Name: 에이 Caenorhabditis elegans 영양 상태 기반 구리 혐오 검정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 학습하세요 Caenorhabditis elegans 영양 상태 기반 구리 혐오 검정법으로 행동 신경과학 연구에서 기아 조건에서의 행동 변화와 돌연변이체 식별 방법을 배우세요.

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이 연구는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 협의회 RGPIN36481-08 William G. Bendena의 지원을 받았다.

1. 실험 생물의 제조 <ol><li> 시험 할 때 유기체가 젊은 성인임을 확인하기 위해 분석을 시작하기 24 시간 전에 균주 당 10 L4 단계의 선충을 뽑는다. 시험 된 각 돌연변이 또는 대조구 선충에 대해 10 개의 L4s (대조군의 경우 10 개, 분석의 경우 10 개)를 선택하십시오. <ol><li> OP50 Escherichia coli로 시딩 된 표준 한천 평판에서 24 시간 동안 표준 방법 26 , 27 을 사용하여 L4 유기체를 유지한다. 후속 세척 단계에서 미생물이 손실되면 시작 샘플 크기를 늘려 보정하십시오 ( 예 : 10 개가 아닌 20 개의 웜을 선택하십시오). 참고 : 행동은 본질적으로 변이가되는 표현형입니다. 세 가지 별도의 일에 각 변형에 대해 세 번씩 방법을 수행하십시오. 토론 장에서 강조한 바와 같이 추가 균주에 대한 추가 제어 균주 및 조건을 포함시킵니다. </li></ol></li><li> 분석하기 직전에 실험용 orga를 옮깁니다.박테리아가없는 한천 플레이트로 옮겨서 선충류를 1 분 동안 자유롭게 움직여 과도한 박테리아를 제거 할 수 있습니다. <ol><li> 실험 생물체가 분석 전 24 시간 동안 오염 조건을 경험했다면 폐기하십시오. </li></ol></li><li> 박테리아가없는 플레이트에 M9 1 mL를 넣고 웜을 마이크로 원심 분리 관으로 씻어냅니다. </li><li> 3,000 xg에서 1 분간 원심 분리하십시오. 웜은 튜브의 바닥에 펠렛을 형성해야합니다. 웜 펠렛을 방해하지 않고 M9 용액을 흡인하십시오. 벌레 펠렛에 M9 1 mL를 넣고 튜브를 뒤집어 웜을 용액과 섞는다. </li><li> 1.4 단계를 세 번 더 반복하십시오. <ol><li> 과도한 박테리아가 처음에 웜과 함께 옮겨지면 총 5 회 반복하십시오. 박테리아는 구리 식품 레이스 플레이트에 옮겨지지 않아야합니다. 식품이 분석 판에 옮겨지면 정확한 데이터 수집을 방해합니다. </li></ol></li><li> 최종 세척 후 상등액을 10081; L의 M9와 웜 펠렛이 남아있다. 주의 : 기아와 관련된 행동은 30 분 후에 분명해진다. 따라서 세척 단계가 완료되면 웜을 즉시 용액에서 옮겨야합니다. </li></ol> 2. 분석 플레이트의 준비 <ol><li> 표준 NGM 한천 플레이트를 분석하기 이틀 전에 준비합니다. <ol><li> 플레이트가 습도가 높은 환경에 보관되는 경우 분석 3 일 전에 한천 플레이트를 만드십시오. 또는, 뚜껑을 3 ~ 6 시간 동안 뚜껑을 제거하여 적절하게 건조시킵니다 (살균 환경에있는 경우). </li></ol></li><li> 두꺼운 영구 마커를 사용하여 바깥 쪽 가장자리를 따라 판 아래쪽에 선을 만들고 다른 선은 중간 선 경계를 형성합니다 ( 그림 1 ). 중앙선 장벽은 판의 각 모서리에서 등거리에 있어야합니다. 정확한 측정을 위해 눈금자를 사용하십시오. 이 라인은 박테리아와 구리 용액을 옮길 때 가이드 역할을합니다. 제공됨구리 용액 전에 대장균 이 옮겨지면이 계통이 지표로 사용됩니다. </li><li> 균일 한 잔디를 만들기 위해 구리 배리어의 한쪽에만 50 μL의 OP50 E. coli 를 넣은 시드 플레이트 ( 그림 2 ). 박테리아 농도는 분석을 통해 일관되게 유지되어야합니다. 그러나 경미한 농도 차이에 따라 약간의 변동성이 관찰되었다. <ol><li> 박테리아가 구리 용액과 접촉하지 않도록 판 밑면의 표시된 선을 사용하십시오. 구리 용액이 플레이트의 모서리를 따라 가고 중간 선의 장벽을 형성하는 경우 구리 용액이 식품 공급원과 접촉하지 않도록 박테리아를 옮깁니다. </li></ol></li><li> 두 번째 플레이트 세트를 표시하고 OP50 E. coli 를 아무 것도 옮기지 않습니다 ( 그림 2 ). 이 플레이트는 음성 대조군을 평가하는 역할을합니다. 이 번호판에는플레이트의 한쪽 절반을 표시하여 초기 이동 원점을 나타냅니다. </li><li> 박테리아가 건조한 후 37 ℃에서 밤새 배양하십시오. 37 ° C 배양기 또는 실내로 옮길 때 박테리아 패치가 방해받지 않도록하십시오. 과도한 교란은 음식물의 위치 나 모양을 바꿀 수 있습니다. </li></ol> 3. 화학 주성 분석 <ol><li> 갓 준비 시작하기 전에 0.5 M 구리 (II) 황산 용액을 준비하십시오. 플레이트 당 125 μL의 용액이 사용된다면, 사용 된 분석 플레이트 ( 예 : 5 개의 분석 플레이트, 625 μL)의 수에 따라이 용적을 확대하십시오. </li><li> 한천 가장자리에 구리 (II) 황산염 용액 100 μL를 피하여 외부 구리 장벽을 만듭니다. 표시된 밑면이 가이드 역할을해야합니다. </li><li> 25μL의 구리 (II) 설페이트 용액을 피펫으로 넣어 정중선 장벽을 만듭니다. <ol><li> 구리 (II) 설페이트 용액이박테리아 패치와 접촉하지 않습니다. 한천에서 들여 쓰기 / 스크래치로 인해 줄무늬가 이동에 영향을 줄 수 있으므로 점을 찍은 기술을 사용하십시오. </li></ol></li><li> 구리 용액을 판 위에 건조시킵니다. 기간은 플레이트 및 실험실 조건에 따라 다를 수 있습니다. 전송 후 5 분마다 건조 상태를 육안으로 확인하십시오. 참고 : 구리 용액은 파란 색조를 나타내며 쉽게 식별 할 수 있습니다. 실험실 조직을 사용하여 접시 가장자리 근처의 용액을 가볍게 닦아서 건조 함을 확인하십시오. </li><li> 튜브 바닥에서 웜 펠렛 20 μL를 분석 플레이트의 박테리아가없는 반으로 피펫 팅합니다. <ol><li> 10 벌레가 분석 플레이트로 옮겨 졌는지 확인하십시오. 여분의 웜이 실수로 포함 된 경우 halocarbon 오일을 사용하여 제거하여 박테리아가 플레이트에 추가되지 않도록하십시오. 각 분석은 분석 도중 일정한 수의 선충을 가져야합니다. 참고 : 너무 적은 수의 웜이 transf 인 경우초기 샘플 크기를 늘리면 세척 및 이동 중에 잠재적 인 손실을 줄일 수 있습니다. </li></ol></li><li> 실험실 조직으로 과량의 M9를 제거하십시오. M9는 황산동 용액과 접촉해서는 안된다. 주의 :이 단계를 수행하는 동안 웜과 한천 표면이 영향을받지 않도록하십시오. 너무 거칠게 사용하면 실험실 조직이 플레이트의 한천 표면에 움푹 패인 곳을 만들 수 있으며 벌레를 제거 할 수 있습니다. KimWipe 를 통해 우발적으로 제거 된 웜은 폐기해야합니다. </li><li> M9 솔루션을 제거하고 모든 웜이 비 액체 운동 패턴을 시작하면 분석 스톱워치를 시작하십시오. <ol><li> 최적으로, 분 이내에 M9 솔루션을 제거하십시오. 필수 매개 변수는 정현파 이동의 식별입니다. 웜은 다르게 이동합니다. 예를 들어 액체에있을 때 사인 곡선보다는 스 래싱입니다. 실험 오르간 각각에 대해 분석 중지 시계를 시작하십시오.isms는 쓰러 뜨림을 멈 춥니 다. </li></ol></li><li> 30 분마다 분석 플레이트를 확인하십시오. <ol><li> 박테리아 패치가있는 분석 플레이트의 경우 4 시간 동안 식품 패치에 도달하면 긍정적 인 점수를 얻습니다. 네거티브 컨트롤 플레이트의 경우 장벽을 넘었다면 유기체를 긍정적으로 점수를 매 깁니다. </li></ol></li></ol>

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</ol>

우리는 공개 할 것이 없습니다.

이 분석 설계는 선충류의 손실을 방지하는 혐오 중심선과 배리어 판의 가장자리 주위를 제작하는 구리 용액을 포함하는 식품 레이스 분석 24 수정한다. 생물체는 혐오 장벽을 넘어 4 시간 동안 음식물에 도달하는 능력을 테스트합니다. npr-9 (GF) 의 맥락에서, 우리는 기아 조건이 어떻게 혐오 반응과 음식 검출에 영향을 미칠 수 있는지 평가하기 위해이 분석을 활용했습니다. 이전에 npr-9 (GF) 가 음식 및 혐오 단서에 대한 반응성에 결함이있는 것으로 판별 한 경우, 기아가 결함 npr-9 (GF) 거동을 조절할 수 있는지 평가하기 위해 영양 환경과 배수 환경 단서를 결합했습니다. 이 분석은 웜이 화학적 자극과 음식 신호 3 , 4 를 감지하고 이에 반응하는 능력에 의존합니다. 분석 된 다양한 변수를 고려할 때,오...

Caenorhabditis elegans 는 단지 302 개의 뉴런으로 구성된 신경계의 회로 분석이 상대적으로 용이하기 때문에 수십 년 동안 신경 생물학 연구의 모델로 사용되었습니다 1 . 유기체가 환경 신호에 반응하는 것에 의존한다면, 신경계의 대부분은 환경 신호의 통합을 규제하는 데 전념합니다 2 . 신경계의 단순함에도 불구하고 C. elegans 는 방수제 3 , 유인물 4 , 온도 5 , 습도 6 등 다양한 환경 신호를 감지하고 이에 대응할 수 있습니다. 제대로 환경 신호를 통합하는 실패는 포유 동물 모델 시스템 7-9에서 행동 장애 및 신경 퇴행성 조건의 번호로 연결되어 있습니다. 이용 가능한 다양한 신경 질환 모델<html> C. elegans의 10 개 및 선충류 약제 스크린 11 의 개발과 관련하여이 미생물은 신경 생물학 연구에 유용한 시스템으로 입증되었습니다. 선충류 게놈 12 의 거의 모든 유전자에 매핑 된 선충 인 connectome 1 과 돌연변이의 이용 가능성을 감안할 때, 선충류 신경계에 대한 우리의 이해와 우리 자신의 확장은 창조적으로 적절한 분석법의 디자인에 의해 부분적으로 제한됩니다. 다양한 혐오 자극 3 , 4 , 13 , 14 , 15에 대한 선충 반응성을 평가하기 위해 지난 40 년간 여러 chemotaxis 분석법이 개발되었습니다. 초기 실험은 단일 한 벌레가 한천 판에 배회하는 동안 급성 환경 자극의 도입과 관련되었다= &quot;xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . 기관지 반응에 대한 즉각적인 변화가 기록되었다. 예를 들어, 휘발성 냄새 물질 인 옥탄 올은 모발에 적용되어 선충의 코 앞에서 떠돌며 야생형 벌레 17 에서 역방향 이동의 시작을 자극 할 수 있습니다. 더 복잡한 분석은 행동의 선택 (18)을 평가하는 수단으로 여러 변수를 포함하도록 개발되어왔다. 이 분석의 변형은 혐오 정중선 배리어 (4)를 제작하는 구리 용액의 사용을 수반한다. 유인물, 즉 디아 세틸은 디아 세틸 공급원으로부터 멀리 이동 된 벌레가있는 화학 장벽의 한쪽면에 놓였습니다. 구리 혐오 반응에 결함이있는 웜은 diacetyl에 도달하는 장벽을 즉시 넘어 섰고 야생 타입 웜은 장벽에 의해 처음에 격퇴되었습니다. 웜이 처음으로 구리 장벽에 접근했을 때 응답이 득점되었습니다.장기간의 관찰없이 굶주림 상태를 겪은 후에 웜을 평가하면 환경 자극에 대한 민감도가 감소합니다 19 . 혐오 화학 옥탄 올이 선충류 앞에서 떠돌 았을 때, 야생형 유기체는 음식에있을 때 3-5 초 내에 거꾸로 움직임을 자극합니다. 10 초 20 -이 생물은 10 분 동안 음식에서 제거 된 후, 그들은 8의 지연 응답을 나타낸다. 따라서 굶주림이 증가하면 선충류는 생존을 위해 음식을 찾는 것이 필수적이 될 때 해로운 환경 신호에 대한 회피 반응이 감소하는 결과를 낳습니다. 반대로, 과도하게 표현 신경 펩티드 수용체 9 (NPR-9), 또는 음식 떨어져 옥탄 올과 혐오 자극 (21)의 수에 대응하는 무능력을 전시에 반응하지 않는 것이 선충. 이 npr-9 (GF) 미생물은 식품 존재시 반전 빈도를 조절하지 않지만들이 거꾸로 운동 (21)의 능력이 강한 것을 나타내는 터치 자극에 응답하여 역방향. 우리는 또한 NPR-9 (LF) 돌연변이들이 음식 (21)의 존재에 자신의 행동을 조절할 수 아직 음식 떨어져 비정상적으로 감소 반전 주파수를 전시 주어진 평가했다. 웜의 영양 상태를 급성 외부 자극의 도입과 결합 시키면 음식 관련 경로가 감각 신호 전달 경로를 광범위하게 조절할 수있는 기전이 밝혀집니다 22 , 23 . 선충류 환경에서 식품의 존재는 에탄올 회수 반응을 평가하는 데에도 사용되었습니다 24 . 이 실험에서 웜을 다양한 농도의 에탄올에서 배양 한 다음 한천 플레이트에 놓고 &quot;food-race assay&quot;라고 불리는 음식 패치를 붙였습니다. 식품 패치는 플레이트의 한쪽 가장자리에 놓고 선충은 w음식 소스에서 멀리 떨어진 장소. 에탄올 철수는 웜이 음식물에 도달하는 데 필요한 시간을 측정하여 평가되었습니다. 이 영양 기반 구리 혐오 분석은 시간 경과에 따른 행동 변화를 평가하는 동안 음식과 구리와 같은 추가 환경 변수를 통합하기 위해 식품 경 쟁 분석을 기반으로합니다. 이것은이 일반적으로 C. elegans의 사회 사를 통해 프로토콜을 사용하는 적응이다. 이 프로토콜은 혐오 반응 및 4 시간 동안의 음식 검출을 평가하는 데 사용되었습니다 21 . 음식 박탈 (25)의 30 분 후 웜의 전시 기아 행동 때문에, 우리는 또한 영양 상태에 변화가 환경의 응답에 영향을 미칠 수있는 방법을 평가할 수 있습니다. 이 분석의 조건은 실험 생물체가 시간이 지남에 따라 혐오적인 자극에 대한 반응을 변화시키는 방법을 측정하므로 행동 변화를 다음과 같이 평가합니다.유기체는 굶어 죽은 상태로 나아 간다 (그리고 연장 된 기아의 계속적인 측정). npr-9 (GF) 동물은 음식이나 많은 혐오 단서에 반응하여 행동을 바꾸지 않기 때문에 이러한 행동 적 결손이 기아와 관련하여 지속되는지 확인하려고했습니다. 궁극적으로,이 분석 디자인은 npr-9 (GF) 돌연변이 체를 특이 적으로 평가하기 위해 제형 화되었지만 새로운 균주의 특성을 규명하기 위해 추가로 적용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>M9 용액 [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O를 1 리터로. 사용 전에 오토클레이브로 살균합니다.]</td><td></td><td></td><td>실험실에서 생산</td></tr><tr><td>구리 황산염</td><td>시그마</td><td>C-1297</td><td>물을 사용하여 0.5M 농도로 적절히 현탁시킵니다</td></tr></tbody></table>

에이<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; 영양 상태 기반 구리 혐오 검정

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

생존을 보장하기 위해 유기체는 일관성없는 식량 원천을 확보하면서 부적절한 서식지를 피할 수 있어야합니다. Caenorhabditis elegans 는 다양한 환경 적 자극을 감지하면 운동 패턴을 변경하고 기아 상태에 반응하여 행동 반응을 조절할 수 있습니다. 선충류는 일반적으로 30 분 이상 식량 공급원에서 제거되면 감소 된 혐오 반응을 보입니다. 변화하는 영양 상태에 대한 행동 변화의 관찰은 잘 먹는 상태에서 굶주린 상태로의 전환을 규제하는 메커니즘에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 우리는 혐오 장벽 ( 예 : 구리)을 통과하여 장기간에 걸쳐 음식물에 도달하는 선충류의 능력을 측정하는 분석법을 개발했습니다. 이 프로토콜은 이전의 작업을 바탕으로, 유기체가 a로 이동함에 따라 계속적인 데이터 수집을 허용하는 방식으로 여러 변수를 통합합니다.점점 더 굶주린 상태. 더욱이,이 분석은 선충의 더 큰 집단이 동시에 평가 될 수 있도록 증가 된 표본 크기를 허용한다. 구리를 감지하거나 반응하는 능력에 결함이있는 생물체는 즉시 화학 장벽을 가로 지르는 반면, 야생형 선충은 초기에 쫓겨납니다. 야생형 벌레는 점점 더 굶어 죽어 가면서 장벽을 넘어 식량 공급원에 도달하기 시작합니다. 우리는 식품 감각이나 혐오 화학 물질 검출 등 다양한 환경 신호에 반응 할 수없는 돌연변이 체를 평가하기 위해이 분석법을 고안했습니다. 이 프로토콜을 통해 평가할 때, 결함있는 유기체는 즉시 장벽을 넘었지만 식량 원천을 탐지 할 수 없었습니다. 따라서 이러한 돌연변이 체는 일시적으로 식품 공급원에 도달 함에도 불구하고 화학 장벽을 반복적으로 교차합니다. 이 분석은 혐오감과 기아와 관련된 잠재적 인 경로 결함을 평가하기 위해 웜 집단을 직접 테스트 할 수 있습니다.

우리는 야생형 (N2), npr-9 (tm1652) 및 npr-9 과발현 균주, 즉 npr-9 (GF) (IC836- npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; -1 :: rfp), 기아와 구리 혐오에 대한 반응을 평가했습니다. NPR-9 (GF) 돌연변이는 4 시간 분석 21 위에 구리로 혐오 반응을 시작하지 않지만 야생형 유기체 검출하고 혐오 구리 배리어에 응답 할 수있다. 굶주림 30 분 후에 야생형 (N2) 유기체의 약 50-60 %가 구리 장벽을 넘어 식량 패치에 도달합니다. 2 시간 후 야생형 선충류의 75 %가 식량 공급원에 도달합니다. 분석이 끝날 때까지 100 %의 N2 유기체가 식품 공급원으로 재배치되었습니다. 대조적으로, 대다수의 npr-9 (GF) 유기체는 음식에 반응하여 locomo...

여기에서 우리는 구리 혐오 행동의 변화와 일반적인 음식 공급원을 찾아내는 능력을 평가하기 위해 고안된 Caenorhabditis elegans 특이 적 검정법을 제시합니다. 유기체가 잘 먹는 것에서 굶주린 영양 상태로 진행되기 때문입니다.

에이<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 영양 상태 기반 구리 혐오 검정

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

이 영양 상태 기반 구리 회피 검정의 전반적인 목표는 4시간 동안 불쾌한 화학 물질과 음식 원천에 반응하는 선충을 평가하는 것입니다. 이를 통해 영양 상태를 동시에 평가할 수 있습니다. 이 방법은 굶주림 조건에서도 운동 패턴과 불쾌한 화학 물질에 대한 반응을 조절하지 못하는 돌연변이를 식별함으로써 행동 신경 과학 분야에 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 장기간에 걸쳐 수행될 수 있어 4시간 동안 선충이 점점 더 굶주리게 되는 과정에서 영양 상태 분석이 가능하다는 것입니다. 검정을 시작하기 24시간 전에 각 흐름당 10마리의 L4 단계 선충을 골라 실험 생물체를 준비합니다. 이렇게 하면 시험 시 생물체가 어린 성체인지 확인할 수 있습니다. 검사할 각 돌연변이 또는 대조군 선충에 대해 10마리의 L4를 골라 넣습니다.L4 생물체는 24시간 동안 표준 아가르 판에 OP50 E.Coli를 접종한 표준 방법으로 유지합니다. 검정 24시간 전에 덧칠된 선충 성장 배지 또는 NGM 판의 바닥면에 자른 판의 바깥쪽 가장자리를 따라 자를 만들기 위해 자와 두꺼운 영구 마커를 사용합니다. 판의 각 가장자리에서 등거리에 중간 장벽을 표시합니다.구리 장벽의 한쪽 측면에만 50마이크로리터의 OP50 E.Coli를 접종하여 균일한 잔디밭을 만듭니다. 판 바닥면에 표시된 선을 사용하여 박테리아가 구리 용액에 닿지 않도록 합니다. 구리 용액이 판 가장자리를 따라 늘어서 중간 장벽을 형성하고, 박테리아를 옮겨 구리 용액이 음식 원천에 닿지 않도록 합니다.OP50 E.Coli가 없는 두 번째 판 세트를 표시하여 음의 대조군으로 사용합니다. 박테리아가 건조되도록 하고, 37도 섭씨에서 밤새 판을 배양합니다. 선충을 37도 섭씨의 인큐베이터로 옮길 때 박테리아 패치가 교란되지 않도록 합니다.과도한 교란은 음식 패치의 위치나 모양을 변경할 수 있습니다. 밤새 배양 후 인큐베이터에서 판을 제거하고, 판 바닥면에 표시된 선을 가이드로 사용하여 아가르의 가장자리에 갓 준비된 0.5 몰러 구리(II)황산염 용액 100마이크로리터를 피펫팅하여 외부 구리 장벽을 만듭니다. 구리(II)황산염 용액 25마이크로리터를 피펫팅하여 중간 장벽을 만듭니다.구리(II)황산염 용액이 박테리아 패치에 닿지 않도록 하고, 구리 용액이 판에 건조되도록 합니다. 전달 후 5분마다 실험실 티슈로 용액을 가볍게 담백하여 판 가장자리 근처에 건조 여부를 확인합니다. 검정 직전에 실험 생물체를 박테리아 없는 아가르 판으로 옮기고, 네마토드가 과잉 박테리아를 제거하기 위해 1분 동안 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다.다음으로, 24시간 전에 옮겨진 어린 성체와 함께 판에 1밀리리터의 M9를 피펫팅하여 선충을 미세원심분리관으로 세척합니다. 3,000 x G의 속도로 1분 동안 선충을 원심분리합니다. 선충은 관 바닥에 펠렛을 형성해야 합니다.벌레 펠렛을 교란하지 않고 M9 용액을 흡입합니다. 벌레 펠렛에 1밀리리터의 M9 용액을 추가합니다. 튜브를 뒤집어 벌레를 용액과 섞습니다.처음에 과잉 박테리아가 벌레와 함께 옮겨진 경우, 총 5회 반복합니다. 마지막 세척 후, 슈퍼내탄트를 100마이크로리터의 M9 용액과 벌레 펠렛이 남을 때까지 흡입합니다. 세척이 완료

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기에 단단한 판 기반식이 제한을 수행하는 프로토콜을...

솔리드 플레이트 기반식이 제한에 Caenorhabditis 엘레간스</em

이 동영상은 급성 독성 치료법을 테스트하거나 독성 상태에 대한 내성을 위해 유전적 균주를 테스트하는 단기 생존 분석을 소개합니다. 예제 프로토콜은 파라콰트(PQ)에 의해 유발된 산화 스트레스에 저항하는 기생충의 능력을 테스트하는 생존 분석의 예를 보여줍니다.

C. 예쁜꼬마선충 생존 분석: 단기 독성 테스트

이 비디오는 선충 C. elegans의 화학주성을 소개하고 황산구리에 대한 화학주성 혐오를 테스트하는 샘플 프로토콜을 보여줍니다.

C. 예쁜꼬마선충 Chemotaxis Assay: 웜에서 Chemosensation을 테스트하는 방법

단백질 항상성, 스트레스 및 노화 사이의 관계를 연구하기 위해 유전적으로 다루기 쉬운 후생동물인 Caenorhabditis elegans를 모델 시스템으로 사용하여 단백질 기능 장애, 세포 내 단백질 국소화 및 유기체, 세포 및 단백질 수준에서의 단백질 안정성을 추적하여 단백질 접힘의 변화를 모니터링했습니다.

사용 예쁜 꼬마 선충 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

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의 로코 속도에 에탄올의 효과를 측정하는 분석<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

C. elegans는 산화 스트레스 저항성과 관련된 신호 전달 경로를 연구하기 위한 매력적인 모델 유기체입니다. 여기에서는 96개의 웰 플레이트에서 여러 산화제를 사용하여 액상에서 C. elegans 동물의 산화 스트레스 저항성을 측정하는 프로토콜을 제공합니다.

의 산화 스트레스 저항을 측정<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 96 웰 마이크로 타이 터 플레이트에

우리는 인구 기반 분석에서 가용성 화합물에 대한 선충류 인 Caenorhabditis elegans 의 선호도를 자동 분석 할 수있는 행동 기록 설정 및 프로토콜을 제시합니다. 이 기사에서는 비헤이비어 챔버의 구성, 동작 분석 프로토콜 및 비디오 분석 소프트웨어 사용에 대해 설명합니다.

선충 집단에 기반한 화학 감응도 선호 분석의 자동화 된 분석

양적 방법 확인 하 고 자동으로 꼬마 선 충의 phenotypic 프로 파일링 분석 하 여 화학 물질의 급성 독성 예측 개발 되었습니다. 이 프로토콜 384-잘 접시에 화학 물질과 웜 치료, 비디오, 캡처 및 독물학 관련된 고기를 계량 하는 방법을 설명 합니다.

꼬마 선 충 의 프로 파일링 Phenotypic 자동화 하 여 화학 독성의 예측에 대 한 높은 처리량 분석 결과

여기서, 우리는 선충 C. 예쁜꼬마선충에서 세포 단백질 독성 스트레스 반응을 형광 전사 기의 활성화를 측정하고 생리적 스트레스에 대한 감수성을 측정하여 특성화한다.

C. Elegans의 생리적 스트레스 반응 측정

여기에서 우리는 평생 생리학적 매개변수 추적 및 형광 정량화를 위해 고체 배지에서 분리된 개별 선충을 배양하는 프로토콜을 제시합니다. 이 배양 시스템에는 동물이 도망가는 것을 방지하기 위해 단일 벌레 우물 주위에 팔미트산 장벽이 포함되어 있어 병원성 박테리아 및 화학적 스트레스 요인을 포함한 혐오적인 개입을 사용할 수 있습니다.

Longitudinal Fluorescence Monitoring and Averseive Interventions를 위한 고체 배지에서 개별 Caenorhabditis elegans 의 장기 배양

이 프로토콜은 액체 배양에서 박테리아의 청소율을 측정하여 Caenorhabditis elegans 섭식 속도를 정량화하는 분석을 설명합니다.

예쁜꼬마선충( Caenorhabditis elegans )의 음식 섭취량을 세균 청소율 측정으로 정량화

학습하세요 Caenorhabditis elegans 영양 상태 기반 구리 혐오 검정법으로 행동 신경과학 연구에서 기아 조건에서의 행동 변화와 돌연변이체 식별 방법을 배우세요.

에이

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