Name: 코카인 사용 장애의 쥐 모델에서 큐 반응성을 측정 하기 위한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 학습하세요 쥐 모델에서 코카인 큐 반응성을 측정하는 방법을 통해 중독 재발 위험을 평가하는 기술을. 이 프로토콜은 약물 연구와 치료법 개발에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

모든 행동 테스트 텍사스 대학 의료 지점 (UTMB) 쥐에서 Vivo 평가 (RIVA) 핵심, 박사 켈리 Dineley 감독과 중독 연구, 박사 캐서린 커닝 햄 감독 센터 내에 보관 되어 수행 했습니다. 이 작품에서 UTMB 환경 독성에 대 한 피터 F. 맥 자선 신뢰, 국립 연구소 환경 보건 과학 센터에서에서 온 지원 (T32ES007254), UTMB (UL1TR001439)에서 변환 연구소 신경 퇴행 성 질환, 그리고 UTMB (DA007287, DA070087, 및 파일럿 연구 자금)에서 중독 연구 센터에 대 한 미첼 센터.

모든 동물 조작 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 승인 그리고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드 (2011 년)에 따라 수행 됩니다.
1입니다. 동물
<ol><li>12 h 빛 어두운 주기에 (표시등 6시-18시 h) 21-23 ° C와 45-50% 습도 유지 식민지 룸에서 최소 7 일에 대 한 남성 Sprague Dawley 쥐 시대 (250-260 g)의 약 8-9 주를 적응.</li>
	<li>쥐 2 집 / 케이지 하 고 연구에 걸쳐 매일 처리 합니다. 음식을 제공 하 고 광고 libitum 연구의 모든 단계에 걸쳐 홈 장에 물. 참고: 음식 제한 코카인 보상48의 saliency 증가, 코카인 유도 운동 활동49, potentiates 역할을 복직50 에 대 한 스트레스와 따라서 영향 큐 반응성 또한 수 있습니다.</li>
	<li>무작위로 할당 쥐 염 분 또는 코카인 치료 그룹.</li>
</ol>2입니다. 수술
<ol><li>쥐 xylazine의 칵테일 포함 8.6 mg/kg, acepromazine의 1.5 mg/kg 및 43 mg/kg 케 타 민 bacteriostatic 염 분에의 사용 하 여 마 취를 놓습니다. 쥐의 발가락을 꼬 집 고 모터 반사와 호흡을 모니터링 하 여 취 충분히 확인 합니다. 눈 건조를 방지 하기 위해 눈에 직접 안과 연 고를 적용 합니다. 참고: 쥐 하지 않으면 충분히 anesthetized 발가락 핀치에 모터 응답을 전시 한다 그것 그리고 쥐의 호흡 속도 급속 하 게 증가 시킬 수 있습니다.<ol>
<li>쥐 마 취는 하는 동안 무 균 기술을 사용 하 여, 임 플 란 트로 경 정 맥 정 맥 카 테 터는 정 맥으로 다시 마운트에 연결. 외과 이식 후 쥐 5-7 일 28,36,,3751복구할 수 있습니다. 참고: 인 간에 있는 코카인 자가 투여의 정 맥 경로 뇌 코카인 레벨52,53에 급격 한 증가 발생합니다. 따라서, 그것의 가장 일반적인 임상 변종 중 하나에서 쥐 내 jugular 카 테 터를 통해 코카인을 실시할에 훈련 된다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>헤 파 린 나트륨 (10 U/mL), streptokinase (0.67 mg/mL), 및 ticarcillin disodium (66.67 mg/mL)를 포함 하는 bacteriostatic 염 분의 0.1 mL의 솔루션을 사용 하 여 매일 플러시와 카 테 터 patency를 유지 합니다. 카 테 터 수술 후 하루를 플러시를 시작 하 고 매일 다음의 자체 관리 세션을 계속.<ol>
<li>솔루션 주사기를 폴 리 에틸렌 튜브를 통해 주사기를 다시 마운트를 연결.</li>
		<li>Methohexital 나트륨 10 mg/kg의 정 맥 행정으로 실험에 걸쳐 정기적으로 적절 한 카 테 터 기능을 확인 합니다. 참고: 이것은 잠시 정 맥 투여 하는 경우에 동물을 anesthetize 충분 한 복용량입니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3입니다. 자기 관리
<ol><li>아래 설명 된 대로 4 별도 프로그램을 생성 하기 위해 프로그래밍 소프트웨어를 사용 합니다.<ol>
<li>코드 2는 고정된 비율 (FR)에 자체 관리를 위한 프로그램 1 일정, 즉., 어디에 하나의 활성 레버 보도 한 주입 결과. #1 프로그램에 대 한 코드 왼쪽된 레버 활성 레버; #2 프로그램에 대 한 활성 레버 오른쪽 레버 코드. 두 프로그램 모두 180 분 길이, 및 제공 코카인 자극 및 개별 큐는 다음과 같은 방식으로 복잡 한 구성:<ol>
<li>하나의 활성 레버 집 빛과 활성 레버 위에 자극 빛의 원인 동시 조명 키를 누릅니다 있다.</li>
			<li>1-s 지연 후 6-s를 통해 솔루션의 0.1 mL를 제공 하는 주입 펌프가 있다.</li>
			<li>7-s (주입 펌프와 동시에 비활성화) 후 차단 자극 빛 있다.</li>
			<li>제한 시간 동안 활성 레버 프레스 예약된 결과가 없습니다 아직이 여전히 기록 나타내는 마지막 20 s 27-s, 후 차단 집 빛이 있다.</li>
			<li>데이터 출력에 대 한 첫 번째 활성 레버 보도에 시달렸다, 활성 레버 프레스, 비활성 레버 프레스, 및 대기 시간을 수집 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>코드는 f r 5에 자체 관리를 위한 2 개의 더 프로그램 일정, 즉., 어디 5 한 주입 프레스 결과 레버. 다시 오른쪽으로 활성 레버와 왼쪽, 그리고 1 개의 프로그램으로 활성 레버 한 프로그램을 확인 합니다. 길이, 두 프로그램 180 분을 만들고 reinforcer 및 개별 큐는 다음과 같은 방식으로 복잡 한 제공:<ol>
<li>집 빛과 활성 레버 위에 가벼운 자극의 5 개의 활성 레버 프레스 원인 동시 조명이 있다.</li>
			<li>3.1.1.5통해 단계 3.1.1.2 반복 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
자기 관리 훈련
	<ol>
<li>매일 살 균 0.9%에서에서 코카인 솔루션 준비 NaCl 0.75 mg/kg/0.1 mL의 복용량에. 참고: 각 180 분 자기 관리 세션의 기간 동안, 쥐 관리 코카인 솔루션의 약 4-5 mL 따라서 초과에서 준비, 일일 예상 약 8 mL/쥐.</li>
		<li>코카인 이나 염 분 해결책의 적어도 8 mL로 테 주사기 (10ml)를 채우십시오. 코카인/염 분 해결책 흐르는 지 확인 한 후 주입 펌프에 주사기를 삽입 하 고 각 자체 관리 세션의 시작에서 금속 봄 가죽 끈에 의해 이탈 식 폴 리 에틸렌 튜브에 연결 합니다. 신중 하 게 조정 각 주입 펌프에 주사기 솔루션 균등 하 게가 고 완료 되도록 각 카 테 터를 부착 하기 전에 폴 리 에틸렌 튜브에 배포 합니다.</li>
		<li>컨디셔닝 챔버 통풍, 소리 약하게 칸막이에 팬 들과 함께 지 내게 각각 표준 조작으로 쥐를 놓습니다. 일관 되 게 각 쥐 같은 작동 챔버에 놓고 모든 실험을 통해 같은 편이 활성 레버를 유지 합니다. 왼쪽 및 오른쪽 활성 레버 사이 쥐의 할당 맞출 참고: 각 챔버 2 개폐식 응답 레버, 각 응답 레버 위에 자극 빛 그리고 레버 맞은편 집 빛을가지고 있는 펠 릿 소켓을 갖추고 있다. 코카인/식 염 수 주사기 23 g에 연결 된 각 쥐의 카 테 터에 연결 하 고 액체 회전에 운영은 금속 봄 가죽 끈 안에 쌌 다 폴 리 에틸렌 튜브에 부착 된 바늘 (튜브를 파고를 피하기 위해에 신청). 주사기는 칸막이에 인접 한 주입 펌프 위치에 배치 됩니다.</li>
		<li>레버를 기차 쥐 코카인 혼합 (0.75 mg/kg/0.1 mL 주입)에 대 한 또는 염 분 혼합 (0.1 mL)를 사용 하 여 매일 180 분 세션 동안 설립 방법28,36,,3751. 참고: 단순히 작동 챔버로 쥐를 배치 하 여 레버 보도; 허용이 훈련 수행 아니 예약된 결과 곰 비활성 레버를 누르는 동안 복잡 한 개별 큐의 영수증에 코카인 주입 발생 합니다 활성 레버를 누르면.<ol>
<li>코카인 이나 6의 기간 동안 식 염 수 주입의 배달에 액티브 레버 결과에 일정 완료 집 빛과 자극 활성 레버 위에 빛의 조명과 (이것은 분리 된 주입 펌프의 활성화와 동시에 결합 큐 복잡 한 코카인 배달와 결합); 비활성 레버 프레스 생산 예정 된 결과가 없습니다. Reinforcer (코카인) 배달, 다음 자극 빛으로 주입 펌프 활동 하지; 집 빛 동안 레버 프레스 결과가 없습니다 예약 된 타임 아웃 시간을 표시 하는 추가 20-s에 대 한에 남아 있다. 참고:이 설정 하는 방법의 설명 단계 3.1.1.1-3.1.1.4 에서 발견 된다
</li>
		</ol>
</li>
		<li>완료 되 면 180-분 세션, 그것의 기사 조절 약 실에서 각 쥐를 제거 하 고 그것의 카 테 터 (단계 2.2) 플러시. 신중 하 게 세션, 70% 에탄올 솔루션과 각 표면 닦아 챔버 청소. 참고: 자체 관리 세션 동안 코카인을 받을 쥐 약 실에서 제거 하기 어려울 수 있습니다 및 더 적극적일 것. 천천히, 주의 동의 사용 하 여 각 쥐의 밧줄에서 분리.</li>
		<li>보강 및 10% 미만으로 혼합/h 7의 조건을 달성 한 후 f r 5 일정 진행 FR1 일정에 쥐를 훈련 3 일 연속에 대 한 세션 당 약의 총 수에 변화. 쥐에는 자기 관리 훈련의 14 일 총에 도달 했습니다 때까지 자기 관리 세션을 계속 합니다. 참고: 이것은 작동 학습;의 한 변종 이다. 일부 프로토콜은 쥐 실험의 전체에 걸쳐 FR1 유지를 싶다. 고정된 비율 일정 FR1 f r 5에서에서 변경 영향을 주지 않습니다 수 혼합의 동물5554,self-administers. 그러나, 고정된 비율 크기 증가 쥐에 응답의 안정성을 보장 하는 데 도움이 하 고 보상56의 saliency 증가 시킬 수 있습니다. 또한, 강제 절제 동안 치료를 원하는 경우 쥐 의사 무작위로 할당 해야 안정성을 달성 시 치료 그룹 (미만 3 일 연속의 최소 세션 당 약의 총 수에 10% 변화)에 f r 5 일정입니다. 또한, 염 분 쥐 것입니다 하지 진행 FR1에서 f r 5, 염 분의 saliency f r 5 FR1에서 진행 하는 데 필요한 안정성을 달성 하기에 충분 하지 않습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 강제 금 욕
<ol><li>30 일;에 대 한 강제 금 욕으로 장소 쥐 즉, 30 일 동안 코카인 이나 염 분을 실시할 수 있는 기회 쥐를 제공 하지 않습니다. 중요 한 것은,이 기간 동안 반환 하지 않습니다 쥐 작동 챔버 (자기 관리의 이전 컨텍스트)에. 그러나, 매일 처리 및 일반적인 건강의 측정으로 무게 홈 연습장에서 쥐를 제거 합니다. 참고: 강제 금 욕 기간을 변경할 수 있습니다, 하지만 천장 및 바닥 효과 피하기 위해 충분 한 기간을 선택 하는 것이 중요 하다. 강제 금 욕 기간 기간을 선택 하는 경우의 인식 해야 하는 요소에는 설치류, 나이, 자기 관리 세션 길이 및 기간, 약물, 약물 투여 및 주입 기간, 긴장과 동물의 섹스 포함 됩니다.</li>
</ol>5. 코카인 큐 반응성
<ol><li>FR1 일정;에 당구 반응성 작업에 대 한 2 개의 소프트웨어 프로그램 코드 왼쪽 레버를 활성 레버, 그리고 하나의 활성 레버로 레버를 오른쪽으로 한 프로그램입니다. 각 프로그램 60 분에 대 한 데이터를 누르면 레버를 수집을 구성 하 고 아래에 설명 된 복잡 한 개별 큐를 제공 합니다.<ol>
<li>반복 단계 3.1.1.1-3.1.1.4
</li>
		<li>데이터 출력에 대 한 첫 번째 레버 언론에 큐 프레 젠 테이 션 (이전의 혼합), 이전 활성 레버 프레스, 비활성 레버 프레스, 및 대기 시간을 수집 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
코카인 큐 반응성 테스트 세션
	<ol>
<li>60 분 작동 테스트 세션에서 강제 절제의 일 30에 큐 반응성을 평가 합니다. 신속한 잘린 및 두뇌 수확 쥐의 시작 시간을 엇갈리게 설정 합니다. 중요 한 것은, 큐 반응성 시험 배치 하지 마십시오 주사기 주입 펌프에 주입 펌프의 소리는 청각 큐 역할을 하지만 코카인 보강 없이 배달 됩니다. 그러나 참고: 큐 반응성 이외에 강제 절제의 한 일에 평가 될 수 있다, 사실은 코카인 짝 신호에 응답 시간34 이상 다릅니다 해야 마음에 보관 큐 반응성 테스트에 대 한 날짜 선택할 때.</li>
		<li>훈련은 자기 관리 실에서 각 쥐를 놓고 매일 자기 관리 세션 동안 그 정 밧줄. 이전 코카인 이나 염 분을 전달 레버 프레스만 개별 큐 복합물의 전달에 의해 강화 된다 지금 (즉,., 자극 빛과 집 조명 및 주입 펌프 활성화) FR1 일정에 (즉, 하나 개별 큐 복잡 한 제시 활성 레버 프레스 당); 큐 및 일 분 세션 동안 이전 활성 레버 프레스 고 비활성 레버 프레스 수 기록. 그러나, 자기 관리와 마찬가지로 비활성 레버 프레스 생산 예정 된 결과가 없습니다. 참고: 추가 제어 옵션은 예약 된 결과의 부재에 이전 활성 및 비활성 레버 프레스 기록 (즉., 아니 개별 큐 복잡 한 reinforcer).</li>
		<li>큐 반응성의 완료 되 면 테스트 세션, 기사 조절 약 실 및 복잡 한 개별 큐에 다시 노출의 생 화 확 적인 효력을 잡으려고 쥐를 즉시 안락사.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 데이터 수집, 조직, 및 분석
<ol><li>세 가지 일반적인 범주로 데이터 뜨: 일반 건강, 자기 관리 및 큐 반응성.<ol>
<li>일반 건강 모니터링 (예., 동물 무게, 모피 조건) 실험을 통해 동물 수의학을, 필요한 경우, 또는 레버 눌러 나타나는 건강에 의해 영향을 받는 경우는 연구에서 제거를 제공 하 고.</li>
		<li>자기 관리의 14 일 동안 자기 관리 데이터를 수집 합니다. 첫 번째 활성 레버 언론에 코카인 및 혼합, 활성 레버 프레스, 비활성 레버 프레스, 및 대기 시간의 총 수에 대 일 분의 자체 관리 그룹 간의 통계적 차이 결정 하는 짝이 없는, 두 꼬리 t-검정을 사용 합니다. 참고: 데이터를 하기 전에 분석 해야 하는 자기 관리 강제 금 욕 하나 (그룹 가질 수 있도록 동일한 평균 수 혼합의 서 활성 및 비활성 큐 반응성에 강제 절제 동안 치료의 효과 연구 하고자 하는 경우 레버 프레스). 2-2 디자인 (코카인 ± 치료, 염 분 ± 치료)를 선택 하면이 데이터를 분석 하 적절 한 포스트 hoc 분석 양방향 ANOVA는 사용 해야 합니다.</li>
		<li>큐 반응 데이터를 수집 하 고 큐 프레 젠 테이 션의 총 수에 대 한 분석, 이전 활성 레버 프레스, 비활성 레버 프레스, 및 대기 시간 첫 번째 레버를 누릅니다. 또한는 짝이 없는, 두 꼬리 t-검정 코카인 및 그 염 분을 관리 하는 자가 자기 관리 하는 동물의 차이점을 결정 하는이 데이터를 분석 합니다. 참고: 다시, 2-2 디자인 (코카인 ± 치료, 염 분 ± 치료)를 선택 하면 적절 한 포스트 hoc 분석 양방향 ANOVA 해야 사용이 데이터를 분석.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

마약 쌍 큐 및 이러한 큐16 응답에 생리 적 변화에 노출와 재발,11,16 연결 위에 contingently 고용 코카인 큐 반응성 시험 선물에서 코카인에 대응 신호는 마약;의 부재 따라서, 이전 활성 레버 프레스의 형태로 약 찾는 행동 재발 취약점의 역할을 합니다. 여기에 설명 된 큐 반응성 프로토콜 재발 수정 pharmacotherapies 시험 될 수 있다, 및 재발 위험을 유전과 환경 요인 조사 될 수 있는 전 임상 수단 이다. 이것은 인간의 약물 복용 및 재발, 많은 속성 정렬 약 찾는 행동에 대 한 작동 작업 및 많은 간행물 주요 약물 투여 및 배달 매개 변수 최적화 뿐만 얼굴 유효성을 설정 하는 적절 한 컨트롤을 채택 하 고 변환의 예측 능력이28,36,<...

코카인 사용 장애 (새김 질감) 반복적인 자기 관리는 이전 중립 자극 얻을 인센티브 값1의 궤적을 따릅니다. 큐 반응성 이전 마약 복용 경험, 연결 신호 감도 이며 인간의 갈망2,3,,45에 저명한 역할을 하 그것. 절제, 동안 타락으로 되 새김 질, 진행의 위험 약물 관련 신호6,7높은 감도 표현 하는 개인에 대 한 높은 것으로 생각 된다. (예를 들어, 사람, 건물, 음악 장르) 환경 컨텍스트 및 개별 약물 관련 자극 (예를 들어, 도구) 코카인 사례금; 연관 될 이러한 단서에 노출 (예:심장 박동, 피부 온도, 피부 저항) 주변 생리학, 뇌가 소성, 및 뇌 기능 연결2,8,9에 변화를 실행할 수 있습니다. ,10. 즉, 코카인 관련 된 단서에 다시 노출 변 corticostriatal 회로 조절 생리 및 주관적인 반응을 appetitive (약 찾는) 접근 행동11,12 드라이브를 활성화합니다 ,13,,1415.
기능적 뇌 영상 분석으로 측정 하는 큐 반응성 CUD16과목의 재발 취약점의 예측 이다. 설치류 모델에서 큐 반응성 측정 역할을 위한 대리 측정 재발 위험 및 변환 연구를 위해 악용 될 수 있습니다. 따라서, pharmacotherapy 감소 설치류에 큐 반응성 수 있습니다 인간 임상 시험에서 재발 방지 치료로 앞으로 실시. 전 임상 모델에 필요한 변환 및 예측 타당성을 새김17아무 FDA 승인 pharmacotherapies 현재 있기 때문에 특히 중요 하다.
설치류의 자체 관리 절차는 금, 인간의 약물 복용18 와 분자 및 생리를 이해 하는 데 매우 중요 한 예측 타당성을 가진 변환 모델 처리 기본 씹는 담배의 한 조각. 응답-응답-종속 코카인 노출; 상대적인 별개 행동, 분자, 그리고 neurochemical 효과 코카인의독립적인 배달 예., 응답독립적인 코카인 배달 상당히 높은 사망률19끝. 또한, 응답-종속 코카인 자가 투여에서 절제의 neurochemical 결과 그 응답-독립적인 코카인 배달20, 에서 절제에 의해 실행에서 21. 따라서, 되 새김 질 모델 기반으로 코카인의 응답-종속 배달 큐 반응성 및 행동의 연결된 메커니즘을 평가할 때 우수한 변환 모델은.
아래에 설명 된 프로토콜에서 코카인 정 맥 내재 내부 jugular 카 테 테 르 통해 전달 됩니다. 그러나, 구두와 흡입 경로 통해 약물을 복용할 대체 방법은 개발 되었습니다. 중요 한 것은, 설치류 작동 응답 통해 유사한 인간, 약물의 배달을 제어합니다. 따라서, 설치류와 인간22자기 관리 약물 사이 높은 색인이 있다. 전 임상 약물 자체 관리 절차 아래 레버를 누르면, 약물 전달, 응답 속도 차량 제어 보다 높은 동기를 부여 하 여 강화를 사용 합니다. 약 찾는 행동은 코카인 주입; 원래 "중립" 단서 (예를 들면, 자극 빛 또는 톤과는 코카인에 발생 하는 자체 관리 콘텐츠 환경)를 연결 하 여 훈련 이 신호 될 조건된 reinforcers (검토를 위해: 커닝 햄 & 아나스타시오, 201423). 이후 다시-코카인 관련 된 단서에 노출 트리거 설치류 (즉, 이전 활성 레버를 누르면 통해 코카인을 제공 시도) 갈망에 있는 약 찾는 행동 및 재발 CUD 과목24, 25 , 26 , 27.
일반적으로, 다음 코카인 자가 투여 약 찾는 행동의 전 임상 설치류 연구 활용 멸종 훈련 및/또는 약물 복직 마약 관련 환경28,29, 이내 실시 30 , 31 , 32. 일반적으로 복직 멸종33,,3435다음 측정을 구성 하는 마약 및/또는 큐 배달의 부재에서 이전 활성 레버 프레스. 그와 반대로, 큐 반응성 약 찾는 행동은 사전 멸종 교육28,36,37,,3839 없이 평가 다음 강제 금 욕 .
Neuroadaptations 모델 간에 다 잘 설립 되며 결과 측정 및 실험 변수 신중 하 게 선택 되었고 마약을 추구 하 고 재발 같은 행동의 신경 생물학의 다양 한 측면을 해 부를 확인 하 고 멸종 하지 않고 40,41,,4243훈련. 또한, translational 관점에서 설치류 멸종 훈련은 미러링되지 않습니다 새김 질감에 대 한 임상 설정에서 마약 관련 단서 포함 기분 상태, 장소 및 사람들44; 이 큐의 독특한 조합 확률이 임상 환경45,,4647에서 사용할 수 없습니다. 따라서, 여기에 설명 된 설치류 모델 현재 사용할 수 있는 모델의 많은 것 보다는 인간의 조건에 더 나은 병렬 역할을 합니다.
다음 유효한 코카인 자기 관리 훈련, 쥐에 대 한 프로토콜을 테스트 하는 강제 금 욕 및 큐 반응성. 간단히, 쥐 내 jugular 카 테 터, 코카인 또는 '활성' 레버 언론을 통해 염 분을 실시할 훈련으로 이식 되 고 코카인 또는 염 분 자극의 영수증 개별 빛과 소리 신호 조절된 reinforcers로 대응 됩니다. 코카인 자가 투여 14 일 다음 쥐 30 일 강제 금 욕과는 레버에 눌러 측정 이후 60 분 큐 반응 테스트를 받게 됩니다. 큐 반응성 테스트는 인 간에 있는 코카인 재발 취약점에 대 한 대리.

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Catheter Tubing: 0.50mm ID x 0.94mm OD x 0.2mm</td><td>width Fisher Scientific, Hampton, NH, USA</td><td>11-189-15A</td><td>1/experiment</td></tr><tr><td>Cue Light</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>ENV-229M</td><td>2/operant chamber</td></tr><tr><td>Guide Cannulae (22 게이지, 받침대 크기-8mm, 절단 길이 11mm, 받침대 위 5mm)</td><td>Plastics One, Roanoke, VA, USA</td><td>8IC313G5UPXC</td><td>1/rat</td></tr><tr><td>House Light</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>ENV-227M</td><td>1/작동 챔버</td></tr><tr><td>주입 펌프</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>PHM-100</td><td>1/작동 챔버</td></tr><tr><td>Levers</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>ENV-110M</td><td>2/작동 챔버</td></tr><tr><td>액체 스위블</td><td>Instech, 플리머스 회의, 펜실베니아, 미국</td><td>375/22</td><td>1/작동 챔버</td></tr><tr><td>MED-PC 패키지, 주입 펌프 소프트웨어</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>SOF-735 (주입 소프트웨어 SOF-700RA-10 버전 1.04)</td><td>1</td></tr><tr><td>Metal Spring Leash</td><td>Plastics One, Roanoke, VA, USA</td><td>C313CS/SPC</td><td>1/operant chamber</td></tr><tr><td>Needle (23g, 1 in)</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>305193</td><td>1/ 작동 챔버</td></tr><tr><td>Nitex Mesh (6/6 짠 메쉬 시트, 12"x12", 500 미크론 두께, 38 % 개방 영역)</td> <td>Amazon, Seattle, WA, USA</td><td>CMN-0500-C, B000FMUNE6</td> <td>~ 1 장 / 100 쥐</td></tr><tr><td>PCI 인터페이스 패키지</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>DIG-700P2-R2, MED-SYST-16</td><td>1/16 피연산자</td></tr><tr><td>챔버 인터페이스 모듈 용 전원 공급 장치</td><td>Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>SG-6510D</td><td>1/16 작동 챔버</td></tr><tr><td>사운드 감쇠 큐비클 Med</td><td>Associates Inc., St. Albans, VT, USA</td><td>ENV-018V</td><td>1/작업자 챔버</td></tr><tr><td>주사기, 10 mL Luer-Lok&trade; tip</td><td>Fisher Scientific, Hampton, NH, USA</td><td>14-827-52</td><td>1 case/experiment (1/operant chamber)</td></tr><tr><td>플러시용 Tygon 튜빙: 0.51mmID x 1.52mm OD 0.51mm 너비 x 152.4m 길이</td><td>Fisher Scientific, Hampton, NH, USA</td><td>14-170-15B</td><td>1/ experiment</td></tr><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine (10mg/mL)</td><td>Henry Schein (Animal Health), Melville, NY, USA</td><td>003845</td><td>~0.5mg/rat*</td></tr><tr><td>Acraweld Repair Resin</td><td>Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA</td><td>1013959</td><td>1/experiment</td></tr><tr><td>Altalube (ophthalmic ointment)</td><td>Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA</td><td>6050059</td><td>1 / 실험</td></tr><tr><td>코카인</td><td>NIDA 노스 베데스다, 메릴랜드, 미국</td><td>N / A</td> <td>~ 350mgs / 쥐 전체 실험 *; DEA 라이센스</td></tr><tr><td>필요 헤파린 (10,000 USP 단위 / 10 mL)</td> <td>Sagent 제약, 샴버그, 일리노이, 미국</td><td>NDC 25021-400-10</td><td>1 / 실험 (~ 21 단위 / 쥐 *)</td></tr> <tr><td>제트 액체</td><td>헨리 샤인 (치과), 멜빌, 뉴욕, 미국</td><td>1256401</td><td>1 / 실험</td></tr><tr><td>케타민 (100mg / mL, 10mL)</td><td>Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA</td><td>1049007</td><td>~15mg/rat*; DEA 면허가 필요한</td></tr><tr><td>Methohexital Sodium (Brevital, 500 mg/50 mL)</td><td>Patterson Dental, Saint Paul, MN, USA</td><td>043-5461</td><td>1/experiment; requires DEA</td></tr><tr><td>License Saline (0.9%, USP)</td><td>Baxter, Deerfield, IL, USA</td><td>2B1307</td><td>1 case/experiment</td></tr><tr><td>&beta;-용혈성 연쇄상구균(Lancefield Group C)의 연쇄상구균 &ge; 3,000 units/mg</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA</td><td>S3134-250KU</td><td>1 바이알/실험 (~1.5mg/쥐/실험*)</td></tr><tr><td>티카르실린 디소듐 솔</td>트 <td>Fisher Scientific, Hampton, NH, USA</td><td>50-213-695</td><td>~4 바이알/연습 또는 25g 바이알 cat.# 50-489-093 (~150mg/rat/experiment*)</td></tr><tr><td>Xylazine (100mg/mL)</td><td>Henry Schein (Animal Health), Melville, NY, USA</td><td>033198</td><td>~3mg/rat*</td></tr><tr><td colspan="4">*쥐의 나이가 프로토콜에 설명된 연령이라고 가정하고, 쥐는 14일 동안 자가 투여하고 21일 동안 홍조가 발생합니다.</td></tr></tbody></table>

코카인 사용 장애의 쥐 모델에서 큐 반응성을 측정 하기 위한 프로토콜

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

코카인 사용 장애 (새김 질감) 반복적인 자기 관리는 이전 중립 자극 얻을 인센티브 값의 궤적을 따릅니다. 큐 반응성, 이전 마약 복용 경험에 연결 하는 단서에 감도 인간의 갈망 절제 동안에 저명한 역할을 한다. 큐 반응 잠복기 및 인간 연구에서 appetitive 접근 행동으로 측정은 마약 관련 신호를 향해 attentional 방향으로 평가 될 수 있다. 여기 쥐가 코카인을 실시할 훈련에 큐 반응성의 평가 설명 합니다. 코카인 자가 투여는 이산 신호 조절된 reinforcers (즉, 집 빛, 빛 자극, 주입 펌프 소리) 역할의 프레 젠 테이 션과 대응 됩니다. 절제의 기간, 이전 코카인 주입와 결합 하 여 개별 단서와 함께 코카인 자체 관리 컨텍스트에서 레버 프레스 큐 반응으로 측정 됩니다. 이 모델은 큐 반응성을 억제 하 고 따라서 재발 취약점을 수정 하는 pharmacotherapies 평가로 큐 반응성 프로세스 또한 기본 neurobiological 메커니즘을 탐구 하는 데 유용 합니다. 모델의 장점의 변환 관련성 및 얼굴 예측 validities 포함 됩니다. 모델의 기본 한계는 큐 반응성 작업 자주 수행할 수 있습니다만 하 고 짧은 기간에만 사용 해야 합니다 (예., 1 시간), 그렇지 않으면 쥐가 코카인 자극과 이산 신호의 페어링 소화 시작 됩니다. 모델은 개별 신호;와 어떤 긍정적 강화 자극에 연장 비록 약물 남용에 특히 적용 가능한,이 모델 입 음식 사례금 긍정적 자극을 강화로 작동할 수 있다 비만, 등의 분야에서 미래의 응용 프로그램을 고정할 수 있습니다.

이전에 게시 연구57 에서 큐 반응성 시험 뒤 코카인 자체 관리 및 절제 실험의 결과 그림 1에 표시 됩니다. 연구 일정은 그림 1A에 그려져 있습니다.
쥐는 개별적으로 전환 FR1에서 f r 5로 기준을 충족. 기사 조절의 코카인을 관리 그룹에서 진행, 고원 (그림 1B)에 도달할 때까지 쥐 혼합 수가 점차적으로 증가 합니다. 비활성 레버 프레스 유지 일관 되 게 낮은 두 코카인을 관리 하 고 염 분 관리 그룹; 비활성 레버 프레스에 차이 동기 부여 또는 건강 변화를 제안합니다. 염 분의 자체 관리 역할 컨트롤에 식 염 수를 강화 하지; 따라서, 레버 프레스와 ...

큐 반응성 마약 복용 경험을 갈망 하 고 절제 인간에서 재발로 연결 된 단서에 감도로 개념입니다. 큐 반응성은 다음의 자체 관리 하 고 금 욕을 강요 큐 반응성 테스트에서 appetitive 접근 동작이 발생 하는 마약 관련 신호를 향해 측정 attentional 오리엔테이션에 의하여 쥐에서 모델입니다.

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

본 프로토콜에서 단서 반응성은 코카인 자가 투여 중단 후 코카인을 갈구하는 동물의 동기 수준을 측정합니다. 단서 반응성은 쥐가 이전에 정맥 내 코카인 투여와 연관되었던 환경 및 단서에 다시 노출될 때 발생합니다. 단서 반응성은 재발 위험을 측정하는 지표입니다.여기에서 설명하는 단서 반응성 프로토콜은 재발 수정 약물 요법을 테스트하고 재발 위험에 기여하는 유전적 및 환경적 요인을 조사하기 위한 전임상적 수단입니다. 이는 인간의 약물 복용 및 재발의 많은 특성과 일치하는 약물 추구 행동에 대한 조작적 과제입니다. 단계적 타당성과 중개 생산력을 확보하기 위해 코카인 용량, 투여량 및 주입 시간과 같은 핵심 매개변수의 최적화가 이루어졌습니다.본 프로토콜에서는 콜로니실에 최소 7일 동안 적응시킨 약 8~9주령의 수컷 Sprague Dawley 쥐를 사용하십시오. 적응 기간 동안 쥐를 두 마리씩 한 케이지에 넣어 사육하고, 연구 전 기간에 걸쳐 매일 핸들링하십시오. 연구의 모든 단계 동안 홈 케이지 내에서 먹이를 제한 없이 제공하십시오.Kmiotek 및 공동 연구자들이 JoVE 비디오에서 설명한 방법을 사용하여 경정맥 카테터를 삽입한 후, 쥐를 생리식염수 투여군 또는 코카인 투여군에 무작위로 배정합니다. 훈련을 위해, 텍스트 프로토콜에 기술된 대로 코카인 자가 투여를 위한 프로그램 일정을 설정합니다. 훈련 챔버에는 두 개의 접이식 반응 레버, 각 반응 레버 상단의 자극등, 그리고 레버 반대편의 하우스 라이트를 설치합니다.큐비클 외부에 설치된 시린지 인퓨전 펌프를 통해 코카인 또는 식염수를 주입합니다. 시린지에 23 gauge 바늘을 장착하고, 쥐의 카테터에는 금속 스프링 리쉬로 감싸진 폴리에틸렌 튜빙을 연결합니다. 코카인 또는 식염수는 활성 레버를 눌렀을 때만 주입하며, 비활성 레버를 눌렀을 때는 주입하지 않습니다.용액을 매일 교체하십시오. 각 쥐의 체중에 맞게 멸균된 0.9% sodium chloride로 조제한 신선한 코카인 희석액을 사용하십시오. 각 쥐의 주사기에 최소 8 mL의 용액을 충전하십시오.먼저 쥐를 FR1 강화 계획으로 훈련시키고, 세션당 총 투여 횟수의 변동성이 10% 미만이면서 시간당 7회의 투여가 3일 연속으로 유지되면 FR5 계획으로 진행합니다. 동물을 FR5로 전환할 시점을 결정하고 카테터의 개통성 상실 여부를 확인하기 위해 자가 투여 행동 데이터를 매일 분석하는 것이 필수적입니다. 이 프로토콜에서 가장 중요한 단계 중 하나는 훈련 초기 14일 동안 자가 투여 상태를 모니터링하여 동물이 정상적으로 자가 투여를 수행하는지 확인하는 것입니다.자가 투여량이 급격히 감소했다면, 쥐의 카테터 개통성이 상실되었을 가능성이 큽니다. 세션 시작 시 주사기 내에 기포가 없는지 확인하십시오. 주사기를 폴리에틸렌 튜브에 연결하고 주입 펌프에 삽입하십시오.용액이 폴리에틸렌 튜브에 균일하고 완전히 분배되도록 시린지를 세심하게 조절하십시오. 다음으로, 쥐를 전달 시스템에 연결하고 팬이 장착된 환기형 방음 큐비클 내의 각 표준 조작성 조건화 챔버에 배치하십시오. 실험 전반에 걸친 일관성 유지가 매우 중요합니다.항상 쥐를 동일한 챔버에 넣고, 해당 챔버 내에서 활성 레버를 동일한 쪽에 배치하십시오. 180분 동안 진행되는 14회의 일일 세션 동안, 쥐는 레버에 자유롭게 접근할 수 있으며 시스템이 정상적으로 작동한다면 어떤 레버가 자극을 제공하는지 쉽게 학습하게 됩니다. 고정 비율 1의 일정으로 활성 레버를 한 번 작동시킬 때마다 6초에 걸쳐 0.1 milliliters의 용액이 방출되며, 동시에 케이지 조명과 활성 레버 위의 자극 조명이 점등됩니다.용액이 방출되기 전 1초의 지연 시간이 있습니다. 각 코카인 또는 식염수 투여 후, 자극등과 주입 펌프는 20초 동안 비활성화되며, 이 동안 하우스 라이트는 켜진 상태로 유지되고 레버를 눌러도 아무런 반응이 없으나 기록은 됩니다. 등이 꺼지면 레버가 다시 활성화됩니다.비활성 레버를 작동시켜도 예정된 결과는 발생하지 않습니다. 180분 세션이 끝나면, 천천히 주의 깊은 동작으로 공격성을 보일 가능성이 있는 쥐를 챔버에서 꺼내십시오. 그 다음 카테터를 세척하십시오.세션 사이에 챔버를 주의 깊게 세척하십시오. 모든 표면을 70% ethanol 용액으로 닦아냅니다. 훈련 세션이 끝나면, 쥐를 조작 챔버에 접근하지 못하게 하여 30일 동안 강제 금욕 상태로 둡니다.매일 계속해서 쥐를 관리하며 전반적인 건강 상태를 모니터링하십시오. 장기간의 금욕 기간이 지난 후, 쥐를 오퍼런트 챔버(operant chamber)에 60분 동안 둔 다음 즉시 뇌를 채취하십시오. 이 세션에서는 예정된 큐 반응성(cue reactivity) 프로그램을 실행하십시오.세션 사이의 뇌 채취 시간을 확보하기 위해 세션 시작 시간을 엇갈리게 설정하십시오. 중요한 점은, 약물 전달 없이도 펌프의 청각적 신호가 자극의 일부로 유지될 수 있도록 시린지를 장착하지 않은 상태에서 펌프를 작동시키는 것입니다. 평소와 같이 훈련이 진행되었던 자가 투여 챔버에 쥐를 넣고 세션을 시작하십시오.본 테스트에서는 이전에 코카인 또는 식염수를 제공했던 활성 레버를 누를 때, FR1 스케줄에 따라 단서만 제공됩니다. 비활성 레버는 여전히 아무런 반응을 하지 않습니다. 모든 단서 제시 횟수, 이전의 활성 레버 누름 횟수, 비활성 레버 누름 횟수 및 첫 번째 레버를 누를 때까지의 잠복기를 기록하십시오.설명된 프로토콜을 사용하여 연구를 수행하였으며, 쥐들이 기준을 충족함에 따라 FR1에서 FR5로 개별적으로 전환시켰습니다. 코카인 투여군에서는 쥐들이 기준에 도달할 때까지 주입 횟수를 점진적으로 증가시켰으며, 이후 FR1에서 FR5로 전환되었습니다. 코카인 단서 반응성 테스트를 통해 다수의 결과 측정값을 수집하였습니다.예를 들어, 이전에 코카인을 자가 투여한 쥐는 식염수를 자가 투여한 쥐보다 이전에 활성화되었던 레버를 훨씬 더 많이 눌렀습니다. 또 다른 중요한 출력 측정값은 첫 레버 누름까지의 잠복기입니다. 이 수치에 변화가 관찰되면, 동물은 신체적 스트레스를 받고 있거나 코카인 자가 투여에 대한 동기가 감소했을 가능성이 있습니다.운동 능력 행동 과제는 신체 건강의 변화를 평가하고, 운동 장애와 동기 부여의 변화를 구분하는 데 사용될 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 쥐가 약물을 스스로 투여하도록 훈련시키는 방법, 자가 투여 기간 동안 카테터의 개통성을 유지하는 방법, 그리고 금단 현상 이후 약물 관련 단서에 대한 반응성을 평가하여 재발 위험도를 측정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 절차를 수행할 때 소프트웨어를 세심하게 프로그래밍하고, 동물을 적절하게 다루며, 정맥 카테터를 정기적으로 세척하는 것이 중요하다는 점을 기억하십시오.이 절차를 통해 코카인 단서 반응성을 유도하는 세포 및 분자 기전을 평가하고, 코카인 단서 반응성을 조절하는 잠재적인 약물 치료제를 테스트할 수 있습니다.

a-protocol-for-measuring-cue-reactivity-rat-model-cocaine-use

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Operant 약물 자기 관리 및 냉방 장소 환경 설정 (CPP) 절차는 expansively 인간의 마약 강화, 소비, 그리고 중독의 다양한 구성 요소를 모델로 연구에 사용됩니다. 이 보고서에서는, 우리는 쥐가에서 마약 강화 및 중독을 연구하는 새로운 접근 방식으로 기존의 CPP과 자기 관리 방법을 결합하여.

약물 보강 소설 장치 및 방법

복직 절차로 알려진 재발의 동물 모델은, 약물 추구하는 재발 스트레스의 역할을 연구하기 위해 널리 사용되었습니다. 여기, 우리는 온화, 간헐적인 전기 footshock에 급성 노출을 통해 실험실 쥐에서 찾는 코카인의 복직을 유도하는 방법에 대한 리포트입니다.

실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

이 문서에서는 마우스의 뇌에 바이러스 벡터를 microinject하고 수집, 멸종 위기 및 회복 단계를 포함하는 에어컨 장소 환경 패러다임에서 테스트하는 방법에 대해 설명합니다.

크레 재조합이 코카인 컨디셔닝 장소 환경에있는 표적 유전자의 역할을 연구하는 표현 바이러스 성 벡터의 정위 미세 주입

이 프로토콜은 연구자들이 조건화된 장소 선호 및 운동 행동 민감성 분석을 사용하여 중독의 이러한 측면을 테스트하기 위해 고안된 실험을 수행할 수 있도록 하기 위한 것입니다.

코카인 유발 행동 과민성 및 마우스의 조건 장소 선호도 평가

이 프로토콜 재발의 모델로 단련 장소 특혜 (CPP)를 설명합니다. 이 절차 갈망으로 마약 관련 환경 단서의 영향을 고려 하는 실험실 동물에서 재발의 측정을 허용 하 고 기권 중독자에 재발은 현재 약물 남용 치료 프로그램의 초점 이다.

바른된 장소 기본 패러다임을 사용 하 여 마우스에 마약 추구의 복직

여기, 모 르 핀 조절 장소 특혜 (CPP) 프로토콜은 쥐에 갈망의 부 화를 측정 하는 설명입니다.

쥐에 갈망의 부 화를 측정 하기 위한 바른된 장소 설정 프로토콜

우리는 다른 형태의 쥐 및 다른 작은 포유동물에서 충 동성을 평가 하는 세 가지 프로토콜을 제시. Intertemporal 선택 절차 평가 지연된 결과의 가치를 할인 하는 경향이. 낮은 가격과 기능-부정적인 차별의 차동 보강 응답 저해 용량와 부적 절 한 응답에 대 한 처벌 없이 각각 평가 합니다.

Impulsivity 쥐에서의 다른 발현을 평가 하기 위한 3 개의 실험실 절차

이 충돌 모델은 습 관성 마약, 또는 억제 제어에 영향을 미칠 수 있는 다른 요인에 노출 된 후 억제 제어의 장애를 측정 하는 데 사용 됩니다. 성적 자극 및 혐오 장애물은 동시에 제공 됩니다, 따라서 남성 쥐 성적 보상을 접근 하는 장애물을 정복 해야 합니다.

남자 쥐에서 보상 찾는 행동의 충돌 모델

여기에 설명 된 방법은 쥐의 행동 관련 회로에서 코카인으로 유도 된 가소성을 광학 유전 학적으로 역전시키는 데 사용되는 절차를 설명합니다. 시상 편도체 시냅스의 지속적인 저주파 광 자극은 장기 우울증 (LTD)을 유도합니다. 코카인 경험이 있는 쥐에서 생체내 광유전학적으로 유도된 LTD는 단서-동기 약물 탐색의 후속 감쇠를 초래하였다.

광유전학을 사용하여 신경 가소성을 역전시키고 쥐에서 코카인 추구를 억제

학습하세요 쥐 모델에서 코카인 큐 반응성을 측정하는 방법을 통해 중독 재발 위험을 평가하는 기술을. 이 프로토콜은 약물 연구와 치료법 개발에 활용됩니다.

코카인 사용 장애의 쥐 모델에서 큐 반응성을 측정 하기 위한 프로토콜

더 많은 동영상 탐색