Name: 광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: 배우세요 마우스 망막 신경절세포의 생체 내 SD-OCT 영상화 방법을. 비침습적 기법으로 망막 두께를 정확히 측정하고 시신경병증 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품 Inserm, 몽펠리에 대학교, 망막 프랑스, 연합 국가 des Aveugles에 의해 지원 되었다 외 Déficients Visuels (UNADEV), 협회 증후군 데 볼 프 람, Fondation 부 라 검색 Médicale, Fondation 드 프랑스, 그리고 우수의 실험실 EpiGenMed 프로그램입니다.

실험 프로토콜 인 국립 드 라 건강에 의해 승인 되었다 동부 표준시 드 라 검색 médicale (Inserm; 몽펠리에, 프랑스), 유럽 지침과 일치 이며 ARVO 문을 안과 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 준수. 랑 그 독 루시 옹 예 윤리 동물 실험 (CEEALR; nuCEEA-LR-12123)의 계약에 따라 실시 됐다.
 1. 장비 설치 및 사전 영상 준비 참고: 여기, 10 월 스펙트럼 도메인 (SD) 안과 이미징 시스템 ( 그림 1A)를 사용 하 여 마우스 망막에서 수행 되었다. SD-10 월 장치 설치류 맞춤 단계 (RAS) ( 그림 1B)는 기지와 동물 이미지 마운트 (AIM)의 구성 됩니다. 기본은 컴퓨터, OCT 엔진, SD 10 월 조사 및 마우스 전용 렌즈 포함 됩니다. 프로브는 Z-번역기를 포함 하는 목표에 거치 된다. RAS는 마우스와 X-및 Y-번역, 테이블 덕분에 올려지고, 회전 수 있는 카세트 위치와 이동식 물린 바 코 밴드와 함께 사용 됩니다. 비록 후자 또한 할 수 있습니다 오픈 소스 이미지 프로세싱 프로그램 제조업체에서 제공 하는 소프트웨어 수집 및 OCT 파일의 분석에 대 한 수 있습니다.
<ol><li>단단히 목표에 프로브를 배치.</li>
	<li>프로브를 연결 하는 마우스 전용 렌즈.</li>
	<li>특정 렌즈 (여기, 086에서 964에 위치)에 대 한 참조 팔 설정을 조정.</li>
	<li>만들기 있는지 마우스 전용 렌즈 충분히 먼에서 카세트, 카세트에 코 밴드와 함께 물린 바 첨부. 
	참고: 렌즈와 카세트 사이의 거리는 목표의 뒤에 위치한 Z 번역기 나사와 조정할 수 있다. 코 밴드 상용 탄성 밴드 이며 장력은 마우스의 크기에 따라 조정 되어야 합니다.</li>
	<li>전원 공급 장치 (손수레의 하단 오른쪽 모서리) 및 다음 컴퓨터를 켭니다.</li>
	<li>이미징 프로그램을 실행 하는 화면에서 해당 바로 가기를 두 번 클릭. 
	참고:이 렌즈; 종류에 따라 다릅니다. 여기, 마우스 망막.</li>
	<li>새로운 임상 연구 만들고 원하는 프로토콜을 추가 합니다. 그렇지 않으면, 기존 임상 연구 및 프로토콜을 사용 하 여.
	<ol><li>선택 하 여 새로운 연구를 추가 &#34; 연구 NameŔ &#34; IDŔ &#34; 치료 팔 사양 &#34; (여기, &#34; 분류 &#34;); 미리 정의 된 &#34; 검색 프로토콜 &#34;, 그들이 존재 하는 경우.</li>
	</ol></li> <li>선택 된 &#34; 심사 관 &#34;에 &#34; 임상 연구 &#34; 섹션. 
	참고:에 대 한 새로운 &#34; 심사 관 &#34;, 이동 &#34; 설치 심사 관 &#38; 의사 &#34; 그것을 정의 하려면</li>
	<li>추가 환자/시험에서 새로운 환자 섹션 추가 환자에 클릭 하 여, 입력은 &#34; ID &#34;, &#34; 이름 &#34;, &#34; 성 &#34;, &#34; 섹스 &#34;, 및 &#34; 생년월일 &#34; (선택 사항). 
	참고: 이렇게 각 마우스 테스트 직전 경우 더 편리 합니다. ID는 10 자 보다는 더 이상 다는 것을 확인 하십시오. 마우스를 두 눈에 대 한 굴절 과실은 0 축 길이 이며 23.0.</li>
	<li>클릭 &#34; 추가 시험 &#34; 원하는 선택 하 고 &#34; 프로토콜 &#34; 추가 하 여 &#34; 검사 미리 &#34; 먼저 측정 됩니다 눈 시작 (여기, 오른쪽 눈), 목록에서 또는 검사를 사용자 지정 하 여.</li>
	<li>검사를 사용자 지정 하는 기존 스캔의 템플릿으로 사용 및 편집, 하거나 통해 처음부터 그것을 만들는 &#34; 추가 사용자 정의 스캔 &#34; 옵션. 모든 검사를 목록에 추가한 후 사용 하 여 새 프로토콜 정의 &#34; 입력 &#34; 새로운 프로토콜 이름 &#34; 옵션 (OS: 쏟아지는 불길 한, 왼쪽 눈; OD: 쏟아지는 덱스터, 오른쪽 눈). 
	참고: 여기, 프로토콜 포함 3 검사: (i) 방사형 스캔, 1.4 m m 직경, 0 mm 수평 및 수직 오프셋, A-스캔/B-스캔, 100 B-스캔/볼륨, 1 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨; 1000 라인 (ii) 직사각형 스캔, 1.4 m m 길이 폭, 0 ° 각도, 0 mm 가로 및 세로 오프셋, A-스캔/B-스캔, 스캔-100 B, 1 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨; 1000 라인 그리고 (iii)는 환상 스캔, 0.4 m m 최소 및 0.6 m m 최대 직경, 0 mm 수평 및 수직 오프셋, A-스캔/B-스캔, 3 B-스캔/볼륨, 48 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨의 1000 라인.</li>
</ol> 2. 마우스 준비 <ol><li>눈 팽창 및 동원 정지 <ol><li>데이터 수집 전에 적어도 15 분 마우스 눈으로 10 %phenylephrine 안 약 한 방울 씩, 초과, 제거 하 고 0.5 %tropicamide 안 약 한 방울 씩. 
		참고: 첫 번째 팽창 세션에서 시험 될 것 이다 모든 쥐에 대 한 한 번에 할 수 있습니다. 실내 온도에 액체는 있는지 확인 하십시오.</li>
		<li>즉시 유도 전신 (2.2 단계), 0.4 %oxybuprocaine 염 산 염 점 안 액, 3에 대 한 장소에서 그들을 유지 관리 anesthetize 눈을 고정 하는 s. 나중에, 방울을 닦아 내 고 눈은 잘 열려진 확인 phenylephrine, 0.5 %tropicamide 10%의 문제를 반복. 
		참고: 실내 온도에 액체는 고 마우스는 oxybuprocaine 삼 키 지 하지 않습니다 있는지 확인 하십시오.</li>
	</ol></li> <li>전신 <ol><li>염 분에 케 타 민 (20 mg/mL) 및 xylazine (1.17 mg/mL)의 마 취 솔루션을 준비. 2 주 최대 4 ° C에서 저장소.</li>
		<li>테스트를 하기 전에 약 5 분 intraperitoneally 주사 마 취 솔루션 신체 질량, 나이 및 마우스의 크기에 따라 1 g 당 5-10 µ L. 
		참고: 영 또는 얇은 마우스 필요 덜 취, 적은 시간이 걸릴 anesthetize, 하지만 또한 빨리 각 성. 여기, 8 µ L/g (160 mg/kg의 케 타 민, xylazine의 9.33 mg/kg).</li>
		<li>필요에 따라 점 안 약 이나 각 막 건조를 피하기 위해 안과 젤으로 눈에 기름칠.</li>
	</ol></li></ol> 3. 마우스 위치 <ol><li>점성 글리콜 기반 눈으로 눈 각 막 수 화를 제공 하기 위해 상품 Lubricate. 
	참고: 보이는 경우에 눈 건조 시험 중,는 다시 적용 한다 눈 방울.</li>
	<li>외과 거 즈 그것을 따뜻하게의 시트에서 마우스를 포장.</li>
	<li>0.3 %hypromellose 각 눈에는 눈 젤의 얇은 층을 적용 스폰지 또는 목화 심지를 사용 하 여, 빛의 굴절을 최소화 하기 위해 불투명도와 안전한 각 막 수 화 피. 이렇게 하는 동안 속눈썹과 수염 옆으로 이동.</li>
	<li>머리 직선과 포인팅 앞으로 카세트에 마우스 위치.</li>
	<li>부드럽게 물린 바 클램프를 열고 입에 막대 배치; 코 밴드를 사용 하 여 보안 위치. 
	참고: 물린 바 카세트 중간 인지 확인.</li>
	<li>장소 오른쪽 (왼쪽된) 눈 테스트 하는 경우 (왼쪽된) 오른쪽 아래는 면 롤.</li>
	<li>마우스 전용 렌즈에 클립 목표로 팁을 유지 하면서가지고 그것은 눈으로 Z-번역기 나사를 시계 반대 방향으로 회전 하 여.</li>
	<li>회전 하 고 카세트를 회전 시키는 고 여 물린 바와 X-번역기 나사 미리 설정 마우스의 위치, 목표 오른쪽 눈 모양을 직접 렌즈에 그리고 이렇게 하는 눈과 렌즈의 광 축 정렬. 
	참고: 마우스 너무 높이 또는 너무 낮게 경우 Y 번역기 나사 사용 해야 먼저.</li>
	<li>선택에서 첫 번째 검사는 &#34; 시험 &#34;, 클릭 &#34; 목표로 시작 &#34;, 고 망막 화상 진 찰에 대 한 추가 수동 조정.
	<ol><li>왼쪽된 패널 ( 그림 2, 가로 B-스캔 정렬)에 맞추고, 가로 r에 수직으로 망막을 이동 Z-번역기 나사를 사용 하 여항공 패널 ( 그림 2, 수직 B-스캔 정렬).</li>
		<li>는 ONH 위나 아래로 이동 하 여 오른쪽 패널 중간 ONH 려 카세트 회전. 오른쪽 패널에 망막을 물린 바 나사를 사용 합니다. 회전 위치 왼쪽된 패널 중간 ONH 카세트.</li>
		<li>X 번역기 나사를 사용 하 여 왼쪽된 패널에 망막 수준. 더는 ONH 중앙 망막의 위치를 조정 각 변조기의 주요 기능을 명심. 
		참고: 필요한 경우 오른쪽 패널에는 ONH를 아래로 이동 하려면 Y-번역기 나사를 사용 합니다. 위치는 언제 든 지 검사 사이의 세련 된 수 있습니다.</li>
	</ol></li></ol> 4. SD-10 월 ONH 및 망막의 이미징 <ol><li>일단 조정 된 콘텐츠를 클릭 &#34; 스냅숏 시작 &#34; SD 10 월 스캔 시작.
	<ol><li>3D 이미징, 필요 없는 경우 OCU 옵션의 선택을 취소.</li>
	</ol></li> <li>스캔 및 보고서 저장.</li>
	<li>다음 스캔 진행.</li>
	<li>이미지 두 번째 눈, 렌즈를 제거 후 카세트 따라 바뀌고 반복 단계 3.6-4.3.</li>
</ol> 5. 수집 완료 <li>인수 완료 되 면 카세트에서 마우스를 제거, 각 눈을 0.3 %hypromellose 안과 젤을 적용 하 고 세를 난방 접시에 마우스</li> <ol>
	<li>마지막 인수 후 소프트웨어를 닫고 컴퓨터와 OCT 시스템 (전원 공급 장치 단추) 전환.</li>
	<li>청소 살 균 제 카세트.</li>
</ol> 6. 분석 <ol><li>망막 레이어 두께 측정에 대 한 제조 업체에서 제공 하는 자동된 분할 소프트웨어를 사용 하 여.
	<ol><li>클릭는 &#34; 환자 &#34;, 원하는 선택 &#34; 시험 &#34;에서 목록, 그리고 클릭은 &#34; 검토 시험 &#34; 옵션.</li>
		<li>원하는 스캔에서 폴더 아이콘을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 여 10 월 소프트웨어에 원하는 10 월 데이터를 로드.</li>
		<li>오른쪽 클릭 B-스캔, 최대 10 캘리퍼스;를 측정 함으로써는 캘리퍼스를 구성 하 고, 그들의 이름, 각도, 색상을 입력.</li>
		<li>적절 하 게 배치 B-스캔;에 마우스 오른쪽 버튼으로 원하는 캘리퍼스를 선택 측정에 대 한 망막에. 
		참고: 검사는 ONH 중심으로 서로 등거리 그것의 각 측에 5 캘리퍼스를 설정 합니다. Peripapillary 분석은 캘리퍼스는 ONH에서 너무 멀리 배치 되지 않습니다 있는지 확인 합니다. 방사형 스캔, 스캔 당 10 월 소프트웨어에 의해 선택 되었다 10 사진을 분석. 그들의 숫자에서 찾을 수 있습니다는 &#34; 보고서 &#34; 폴더.</li>
		<li>B-스캔을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 고 클릭 하 여 스프레드시트 소프트웨어 프로그램에서 분석 결과 저장 &#34; 결과 저장 &#34;. 
		참고: 결과 검색 데이터와 같은 폴더에 찾을 수 있습니다.</li>
	</ol></li> <li>또는 만든 캘리퍼스 매크로 사용 하 여 &#34; MRI 망막 도구 &#34;, 오픈 소스 이미지 처리 프로그램 개발 (재료의 표 참조).
	<ol><li>있는지 확인 하는 &#34; MRI 망막 도구 &#34;와 &#34; 다각형 섹션 도구 수정 &#34; 매크로 활성화. 이미지를 로드 합니다. 측정을 시작 하는 m 버튼을 클릭. 
		참고: 매크로 자동으로 생성 한 0.2 m m 긴 카세트는 ONH의 양쪽 모두를 측정. 각 카세트 캘리퍼스로 5 측정 포인트 기능을 포함합니다. 그들의 측면 위치 변경 가능 하 고 광선 검사에서 peripapilla에 대 한 사용자 지정. RNFL/GCL 두께 측정 하는 카세트의 수평 위치를 미리 정의 된 하지만 대신 GC 복잡 한 레이어를 측정 하기 위해 쉽게 수정 가능. 면 스캔 품질이 가난, 수평 위치 조정 될 필요가 또는 그림 분석에서 제외할 필요가.</li>
		<li>수평 조정에 대 한 e 버튼을 클릭. 새롭게 문을 연에서 &#34; ROI 관리자 &#34; 창 첫 번째 카세트를 선택 하십시오.</li>
		<li>블루 다각형을 클릭 버튼을 그림에서 측정 된 레이어의 테두리를 클릭 하 여 첫 번째 카세트의 위치를 조정.</li>
		<li>두 번째 반복에서 첫 번째 선택 하 여 카세트는 &#34; ROI 매니저 &#34; 창 고 적절 한 이미지에 클릭. 다시 측정 하기 위해 r 버튼 클릭 합니다. 보기에서 결과 &#34; 측정 &#34; 창. 
		참고: 결과 수 있습니다 복사 스프레드시트 소프트웨어 프로그램을 언제 든 지. 그들은 바로 카세트 (r), 왼쪽된 카세트 (l), 및 합계에 대 한 다음 값 포함: Intden-카세트; 내 통합된 밀도 위치: 측정, m m 2; Mm; 카세트 내 캘리퍼스의 Len: 길이 평균: 카세트; 내 신호의 강도 의미 그리고 성병: 신호의 평균 농도의 표준 오차.</li>
		<li>다음 이미지로 진행.</li>
		<li>추가 스프레드시트 소프트웨어 프로그램에서 데이터를 분석. 
		참고: 층의 평균 두께 찾으려면 걸릴 10 Len 값.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Drexler, W., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+retinal+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art retinal optical coherence tomography.</a> Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).</li>
<li>Grenier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WFS1+in+Optic+Neuropathies%3A+Mutation+Findings+in+Nonsyndromic+Optic+Atrophy+and+Assessment+of+Clinical+Severity%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessment of Clinical Severity.</a> Ophthalmology. 123 (9), 1989-1998 (2016).</li>
<li>Zmyslowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+thinning+as+a+marker+of+disease+progression+in+patients+with+Wolfram+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Retinal thinning as a marker of disease progression in patients with Wolfram syndrome.</a> Diabetes Care. 38 (3), e36-e37 (2015).</li>
<li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive%2C+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507(2009).</li>
<li>Grieve, K., Thouvenin, O., Sengupta, A., Borderie, V. M., Paques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appearance+of+the+Retina+With+Full-Field+Optical+Coherence+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Appearance of the Retina With Full-Field Optical Coherence Tomography.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (9), OCT96-OCT104 (2016).</li>
<li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42 (4), 517-525 (2002).</li>
<li>Mustafa, S., Pandit, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach+to+diagnosis+and+management+of+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+India%22%5BJournal%5D)">Approach to diagnosis and management of optic neuropathy.</a> Neurol India. 62 (6), 599-605 (2014).</li>
<li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+OPA1delTTAG+mutation+induces+premature+age-related+systemic+neurodegeneration+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The human OPA1delTTAG mutation induces premature age-related systemic neurodegeneration in mouse.</a> Brain. 135 (Pt 12), 3599-3613 (2012).</li>
<li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+steroidogenesis+promotes+early-onset+and+severe+vision+loss+in+females+with+OPA1+dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Increased steroidogenesis promotes early-onset and severe vision loss in females with OPA1 dominant optic atrophy.</a> Hum Mol Genet. 25 (12), 2539-2551 (2016).</li>
<li>Delettre-Cribaillet, C., Hamel, C. P., Lenaers, G., et al. Optic Atrophy Type 1. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1248/">Gene Reviews</a>. Pagon, R. A. 7 (2007), University of Washington. Seattle. (2007).</li>
<li>Lenaers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+J+Rare+Dis%22%5BJournal%5D)">Dominant optic atrophy.</a> Orphanet J Rare Dis. 7 (46), (2012).</li>
<li>Delettre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+gene+OPA1%2C+encoding+a+mitochondrial+dynamin-related+protein%2C+is+mutated+in+dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Nuclear gene OPA1, encoding a mitochondrial dynamin-related protein, is mutated in dominant optic atrophy.</a> Nat Genet. 26 (2), 207-210 (2000).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+retinal+morphologic+and+functional+changes+in+mice+following+optic+nerve+crush%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Monitoring retinal morphologic and functional changes in mice following optic nerve crush.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (6), 3766-3774 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

OCT 시스템은 비-침략 적 vivo에서 이미징 방법, 고해상도 망막 교차 section 같은 검사를 제공 합니다. 따라서, 그것의 주요 이점은 정기적으로 마우스 모델에 인 간에 게 적용 하는 프로토콜을 바꾸어 좋은 기회와 상세한 분석을 위한 잠재력 이다.
Opa1delTTAG 돌연변이 생쥐의 예에서는 SD-10 월 DOA 이상9의 추가 탐사에 대 한 허용 되는 RNFL 및 GC 복잡 한 레이어 두께의 증가 보여준 결과. 그것은 하지 했 조직학 분석만 가능. 비교에서는, 조직학 환상 또는 방사형 10 월 검사와 달리 전체 망막을 시각화 하는 가능성을 제공 하지 않습니다. 또한, 그것은 더 많은 시간과 비용이 많이 드는 여러 시간 점 연구에 동물의 증가 수를 고려입니다. 사실, SD-10 월 DOA, 뮐러 셀9에서 망막 세포 신형 씌 웠 어 요 ...

10 월 망막 구조1, 시 신경 머리 (ONH) 등의 검사를 용이 하 게 하는 진단 도구입니다. 년 동안 인간2,3, 설치류4,5에서 뿐만 아니라 질병 진행의 신뢰할 수 있는 표시기 되고있다. 간섭계를 사용 하 여 2 µ m 축 해상도 망막 층의 단면 이미지를 만듭니다. 안쪽 층은 망막 신경 섬유 (RNFL), 포함 된 레이어 RGC 축 삭, 신경 절 세포 레이어 (GCL), 주로 RGC 시체를 포함 하 여 뒤. 다음은 내부 plexiform 계층 (IPL), RGC dendrites 바이 폴라, 수평, 그리고 amacrine 세포 축 삭을 만나는 곳입니다. 가로 셀, 함께이 형성 안 핵 층 (INL), 그리고 그들의 돌출 외부 plexiform 레이어 (OPL) 축 삭 포토 리셉터와 연결. 이 포토 리셉터 세포 기관과 외부 핵 층 (ONL), 뒤 및 외부 제한 막 (옴), 내부 세그먼트/외부 세그먼트 라고도 포토 리셉터 계층에서 분리 (IS / OS) 계층. 마지막으로, 마우스 망막에 마지막 관찰 레이어는 망막 안료 상피 (RPE) 및 맥락 막 (C). 혼자 RNFL은 일반적으로 너무 얇은 쥐;에서 측정 따라서, 낫4,5는 대신 RNFL/GCL을 분석입니다. 또 다른 가능성은 IPL 뿐만 아니라 후자 포함 된 GC 복잡 한 레이어, 두꺼운 고 따라서 더욱 쉽게 10 월 측정 스캔4. 따라서, 10 월에 OPNs와 같은 망막의 병 적인 상태에 대 한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
또는, 마우스 망막의 두께 종종 사후 조직학으로 분석 했다. 그러나,이 기술은 얼굴 제한 관련 된 조직 수집, 고정, 절단, 얼룩, 장착, 등 그러므로, 미묘한 두께 변화 등 몇 가지 결함이 감지할 수 없습니다. 마지막으로, 같은 마우스 테스트할 수 없습니다에서 여러 시간 때문에 점, 당 동물의 수 공부 크게 증가와 달리 10 월. 모두 모두, 반복에 대 한 비 침해, 고해상도, 가능성, 시간 시간, 및 10 월 기술 사용의 용이성에 모니터링 할 선택의 방법 망막 질병 연구에.
마우스 모델은 유전자 결함을 식별 하 고 retinopathies6기본 분자 메커니즘을 명료 하 게 하는 데 사용 됩니다. OPN는 약 1.2 백만 RGC axons 이루어져 있다 (에), 망막 시 신경에 상당한 손상의 형태입니다. OPN ON에 집중 될 수 있다 또는 선도 시야 손실 후, 실명 아닌7또는 다른 장애, 선천적인된 보조 수 있습니다. OPN의 특성을 특성 RGC 손실 되며 손상에는 관찰 될 수 있다 인간 10 월에 RNFL와 GCL 숱이2,3. 한편, OPN의 이상, 아직도 제대로 이해 하 고 따라서 마우스 망막 테스트 필요가 남아 있다.
이 원고는 이미징 및 Opa1delTTAG 마우스 선8,9, 지배적인 광섬유 위축 (DOA)10모델의 예를 사용 하 여 망막 층 두께의 정량화를 설명 합니다. RGC 이상 평가, 방사형, 직사각형, 그리고 환상 검사 정량 했다. 이것은 10 월 소프트웨어에서 제공 하는 표준 캘리퍼스 또는 오픈 소스 이미지 처리 프로그램 개발 만든 매크로 이루어졌다. 만든 캘리퍼스는 사용 하기 쉬운, 재현, 그리고 더 정확 하 게 표준 캘리퍼스 조작 하기 어렵고 종종 RNFL/GCL, 보다 두꺼운 있습니다. 매크로 5 포인트에서와 peripapillary 지역에서 ONH의 양쪽에 고정된 위치에서 자동으로 검색 된 계층에 대 한 측정을 수행합니다. 제시 프로토콜의 목표 10 월 스캔 수집 RGCs에 초점을 맞춘 망막 위치 지정을 설명 하는입니다.

<table><tbody><tr><td>Mice</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Opa1delTTAG 몽</td><td>펠리에의 신경과학 연구소, INSERM UMR 1051, 프랑스</td><td>-</td><td>Opa1 넉인 마우스 운반&nbsp; C57Bl6/J의 OPA1 c.2708_2711delTTAG 돌연변이 background</td></tr><tr><td>Name</strong</td><td>>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System</td><td>Bioptigen, Leica Microsystems, Germany</td><td>-</td><td>스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층 촬영 시스템</td></tr><tr><td>EnVisu R2200 SD-OCT 이미징 시스템 소프트웨어</td><td>Bioptigen, Leica Microsystems,</td> <td>Germany-OCT</td> <td>수집 및 분석용 소프트웨어</td></tr><tr><td>ImageJ 1.48v</td><td>Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA-</td><td></td><td>분석용 소프트웨어, 두 개의 hommade 매크로를 다운로드하고 설치해야 합니다 http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool</td></tr><tr><td>자기 조절 가열판</td><td>Bioseb, 프랑스</td><td>BIO-062</td><td>저체온증에 대한 보호</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nose Band</td><td>-</td><td>-</td><td>탄성 밴드</td></tr><tr><td>거즈 패드 3 "x 3"</td><td>Curad, 미국</td><td>CUR20434ERB</td><td>저체온증에 대한 보호</td></tr><tr><td>듀얼 엔드 코튼 팁 애플리케이터</td><td>Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA-Gel</td><td></td> <td>application</td></tr><tr><td>Cotton Twists</td><td>CentraVet, France</td><td>T.7979C.CS</td><td>Mouse positioning</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</strong</td></tr><tr><td>>시약 및 약물</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N&eacute; 오신&이큐트; 프린 Faure 10%</td><td>Laboratoires Europhtha, 모나코</td><td>-</td><td>눈 확장</td></tr><tr><td>Mydriaticum 0.5%</td><td>Laboratoires Th&eacute; a, 프랑스</td><td>3397908</td><td>눈 확장</td></tr><tr><td>Cebesine 0.4%</td><td>Laboratoire Chauvin, Bausch& Lomb, France</td><td>3192342</td><td>국소 마취</td></tr><tr><td>Imalgene 1000</td><td>Merial, France/CentraVet, France</td><td>IMA004</td><td>전신 마</td></tr>취 <tr><td>Rompun</td><td>Bayer Healthcare, Germany/CentraVet, France</td><td>ROM001</td><td>전신 마취, 진통, 근육 이완</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Laboratoire Osalia, France&nbsp;</td><td>103697114</td><td>생리학적 세럼</td></tr><tr><td>Systene Ultra</td><td>Alcon, Novartis, USA-</td><td></td><td>눈의 수분</td></tr><tr><td>GenTeal'Alcon</td><td>, Novartis, USA-</td><td></td><td>빛의 굴절 및 불투명도를 최소화하는 안과 젤</td></tr><tr><td>Aniospray Surf 29</td><td>Laboratoires Anios, France</td><td>59844</td><td>소독제</td></tr></tbody></table>

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 vivo에서 화상 진 찰

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

망막에 구조 변경 안과 질병의 일반적인 발현 됩니다. 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 그들의 식별에서 비보에있습니다-빠르게, 반복적으로, 그리고 높은 해상도. 이 프로토콜 광섬유 neuropathies (OPN)를 공부 하는 강력한 도구로 마우스 망막에 10 월 영상을 설명 합니다. OCT 시스템은 일반적인 사후 조직학 분석을 간섭계 기반, 비-침략 적 대안 이다. 그것은 망막 엷게 또는 두껍게 등의 변경 내용을 추적 하는 가능성을 허용 하는 망막 두께의 신속 하 고 정확한 평가 제공 합니다. 선물이 Opa1delTTAG 마우스 라인의 예제와 이미징 프로세스 및 분석. 세 가지 유형의 스캔, 정량화 방법으로 두 제안: 표준 및 수 제 캘리퍼스. 후자는 peripapillary 망막에서 사용 하기 위해 최고의 동안 방사형 검사; 더 정확 하 게 되 고, 하는 것이 얇은 구조를 분석 하는 데 좋습니다. 여기에 설명 된 모든 접근 하지만 망막 신경 절 세포 (RGC) 설계는 다른 세포 인구에 쉽게 적응할 수 있다. 끝으로, 10 월 마우스 모델 형질에 효율적 이며 치료 개입의 신뢰할 수 있는 평가 위해 사용 될 가능성이 있다.

SD-10 월 기술 망막 상상 및 두께 조직학, 비교 하지만 빠른 분석과 더 자세한 (그림 3) 수 있습니다. 제시 wildtype C57Bl/6 마우스, 비록 SD 10 월 스캔의 품질 (그림 3A, 오른쪽)은 (그림 3A, 왼쪽) 망막 횡단면의 이미지의 좋은, 그것은 더 많은 레이어 (예: 옴)을 시각화. 또한, 그것은 일 또는 조직학 분석을 위한 주 대 마우스 준비를 포함 하 여 약 40 분 걸립니다. 마지막으로, 처리 및 등 haematoxylin, 오신, 사프란, 조직을 손상 하 고 잘못 된 데이터의 수집을 유발 수 있습니다, 얼룩이 지기 요구 하지 않는다. 10 월에서 쉽게 측정 망막 레이어 포함 RNFL/GCL, IPL, INL, OPL, ONL, IS / OS, RPE, 및 C (<...

이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

이 실험의 전체적인 목표는 광학 단층 촬영(optical coherence tomography, OCT)을 사용하여 망막 두께를 신속하고 정확하게 평가하는 것입니다. OCT는 시신경 병증과 같이 안과학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마우스 망막 신경절 세포의 구조적 변화를 감지할 수 있는 비침습적 방법이라는 점입니다.이 기술은 시신경 병증에서 치료 효과를 테스트할 수 있는 비침습적이고 안전하며 정평이 난 방법이기 때문에 매우 흥미롭습니다. 우선, 렌즈에 적합하게 기준 팔(reference arm) 설정을 조정하십시오. 그다음, 전원 공급 장치와 컴퓨터를 켭니다.컴퓨터 준비가 완료되면 이미징 프로그램을 실행하십시오. 새로운 임상 연구를 생성하고 원하는 프로토콜을 추가하십시오. 환자 검사 섹션으로 이동하여 검사 기본값을 설정하십시오.환자 검사 섹션에서 환자 추가를 클릭하여 새 환자를 추가하고 관련 환자 정보를 입력합니다. 그런 다음 검사 추가, 검사 시작을 클릭하고 리스트에서 프리셋 스캔을 추가하여 먼저 측정할 안구를 시작으로 원하는 프로토콜을 선택합니다. 데이터 획득 최소 15분 전에 테스트 예정인 모든 마우스의 각 눈에 상온의 10% phenylephrine 점안액을 투여합니다.그다음 과잉 시약을 제거하고 상온의 0.5% tropicamide를 점안합니다. 이미지 획득 약 5분 전에 전신 마취를 유도합니다. 직후에 각 눈에 0.4% oxybuprocaine hydrochloride를 투여하고, 안구를 마취시키고 고정하기 위해 용액을 3초 동안 그대로 둡니다.그 다음, 점안액을 제거하고 10% phenylephrine과 0.5% tropicamide 점안을 반복합니다. 영상 촬영을 위해 눈이 충분히 확장되면, 각막 수분 공급을 위해 점성 글리콜 기반의 안약을 사용하여 눈을 윤활시키고, 마우스의 체온을 유지하기 위해 수술용 거즈 한 장으로 감쌉니다. 스펀지나 면심을 사용하여 0.3% hypromellose가 첨가된 안과용 겔을 각 눈에 얇게 도포합니다.그동안 속눈썹과 수염을 옆으로 치워 둡니다. 머리를 곧게 펴고 앞을 향하도록 하여 마우스를 카세트에 배치하고, 바이트 바(bite bar)를 입안에 조심스럽게 고정합니다. 검사 중인 눈 쪽의 동물 측면에 코튼 롤을 받쳐 줍니다.그런 다음, 클립이 달린 조준 팁을 마우스 전용 렌즈에 맞춘 상태에서 z축 이동 나사를 시계 반대 방향으로 돌려 렌즈를 눈 쪽으로 가져옵니다. 카세트를 회전 및 스위블링하고 바이트 바와 x축 이동 나사를 돌려, 실험 대상인 눈이 렌즈를 정면으로 바라보도록 마우스의 위치를 미리 설정합니다. 눈의 광축과 렌즈가 일치하면, 검사 내의 첫 번째 스캔을 선택합니다.'Start aiming'을 클릭하고 z-translator 나사를 사용하여 왼쪽 패널에서는 망막을 수직으로, 오른쪽 패널에서는 수평으로 이동시킵니다. 카세트를 회전시켜 시신경 유두를 위아래로 움직여 오른쪽 패널의 중앙에 위치시킵니다. 바이트 바(bite bar) 나사를 사용하여 오른쪽 패널 내의 망막을 곧게 펴고, 카세트를 회전시켜 시신경 유두가 왼쪽 패널의 중앙에 오도록 배치합니다.그 다음 x-축 변환 나사를 사용하여 왼쪽 패널 내에서 망막의 수평을 맞추고, 각 모듈레이터의 주요 기능을 고려하여 시신경 유두가 완벽하게 중앙에 오도록 망막의 위치를 추가로 조정합니다. 망막이 적절한 위치에 놓이면, 스냅샷 시작을 클릭하여 스펙트럼 영역 광학 단층 촬영 스캔을 시작하십시오. 스캔 결과와 보고서를 저장하는 것을 잊지 마십시오.필요한 경우 중심 정렬을 조정하십시오. 스캔이 완료되면 렌즈를 후퇴시키고 앞서 시연한 것과 같이 두 번째 눈을 배치하십시오. 두 번째 눈의 스캔이 끝나면 카세트에서 마우스를 꺼내고, 양쪽 눈에 0.3% hypromellose 성분의 안과용 겔을 도포한 후 완전히 회복될 때까지 모니터링하며 가열판 위에 마우스를 두십시오.망막 신경절 세포에 집중하기 위해 Image J용으로 제작된 MRI retina tool 매크로를 사용하십시오. MRI retina tool을 열고 polygon selection tool을 수정한 후 해당 이미지를 로드하십시오. M을 클릭하여 측정을 시작하고, E를 클릭하여 수평 위치를 조정하십시오. 새로 열린 region of interest manager 창에서 첫 번째 카세트를 선택하십시오.파란색 다각형을 클릭하고 사진 속 측정 레이어의 경계선을 클릭하여 첫 번째 카세트의 위치를 조정하십시오. 관심 영역 관리자 창에서 두 번째 카세트를 선택하고 두 번째 카세트를 조정하십시오. 그런 다음 R을 클릭하여 망막을 재측정하고 측정 창에서 결과를 확인하십시오.스펙트럼 도메인 OCT 스캔의 품질이 망막 단면 이미지만큼 좋지는 않지만, OCT를 통해 더 많은 층을 시각화할 수 있습니다. OCT 스캔에서는 망막 층을 쉽게 측정할 수 있으며, 여기에는 신경절 세포층의 망막 신경 섬유, 내핵층, 외망상층, 외핵층, 내절 및 외절층, 망막 색소 상피, 그리고 맥락초가 포함되어 망막 전체에 대한 복합적인 연구가 가능합니다. 방금 시연한 망막 두께의 OCT 측정 결과에 따르면, 시각 장애가 있는 유전자 변이 OPA1 암컷 마우스는 신경절 세포 복합체와 유두 주변 망막 신경 섬유층이 점진적으로 두꺼워지는 양상을 보입니다.표준 캘리퍼스와 수제 캘리퍼스를 사용하여 신경절 세포층의 망막 신경 섬유 두께를 비교한 결과, 표준 캘리퍼스는 훨씬 더 두껍고 얇은 층 경계에 배치하기 어렵기 때문에 수제 캘리퍼스보다 두께를 유의하게 낮게 측정하는 것으로 나타났습니다. 숙련된 후, 이 기술은 정확하게 수행될 경우 15분 이내에 완료할 수 있습니다. OCT의 개발 이후, 안과학 분야의 연구자들이 생쥐 망막의 구조적 변화를 분석할 수 있는 길이 열렸습니다.이 영상을 시청한 후, 마우스의 망막 신경절 세포에 대한 OCT 영상 촬영 및 분석 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 감염 후 포도막염의 마우스 모델에서 안구 염증을 감지하고 정량화하기 위한 생체 내 이미징 기술을 보여줍니다. 광간섭 단층촬영(OCT)으로 알려진 이 기술은 질병 진행을 평가하기 위해 눈의 고해상도 단면 이미지를 생성합니다.

마우스 모델에서 포도막염을 평가하기 위한 광간섭 단층촬영 이미징(Optical Coherence Tomography Imaging)

출처: Wang, Z., et al. Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina.  J. Vis. 특급 (2021). 이 동영상은 이광자 현미경을 사용한 in vivo 망막 이미징 기술을 보여줍니다. 마취된 마우스는 머리를 고정하고, 눈 윤활제를 바르고, 눈 위에 커버슬립을 놓아 이미징을 준비합니다. 형광 단백질을 발현하는 망막 신경절 세포(Retinal ganglion cell, RGC)는 정렬을 위해 상피형광(epifluorescence)을 사용하여 먼저 시각화됩니다. 마지막으로, 이광자 이미징이 사용되어 망막 신경절의 고해상도 시각화가 가능합니다.

마우스 망막의 Two-Photon In Vivo 이미징

출처: Jagodzinska, J., et. al., Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. 특급. (2017) &lt;br /&gt; 이 비디오에서는 SD-OCT(spectral-domain optical coherence tomography)를 사용하여 망막층을 이미지화하고 시신경병증이 있는 유전자 변형 마우스 모델의 구조적 변화를 평가하는 방법을 보여줍니다.

광간섭 단층촬영(Optical Coherence Tomography)을 사용한 마우스 망막의 In vivo 이미징

이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

광학 일관성 단층 촬영 및 optokinetic 응답이 설치류에서 구조적 및 시각적 판독의 평가 대 한 자세한 프로토콜 제공 됩니다. 결과 신경학 상 뿐 아니라 안과 연구에 대 한 귀중 한 통찰력을 제공합니다.

쥐와 쥐에 구조와 기능적 시각 시스템 판독으로 광학 일관성 단층 촬영 및 Optokinetic 응답을 사용 하 여

여기에서는 망막 변성, 녹내장, 당뇨병 성 망막증 및 근시 모델에서 생체 내 망막 및 안구 구조를 시각화하기 위해 스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층 촬영 (SD-OCT)을 사용하는 방법을 설명합니다.

광학 간섭 단층 촬영을 사용한 설치류 모델에서 안구 질환의 생체 내 구조 평가

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

여기에서는 마우스에서 망막병증의 진단 및 정량적 측정을 용이하게 하기 위해 광학 간섭 단층 촬영을 사용하는 생체 내 이미징 기술에 대해 설명합니다.

망막병증의 마우스 모델에 대한 광학 간섭 단층 촬영의 적용

본 프로토콜은 in vivo 이미지에서 관찰된 망막 신경절 세포 축삭 다발 형태를 검증하기 위한 목적으로 in vivo 가시광선 광간섭 단층 촬영 fibergraphy(vis-OCTF) 이미지를 동일한 마우스 망막의 ex vivo 공초점 이미지와 정렬하는 단계를 설명합니다.

Align of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina(가시광선 광간섭 단층 촬영 파이버그램과 동일한 마우스 망막의 컨포칼 이미지 정렬)

이 문서는 해부하다와 마우스에서 분리된 망막 준비에서 기록하는 방법에 대한 설명을 제공합니다. 특히, 우리는 찬란 표시 신경절 세포 인구의 빛을 반응을 기록하고 이후 식별하고 그 형태를 분석하는 방법에 대해 설명합니다.

유전적으로 망막 신경절 라벨 셀에서 라이트 응답을 기록하기 위해 절연 망막 준비

배우세요 마우스 망막 신경절세포의 생체 내 SD-OCT 영상화 방법을. 비침습적 기법으로 망막 두께를 정확히 측정하고 시신경병증 연구에 활용할 수 있습니다.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

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