Name: 삼투압 펌프 또는 직접적인 근육 주사를 이용한 피하 뉴로트로핀 4 주입으로 노화 후두 근육 강화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: 배우세요 노화된 쥐 후두 근육에서 Neurotrophin 4를 삼투압 펌프와 직접 주사로 투여하여 근육 재형성을 유도하는 방법을. 이 기술은 노화 관련 성대 기능 저하 개선과 임상 적용 가능성을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 난청 및 기타 의사 소통 장애 (R21DC010806에서 CAM 및 JCS로, R01DC011285에서 CAM로)의 국립 연구소로부터의 보조금에 의해 지원되었습니다.

이 프로토콜에 대해 6 개월에서 30 개월 된 수컷 Fischer 344-Brown Norway 쥐를 사용하십시오. 랫트는 국립 늙은 쥐 서식지 연구소 (National Institute of Aging)의 설치류 식민지에서 얻은 것이다. 랫트 후두의 구조는기도 보호 및 종 특이 적 발성을 위해 기능적으로 작용하는 인간의 것과 유사하기 때문에 본 연구를 위해 쥐를 사용했다.이 연구는 실험실 동물의 인간애 관리 및 사용에 관한 PHS 정책에 따라 수행되었으며, 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 NIH 안내서 및 동물 복지법 (7 USC 외); 동물 사용 프로토콜은 University of Kentucky의 IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해 승인되었습니다. 1. 쥐의 마취 <ol><li> 완충 식염수에 ketamine hydrochloride (해리 성 마취제)와 xylazine hydrochloride (진정제 및 진통제)를 혼합하여 마취약을 준비합니다. 최종 용액에서 ketamine과 xylazine의 농도는 kg 당 100 mg / 8 mg체중 각각. </li><li> 25G 바늘과 주사기를 사용하여 intraperitoneal 투여하여 쥐에 마취제를 주사. </li><li> 쥐가 포셉과 발가락이나 발을 꼬집어 의해 충분히 anesthetized 있는지 확인하십시오. 쥐가 꼬집음에 반응하지 않으면 수술을 시작할 수 있습니다. 쥐가 반사 또는 근육 수축으로 발가락 핀치에 반응하면 1 ~ 2 분을 기다렸다가 핀치 테스트를 반복하십시오. 쥐가 다시 반응하면 쥐를 새 동물로 바꾸고 1.2 단계부터 시작하여 절차를 반복하십시오. </li><li> 쥐가 움직이지 않으면 각막이 마르지 않도록 쥐의 눈에 안 연고를 바릅니다. </li></ol> 2. 삼투압 펌프 이식 <ol><li> 쥐를 무균 수술 부위에 복강으로 놓습니다. Preanesthetic 약물로 meloxicam를 관리하십시오. 25G 주사 바늘이 달린 주사기를 사용하여 체중 1kg 당 1-4mg의 용량으로 복강 내 투여. </li><li> 클리퍼를 사용하여 근사치 제거목 뒤에서 모피 1 &quot;x 1&quot;정사각형, 어깨 사이에 약 1 &quot;꼬리 공간. 가능하면 피부 가까이에 면도하십시오. </li><li> 에탄올 소독 (70 %)으로 목과 뒷부분을 적시십시오. </li><li> 면도 후, 알코올로 요오드 - 알코올 마무리를 연속적으로 3 번 문지르면 목의 등면을 문지릅니다. </li><li> 34 ° C로 설정된 가열 패드 위에 놓아 쥐의 체온을 유지하십시오. </li><li> 전신 NTF4 처리를 위해 50 μL의 NTF4 또는 식염수로 무균 처리 된 삼투 펌프를 채 웁니다 ( 그림 1 ). <ol><li> 메스를 사용하여 피부를 가로 지르는 약 2cm의 수평 절개를하고, 견갑골 사이의 공간으로 단지 두개의 절개를하십시오. 한쪽 손으로 겸자로 절개의 후부 가장자리를 들어 올리면서 hemostats의 팁을 삽입하고 절개 부분을 부드럽게 밀어 넣습니다. </li><li> 지혈 기 끝이 약 2 cm c목덜미를 절개 부위에 놓고 지혈대의 손잡이를 열어 절개 부위의 피하에 중공 &quot;포켓&quot;을 형성하도록 팁을 확장시킵니다. 이것은 펌프의 배치 사이트가됩니다. </li></ol></li><li> NTF4의 상호 작용과 포켓 절개 부위의 치유를 최소화하기 위해 삽입시 펌프 전달 포털 끝을 먼저 배향하십시오. </li><li> NTF4 생리 식염수 50 μL를 7 14 일 동안 전달하십시오. 7 일군은 6.72 mg / day의 NTF4를 투여 받았고 총 용량은 47.04 mg이었다. 14 일군은 6.72 mg / 일을 투여 받았고 총 용량은 94.08 mg NTF4 25 이었다. </li><li> 5-0 나일론 봉합사, hemostats 및 포셉 펌프 배치를 위해 만들어진 절개를 닫습니다. </li><li> 마취에서 회복되면서 최소 30 분 동안 쥐를 관찰하십시오. 모니터링 완료 기준은 동물이 활성화되고, 새장 주위로 이동하고, 식수를 공급하고, 정리와 같은 기타 정상적인 활동을 시작하는 것을 포함합니다. </li><li> 매일 동물 관찰수술 부위의 치유, 정상적인 사료 및 물 소비, 소변 / 대변 통과, 스트레스, 통증 또는 기타 수술후 합병증의 비정상적인 행동 징후를 관찰하여 첫 주. </li><li> 쥐가 통증이나 고통을 겪고있는 것으로 나타나면 통증 완화를 위해 최대 24 시간마다 carprofen을 5 mg / kg 피하 주사하여 5 일 동안 투여하십시오. </li><li> 감염이있는 경우 수의사와상의하여 상처가 적절하게 치료되도록하십시오. </li><li> 어떤 실험 그룹에 따라 쥐가에 스레드에서 자극을 방지하기 위해 수술 후 7-10 일 5-0 나일론 봉합을 제거합니다. </li></ol> 3. 직접 주입을위한 쥐의 마취 <ol><li> 수술 전날 밤에 쥐에게서 음식물을 보류하십시오. 이렇게하면 내시경이나 주사 바늘을 막을 음식이 없습니다. </li><li> 쥐를 체중을 줄이고 아세 롤마 민 1 ~ 2 mg / kg 체중을 준비하십시오. 근육 주사로 주사하십시오 (IM 위치는thyroarytenoid 근육을 떠났다. </li><li> 유도 상자에 쥐를 놓으십시오. 5 % isoflurane과 1 LO 2로 유도 상자에서 마취를 유도하십시오. </li><li> 2 % isoflurane과 600mL O 2 를 사용하여 쥐 원추로 쥐를 이동하십시오. </li><li> 쥐가 포셉과 발가락이나 발을 꼬집어 의해 충분히 anesthetized 있는지 확인하십시오. 쥐가 핀치에 반응하지 않으면 주사 프로토콜을 시작할 수 있습니다. 쥐가 반사 또는 근육 수축으로 발가락 핀치에 반응하면 1 ~ 2 분을 기다렸다가 핀치 테스트를 반복하십시오. 쥐가 다시 반응하면 쥐를 새 동물로 바꾸고 단계 3.4부터 시작하여 절차를 반복하십시오. </li></ol> 4. 직접 주입 및 시각화 <ol><li> NTF4 또는 생리 식염수가 포함 된 무균 적으로 준비한 50 μL 용량을 주사하기 전에 30 분 동안 25 ° C로 설정된 H2O 배스에 놓습니다. </li><li> 플렉시 유리 플랫폼 ( 그림 2 )에서 쥐를 앙와위 자세로 올려 놓습니다. Sus플랫폼의 꼭대기를 가로 지르는 가이드 와이어를 통해 정면 상단 절치에서 젖혀지는 자세로 쥐를 지키십시오. </li><li> 50 mm, 30 게이지, 100 μL 주사기를 1.9 mm, 30 ° sinus 내시경에 부착하십시오 ( 그림 3 ). 참고 : 주사기 어셈블리는 내시경의 외벽에 캐뉼라를 단단히 고정하는 지그를 통해 부착됩니다. 내시경은 성대의 시각화 및 구강 내 주사기 안내를 허용합니다. 각 동물에 앞서 캐 뉼러 팁의 위치를 ​​조정하여 팁이 내시경보기를 통해 완벽하고 명확하게 보이는지 확인합니다 ( 그림 4 ). </li><li> 혀를 연장하고 그것을 옆으로 움직이려면 고무로 깎은 한 쌍의 집게를 사용하십시오. 그런 다음 구강 개통을 유지하기 위해 플라스틱 견본을 삽입하십시오. 1.5 ~ 2 cm 길이로 자른 5 mL 플라스틱 시린지 배럴에서 검체를 만들고, 절단 된 가장자리는 떨림을 제거하고 부드럽게 연마합니다. </li><li> 루아의 조명을 끄십시오.할로겐 광원을 내시경에 부착하십시오. 비디오 레코더를 켜서 절차를 캡처하십시오. </li><li> 쥐의 입에 넣을 때 유리 팁에 결로 현상을 최소화하기 위해 내시경의 말단을 따뜻한 물에 몇 초 동안 담그십시오. </li><li> 모니터의 시각적 피드백을 사용하여 바늘을 왼쪽 성대 영역으로 조심스럽게 당깁니다. </li><li> 성대에 완전히 접근하기 위해 동물 호흡주기의 흡기 단계로 용액 주입을 시간을 재십시오. 호흡의 흡기 단계에서 성대가 완전히 노출됩니다. <ol><li> 성대가 완전히 보이면, 바늘을 음성 골격의 흰색 중앙 가장자리 옆쪽에있는 왼쪽 thyroarytenoid에 삽입하십시오. 주사 바늘을 제 위치에 놓고 주사기의 우울증을 통해 주사액을 전달하십시오. </li></ol></li><li> 내시경과 비디오 플레이어의 할로겐 광원을 끄고 ro를 다시 켭니다.옴 조명. </li><li> 쥐를 집에 넣고 가열 패드에 놓습니다. </li><li> 발열 패드에서 제거하기 전에 쥐가 회복되도록하십시오. 새장에서 음식과 물을 교체하십시오. </li><li> 주입 후 7 일 동안 래트를 모니터링 한 다음 안락사하십시오. 절제를위한 후두 제거 24 . </li></ol> 5. 쥐의 안락사 <ol><li> 쥐를 케타민 하이드로 클로라이드 및 크 실라 진 하이드로 클로라이드 (체중 kg 당 100mg / 8mg 복강 내 주사)로 마취시킨다. </li><li> 내측 thoracotomy 다음 exsanguination에 의해 안락사. </li></ol>

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후두 근육은 노화의 부작용에 취약합니다. 이전의 연구들은 수축 기능과 myosin isoform 변이의 변화뿐만 아니라 섬유 크기, 총 섬유 수, 재생 능력, NMJ 크기 및 양 변화에 대한 후두 근육의 변화를 보여주었습니다 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . 노화 후두 근육은 신경 영양소의 적용으로 바꿀 수 있습니다. 이러한 변화는 쉽게 측정 할 수 있습니다. 따라서 쥐의 후두 근육은 노화와 성대 질환 / 장애의 영향을 연구하는 데 유용한 모델을 제공합니다. 이 근육의 연구는 또한 노화 된 인간의 개입이나 보호 과정을 개발하는 데 도움이 될 수 있습니다. NTF4를 전신 또는 직...

후두 근육은 신속하고 지속적으로 수축하며 노화의 부작용에 취약합니다. 이 지속적인 활동은 65 세 이상의 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 명에서 관찰되는 목소리 문제 또는 연하 장애에 기여하는 것으로 생각됩니다. 몇 가지 분자 및 pathophysiologic 메커니즘이 나이 관련 기능 장애에 기여한다. 이러한 메커니즘은 후두 점막의 재건, 근육 섬유 위축 또는 손실, 성대의 굽힘과 성문 폐쇄의 원인이되는 근섬유 재생 또는 위축의 결핍을 포함 할 수 있습니다 8 , 9 , 10 , 11 . 현재로서는 입증 된 의학 요법이 없습니다.이러한 근육의 연령 관련 변화를 철저히 예방하거나 재활시킵니다. 신경근 전달의 효과를 조절하면 신경 모터의 성능에 큰 영향을 줄 수 있습니다. 뉴로 트로 핀의 계열은 신경 성장 인자 (NGF), 뇌 파생 신경 성장 인자 (BDNF), 뉴로 트로 핀 3 (NTF3) 및 NTF4 12 , 13을 포함 한다. 뉴로 트로 핀은 시냅스 효능을 조절하는 것으로 나타났습니다. 간세포 성장 인자, 형질 전환 성장 인자 베타 및 섬유 아세포 성장 인자는 최근 성대 흉터 치료를 위해 인간에서 사용되어왔다. NTF4는 또한 NMJ 효과를 조절합니다. NTF4가 결핍 된 마우스는 해체 된 NMJs 11 , 18 , 19를 보여준다. 이 연구는 치료자의 유망한 효과를 가져옵니다고령화 된 후두 근육 장애 및 성장 인자로 인한 노화. 성대 주름의 조직에 대한 직접 주사 치료제는 인간에게 전례가 없습니다. 예를 들어, 보툴리누스 독소의 국소 주사는 경련성 발성 장애 및 양측 재발 성 후두 신경 마비와 같은 후두 근육에 영향을 미치는 신경 학적 운동 장애에 대한 효과적인 치료법으로 현재 사용되고 있습니다 20 , 21 . Hyaluronic acid hydrogel은 보컬 폴드 징후와 성문 기능 부전을 치료하는 데 사용되는 또 다른 주사제입니다 22 , 23 . 주사 후두 성형술은 다양한 의사 소통 장애 치료에 사용될 수 있습니다 24 . 이러한 직접적인 주사 방법은 노령 인구에서 보컬 기능과 삼킴을 향상시킬 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Neurotrophin 4</td><td>Pepro Tech</td><td>450-04</td><td>200 ng 50 &mu; L</td></tr><tr><td>Alzet Osmotic Pump</td><td>DURECT Corporation</td><td>2001D</td><td></td></tr><tr><td>30&deg; 내시경</td><td>Stoltz</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>50 mm 30 게이지 100-&mu; L 주사기</td><td>Hamilton</td><td>84850 및 201812</td><td></td></tr><tr><td>식염수 (염화나트륨 용액)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>케타민 염산염</td><td>Henry Schein</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>자일라진 염산염</td><td>Henry Schein</td><td>33198</td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8 바늘</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305901</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>Becton-Dickinson</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>안과 연고</td><td>Henry Schein</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>Oster</td><td>44-018</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Decon</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>요오드 (Betadine)</td> <td>Purdue Pharma L.P.</td><td></td><td></td>606404</tr><tr><td>가열 패드</td><td>Sunbeam</td><td>731-5</td><td></td></tr><tr><td>5-0 나일론 봉합</td>사 <td>스레드 AD Surgical</td><td>PMN-518R6</td><td></td></tr><tr><td>crile hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13005-14</td><td></td></tr><tr><td>섬세한 봉합사 묶는 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>meloxicam</td><td>Henry Schein</td><td>49756</td><td></td></tr><tr><td>carprofen</td><td>Merritt Veterinary Supplies</td><td>148700</td><td></td></tr><tr><td>항생제 연고</td><td>Henry Schein</td><td>57110</td><td></td></tr><tr><td>아세프로미진 Aceproject</td><td>Henry Schein</td><td>3845</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 Isothesia</td><td>Henry Schein</td><td>50033</td><td></td></tr><tr><td>인덕션 박스(마취 상자)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-0116</td><td></td></tr><tr><td>산소 압축 탱크</td><td>Scott Gross</td><td>UN1072</td><td></td></tr><tr><td>플렉시 글라스 플랫폼</td><td>Small Parts Inc (Amazon)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>고무 팁 겸자</td><td>미세 과학 도구 고무</td><td>11075-00</td><td></td></tr><tr><td>Lowe's</td><td>42518</td><td></td>플라스틱 스펙튤라<td>위의 집게용 액체 고무</td></tr><tr><td>(BD 주사기 길이로 절단)</td><td>Becton-Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>할로겐 광원 코뿔소 후두 스트로보스코프</td><td>Kay-Pentax</td><td>RLS 9100 B</td><td></td></tr><tr><td>비디오 레코더</td><td>Kay-Pentax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치 Mictotom HM525</td><td>Thermo Scientific</td><td>HM 525</td><td></td></tr><tr><td>Gill 1 hematoxylin</td><td>VWR</td><td>10143-142</td><td></td></tr><tr>토끼 <td>Sigma-Aldrich</td><td>S0819</td><td></td>Texas red-X phalloidin Sigma-Aldrich T7471<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>alpha-bungarotoxin alexa fluor 488 conjugate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B-13422</td><td></td></tr> 소동물 마취에서 생산된 <tr><td>Shandon eosin-Y alcoholic</td><td>Thermo Fisher</td> Scientific <td>6766007</td><td></td></tr> 항나트륨 채널 Nav1.5 항체 <tr><td> 기계</td><td>스미스 의료</td><td>CDS 9000</td><td></td></tr></tbody></table>

삼투압 펌프 또는 직접적인 근육 주사를 이용한 피하 뉴로트로핀 4 주입으로 노화 후두 근육 강화

Subcutaneous Neurotrophin 4 Infusion Using Osmotic Pumps or Direct Muscular Injection Enhances Aging Rat Laryngeal Muscles

노인에서 후두 장애는 음성 장애에서부터 연하 장애로,기도 보호 반사 신경 장애로 이어집니다. 연령 관련 후두 근육 기능 장애를 표적으로하는 치료법은 거의 없습니다. 뉴로 트로 핀 (neurotrophin)은 근육 신경 분포 및 신경근 접합부 (NMUs)의 분화에 관여합니다. 뉴로 트로 핀은 신경 전달 물질 방출을 증가시킴으로써 신경근 전달을 향상시키는 것으로 생각됩니다. neuromuscular junctions (NMJs)는 노화 된 쥐의 후두 근육에서 작고 덜 풍부 해지고, 기능적 소실의 증거가 있습니다. 우리는 노화 후두 근육의 기능을 향상시키는 치료제로서 미래의 임상 적 사용을위한 NTF4의 효과를 탐구했다. 여기서는 NTF4 적용에 대한 반응으로 쥐의 두드러기 후두 근육이 재 형성되는 능력을 조사하기 위해 NTF4의 전신 투여 및 직접 주사에 대한 상세한 프로토콜을 제공합니다. 이 방법에서는 쥐가 NTF4를 전신적 으로 o자극적 인 펌프 또는 성대를 통한 직접 주입에 의한 것입니다. 후속 근육을 절개하여 형태학 및 연령 관련 소실에 대한 조직 학적 검사에 사용 하였다.

2 주 동안 삼투압 펌프를 주입하거나 NTF4를 직접 주입 한 후 1 주일 동안 랫트를 안락사시켰다. 후두를 수확하고 동결 방지제 (30 % 자당 및 70 % 인산 완충 생리 식염수)에 넣은 다음 저온 유지 장치를 사용하여 10-μm 폭으로 연속 절편을 만들었습니다. 나이가 들어간 후두 근육은 NTF4 투여로 영향을받습니다 25 . 젊고 오래된 쥐 이외에, 우리는 thyroarytenoid 근육의 주입 된 것과 주입되지 않은 것을 비교했다. 일반적으로 NTF4의 투여 경로에 따라 연령에 따라 섬유 크기가 달라집니다 ( 그림 5 ). 섬유화가 적 으면 치료 후에도 질적으로 관찰됩니다. 노화 된 래트에서 NTF4의 전신 투여 및 직접 적용으로 탈질 된 섬유의 백분율이 감소한다 ( 도 6 ). NMJ의 양도 증가한다 ( <st...

여기에서 우리는 쥐 노화 후두 근육을 재구성하기 위해 전신적으로 그리고 직접적으로 뉴로 트로 핀 4 (NTF4)의 사용을 기술하는 프로토콜을 제시합니다.

Laryngeal dysfunction in the elderly is a major cause of disability, from voice disorders to dysphagia and loss of airway protective reflexes. Few, if ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 노화된 쥐의 후두 근육 리모델링 유도를 위해 Neurotrophin 4를 전달하는 것입니다. 이 방법은 후두 근육 기능과 관련된 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 연령 관련 근위축을 역전시켜 발성 기능을 개선할 수 있는지가 그것입니다.이 기술의 주요 장점은 성대 노화의 인간 모델로 쉽게 적용할 수 있다는 점입니다. 성대 기능을 개선하는 데 필요한 용액을 주입하기 위해, 일반적으로 이비인후과 의사가 사람에게 사용하는 주입 방법을 사용할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 개인은 이식 및 주입 절차의 섬세함으로 인해 어려움을 겪을 수 있습니다.시연은 켄터키 대학교(University of Kentucky) 생리학과 기술자인 Tanya Seward와 커뮤니케이션 과학 및 장애학 부교수인 Richard Andreatta가 진행하겠습니다. 펌프를 이식하려면 먼저 쥐를 무균 수술 구역 내에서 복와위로 배치하십시오. 요오드로 등과 목 부분을 적십니다.그런 다음 목의 등쪽 부분을 70% ethanol로 닦아냅니다. 이어서 동물을 34 °C 가열 패드 위로 옮기고 마취 전 약물을 투여합니다. 무균적으로 준비된 삼투압 펌프에 Neurotrophin 4를 50 µL 채웁니다.그리고 메스를 사용하여 양쪽 견갑골 사이 공간의 바로 뒤쪽 피부에 가로로 2cm 너비의 절개를 가합니다. 핀셋으로 절개 부위의 뒤쪽 가장자리를 들어 올리고, 지혈鉗(hemostat)의 끝을 절개 부위 뒤쪽으로 조심스럽게 삽입합니다. 팁이 절개 부위에서 뒤쪽으로 약 2cm 정도 떨어졌을 때, 지혈鉗의 손잡이를 벌려 절개 부위 피하에 빈 공간을 만듭니다.펌프를 포켓에 삽입하되, 치료제와 포켓 절개 부위의 치유 과정 사이의 기타 상호작용이 최소화되도록 주입구 끝의 방향을 조절합니다. 그런 다음 5-0 나일론 봉합사와 지혈鉗子(hemostat), 포셉을 사용하여 펌프 배치 절개 부위를 봉합하고, 동물이 완전히 깨어나 보행할 수 있을 때까지 관찰합니다. 주입 30분 전에 무균적으로 준비된 50 µL 용량의 Neurotrophin 또는 식염수를 25 °C 항온 수조에서 가온합니다.처치 준비가 완료되면, 마취된 쥐를 플렉시글라스 플랫폼 위에 앙와위로 눕히고 가이드 와이어를 사용하여 위쪽 앞니를 통해 동물을 고정합니다. 다음으로, 30 gauge, 50 millimeter, 100 microliter 주사기를 1.9 millimeter 30 degrees 부비동 내시경에 연결합니다. 그리고 주사기 어셈블리를 내시경 외벽의 지그에 부착합니다.주사기가 고정되면 처치제를 충전하고 내시경 어셈블리를 카메라에 연결하십시오. 그런 다음 고무 팁 포셉을 사용하여 혀를 옆으로 밀어 확장하고 플라스틱 질경을 삽입하여 구강 개방 상태를 유지하십시오. 그리고 내시경의 할로겐 광원을 켭니다.비디오 녹화기를 켠 상태에서, 유리 팁에 응결이 생기는 것을 최소화하기 위해 내시경의 말단부를 따뜻한 물에 몇 초 동안 담급니다. 그런 다음 모니터의 시각적 피드백을 가이드로 사용하여 바늘을 왼쪽 성대 부위에 조심스럽게 삽입합니다. 성대가 완전히 보이면, 성대의 흰색 내측 가장지점에서 외측으로 떨어진 왼쪽 갑상피열연골에 바늘을 주입합니다.그리고 플런저를 눌러 약물을 투여합니다. 후두의 시야를 가릴 정도로 후두개(epiglottis)가 닫혀 있는 경우, 주사기 팁을 사용하여 위로 쓸어올리는 동작으로 조직을 부드럽게 떼어냅니다. 그런 다음 바늘을 제거하고, 동물이 완전히 쓰러져 누울 때까지 가열 패드가 깔린 홈 케이지에 넣습니다.일반적으로 Neurotrophin 4 처리 동물에서는 연령에 따라 신경섬유 크기의 변화가 관찰됩니다. 또한, 노령의 Neurotrophin 처리 동물에서는 섬유화 및 섬유 생성 수준이 더 낮게 관찰되는 반면, 신경근 접합부의 수는 증가합니다.숙련된다면, 삼투압 펌프 설치와 주입 절차는 각각 적절히 수행했을 때 한 시간 내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 후두 주변 부위의 긁힘과 손상을 방지하기 위해 바늘을 천천히 부드럽게 사용하는 것이 중요합니다. 이 방법은 노화 과정 중 성대 기능의 메커니즘에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 인두 및 삼킴 관련 질환과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.

subcutaneous-neurotrophin-4-infusion-using-osmotic-pumps-or-direct

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

신생아 생쥐의 중추 신경계에 치료 요원들을 소개하는 뇌 (intracerebroventricular)와 (정맥 주사) 2) 체계로 : 1)이 문서 분사의 두 가지 방법을 보여줍니다.

마우스에 Intracerebroventricular을 통해 치료 대리점 납품 (ICV)과 정맥 (IV) 사출

우리는 levator auris의 longus (랄) 젊은 성인 마우스의 근육을 muscarinic 신호의 억제제의 반복 관리와 wholemounts 년에 신경근육학 분기점의 후속 immunostaining (NMJs)에 대한 절차를 설명합니다. 랄 근육이 공개에 대해 고유한 장점이...

피하 Muscarinic Antagonists의 관리 및 마우스에 Levator Auris의 Longus 근육의 트리플 - Immunostaining

출처: Andreatta, RD et. al., 삼투압 펌프 또는 직접 근육 주사를 사용한 피하 뉴로트로핀 4 주입은 노화된 쥐 후두 근육을 향상시킵니다. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 노화 관련 신경차단 및 신경근 접합부 감소에 의해 영향을 받는 후두 근육 기능을 회복하기 위해 노령 쥐 모델에 뉴로트로핀 4(NTF4) 주입을 보여줍니다. NTF4는 신경 재생을 유발하고 신경근 접합부 형성을 촉진하여 후두 기능 장애에 대한 치료 가능성을 강조합니다.

노령 쥐의 후두 신경 재생을 위한 뉴로트로핀 4 주입

후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다.

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

근육 내 흡수 및 해당 운동 뉴런으로의 분자 역행 수송의 효능은 모터 엔드 플레이트(MEP)에 대한 주입 부위의 위치에 따라 달라집니다. 여기에서는 운동 뉴런으로의 추적자의 역행 수송을 최적화하기 위해 골격근에서 MEP를 찾는 방법을 설명합니다.

모터 엔드 플레이트 함께 근육 주사 : 직접 모터 뉴런에 셔틀 트레이서에 대한 최소 침습 접근

삼투 펌프의 피하 주입 화합물의 연장하고 일관된 전달을위한 편리한 방법을 제공합니다. 이러한 접근은 마우스에서 복부 및 흉부 대동맥 동맥류 모두 광범위하게 연구하기 위해 사용되었다.

삼투압을 이용하여 피하 안지오텐신 II 주입 쥐에서 유도 대동맥 동맥류 펌프

여기, 우리는 전기 신경 자극 기의 도움으로 회귀 후 두 신경에 근접에 있는 헌 근육 파생 된 줄기 세포를 주입 하는 프로토콜을 제시. 이 새로운 기술은 말 회귀 후 두 신경 병의 치료에 유용 될 수 있습니다.

말 왼쪽된 회귀 후 두 신경 근처 헌 혈 줄기 세포의 신경 자극을 유도 주사

여기서 제시된 것은 유발되고 자발적인 근전도 전위내의 생체 내 연대순 기록을 위한 이식형 시스템의 제조를 위한 프로토콜이다. 이 시스템은 신경 손상 다음 후두 근육의 회안의 조사에 적용됩니다.

만성 생체 내 근전도를 위한 이식형 시스템

이 프로토콜은 조직 화학 신경 근육 연구에 대 한 쥐 보컬 주름을 준비 하는 데 사용 하는 방법을 설명 합니다.

신경 근육 분석을위한 쥐 보컬 폴드의 준비

여기에서는 두개골 거근 장뇨근(LAL)의 생체 내 전기천공법(in vivo electroporation)과 탈질법(denervation)을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차를 통해 신경근 시냅스의 재생에서 근육 유래 단백질의 잠재적 역할을 연구할 수 있습니다.

In Vivo Electroporation과 Cranial Levator Auris Longus Skeletal Muscle의 단기 신경 재생이 결합되었습니다.

우리는 쥐에서 직접 미주신경 주사를 위한 프로토콜을 제시하여 주사 후 합병증 없이 신경으로 직접 약물을 전달할 수 있도록 합니다. 이 방법은 자율신경계 조작과 관련된 전임상 신경학적 연구에 적용됩니다. 필요한 수정을 통해 쥐 및 다른 종의 다른 신경에 대한 직접 신경 주입에 사용할 수 있습니다.

쥐를 위한 직접 미주신경 주사 프로토콜

배우세요 노화된 쥐 후두 근육에서 Neurotrophin 4를 삼투압 펌프와 직접 주사로 투여하여 근육 재형성을 유도하는 방법을. 이 기술은 노화 관련 성대 기능 저하 개선과 임상 적용 가능성을 연구하는 데 활용됩니다.

삼투압 펌프 또는 직접적인 근육 주사를 이용한 피하 뉴로트로핀 4 주입으로 노화 후두 근육 강화

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