 마이크로 원심분리기 튜브, 폴리프로필렌, 사용 전 0.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363719</td><td>오토클레이브</td></tr><tr><td>Safe-Lock 마이크로 원심분리기 튜브, 폴리프로필렌, 1.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td>Autoclave 사용 전</td></tr><tr><td>식염수 - 0.9% 염화나트륨 주입, 정균, 20 mL</td><td>Hospira</td><td>0409-1966-05</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드 - #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Schuknecht 흡입 튜브 24 게이지</td><td>Bausch + Lomb</td><td>N1698 42</td><td>외과적 접근법(일반적인 이과 수술 기구 외에) 및 예: 파란색 수술 마커에 유용합니다</td></tr>. <tr><td>표본 용기, 또는 멸균, 4OZ</td><td>Medline</td><td>DYND30331H</td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000-C 실체 현미경</td><td>Zeiss</td><td>000000-1106-133</td><td></td></tr><tr><td>주사기/바늘 조합, Luer-Lok 팁, 5 mL, 22 G x 1 in.</td><td>BD</td><td>309630</td><td></td></tr><tr><td>투베르쿨린 주사기 전용, 슬립 팁, 1 mL</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>투베르쿨린 주사기 전용, 슬립 팁, 3 mL</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>초음파 균질기, 4710 시리즈, CV18 프로브</td><td>Cole-Parmer</td><td>CP25013</td><td></td></tr></tbody></table>

vestibular schwannoma 연구를위한 통합 방법론 체계

A Unified Methodological Framework for Vestibular Schwannoma Research

전정 신경초종은 cerebellopontine 각의 가장 흔한 신 생물이며 모든 두개 내 성장의 6-8 %를 차지합니다. 이 종양은 영향받은 개체의 최대 95 %에서 감각 신경성 청력 손실을 일으키지 만,이 청력 손실의 근간을 이루는 분자 메커니즘은 아직 파악하기 어렵습니다. 이 기사는 전정 신경초종 연구에 필수적인 다운 스트림 연구 응용을위한 다양한 1 차 인간 조직 샘플의 수집과 처리를 용이하게하기 위해 연구실에서 수립 된 단계를 설명합니다. 특히,이 연구는 외과 표본에서 Schwann과 schwannoma 세포의 수집, 가공 및 배양에 대한 통일 된 방법 론적 틀을 설명합니다. 이것은 종양과 신경 분비물의 수집, RNA의 보존과 수집 된 조직에서의 단백질 추출, 절편 준비를위한 조직 고정, 현재의 연구에 필수적인 것으로 간주되는 병행 처리 단계와 통합되어 있습니다.유전자 치료에 응용하기 위해 아데노 관련 바이러스에 일차 인간 세포를 노출시키는 것. 또한,이 연구는이 종양을 내이 및 외음부에서 인간의 감각 상피를 얻을 수있는 독특한 기회로 수집하는 외과 적 접근법을 강조합니다. 실험적인 품질을 향상시키기위한 팁이 제공되고 일반적인 함정이 강조 표시됩니다.

5 장에서 확립 된 것처럼 배양 된 1 차 인간 VS 세포는 많은 하류 연구 응용에서 질병 관련 과정에 대한 유익한 모델로 취급 될 수있다 ( 그림 1 ). 6 절에서 배양 된 건강한 Schwann 세포는 직접적이고 객관적인 비교 점을 ​​제공합니다. 아래에 요약했듯이이 통일 된 방법론 프레임 워크에 따라 처리 된 VS 및 GAN의 광범위한 데이터는 이전에 12 , 13 , 14 , 15 , 27 에 게시 된 여러 기사에서 사용할 수 있습니다. <p class="jove_content" fo:keep-together.wi...

이 프로토콜의 목표는 vestibular schwannoma 및 Schwann 세포 연구에서 여러 하류 응용 프로그램에 대한 인간의 수술 샘플 수집 및 처리를 설명하는 것입니다.

Vestibular Schwannoma 연구를위한 통합 방법론 체계

Vestibular schwannomas are the most common neoplasms of the cerebellopontine angle, making up 6-8% percent of all intracranial growths. Though these ...

본 절차의 전반적인 목적은 수술실에서 수령한 인간 전정신경초종 샘플을 처리하여 일차 세포 배양 및 종양 분비물을 수집하는 것입니다. 이 방법은 다수의 생체 분자 분석에 사용할 인간 일차 종양 샘플을 수령, 보관 및 처리하는 최선의 방법에 관한 전정신경초종 연구 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 최소 조작 배양법을 사용하여 인간 일차 전정신경초종 세포를 증식시킨다는 점입니다.이 기술의 함의는 배양된 세포에서 유망한 치료 후보 물질을 직접 테스트할 수 있기 때문에 전정신경초종 치료로 확장됩니다. 수술실에서 운반 시 사용한 얼음에서 실험실의 층류 후드로 갓 채취한 전정신경초종 또는 대이개신경 샘플이 담긴 검체 용기를 옮기는 것으로 시작하십시오. 멸균 집게를 사용하여 검체를 1.4 mL의 1배 외액 PBS가 채워진 3개의 1.5 mL 튜브 중 첫 번째 튜브로 조심스럽게 옮기십시오.검체가 담긴 각 튜브의 뚜껑을 닫고 가볍게 흔들어 세척합니다. 샘플을 건조한 60 millimeter 페트리 접시에 놓고 핀셋을 사용하여 혈관이 뚜렷한 부위의 모든 괴사 조직을 제거합니다. 핀셋이나 메스 칼날을 사용하여 샘플을 RNA 보존, 단백질 추출, 분비물 수집, 고정 및 세포 배양을 위한 별도의 조각으로 나눕니다.세포 배양용으로 지정된 검체 조각을 5~8 mL의 차가운 보충 DMEM F12 배지가 들어 있는 새로운 60 mm 배양 접시에 옮깁니다. 분비물 수집용으로 지정된 전정신경초종 또는 대이개신경 조각을 빈 1.5 mL 튜브에 넣습니다. 먼저 FBS가 보충되지 않은 DMEM 500 µL를 두 개의 1.5 mL 튜브에 피펫팅하여 넣습니다.첫 번째 튜브는 종양 분비물을 수집하는 데 사용하고, 두 번째 튜브는 대조군으로 사용합니다. DMEM이 담긴 튜브 하나를 교정된 디지털 저울 위에 올립니다. 저울의 영점을 맞춘 후, 분비물 수집용으로 지정된 시편 조각을 튜브에 넣고 무게를 잽니다.결과값을 기록하며, 이는 조직만의 무게를 나타냅니다. 층류 후드(laminar flow hood) 아래에서, 튜브 내 DMEM의 부피를 시료 10 mg당 100 µL가 되도록 조정하십시오. 조직 샘플과 그에 대응하는 대조군이 담긴 튜브를 인큐베이터에 넣으십시오.종양 또는 신경 분비물의 생물학적으로 유용한 양을 수집하기 위해 최소 72시간 동안 배양합니다. 72시간 배양 후, 1 mL 피펫을 사용하여 검체에서 분비물이 포함된 배지를 제거합니다. 반복적인 동결-해동 사이클을 방지하기 위해, 계획된 후속 분석에 따라 배지를 새 튜브에 분주합니다.후속 응용 단계가 시작될 때까지 원래의 조직 조각, 분비물 및 대조군 DMEM을 -80 °C 냉동고에 보관하십시오. 양손에 핀셋을 하나씩 잡고 전정신경초종 조직을 약 1 mm³ 크기의 조각으로 분리하여 배양 절차를 시작하십시오. 그런 다음 10 mm 세롤로지컬 피펫으로 배지와 종양 조각을 흡입하여 모든 내용물을 15 mL 원심 분리 튜브로 옮기십시오.25 °C에서 1000G로 3분 동안 원심분리합니다. 원심분리하는 동안, 60 mm 배양 접시에 보충된 DMEM F12 배지 4.7 mL와 콜라게나제(collagenase) 250 µL, 히알루로니다제(hyaluronidase) 50 µL를 혼합하여 조직 분해 배지를 준비합니다. 원심분리가 끝나면 종양 조각들이 원추형 튜브 바닥에 펠렛(pellet) 형태로 형성됩니다.상층액을 조심스럽게 피펫으로 흡입하여 제거합니다. 그런 다음, 갓 제조한 효소가 포함된 붕해 배지 2 mL를 종양 부위에 첨가합니다. 조직이 이동할 수 있도록 피펫팅을 여러 번 반복한 후, 이를 60 mm 배양 접시로 옮깁니다.배양 접시를 인큐베이터에 넣고 18시간 동안 배양합니다. 다음 날, 10% FBS와 1% penicillin streptomycin이 첨가된 DMEM F12 배지를 37 °C 항온 수조에서 가온합니다. 전정 신경초종 배양물이 담긴 접시를 인큐베이터에서 꺼내 클린벤치(flow hood)로 옮깁니다. 6 mL 시린지에 22게이지 바늘을 장착하여 배지가 포함된 배양액을 흡입한 후, 새로운 15 mm 원추형 튜브로 옮깁니다.37°C에서 1000G로 5분 동안 원심분리합니다. 그동안 멸균 핀셋을 사용하여 필요한 수의 폴리델리신(polydelycine) 및 라미닌(laminin) 코팅 유리 커버 슬립을 24웰 배양 플레이트에 넣습니다. 1cm³ 크기의 종양 하나로 24~32개의 웰을 배양할 수 있으므로, 대부분의 작은 종양의 경우 8~16개의 웰에 세포를 배양하도록 계획하는 것이 적절합니다.원심분리 후 상층액을 제거하고, 계획된 웰당 1mL의 세포 현탁액이 되도록 미리 데워둔 배지에 잔여 세포 펠렛을 재현탁합니다. 5mL 세롤로지컬 피펫을 사용하여 세포 현탁액 2mL를 흡입한 후, 24웰 플레이트의 웰 하나에 1mL를 분주합니다. 모든 준비된 웰에 종양 세포 현탁액이 동일하게 나누어질 때까지, 2mL씩 흡입하여 각 계획된 웰에 1mL씩 분주하는 과정을 반복합니다.24-웰 플레이트를 37 °C 인큐베이터에 넣고 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날 플레이트를 확인하여 웰 바닥에 상당한 부유물이 관찰되면, 부착 세포가 떨어지지 않도록 주의하며 각 웰의 배지를 새로운 보충제 함유 DMEM F12 배양 배지로 조심스럽게 교체합니다. 부유물이 없으면 플레이트를 다시 인큐베이터에 넣고, 5일째에 처음으로 배지를 교체한 후 이후 3일마다 교체합니다.이 명시야 이미지는 배양된 전정 신경초종 세포의 전형적인 조직 패턴을 보여줍니다. 일차 인간 전정 신경초종 배양물의 이 면역형광 이미지들은 녹색으로 표시된 GFP 발현 ink 80에 48시간 동안 노출시킨 후 촬영되었습니다. 적색 형광은 세포골격을 염색하는 phalloidin F actin 면역 염색이며, 청색 형광은 핵을 염색하는 dapi입니다.삽입도는 저배율 이미지의 특정 영역을 고배율로 촬영한 이미지입니다. 이 절차를 수행할 때, 이후 단계들이 정확한 배양 기간 후에 진행될 수 있도록 분비물 샘플과 배양 샘플을 인큐베이터에 넣은 시간을 기록하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 바이러스 형질도입, 고정, 면역형광법, 약물 처리 및 RNA 추출과 같은 다른 방법들을 수행하여, 서로 다른 바이러스가 세포 내에서 어떻게 발현되는지 또는 약물 처리 후 유전자 발현이 어떻게 변화하는지와 같은 추가적인 질문들에 대한 답을 얻을 수 있습니다.이 기술의 개발 이후, 전정신경초종 연구 분야의 연구자들은 수술을 받은 실제 환자의 생체 내에서 일차 인간 세포가 다양한 약물에 어떻게 반응하는지 탐구할 수 있는 길이 열렸습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

방법은 자유의 여섯도 (6DF) 모션 시뮬레이터를 사용하여 인간의 입체 전정 안구 반사 신경을 (3D VOR)를 측정하기 위해 설명되어 있습니다. 3D 각도 VOR의 이득과 어긋남은 전정 기능의 품질을 직접 측정을 제공합니다. 건강한 주제에 대한 대표적인 데이터가...

자유 모션 플랫폼의 여섯도를 사용하여 세 가지 차원 전정 안구 반사 테스트

전정 신경초종 (VSS는) NF2 종양 억제 유전자의 돌연변이와 관련된 슈반 세포 (SC) 기원의 비 악성 종양이다. 우리는 분자 및 세포 실험 조작 및 분석이 가능하며 인간의 질병의 이질적인 성격을 되풀이되었습니다 세포 배양 VS 인간의 기본에 대한 재현, 효율적인 프로토콜을보고합니다.

인간의 전정 신경초종의 차 문화

두개골 신경 신경의 손실 등의 형태학 적 변화를 평가 하기 위해 구조 또는 두개골 신경 Menière의 질병 (MD) 또는 건강 한 사람에 비보에, 평가의 프로토콜에서의 붓기 개발 된 자기 공명 영상 (MRI)를 사용 하 여 . MD의 추가 MRI 기반 확인 수행 되었다.

Vivo에서 Menière의 질병 귀 그리고 정상 청력 귀에 자기 공명 화상 진 찰을 사용 하 여 인간의 두개골 신경의 형태학 분석

비대칭 반응을 가진 환자에서 전정 시스템을 재조정하기 위한 새로운 재활 방법이 제시되며, 이는 약한 쪽으로 단방향 회전으로 구성됩니다. 보상의 다감각적 측면을 향상시키기보다는 전정 경로를 직접 수정함으로써 1-2 세션 내에서 비대칭을 정상화하고 지속적인 효과를 보여줄 수 있습니다.

전정 기능 장애 환자에서 전정 시스템 비대칭을 개선하기 위해 단방향 회전을 사용하여

중력의 지각은 일반적으로 머리 똑바로 서 있는 주관적인 시각적 수직에 의해 결정됩니다. 롤 플레인에서 ± 15 ° 및 ± 30 °의 헤드 틸트에서추가 평가는 손상된 중력 지각의 검출을위한 증가 된 정보 콘텐츠를 보장합니다.

주관적인 시각적 수직 패러다임을 사용하여 롤 플레인에서 정적 중력 지각의 평가

이 기사에서는 7 Tesla 자기 공명 단층 촬영(7T-MRT) 스캐너에서 자기 전정 자극 하에서 반사적 안구 운동, 자기 움직임 인식 및 인지 작업과 전정 기관의 해부학적 방향을 평가하기 위한 실험 설정, 재료 및 절차를 설명합니다.

7T MRT에서 안진, 자기 움직임 인식 및 인지 능력에 대한 자기 전정 자극의 영향 측정

여기에서는 미로 절제술 중 생리학적 조건에서 인간 전정 말단을 적출하는 기술과 면역 염색을 사용한 분석에 대해 설명합니다.

Labyrinthectomy 중 생리학적 조건 하에서 전정 말단 장기의 수확

이 방법론은 시운동 및 전신 회전 중 시선 안정화에 대한 시각 및 전정 기여를 조사했습니다. 자극은 시각, 전정 및 시전엽 시험을 통해 수행되었습니다. 비틀림 안구 운동 이득 및 안진 빈도는 각 시도에 대한 반사 뇌간 반응에 대한 감각 특이적 운동 정보의 피질하 중계에 대한 지표 역할을 했습니다.

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이전에 방사선 조사된 분야에서 고립된 재발성 폐암을 관리하는 것은 어려운 일입니다. 여기에서는 이전에 방사선 조사장에서 국소 폐암 재발 환자를 관리하기 위한 기관지 초음파 (EBUS) 유도 시스플라틴 주사에 대해 설명합니다.

기관지 폐암의 고립 된 종격동 재발의 치료에 시스플라틴의 종양 내 주입을 초음파 유도

Colon-26 (C26) 암종을 가진 마우스는 암 악액질의 고전적인 모델을 나타냅니다. 진행성 근육 소모는 종양 성장, 근육 특이적 유비퀴틴 리가제의 과발현, 근육 단면적 감소와 관련하여 발생합니다. 지방 감소도 관찰됩니다. 악액질은 시간 의존적인 방식으로 연구되며 낭비의 심각성이 증가합니다.

콜론-26 암 종양 베어링 암 악액질의 연구를위한 모델로 마우스를

배우세요 전정신경초종양 샘플 처리 및 원발세포 배양법을 최소 조작 방식으로. 이 기술은 종양 분비물 수집과 치료 후보 물질 직접 검증에 활용되어 신경종양학 연구에 기여합니다.

Vestibular Schwannoma 연구를위한 통합 방법론 체계

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