Name: N-glycans 배열 개발 및 HIV 항 체의 항 암 치료 효소 합성 프로 파일링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: 학습하세요 N-glycan 화학효소 합성법과 글리칸 마이크로어레이 기술을 활용한 HIV 광범위 중화항체 프로파일링 방법입니다. 이 기술은 약한 결합을 검출하여 당단백질 특이성을 연구하고 인플루엔자 및 암 진단에 활용됩니다.

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저자는 얇은 영화 기술, 계측 기술 연구 센터 (ITRC)와 국가 적용 연구 실험실, Hsinchu 과학 공원, 대만 감사합니다. 이 작품은 국가 과학 위원회에 의해 지원 되었다 (no를 부여 합니다. 대부분 105-0210-01-13-01) 및 학계 Sinica.

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<li>Wang, L. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+carbohydrate+Antigens+for+HIV+Vaccine+Design%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Synthetic carbohydrate Antigens for HIV Vaccine Design.</a> Curr Opin Chem Biol. 17, 997-1005 (2013).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Glycosylation+on+an+Immunodominant+Region+in+the+V1V2+Variable+Domain+of+the+HIV-1+Envelope+gp120+Protein%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Effect of Glycosylation on an Immunodominant Region in the V1V2 Variable Domain of the HIV-1 Envelope gp120 Protein.</a> PLoS Comput Biol. 12, e1005094(2016).</li>
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<li>Chang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycan+Array+on+Aluminum+Oxide-Coated+Glass+Slides+Through+Phosphonate+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Glycan Array on Aluminum Oxide-Coated Glass Slides Through Phosphonate Chemistry.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13371-13380 (2010).</li>
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<li>Shivatare, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Convergent+Synthesis+of+Bi-%2C+Tri-%2C+and+Tetra-Antennary+Complex+Type+N-Glycans+and+Their+HIV-1+Antigenicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Efficient Convergent Synthesis of Bi-, Tri-, and Tetra-Antennary Complex Type N-Glycans and Their HIV-1 Antigenicity.</a> J. Am. Chem. Soc. 135, 15382-15391 (2013).</li>
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<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/5499/performing-1d-thin-layer-chromatography">Essentials of Organic Chemistry. Performing 1D Thin Layer Chromatography.</a> JoVE. , Cambridge, MA. (2017).</li>
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<li><a target="_blank" href="https://classes.soe.ucsc.edu/bme210/Spring07/GenePix_Pro_6.0_Manual_RevL.pdf">GenePix Pro 6.0 Microarray Acquisition and Analysis Software for GenePix Microarray Scanners User’s Guide & Tutorial</a>. , Axon Instruments/ Molecular Devices Corp. Sunnyvale, CA. (2017).</li>
<li>GraphPad Prism version 6.01 for Windows. GraphPad Software. , La Jolla California USA. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/">http://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/</a> (2017).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

에이즈-1 bNAbs PG9, PG16, 및 PGTs 128, 141-145를 포함 한 클래스 중화 HIV-1 분리 순환의 70-80%에서 매우 강력한 보고 했다. 이러한 bNAbs epitopes는 높은 전체 HIV-1 그룹 M의 변종 중 보존, 그러므로 그들은 유도 중화 항 체23,24,25 에이즈 백신에 대 한 효과적인 immunogen 디자인을 안내할 수 있습니다. . 에이즈-1 광범위 하 게 항 체를 중화의 glycan epitopes를 식별 하기 위해 지속적인 노력의 일환으로 우리 보고 높은 노 오 스, 하이브리드, 그리고 복합 형식 oligosaccharides glycan 배열21, 형성의 패널의 화학과 효소 합성 22. 그러나, N</...

N-glycans glycoproteins에 covalently에 연결 되는 아스파라긴 (Asn) 잔류물 합의 Asn-Xxx-Ser/Thr sequon의 단백질 구조, antigenicity, 가용성, 및 lectin 인식 등 여러 생물 학적 과정에 영향을 1 , 2. 화학 합성 N-연결 된 oligosaccharides 그들의 거 대 한 구조 마이크로 고 높은 분기 건축 때문에 중요 한 합성 챌린지를 나타냅니다. 보호의 신중한 선택 그룹 빌딩 블록, anomeric 센터, 및 발기인의 적절 한 사용에서 선택 달성의 반응성을 조정/activator(s) 복잡 한 oligosaccharides의 합성에서 핵심 요소입니다. 복잡 한이 문제를 해결 하려면 사전 N-glycan 합성 작품의 좋은 금액으로 알려졌다 최근3,4. 이러한 강력한 접근에도 불구 하 고 찾는 다양 한 N-glycans의 준비에 대 한 효과적인 방법 주요 도전 (~ 20000) 남아 있다.
에이즈-1 광범위 한 유전적 다양성 및 중화 항 체 응답에서 탈출 하는 능력의 급속 한 돌연변이 율 에이즈-15,6 에 대 한 안전 하 고 예방 백신을 개발 하는 가장 큰 과제 중 하나입니다. , 7. 에이즈를 사용 하 여 호스트 면역 반응을 피하기 위해 하나의 효과적인 전술 이다 봉투 당단백질 gp120 다양 한 N의 닢 glycosylation-호스트 glycosylation 기계8에서 파생 된 glycans 연결 9. 인간 미 발달 신장 (HEK) 293T 세포에서 재조합 단위체 HIV-1 gp120 glycosylation의 정확한 분석에 대 한 최근 보고서 제안 특성 셀 전용 패턴10 구조 microheterogeneity의 발생 , 11 , 12. 따라서 이해의 HIV-1 bNAbs glycan 특이성 필요 잘 특징이 gp120 N-glycan 구조 분석에 대 한 충분 한 수량에 관련.
Glycan microarray 기술 발견 제공 다양 한 탄수화물 묶는 단백질, 바이러스/박테리아 adhesins, 독 소, 항 체, 및 lectines13,14의 특이성의 높은 처리량 기반 탐사 . 기준점과 칩 기반 형태로 체계적인 glycans 배열 문제가 낮은 선호도 단백질 glycan 상호 작용 multivalent 프레 젠 테이 션15,16,,1718을 통해 결정 합니다. 이 칩 기반 glycan 배열 셀 인터페이스를 효과적으로 모방을 편리 하 게 나타납니다. 기술을 풍부 관련 된 기존의 배열 형식 고르지 못한 문제를 극복 하 고, 우리의 그룹 최근 개발 phosphonic 산-엔드 glycans를 사용 하 여 신호 강도 향상 하는 알루미늄 산화물 코팅 유리 (ACG) 슬라이드에 glycan 배열 동질성, 그리고 감도19,20.
Glycan epitopes 광범위 중화 항 체 (bNAbs) 새로 격리 된 에이즈-1의에 대 한 현재 이해를 개선 하기 위해, 우리는 N의 광범위의 준비에 대 한 매우 효율적인 모듈형 전략 개발-glycans21 연결 22 는 ACG에 인쇄할 슬라이드 ( 그림 1참조). 매우 강력한 bNAb PG9 HIV 분리 되었던의 이종 glycan 바인딩 동작의 특이 한 검출 감염 개인23,,2425를 제공 하는 프로 파일링 연구 에이즈-1 bNAbs ACG 배열에의 한 특이성

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>: 시그마 알드리치</td><td>64197</td><td></td></tr>, <tr><td>아세토 니트릴</td><td>: 시그마 알드리치</td><td>75058</td><td></td></tr><tr><td>아세트산 무수물</td><td>시그마 알드리치</td><td>108247</td><td></td></tr><tr><td>무수 마그네슘 황산</td>염 <td>시그마 알드리치</td><td>7487889</td><td></td></tr><tr><td>붕소 트리 플루오 라이드 에틸 에테르 레이트</td><td>시그마 알드리치</td><td>109637</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048468</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Gel P2 polyacrylamide</td><td>Bio-Rad</td><td>1504118</td><td></td></tr><tr><td>Bis(cyclopentadienyl)hafnium(IV) dichloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12116664</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-1, 4 Galactosyl transferases from bovine</td><td>milk Sigma Aldrich</td><td>48279</td><td></td></tr><tr><td>BioDot Cartesion technology with robotic pin SMP3 (Stealth Micro Spotting Pins)</td><td>Arrayit</td><td></td><td></td></tr><tr><td>세륨 암모늄 몰리브덴산염</td><td>TCI</td><td>C1794</td><td></td></tr><tr><td>세륨 암모늄 질산염</td><td>시그마 알드리치</td><td>16774213</td><td></td></tr><tr><td>클린 글라스 슬라이드&nbsp;</td><td>쇼트&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>시티딘-5&프라임;-모노포스포-N-아세틸뉴라민산</td><td>시그마 알드리치</td><td>3063716</td><td></td></tr><tr><td>중수소화 클로로포</td>름 <td>시그마 알드리치</td><td>865496</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 항인간 IgG (Alexa Fluor647 conjugated</td><td>Jackson Immuno Research, 미국</td><td>709605098</td><td></td></tr><tr><td>디클로로메탄</td><td>시그마 알드리치</td><td>75092</td><td></td></tr><tr><td>디에틸아미노황 트리플루오라이드</td><td>시그마 알드리치</td><td>38078090</td><td></td></tr><tr><td>디메틸포름아미드</td><td>시그마 알드리치</td><td>68122</td><td></td></tr><tr><td>에틸 아세테이트</td><td>시그마 알드리치</td><td>141786</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌 글리콜</td><td>아크로스 유기</td><td>107211</td><td></td></tr><tr><td>FAST 프레임 슬라이드 배양 챔버</td><td>시그마 알드리치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>구아노신 5'- diphospho-b-L-fucose 디소듐 염&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15839700</td><td></td></tr><tr><td>Lab 트레이서 2.0 소프트웨어&nbsp;</td><td></td><td></td><td>프로토콜</td></tr><tr><td>GenePix Pro 4300A 리더 섹션 4 (마이크로 어레이 이미지 분석)</td> <td>분자 장치</td><td></td><td>www.moleculardevices.com</td></tr><tr><td>GraphPad 프리즘 소프트웨어 (이미지 처리)</td> <td>GraphPad Software, Inc</td><td></td><td>http://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/</td></tr> <tr><td>수산화 리튬</td><td>시그마 알드리치</td><td>1310652</td><td></td></tr><tr><td>염화망간</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7773015</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67561</td><td></td></tr><tr><td>N-부탄올</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71363</td><td></td></tr><tr><td>Oxalic acid</td><td>Acros Organic</td><td>144627</td><td></td></tr><tr><td>Palladium hydroxide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12135227</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>피리딘</td><td>시그마 알드리치</td><td>110861</td><td></td></tr><tr><td>P-톨루엔 술폰산 일수화물</td><td>시그마 알드리치</td><td>773476</td><td></td></tr><tr><td>실버 트리플레이트,</td><td>시그마 알드리치</td><td>2923286</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>시그마 알드리치</td><td>144558</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>시그마 알드리치</td><td>7647145</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 탄산수소</td><td>시그마 알드리치</td><td>144558</td><td></td></tr><tr><td>메톡시드나트륨&nbsp;</td><td>시그마 알드리치</td><td>124414</td><td></td></tr><tr><td>황산나트륨</td><td>시그마 알드리치</td><td>7757826</td><td></td></tr><tr><td>톨루엔&nbsp;</td><td>시그마 알드리치</td><td>108883</td><td></td></tr><tr><td>트리스 버퍼&nbsp;</td><td>Amresco</td><td>N/A</td><td>초순수 등급</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Amresco</td><td>9005645</td><td></td></tr><tr><td>우리딘 이인산 갈락토스(UDP-갈락토스)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>137868521</td><td></td></tr></tbody></table>

n-glycans 배열 개발 및 hiv 항 체의 항 암 치료 효소 합성 프로 파일링

Chemo-enzymatic Synthesis of N-glycans for Array Development and HIV Antibody Profiling

우리 N의 광범위의 빠른 준비를 위한 매우 효율적인 방법 제시-oligosaccharides (초과 20000 구조 추정) 인간 glycoproteins에 일반적으로 발견 되는 연결. 원하는 구조 다양성을 달성 하기 위해 전략 뒤에 3-O 및 6-O 에 그들의 stepwise α 선택적 glycosylations oligosaccharyl 불 소 단위의 세 종류의 화학 효소 합성 시작의 위치는 중요 한 β-mannoside 결합 하는 데 일반적인 코어 trisaccharide의만 노 오 스 잔류물. 우리는 더 HIV 항 체와 이종 ligand 상호 작용의 분석에 대 한 공유 혼합된 배열을 만드는 알루미늄 산화물 코팅 유리 (ACG) 슬라이드의 표면에 N-glycans를 첨부. 특히, 남자 (5)는 새로 고립 된 HIV-1 광범위 중화 항 체 (bNAb), PG9, 밀접 하 게 간격 둔된 남자5GlcNAc2 의 혼합물에의 바인딩 동작 및 2, 6-디-sialylated bi antennary 복잡 한 입력 N-glycan (SCT ) ACG 배열, 에이즈 백신 개발을 위한 효과적인 immunogen 디자인 가이드에 새로운 길을 엽니다. 또한, 우리의 ACG 배열 hetero ligand 바인딩 동작에 대 한 다른 HIV 항 체를 연구 하는 강력한 도구를 구현 합니다.

다양 한 N-glycans의 합성에 대 한 모듈형 화학 효소 전략은 그림 1에 표시 됩니다. 전략은 다양성 α-특정 mannosylation는 3-O 및 6-O 에 다음 세 가지 중요 한 모듈의 화학 효소 합성 하 여 처음에 만들 수 있습니다는 사실에 근거한 일반적인만 노 오 스 잔류물의 위치 trisaccharide Nglycans의 핵심. Bi-트라이-, tetra antennary 복합 형식 N-glycan 구조의 구조 다양성을 고려 하면 우리 oligosaccharyl 기증자와 함께 사전 설치 된 알 킬 handlecould 코어 trisaccharides 수락자로 시작 사용할 수 믿 었 다 원하는 구조 다양성 (그림 1)을 생성 하는 재료. Glycosyl 불 기증자 복잡 한 ...

Glycan microarray를 개발 하 고 광범위 하 게 항 체를 중화 하는 HIV의 프로 파일링에 대 한 사용 설명 되는 산화 알루미늄 코팅 유리에 첨부 파일에 대 한 N-glycans의 합성에 모듈 접근 (ACG 슬라이드) 슬라이드.

N-glycans 배열 개발 및 HIV 항 체의 항 암 치료 효소 합성 프로 파일링

We present a highly efficient way for the rapid preparation of a wide range of N-linked oligosaccharides (estimated to exceed 20,000 structures) that are ...

본 방법론의 전반적인 목표는 산화알루미늄이 코팅된 유리 슬라이드 위에 새로운 글리칸 마이크로어레이를 구축함으로써, HIV 항체의 헤테로그리칸 결합을 검출하기 위한 N-글리칸 합성용 모듈형 화학-효소적 접근법을 개발하는 것입니다. 이 방법은 향후 발전을 위해 세포-바이러스 특이적 글리칸을 식별하는 당생물학의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 약한 결합을 검출하고, HIV 환자 유래 항체와 같은 단백질에 결합하는 당 혼합물을 식별할 수 있다는 점입니다.이 기술의 함의는 인플루엔자 감염 진단으로 확장되는데, 이는 인간 기도 상피 세포에 시알산 분해 효소가 발현되며 증상과 함께 흔히 나타나기 때문입니다. 따라서 glycoarray는 야생형 서브타입의 특이성을 결정하는 이상적인 도구가 될 것입니다. 이 방법은 HIV 항체의 글리칸 특이성에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 표면에 프린팅된 인간 특이적 혈청 항원에 대한 인간 혈청 항체의 결합 패턴에 기반한 다양한 암 진단과 같은 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다.이 절차를 시작하려면, 미리 준비한 glycan 2-5 µmol을 5 mL 둥근 바닥 플라스크에 넣습니다. 플라스크에 자석 교반자를 넣고 고무 격막으로 밀봉합니다. 플라스크에 갓 건조시킨 DMF 400 µL와 phosphonic acid 링커 10-25 µmol을 첨가합니다.그 다음, 반응 혼합물을 800 rpm으로 5시간 동안 교반합니다. 반응이 완료되면, 5~10 millibar의 진공 압력과 40 °C 조건에서 회전 증발기를 사용하여 용매를 증발시킵니다. 이후, 건조된 반응 혼합물을 0.5 mL의 물에 녹여 폴리아크릴아마이드 겔 베드 상단에 로딩합니다.물을 사용하여 생성물을 용리시키고 1~2 mL 분획으로 수집합니다. TLC로 수집된 분획을 확인하려면, 각 분획을 TLC 플레이트에 점적하고 플레이트를 0.25 M Cerium Ammonium Molybdate에 담급니다. 염색된 플레이트를 핫플레이트로 가열하여 생성물을 시각화합니다.분획물이 포함된 생성물을 혼합하고 용액을 동결 건조하여 원하는 생성물을 흰색 분말 형태로 얻습니다. 그다음, 건조된 생성물을 2 mL의 물에 녹이고 수산화 팔라듐(Palladium Hydroxide)을 첨가합니다. 플라스크에 수소가 충전된 풍선을 연결하고 수소 분위기 하에서 반응 혼합물을 800 rpm으로 15시간 동안 교반합니다.반응이 완료되면, 혼합물을 Celite Bed로 여과하고 2 mL의 메탄올과 2 mL의 탈이온 증류수로 세척합니다. 그다음, 300 mbar의 진공 압력과 40 °C 조건에서 회전 증발기를 사용하여 용매를 증발시킵니다. 이후, 조혼합물을 약 1 mL의 물에 녹여 polyacrylamide gel bed 상단에 로딩합니다.물로 생성물을 용출하고 1~2 mL 분획을 수집합니다. 생성물이 포함된 분획들을 합친 후, 용액을 동결 건조하여 원하는 생성물을 흰색 분말로 얻습니다. 생성물이 건조되면, Deuterium Oxide를 용매로 사용하여 NMR 및 질량 분석법으로 특성을 분석합니다.표면 양극산화 처리를 위해, 온도 조절 인큐베이터를 4 °C로 설정하십시오. 그런 다음, 미리 준비한 0.3 M 옥살산 수용액을 마그네틱 바가 들어 있는 500 mL 비커에 옮기십시오. 10 cm 길이의 백금 봉을 음극으로 하여 용액에 넣으십시오.양극 산화 과정 전반에 걸쳐 옥살산(oxalic acid)을 300 rpm으로 계속 교반하십시오. 실험실 트레이서 소프트웨어에서 설정 버튼을 클릭한 다음, 기능 선택에서 Sweep Voltage를 클릭하십시오. 시작 및 종료 전압을 25.8 volts로 설정하십시오.포인트 수를 100으로, 컴플라이언스를 1로, 스윕 지연 시간을 1200 milliseconds로 설정하십시오. 그런 다음 확인을 클릭하십시오. 알루미늄 코팅된 유리 슬라이드를 음극 방향으로 향하게 하여 고정하십시오.테스트 실행 버튼을 클릭하고 현재 측정값을 관찰하십시오. 표면 양극 산화 후, 유리 슬라이드를 2차 증류수로 충분히 세척하고 질소 가스로 건조시키십시오. 유리 슬라이드를 추가로 사용할 때까지 30% 상대 습도 챔버에 보관하십시오.제작을 위해, 모든 일가 글라이칸(monovalent glycans)을 10 mM 농도로 에탄올 글리콜에 녹여 100 µL 용액으로 준비합니다. 프린팅 버퍼를 사용하여 글라이칸 용액을 희석해 100 µM 용액으로 만듭니다. 헤테로리간드 연구(Heteroligand Study)를 위해, 각 글라이칸 용액 5 µL에 MAN-5 글라이칸 5 µL를 첨가합니다.준비된 글리칸을 마이크로어레이 프린팅 단계를 위해 384웰 마이크로플레이트로 옮깁니다. 프린터 어레이 테크에 마이크로플레이트를 삽입한 후, 로봇 핀을 사용하여 알루미늄 코팅 유리 슬라이드 각각에 글리칸 용액 0.6 nanoliters를 분사하여 마이크로어레이를 프린팅합니다. 다음으로 3% BSA가 포함된 PTSB 버퍼와 1차 항체 PG-9 70 microliters를 준비합니다.그런 다음 암실에서 3% BSA가 포함된 PBST 버퍼와 120 µL의 2차 형광 표지 항체 Donkey Anti-human Immunoglobulin G를 준비합니다. PG9와 2차 형광 표지 항체를 1:1 비율로 혼합합니다. 이후 미리 혼합된 항체들을 4 °C에서 30분 동안 배양합니다.배양 후, 16개의 웰로 나누어진 슬라이드 배양 챔버에 알루미늄 코팅 유리 슬라이드를 장착합니다. 미리 혼합된 항체 100 µL를 글리칸 어레이에 옮깁니다. 4 °C에서 16시간 동안 배양한 후, 피펫을 사용하여 글리칸 어레이에서 혼합 항체를 제거하고 슬라이드 배양 챔버를 제거합니다.슬라이드 글라스를 PBST 버퍼와 탈이온수로 세척하십시오. 그 다음, 슬라이드 글라스를 2000 ×g에서 원심 분리하여 건조시킵니다. 이어서, 마이크로어레이 이미지 분석 소프트웨어를 실행하십시오.배열된 특징 부위가 아래로 향하도록 하여 유리 건조 슬라이드를 어레이 스캐너에 삽입하십시오. 설정 메뉴를 클릭하십시오. 이미지 해상도를 픽셀당 5 µm로 설정하십시오.파장을 635 nm로 설정하고 PMT를 450으로, 출력을 100%로 설정하십시오. 스캔 버튼을 클릭하여 슬라이드 이미징을 시작합니다. 마지막으로 파일 아이콘을 클릭하여 스캔 이미지를 이미지 분석을 위한 TIF 형식으로 저장하십시오. 본 연구에서는 모듈형 화학 효소 전략을 사용하여 광범위한 N-글리칸(N-Glycans)을 합성하였습니다.해당 전략의 유효성을 입증하기 위해 화학효소적 방법으로 이분지 등척성 구조를 합성하였습니다. 이당류 1에 대해 효소적 갈락토실화를 수행한 후 삼당류 2를 푸코실화하여 목적하는 사당류 3을 얻었습니다. 빌딩 블록 2와 3의 퍼사틸화 및 환원 말단 수정을 통해 목적 분자인 4와 5를 얻었습니다.삼당류 6의 모듈 4에 대한 입체선택적 3가지 O-당화 반응을 통해 육당류 7을 얻었습니다. 보호기 제거 후 모듈 5와 반응시켜 십당류 9를 생성하였습니다. 전체 보호기 제거를 통해 글리칸 10을 얻었으며, 이는 NMR 및 질량 분석법으로 분석되었습니다.환원단에 펜틸아민(Pentylamine) 꼬리가 포함된 글리칸을 포스폰산 링커로 수식한 후, 포스피니드 화학을 통해 알루미늄 유리 코팅 표면에 부착하였습니다. HIV-1 광범위 중화 항체 PG9의 글리칸 특이성을 호모 및 헤테로 글리칸 어레이를 사용하여 스크리닝함으로써, HIV1 PG120 표면의 V1/V2 루프에 있는 인접한 헤테로 글리칸과의 상호작용을 최초로 입증하였습니다. 이 기술을 숙달하고 적절하게 수행한다면 글리칸 고정부터 베타 분석까지 24시간 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때, Glycan 10의 경우 새로 양극 산화 처리된 알루미늄 코팅 유리 슬라이드를 사용해야 함을 유념하는 것이 중요합니다. 이 절차의 기반은 임상병리사 슬라이드입니다. 관심 있는 탄수화물과 단백질 사이의 결합 상호작용을 정량화하기 위해 체상수를 결정할 수 있습니다.이 기술이 개발된 이후, 연구자들은 케냐의 감염성 질환에서 탄수화물의 역할을 더 잘 이해하고 질병에 대응하는 새로운 치료법을 개발하는 기틀을 마련할 수 있었습니다. 독성 물질을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 실험을 수행할 때는 항상 보호복, 보안경 및 마스크 착용과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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연구

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Chemistry

화학

nanomole 친화력과 HIV - 1Ba - L gp120에 대한 몇 가지 2' - 플루오로 RNA의 aptamers는 RNA 라이브러리에서에 의해 고립...

siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발

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단지 샘플의 특정 단백질 글리코 실화의 다중 높은 처리량 프로파일을위한 화학을 차단 항체 Microarray

이 동영상은 마우스 혈청에서 순환하는 항글라이칸 항체를 분석하기 위한 인쇄된 글라이칸 어레이 기술을 보여줍니다. 혈청의 항체는 칩의 특정 글라이칸과 상호 작용하며, 이는 면역 염색 후 형광 스캔으로 확인됩니다.

Printed Glycan Array를 사용한 순환 항글라이칸 항체 검출

항체 중화를 평가하고 효과적인 백신 면역원의 설계를 안내하려면 바이러스 표면 항원 구조를 이해하는 것이 필요합니다. 여기에서는 특정 anti-Env 항체에 의해 transfection된 세포의 표면에서 발현되는 trimeric HIV-1 Env의 인식에 대한 연구를 가능하게 하는 세포 기반 ELISA 분석에 대해 설명합니다.

셀 기반의 ELISA 분석을 사용하여 HIV-1 삼량 봉투 당 단백질의 구조적 평가

인쇄된 글라이칸 마이크로어레이 전략을 사용하여 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 열성 및 시알산 함유 수용체에 대한 특이성을 분석하기 위해 기존의 96웰 플레이트 분석을 소형화했습니다.

인플루엔자 바이러스 Hemagglutinins의 결합력 및 특이도를 평가하기위한 소형화 글리 칸 마이크로 어레이 분석

시알로 글리 칸 마이크로 어레이 분석은 인체 혈청에서 항 -Neu5Gc 항체를 평가하는 데 사용될 수있어 암 및 기타 만성 염증 매개 질환에 대한 잠재적 인 고효율 진단 분석법이됩니다.

Sialoglycan Microarray Assay를 사용하여 Human Sera에서 Anti-Neu5Gc IgG 프로파일 링

이 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 분석에 대 한 인쇄 glycan 배열 (PGA) 기술의 잠재력을 보여줍니다.

인쇄 Glycan 배열: 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 레 퍼 토리의 분석에 대 한 민감한 기술

본 프로토콜은 HA, S 당단백질, 관련 하이브리드형 글리칸 및 고만노스 올리고당에 대한 CV-N 결합을 검사하기 위한 SPR 결합 분석을 위한 새로운 도구를 설명합니다. SPR은 이량체 또는 단량체 CV-N을 이들 글리칸에 결합시키기 위한KD 를 결정하기 위해 사용된다.

표면 플라즈몬 공명을 통한 항바이러스제 엔지니어링

항체의 글리코실화 패턴은 그의 임상 성능을 결정하고, 따라서 글리코실화를 조절하기 위한 산업적 및 학문적 노력이 지속된다. 전형적인 글리코엔지니어링 캠페인은 시간과 노동 집약적이기 때문에, 일시적 침묵을 사용하여 글리코실화 유전자의 영향을 특성화하는 신속한 프로토콜의 생성은 유용할 것이다.

중국 햄스터 난소 세포의 신속한 항체 당공학

마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)은 생물학적 샘플에서 글라이칸의 조성 분석을 위한 고처리량 기술입니다.

고처리량 글라이칸 분석을 위한 마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)

학습하세요 N-glycan 화학효소 합성법과 글리칸 마이크로어레이 기술을 활용한 HIV 광범위 중화항체 프로파일링 방법입니다. 이 기술은 약한 결합을 검출하여 당단백질 특이성을 연구하고 인플루엔자 및 암 진단에 활용됩니다.

N-glycans 배열 개발 및 HIV 항 체의 항 암 치료 효소 합성 프로 파일링

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