Name: 인간 태반 생리학의 통합 연구에 대한 4 혈관 샘플링 접근법 In Vivo (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: 학습하세요 인간 태반 생리학 연구를 위한 4혈관 샘플링 기법을 통해 모체-태아 상호작용과 영양소 전달 메커니즘을 탐구하는 방법을. 이 기술은 임신 합병증 연구에 중요한 통합적 데이터를 제공합니다.

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무엇보다도이 프로젝트에 참여한 어머니 들께 진심으로 감사드립니다. 다음으로, 우리는 샘플링 절차, 마취과 의사, 간호사 마취 전문의 및 외과 간호사를 돕고 촉진 한 모든 인원을 인정합니다. 이 프로젝트는 남유럽 노르웨이 지역 보건 당국과 노르웨이의 여성 건강, 오슬로 대학 자문단 및 오슬로 대학 병원이 제공하는 지역 기금으로 기금을 마련하지 않고는 불가능했을 것입니다.

이 연구는 오슬로 대학 병원의 데이터 보호 관리 및 노르웨이 남부 의료 보건 연구 윤리위원회 (2419/2011)의 승인을 받았습니다. 모든 참가자는 포함시 서면 동의서에 서명했습니다. 1. 준비 사항 참고 : 절차 일정은 그림 1에 요약되어 있습니다. <img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig1.jpg" /> 그림 1 : 4- 용기 시료 채취 절차에 관련된 타이밍과 인원을 설명하는 순서도. 하나의 색상은 한 사람을 나타냅니다. 방법에 대한 자세한 설명은 프로토콜에 나와 있습니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55847/55847fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 직원 <ol><li&gt; 초음파 측정을 수행하는 고도로 숙련 된 태아 의학 전문가, 수술을 담당하는 산부인과 의사, 산과 의사 중 한 명과 샘플을 채취하는 간호사 두 명, 혈액 가스 분석을 담당하는 조교 1 명, 연속적으로 그리고 수집 직후 다른 샘플. 참고 :보다 고급 수집 태반 조직의 경우, 추가 사람이 필요합니다. </li></ol></li><li> 장비 <ol><li> 장비, 얼음 콜드 1 M 인산염 완충 식염수 (PBS) 50 ML, 차가운 RNA 안정 솔루션 25 ML과 최적의 절단 온도 화합물 (OCT) 0.5 ML의 5 ML을 준비합니다. vacutainers 및 튜브를 표시합니다. 장비의 임시 목록을 참조하십시오. </li></ol></li></ol> 2. 모성 특성 <ol><li> 모성 임상 및 비 임상 특징을 포함하여 기록하고 관련 질문과 저를 반복하십시오.인도시 체중을 포함한 유지 관리비. 제왕 절개 전에 절식 기간을 기록하고 수술 중 저혈압 증상을 기록하십시오. 참고 : 세계 임신 협동 조합 (COLAB)의 최신 간행물에보고 된 최소한의 산모 임상 데이터 세트를 포함하십시오. 이 기사는 또한 연구 집단을 선정 할 때 매우 중요한 몇 가지 측면을 포함하고 있으므로 연구를 계획하는 동안 다루어야합니다 18 . </li><li> 민족, 나이 및 체질량 지수 (BMI)를 포함한 부계 특징을 기록하는 것을 고려하십시오. </li></ol> 3. 초음파 <ol><li> 단식 상태의 여성과 함께 배달 당일 도플러 초음파 검사를 수행하십시오. 대동맥과 대정맥의 압박을 피하기 위해 태아의 정지 상태에서 여성을 반 앙복 자세로 검사하고 관심 부위와 약간 반대 방향으로 기울입니다. 에서 출력 모니터링디스플레이상의 기계적 및 열적 인덱스에 의한 강도. </li><li> 탯줄 정맥 <ol><li> 태아 복부의 시상 또는 사시 절제로 제대 정맥을 시각화하십시오. 눈에 보이는 가지 이전에 복부 제대 정맥의 직선 부분에서 내부 혈관 직경을 측정합니다. 정규 B 모드를 사용하고 혈관 직경을 측정하기 위해 수직 인 오손 각도에서 혈관을 가시화하고 박동 직경 변화의 영향을 최소화하기 위해 이후의 측정을위한 몇 가지 최적의 프레임을 유지합니다. <ol><li> 측정을 5 ~ 10 배 (19)를 반복합니다. </li></ol></li><li> 동일한 사이트에서 도플러 초음파를 사용하고 시간 평균 최대 속도 (TAMX)를 측정하기 위해 가능한 한 낮은 주입 각도 (항상 &lt;30 °)를 얻기 위해 프로브를 조정하십시오. 3 - 5 초 (비 맥동 흐름)의 속도를 구하십시오. </li></ol></li><li> 자궁 동맥 <ol><li> 도플러 사용자궁 동맥이 내 장골 동맥에서 분지 된 직후에 외 골반 동맥을 가로 지르는 동안 자궁 동맥을 시각화하는 초음파입니다. 이 부위에서 프로브를 조정하여 낮은 발병 각도 (항상 &lt;30 °)를 얻고 TAMX를 측정하십시오. 3 개의 심장주기의 평균 속도로 속도를 구하십시오. </li><li> 동일한 위치에서 TAMX가 측정되는 것과 같은 위치에서 수직 각도를 얻지는 않을 것이므로 직경 측정을위한 위치에 가깝게 직경 측정을위한 정확한 각도를 얻기 위해 용기를 원위리로 따라 가십시오. 컬러 도플러 초음파로 평가 한 바에 따라이 부위 이전에 눈에 보이는 혈관이 분지되면 직경 측정을 제외하십시오. <ol><li> 정규 B 모드를 사용하고 혈관 직경을 측정하기 위해 수직 인 오손 각도에서 혈관을 가시화하고 박동 직경 변화의 영향을 최소화하기 위해 이후의 측정을위한 몇 가지 최적의 프레임을 유지합니다. </li><li> 측정을 5 ~ 10 배 (19)를 반복합니다. </li></ol></<html> li&gt; </ol></li><li> 태반의 위치를 ​​기록하십시오. </li></ol> 4. 4 혈관 혈액 샘플링 참고 : 절차 일정은 그림 1에 나와 있으며 샘플 개요는 그림 2에 나와 있습니다. <img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig2.jpg" /> 그림 2 : 태반 혈관 및 표본 추출 사이트의 개략도. 4 혈관 샘플링 방법에서 혈액 샘플은 자궁 정맥, 요골 동맥 (자궁 동맥의 대용 물) 및 제대 동맥 및 정맥에서 가져옵니다. 자궁 동맥과 제대 정맥의 혈류는 초음파로 측정됩니다. 태반의 조직 샘플을 수집합니다. 삽화 : Øystein H. Horgmo, 오슬로 대학.5847fig2large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <ol><li> 안전 절차 <ol><li> 작업장의 모든 인원에게 장갑, 수술 용 양복, 마스크 및 모자를 착용하십시오. </li><li> 외과 의사 및 연구 인력에게 외과 수술 용 복장, 마스크, 모자, 가운 및 이중 장갑을 착용하십시오. 안경은 옵션입니다. </li><li> 혈액 샘플을 장갑으로 취급하는 직원을 제공하십시오. </li><li> 태반 샘플을 장갑과 외과 용 마스크로 다루는 요원을 제공하십시오. 균질화에는 후드 사용이 필요합니다. </li></ol></li><li> 수술실에서의 준비 <ol><li> 브리핑을하고 수술 시작 전 샘플링을 돕는 모든 요원에게 장비를 건네주십시오. </li><li> 필요한 말초 동맥 및 정맥 접근을 도와 줄 마취과 의사이자 마취과 간호사와 상담하십시오.샘플링 전에 액체를 정맥 내 투여하지 마십시오. </li><li> 요골 동맥을 조력하는 사람에게 주사 바늘없는 세 개의 주사기 (10 mL)를 전 대퇴 정맥 샘플과 보조 주사기 (20 mL와 10 mL 중 한 개)와 혈액 가스 주사기 (헤파린과 함께) 한 사람에게 준다. </li><li> 수술 필드에 2 개의 멸균 주사기 (20 mL), 5 개의 멸균 주사기 (10 mL), 3 개의 &quot;나비 바늘&quot;및 2 개의 혈액 가스 주사기를 준비하십시오. </li></ol></li><li> 혈관에 접근. <ol><li> 제왕 절개 전에 표준 절차를 따라 말초 정맥 주사 (iv) 접근을 보장하십시오. 참고 : 전두엽 정맥은이 부위에서 샘플을 추출하기 쉽기 때문에 바람직합니다. </li><li> 초음파 또는 촉진에 의해 손목에서 요골 동맥을 국소화하십시오. 피하 리도카인 진통제 0.5 mL에 따라 요골 동맥에 동맥을 삽입한다. 삽입이 3 회 실패한 경우이 사이트에서 샘플링을 포기합니다.여자가 삽입 중에 통증을 느낀다. 참고 : 표준 절차에 따라 제왕 절개 수술 절차를 수행하십시오. 샘플링 절차에 필요한 조정 만 아래에 밑줄이 그어져 있습니다. </li></ol></li><li> 모성 혈액 샘플 참고 : 자궁 절개 전에 세 모체 혈액 샘플 (자궁 정맥, 요골 동맥 및 전두 정맥)을 동시에 얻습니다. <ol><li> 자궁 정맥 들어, 복강을 열고 복벽을 들어 올리고 자궁 앞쪽에 자궁 정맥의 주요 가지를 드러내는 견인기를 사용합니다. 태반과 같은면의 자궁 정맥 분지에서 혈액을 채취하거나 태반이 자궁 정중선에 위치하면 가장 두드러진 정맥을 사용하십시오. <ol><li> 자궁 정맥의 혈액 가스 주사기에 버터 플라이 바늘을 약 30도 각도로 삽입하고 부드러운 흡입을 피하여 혈액을 채취합니다.용혈. 나비 바늘의 iv 위치를 조심스럽게 고정한 채로 채워진 혈액 가스 주사기를 20 mL와 10 mL 주사기로 연속적으로 교체하십시오. 참고 : 최적의 접근은 선택한 자궁 정맥의 반대쪽에 서있을 때 가장 잘 보장됩니다. </li></ol></li><li> 요골 동맥의 경우, 동맥 내에서 흡인을하십시오. 첫 번째 5 mL를 버리고 혈액 가스 분석을 위해 헤파린 주사기에서 3 mL를 흡입 한 다음 두 개의 주사기 (20 + 10 mL)에서 3 mL를 흡입합니다. </li><li> 대퇴 정맥을 위해서는 정맥 카테터에서 천천히 흡인하십시오. 첫 번째 5 mL를 버리고 세 개의 주사기 (10 mL)로 30 mL를 흡입하십시오. </li><li> 복부 폐쇄를 시작하기 전에 자궁 정맥의 샘플링 위치를 최종 검사하십시오. </li></ol></li><li> 태아 혈액 샘플 <ol><li> 아이가 태어 났을 때 즉시 제대를 고정 시키거나 태반을 옮기지 않고 제대 동맥으로부터 혈액을 배출하십시오. 기지 시작혈액 가스 분석을위한 주사기를 사용하고 가능한 경우 3 개의 10 mL 주사기를 따르십시오. </li><li> 동맥 표본이 확보되면 제대 정맥 (혈액 가스 및 20 + 10mL 주사기)에서 표본 추출하기 전에 코드를 클램프하고 조산사에게 아이를 넘겨줍니다. 참고 : 자발적으로 분리하지 않은 경우 출산 후 몇 초 내에 모든 제대 시료를 수집하고 태반 을 제자리에 놓습니다. </li><li> 후기 코드 고정에 관한 노르웨이의 권장 사항을 따르십시오. 고민이 된 어린이의 경우 즉시 코드를 조이고 자르십시오. 조산사 및 신생아 전문의에게 아이를 넘겨주십시오. </li></ol></li><li> 혈액 샘플 취급 <ol><li> 나머지 혈액 샘플을 준비하면서 혈액 가스 주사기를 얼음에 담아 혈액 가스 분석기에서 5 분 이내에 분석하십시오. </li><li> 혈액 샘플을 즉시 vacutainers로 옮기고 얼음 위에 올려 놓기 전에 1-2 분 동안 로커에 플라스마 튜브를 놓습니다. 혈청 튜브를 노동에 맡기십시오.30 분 동안 정착하기위한 벤치. 참고 : 5 개의 사이트 모두에서 양질의 품질을 유지하기 위해 동시에 샘플을 준비해야하기 때문에 이것은주의가 필요한 절차에서 중요한 단계입니다. </li><li> 가능한 한 빨리 플라스마 샘플을 원심 분리기에 넣고 30 분 이내에 6 ° C, 2,500 xg에서 20 분간 원심 분리하십시오. </li><li> 30 분 후, 2,500 x g에서 10 분간 실온에서 혈청 샘플을 원심 분리한다. </li><li> 분주는 혈장없는 혈장을 보장하기 위해 펠렛 위에 뜨는 0.5 ML을 떠나, 2 ML cryo 튜브에 신중하게 뜨는. </li><li> 샘플을 -80 ° C에 보관하십시오. </li></ol></li></ol> 5. 태반 조직의 수집 <ol><li> 태반이 납품 된 후 가능한 한 빨리 얼음으로 냉각 된 절개 트레이에 내려 놓습니다. 가장 긴 직경과 직경을 90도까지 사진 으로 찍고 측정하십시오. </li><li> 태반 무게를 잰다. </li><li> 무게, 두 직경, 모든 g를 기록하십시오.로스 병리학, 탯줄에 혈관 수 및 배달에서 태반을 얼음 위에 놓았을 때까지의 시간 간격. 참고 : 임상 적으로 표시된 경우 병리 검사에 태반을 보냅니다. </li><li> 산모 표면이 위로 향한 태반을 놓고 솔직한 병리학 영역을 피하면서 태반의 각 사분면에 무작위로 위치한 4 - 5 개의 샘플링 사이트를 확인합니다. 가위를 사용하여 탈모기를 제거하여 산모 표면에서 3 - 5mm 떨어진 곳을 잘라냅니다. 각 사이트에서 1 ~ 2cm 3 조각의 융모 조직을 수집합니다. </li><li> 콜드 1M PBS 50 ML에서 부드럽게 수집 된 조직을 씻으십시오. 각 샘플링 사이트와 분액에서 여러 조각으로 나눕니다. 참고 : 태반 조각의 크기는 계획된 분석에 따라 달라집니다. </li><li> 0.1 - 0.5 cm 3 티슈 샘플의 분취 량을 5 개의 냉동 튜브에 첨가하고 액체 질소로 급속 냉동하십시오. </li><li> RNA 안정화 용액 25 mL와 함께 0.1 - 0.2 cm 3 의 작은 조각을 튜브에 첨가한다. 4시에 쇼핑6, 24 시간 동안 RNA 안정화 용액을 폐기하고 그것을 대체하십시오. 얼다. </li><li> OCT 0.5 mL가 달린 5 개의 cryo tube에 0.5 cm 3의 조각을 넣고, OCT로 위로 올려 놓고 혼합하고 동결시킨다. </li><li> 분석 할 때까지 시료를 -80 ° C에 보관하십시오. 참고 : Burton et al. 계획된 분석에 따라 태반 샘플링의 실용적인 측면에 대한 훌륭한 개요를 제공합니다. 20 microvillous 및 기초 막 분리에 대한 나머지 조직을 제조하고, 진공 흡착 방식에 의해 탈락 조직을 수집하기 위해 고려한다. 21 , 22 </li></ol> 6. 신생아의 특성 <ol><li> Apgar- 점수 (1, 5 및 10 분), 성별, 체중, 길이, 재태 연령 및 신생아 집중 치료실 (입원 기간 및 결과)에 대한 입원을 포함하여 신생아 특성을 기록하십시오. </li><li> 인체 측정, 공기 치환에 의한 신생아 신체 조성 측정 고려또는 X-ray 흡광도 측정법으로 측정 할 수 있습니다. 23 , 24 </li></ol> 7. 계산 <ol><li> 방사형 및 자궁 동맥에서 유사한 혈액 조성을 가정하고 자궁 평활근 정 농도 차이를 계산하십시오. 자궁 동정맥 농도 차이 = C A - C V 정맥 - 동맥 농도 차이 = C v - C a 여기서 C는 첨자가있는 농도 : A, 요골 동맥; V, 자궁 정맥; v 배꼽 정맥과 배꼽 동맥. </li><li> 체적 유량, mL / min (Q)을 계산하시오. <img alt="방정식 1" src="/files/ftp_upload/55847/55847eq1.jpg" /> 여기서 D는 혈관 직경 (cm)이고, TAMX는 시간 평균 최대 속도이고, h는 공간 혈액 속도 프로파일의 계수입니다. 제대 정맥의 계수로 0.5를 사용하고자궁 동맥 (25), (26) 0.6. </li><li> Fick의 원리에 따라 태반 섭취량과 출산량을 계산하십시오 : 자궁 입구 섭취 = ( C A - C V ) x Qm 태아 흡수 = (C의 V - C가) x Q f 아래 첨자 : m, 모성 및 f, 태아. </li></ol>

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</ol>

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<html> 태반 4 혈관 샘플링 방법은 세 가지 주요 목적과 관련이 있습니다. 첫째, 우리의 포도당과 아미노산 연구에 의해 입증 된 것처럼 특정 물질이 어떻게 모체 측의 태반에 흡수되어 제대혈과 태아로 옮겨지는지를 연구하는데 사용될 수 있습니다. 둘째,이 방법은 프로게스테론 결과에 의해 입증 된 것처럼, 태반에 의해 생성되어 산모 또는 태아 순환계로 방출되는 물질을 연구하는 데 매우 관련이 있습니다. 셋째, 빠른 성장과 조직 개조 과정 에서 생체 내 태아 가 어떻게 폐기물을 제거하는지 연구하는 것이 유용 할 수 있습니다. 4-vessel 방법의 중요 단계 및 물류 문제 태반 4 혈관 표본 추출은 정상적인 생리 임신 8 , 10 , 11 ...

미국 국립 보건원 (National Institutes of Health)에 따르면, 태반은 인체 1 , 2 , 3 에서 가장 잘 이해되지 않는 기관입니다. 진행중인 임신에 비 윤리적 위험을 가하지 않으면 서 생체 내 에서 인간 태반 에 접근하여 연구하기가 어렵습니다. 그러므로 인간의 태반 기능에 대한 연구는 주로 시험 관내 및 생체 외 모델에 기반을두고있다. 태반 수송과 대사에 대한 이전 의 생체 내 연구의 대부분은 동물 4 , 5 , 6 에서 수행되었다. 그러나 태반의 구조와 기능은 종간에 상당히 다르기 때문에 인간에서 동물로 결과를 외삽하는 것은 신중해야한다. 인간 생체 내 (in vivo) 연구 에서 태아와 태아의 흡수 및 정상 생리학모든 조건을 가지고 있으며 , 화합물 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 의 통합 전이를 연구 한 사람은 없다. 이러한 기초 연구는 인간 태반에 대한 생체 내 연구가 가능하며 여러 목적을 달성 할 수 있음을 보여줍니다. 첫째, 현재 체외 , 체외 및 동물 연구 에서 유래 한 태반 기능의 현재 개념을 인간 환경에서 시험 할 수 있으므로 인간 태반에 대한 새롭고보다 구체적인 통찰력을 얻을 수 있습니다. 둘째, 비정상 태아 성장, 자간전증, 모성 당뇨병, 대사 증후군 및 기타 모체 대사 장애와 관련된 기능 장애 태반의 특성이 더 잘 특성화 될 수 있습니다. 셋째, 인간 생체 내 연구는 진단을 개발할 수있는 기회를 제공한다.틱 기능과 예측 도구. 이 배경에서 우리 는 생체 내 인간의 태반 기능을 조사하기 위해 생리 학적 데이터의 종합적인 수집을 목표로 삼았습니다 . 계획된 제왕 절개 동안, 우리는 자궁 정맥에 대한 복강 내 접근을 이용하여 태반의 모성 및 태아 측 (4 혈관 샘플링 방법)에서 들어오고 나가는 혈관으로부터 혈액 샘플을 수집합니다. 이 샘플은 영양소 및 기타 물질 (14)의 쌍 동정맥 농도 차이를 계산하는 데 사용됩니다. 또한 초음파를 이용하여 태반 양측의 체적 유량을 측정합니다. 따라서, 모든 화합물의 태반 및 태아 섭취를 정량화 할 수있다. 또한, 태반에 의해 방출되는 물질을 산모 및 태아 순환계 15 , 16 , 17 로 결정하는 것이 가능합니다. 결합 할 때엄마와 아이의 임상 적 매개 변수와 태반 및 기타 관련 조직의 분석을 통해이 방법은 동일한 모체 - 태아 쌍 에서 생체 내 태반 기능의 여러 측면을 통합 할 수있는 흥미 진진한 잠재력을 가지고있다.

<table><tbody><tr><td><강한>산모의 신체 구성</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>임피던스 척도</td><td>Tanita</td><td></td><td>또는 이와 유사</td></tr><tr><td>한<강한>초음파 측정&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sequoia 512 초음파 기계</td><td>Acuson</td>, <td>컬러 및 펄스파 도플러가 있는 곡선 변환기가 장착된 Acuson(주파수 대역폭 2 - 6MHz)</td>혈액 샘플Arerial 캐뉼라 BD Medical 682245 또는 이와 유사한 20cc 편심 Luer Tip 주사기(바늘 Termo 없음)<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>SS-20ES</td><td>또는 이와 유사한. 3 개가 필요합니다.</td></tr><tr><td>10cc 편심 루어 팁 주사기(니들 없음</td><td>Termo</td><td>SS-10ES</td><td>또는 이와 유사). 9 필요.</td></tr><tr><td>5cc 6% 루어 주사기(니들 없음</td><td>Termo</td><td>SS-05S1</td><td>또는 이와 유사). 2개 필요.</td></tr><tr><td>동맥혈 가스 주사기&nbsp;</td><td>방사선계 의료</td><td></td><td>또는 이와 유사한. 4 필요.</td></tr><tr><td>유연한 튜브에 연결된 멸균 날개 바늘, 21 게이지</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>(일회용).3 필요.</td></tr><tr><td>진공 튜브 6 mL EDTA&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456043</td><td>또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 10이 필요합니다.</td></tr><tr><td>Vacutainer 튜브, 5 mL, LH, 리튬 헤파린 분리기</td>, <td>Greiner Bio-One</td><td>456305</td><td>또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요.</td></tr><tr><td>Vacutainer 튜브 6 mL 혈청 응고 활성제&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456089</td><td>또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요.</td></tr><tr><td>Vacutainer 튜브 3 mL&nbsp; 9NC 응고 나트륨 시트레이트 3.2%</td><td>Greiner Bio-One</td><td>454334</td><td>또는 이와 유사합니다. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요.</td></tr><tr><td>극저온 바이알, 2.0mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>또는 이와 유사한. 샘플 부위, 혈청/혈장 유형 및 ID. 90이 필요한 라벨.</td></tr><tr><td>수술실에서 혈액 샘플을 운반하기 위해</td>주사기 <td></td><td></td> 를 <td>운반하기 위한 주사기를 운반하는 표시가 있는 트레이</td></tr>, <tr><td>샘플의 부드러운 혼합을 위한</td><td>로커</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>스티로폼 상자에</td><td>얼음</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>적절한 용기에</td> <td>액체 질소</td><td></td><td></td></tr><tr><td><강>태반 샘플</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>금속 트레이</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>스티로폼 상자 안의</td><td>얼음</td><td></td><td></td></tr><tr><td>보정 된 스케일</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>금속 눈금</td><td></td><td></td><td></td></tr>자 <tr><td>1M 인산염 완충 식염수</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td>또는 이와 유사한. 10m 희석&nbsp; 사용 전 1 M</td></tr><tr><td>RNA 안정화 솔루션</td><td>Sigma</td><td>R0901-500ML&nbsp;</td><td>또는 이와 유사한</td></tr> 차량<tr><td>최적 절단 온도(O.C.T.) 화합물</td><td>vwr</td><td>361603E</td><td>또는 유사한</td></tr><tr><td>극저온 바이알, 2.0mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>또는 이와 유사한 것. 샘플 사이트가 있는 라벨. 콘텐츠 및 ID. 10이 필요합니다.</td></tr><tr><td>원심분리기 튜브, 원뿔형 바닥 50mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227,285</td><td>또는 이와 유사한. "RNA later", 샘플 부위 및 ID. 2가 필요한 라벨.</td></tr><tr><td>적절한 용기에 액체</td> <td>질소</td><td></td><td></td></tr><tr><td><강>태아 체성분</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>보정된 저울</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>측정 테이프</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인간 태반 생리학의 통합 연구에 대한 4 혈관 샘플링 접근법<em&gt; in vivo</em

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

인간 태반은 여전히 utero에서 연구를 위해 매우 접근하기가 어렵습니다. 따라서 생체 내에서 인간 태반 생리학 에 대한 현재의 이해는 태반 해부학, 혈역학 및 임신 기간에있어서 종간의 다양성은 매우 높지만 동물 실험에 기반하고있다. 인간 태반 연구의 대다수는 생체 외 관류 연구 또는 시험관 내 영양막 연구입니다. 시험 관내 연구 및 동물 모델은 필수적이지만, 생체 내 인간 태반 에 대한 그러한 연구 결과의 외삽은 불확실하다. 우리 는 생체 내 에서 인간 태반 생리를 연구하고, 그 방법의 상세한 프로토콜을 제시하고자했다. 계획된 제왕 절개 도중에 자궁 절개 직전에 자궁 내 정맥에 대한 복강 내 접근을 이용하여 우리는 태반의 산모와 태아 측에서 들어오고 나가는 혈관으로부터 혈액 샘플을 채집합니다. 사기를 결합 할 때혈류량 측정을 통한 혈액 샘플의 중심 측정을 통해 태반 및 태아의 흡수 및 모든 화합물 방출을 정량화 할 수 있습니다. 또한, 동일한 모체 - 태아 쌍으로부터의 태반 조직 샘플은 운반체 밀도 및 활성 및 생체 내 태반 기능의 다른 측면의 측정을 제공 할 수있다. 이러한 4 혈관 샘플링 방법의 통합적 사용을 통해 우리는 정상 및 병리학 임신 모두에서 생체 내 태반 영양 전달 및 대사의 현재 개념을 시험 할 수 있습니다. 또한,이 방법은 태반에 의해 분비되는 물질을 모체 순환으로 확인하는 것을 가능하게하는데, 이는 태반 기능 장애의 바이오 마커 검색에 중요한 공헌을 할 수 있습니다.

4 혈관 샘플링 방법은 임상 실험에 적용 가능하며 우리는 209 명의 어머니 / 유아 쌍으로부터 혈액 샘플을 성공적으로 얻었습니다. 이 중 128 회에 우리는 또한 체적 유량을 측정했습니다. 70 마리의 모체 - 태아 쌍 ( 그림 3 )에서 모체와 태아 혈관 모두의 완벽한 4 혈관 표본 추출과 양질의 혈류 측정이 이루어졌습니다. 또한, 우리는 지금까지 30 명의 자간전증 환자로부터 혈액 및 태반 샘플을 수집했습니다. 우리는 이전에 방법 14 , 15 , 16 두 응용 프로그램을 보여주는 vasoactive 요인의 placental 릴리스뿐만 아니라, 인간의 태반이 양분 전송에 대한 기사를 게시했습니다. <p class="jove_content"...

우리는 장기간 생체 내 생체 태반 생리를 연구하기위한 상세한 방법을 제시합니다. 이 방법은 태아의 모체 및 태아 측에 유입 및 유출 혈관으로부터의 혈액 샘플링을 부피 혈류 및 태반 조직 샘플링의 초음파 측정치와 결합시킨다.

인간 태반 생리학의 통합 연구에 대한 4 혈관 샘플링 접근법<em&gt; In Vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

본 절차의 전반적인 목적은 여러 가지 방법을 사용하여 생체 내(in vivo)에서 인간 태반 기능을 연구함으로써, 인간 태아 태반 생리학에 관한 포괄적이고 통합적인 데이터를 수집하는 것입니다. 이 방법은 모체-태아 상호작용에서 태반의 역할과 같이 인간 태반 생리학에 관한 핵심 질문들에 대한 답을 얻는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 인간의 생체 내 환경에서 태반의 이동, 흡수 및 분비에 관한 현재의 개념들을 테스트할 수 있게 한다는 점입니다.태반의 해부학적 구조, 임신 기간 및 임신 합병증에 있어 동물과 인간 사이의 큰 차이로 인해 실험적 연구 결과를 인간에게 외삽하는 데 어려움이 있습니다. 이 방법은 태반 대사 및 영양소 전달에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 건강한 임신과 자간전증과 같은 합병증이 있는 임신 모두에서 태반의 화합물 방출을 연구하는 데 적용될 수 있습니다. 이 방법은 여러 의료 전문가, 간호사 및 연구원들의 매우 조율된 협력이 필요합니다.성공의 핵심은 항상 산모와 아기에게 집중하면서 철저하게 계획하는 것입니다. 이 도표는 샘플을 얻기 위해 필요한 타임라인과 인력을 보여줍니다. 샘플링을 돕는 각 개인은 서로 다른 색상으로 표시됩니다.본 프로토콜은 인간 태반 생리학을 연구하기 위한 세 가지 방법의 복합적 사용으로 구성됩니다. 첫째, 초음파를 사용하여 자궁 동맥과 제정맥의 혈류량을 측정합니다. 둘째, 제왕절개술 동안 인간 태반의 모체 측과 태아 측의 유입 및 유출 혈관에서 혈액 샘플을 수집합니다.분석을 위해 세 번째 태반 조직 샘플을 수집합니다. 먼저, 대동맥과 하대정맥의 압박을 피하기 위해 여성을 관심 영역의 반대쪽으로 약간 측면으로 기울어진 반수평 자세로 안내합니다. 태아가 안정된 상태일 때, 태아 복부의 시상단면 또는 사선단면에서 제정맥을 시각화하고, 눈에 보이는 분지점이 나타나기 전 복강 내 제정맥의 직선 구간에서 혈관 내경을 측정합니다.일반적인 B-모드를 사용하여 직경 측정을 위해 혈관을 수직 입사각으로 시각화하고, 박동성 직경 변화의 영향을 최소화하기 위해 나중에 측정할 수 있도록 최적의 프레임을 여러 장 확보합니다. 측정을 5~10회 반복합니다. 동일한 부위에서 프로브를 조정하고 도플러 초음파를 사용하여 입사각을 가능한 낮게 설정함으로써 시간 평균 최대 속도 또는 TAMX를 측정합니다.3~5초 동안의 속도를 측정합니다. 다음으로, 도플러 초음파를 사용하여 자궁동맥이 내장골동맥에서 분지된 직후 외장골동맥과 교차하는 지점을 시각화합니다. 이 지점에서 프로브를 조절하여 낮은 입사각을 확보한 후 TAMX를 측정합니다.3회 심장 주기의 평균 속도를 구해 속도를 측정하십시오. TAMX 측정 부위에 최대한 가깝게 직경 측정을 위한 정확한 각도를 얻기 위해 혈관의 원위부를 따라가십시오. TAMX가 측정되는 동일한 부위에서 수직 각도를 얻기 어렵기 때문에 자궁 동맥의 혈류량을 측정하는 것은 까다롭습니다.두 측정 지점 사이에서 분지되는 혈관이 있을 경우 해당 직경 측정값은 제외될 수 있습니다. 수술 시작 전 4개 혈관 혈액 샘플링을 수행하기 위해 용액, 튜브 및 장비를 준비하십시오. 그런 다음 샘플링을 도울 모든 인원에게 브리핑을 실시하고 장비를 전달하십시오.표준 말초 정맥 확보와 더불어 요골 동맥에 동맥 라인을 삽입하십시오. 이 부위는 샘플 채취가 더 쉽기 때문에 주와정맥(antecubital vein)이 선호됩니다. 다음으로, 복강을 절개한 후 리트랙터를 사용하여 복벽을 들어 올리고 자궁의 전외측에 있는 자궁 정맥의 주 분지들을 노출시키십시오.가능한 경우 태반과 같은 쪽에 있는 자궁 정맥 분지를 확인하거나, 태반의 가장 두드러진 정맥총이 자궁 중앙선에 위치한 경우 이를 확인합니다. 적절한 자궁 정맥이 확인되면, 보조 인원에게 요골 동맥과 주와 정맥에서 혈액 샘플을 채취하도록 지시하십시오. 동시에 30도 각도로 혈액 가스 주사기에 연결된 버터플라이 바늘을 자궁 정맥에 삽입하고 완만하게 흡인하여 혈액을 수집합니다.나비 바늘의 IV 위치를 주의 깊게 고정한 상태에서, 보조자가 혈액 가스 채취용 시린지를 20 milliliter 시린지로 교체하도록 합니다. 곧바로 10 milliliter 시린지로 교체하십시오. 요골 동맥이나 주관절 정맥으로부터 처음 5 milliliter는 버리고, 이후 혈액 가스 분석을 위해 헤파린 시린지에 3 milliliter를 흡입합니다.그 다음 각 부위에서 30 milliliters를 흡인합니다. 아이가 태어나면, 혈액 가스 분석용 주사기로 시작하여 탯줄을 집거나 태반을 만출시키지 않은 상태에서 즉시 제동맥으로부터 혈액을 흡인합니다. 가능하다면 이어서 10 milliliter 주사기 3개로 흡인을 진행하십시오.동맥 시료를 확보한 후, 제대정맥에서 시료를 채취하기 전에 탯줄을 집게로 집고 절단하여 태반이 제자리에 있는 상태에서 모든 제대 시료를 얻습니다. 4-혈관법(four-vessel method)은 다섯 군데의 서로 다른 부위에서 동시에 시료를 빠르게 처리하는 것뿐만 아니라 조율된 혈액 채취가 필요합니다. 수축, 용혈 및 응고가 일어나기 쉬운 제대동맥에 주의하십시오.복부를 닫기 시작하기 전에 자궁 정맥의 샘플링 부위를 최종 점검하십시오. 모든 혈액 가스 주사기를 얼음 위에 두고, 혈액 가스 분석기를 사용하여 5분 이내에 샘플을 분석하십시오. 혈액 샘플을 즉시 vacutainer로 옮기고, 혈장 튜브를 1~2분 동안 흔들어 섞은 후 얼음 위에 두십시오.혈장 샘플을 가능한 한 빨리, 30분 이내에 2,500 ×g, 6 °C에서 20분 동안 원심분리하십시오. 그 다음 상층액을 2 mL 크라이오튜브에 조심스럽게 분주하십시오. 혈액 샘플 내의 목적 물질을 분석하고 텍스트 프로토콜에 따라 태반 전이 계산을 수행하십시오.태반이 분만된 직후 가능한 한 빨리 얼음으로 냉각된 해부 트레이 위에 평평하게 놓으십시오. 조직의 무게와 가장 긴 지름, 그리고 첫 번째 측정 방향과 90도 각도가 되는 지름을 기록하십시오. 그런 다음 육안적 병리 소견과 탯줄 내 혈관 수를 기록하십시오.태반의 모체면이 위를 향하게 놓고, 태반의 각 구역에 무작위로 위치한 4~5개의 샘플링 지점을 지정합니다. 가위로 모체면에서 3~5mm 깊이로 절개하여 탈락막을 제거합니다. 그런 다음 각 지점에서 1~2cm³ 크기의 융모 조직 조각을 수집합니다.차가운 1 M PBS 50 mL로 수집한 조직을 부드럽게 세척합니다. 그런 다음 각 샘플링 부위에서 조직을 여러 조각으로 나누어 분주합니다. 0.1 ~ 0.5 cm³ 크기의 조직 샘플 분주물을 5개의 크라이오튜브에 넣고 액체 질소에서 급속 냉동합니다.0.1에서 0.2 cm³ 크기의 작은 조각들을 25 mL의 RNA 안정화 용액이 들어 있는 미리 준비된 튜브에 넣습니다. 조직학적 연구를 위해서는 0.5 cm³ 크기의 조각들을 0.5 mL의 OCT가 들어 있는 5개의 cryotube에 넣고, OCT를 가득 채운 후 튜브의 내용물을 섞습니다. 샘플을 -80 °C에서 냉동 보관하여 추후 분석 시까지 유지합니다.4혈관 샘플링법을 사용하여 209쌍의 모아(mother-infant) 쌍으로부터 혈액 샘플을 성공적으로 얻었습니다. 그 중 128개의 샘플에서 혈류량이 측정되었습니다. 모체 및 태아 혈관 모두에서 완전한 4혈관 샘플링과 양질의 혈류 측정이 이루어진 경우는 70쌍의 모태아(mother-fetus) 쌍이었습니다.포도당의 사례에서 알 수 있듯이, 태반 이동을 연구하기 위해 4혈관 접근법이 사용되었습니다. 태반 양측 모두에서 유의미한 동정맥 포도당 농도 차이가 발견되었으며, 이는 0.29 millimoles per liter의 생체 내 자궁태반 섭취와 0.54 millimoles per liter의 태아 섭취를 입증합니다. 제대 정맥의 중앙값 혈류량은 196.2 milliliters per minute로 측정되었습니다.Fick의 원리를 적용하여 제대 순환을 통한 태아의 포도당 섭취 중앙값은 분당 0.10 millimoles로 계산되었습니다. 4혈관법을 사용하여 글루탐산의 태반 섭취를 연구하였는데, 이는 대사 경로의 연료 및 태아-태반 간 아미노산 상호 전환에 있어 중요합니다. 제대 순환과 모체 순환 모두로부터 글루탐산의 태반 섭취가 관찰되었습니다.만삭 시 태반에 의한 프로게스테론의 생체 내 방출 또한 측정되었으며, 모체 혈류로의 유의미한 프로게스테론 방출이 확인되어 태반 4혈관 샘플링 방법이 태반에서 방출되는 물질을 검출하는 데 사용될 수 있음을 입증하였습니다. 이 절차를 시도할 때, 정확한 측정값을 얻기 위해서는 혈류량 측정 시 이러한 유형의 초음파 검사 경험이 풍부한 태아 의학 전문의가 수행해야 한다는 점을 강조하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후, 혈액 샘플을 분석하여 영양소, 대사 산물, 신호 분자, 엑소좀, 노폐물, 약물 또는 독소 등 관심 물질의 태반 전달 및 흡수 또는 방출을 연구할 수 있습니다.또한, 태반 샘플 분석을 통해 전달 조절 및 태반 대사와 관련된 추가적인 의문점을 해결할 수 있습니다. 종합적으로, 본 프로토콜은 혈류량 측정, 혈액 및 조직 샘플의 조율된 수집을 통해 인간 태반 생리학을 연구하기 위한 통합적인 in vivo 모델을 구축하는 방법을 보여줍니다. 이 영상을 시청한 후, 산부인과 전문의는 제왕절개술 중 인간 태반의 양측에서 동정맥 혈액 샘플을 안전하게 수집하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 개발하는 동안 중요한 조혈 기관으로 태반을 확인했습니다. 우리는 조혈 줄기 세포 (HSCs)이 생성되는 독특한 microenvironmental 틈새의 태반에서 확장 둘 발견했습니다. 여기, 우리는 마우스 태반에 HSCs의 격리 및 시각화에 필요한 실험 기법을 설명합니다.

태반에서 조혈 줄기 세포의 분리 및 분석

태반의 맞은 편에 생체이 물과 나노 물질의 전송 속도의 결정을 사용하여<em&gt; 생체</em&gt; 인간 태반 관류 모델

기본 인간의 태반 (융모) 및 탈락 기관 배양을 설정하는 간단한 방법을 설명한다. 융모와 탈락 기관 배양은 인간의 모체 - 태아 인터페이스에서 발병 기전을 연구하기위한 귀중한 도구입니다. 통성 세포 내 세균 리스테리아 균에 감염이 증명된다.

인간의 태반과 탈락 오르간 문화는 산모 - 태아 인터페이스에서 감염을 연구하는

이 연구는 가역 조직 삭제, immunostaining, 3D 렌더링 및 인간 태 반 villi 샘플 1-2 m m3의 순서에 혈관 네트워크의 분석에 대 한 프로토콜을 선물 한다.

3 차원 렌더링 및 Immunolabeled, 분석 인간 Placental Villous 혈관 네트워크를 명확히

우리는 안전 및 태 반 대상 약물 전달의 효과 평가 하기 위해 세 가지 방법을 사용 하는 시스템을 설명: vivo에서 이미징 나노 축적, 태 반 및 태아 개발을 모니터링 하 고 주파수 초음파를 모니터링 하 그리고 조직에 약물 전달 척도를 HPLC.

3 보완 방법을 사용 하 여 태 반 대상 약물 전달의 안전과 효율성의 종합 평가

여기에 전 생체 모성 태아 혈관 관류의 프로토콜이 제시 되어 모계의 혈관 조직으로 시험 물품의 투여를 가능 하 게 하 고, xenobiotic 입자 또는 약리학 적 제제의 변경 이외에의 태 반 전달을 평가할 수 있도록 태 반 생리학.

설치류 태 반의 전 생체 관류

다음은 일정한 흐름 조건에서 태반 외식을 배양하기 위한 프로토콜입니다. 이 접근법은 동적 생리학적 환경의 복제를 가능하게 하여 기존의 정적 융모 배양 시스템을 향상시킵니다.

Ex Vivo (체외 주행) 태반 이식 유동 배양 - 자궁의 동적 조건 모방

이 프로토콜은 바이러스 감염 연구를 위해 공기-액체 경계면에서 배양한 인간 태반 조직 제거 식물을 준비하는 과정을 설명합니다.

엑스빅 빅 모체-태아 경계면을 통한 바이러스 전파 연구를 위한 인간 태반 이식 배양

위장 연결 쥐 모델을 이용하여 많은 연구가 최근 Roux-EN-Y 위장 작업의 기본 생리 메커니즘을 밝히기 위해 실시되었습니다. 이 문서는 입증이 실험 도구의 장점과 한계를 이해하기 위해 우리의 출판 위장 바이패스 쥐 모델의 기술적 및 실험적 세부 사항을 논의하는 것을 목표로하고있다.

쥐에서 Roux-EN-Y 위장 바이패스 수술

인간 종양 이종 이식은 생체 혈관의 성장 단계 중 마우스 유래의 세포에 의해 함침된다. 하류 분석시 이러한 세포의 오염에 의한 바이어스를 회피하기 위해, 자기 세포 선별에 의해 모든 마우스 세포의 광범위한 공핍을 허용하는 방법을 개발 하였다.

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

학습하세요 인간 태반 생리학 연구를 위한 4혈관 샘플링 기법을 통해 모체-태아 상호작용과 영양소 전달 메커니즘을 탐구하는 방법을. 이 기술은 임신 합병증 연구에 중요한 통합적 데이터를 제공합니다.

인간 태반 생리학의 통합 연구에 대한 4 혈관 샘플링 접근법

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