July 17th, 2017
여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.
이 방사형 물 트레드 미로 프로토콜의 전반적인 목표는 수영을 필요로 하지 않는 마우스 중심의 인지 작업을 사용하여 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억을 테스트하는 것입니다. 이 방법은 운동 결핍 및/또는 동기 부여 부족으로 인해 Morris Water Maze와 같은 수영 기반 인지 테스트 프로토콜이 비현실적인 마우스 모델의 인지 테스트를 테스트하는 데 특히 유용할 수 있습니다. 이 방법은 생쥐의 외상성 뇌 손상에 대한 통제된 피질 영향 모델에서 그룹 차이와 인지에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 수영 기반 테스트에서 성능이 좋지 않은 것으로 알려진 노화 및 형질전환 마우스 모델의 인지를 측정하는 데에도 유용할 수 있습니다.
모든 시험일에 다음 준비 단계를 수행합니다. 먼저, 쥐가 집 우리에 있는 동안 최소 30분 동안 실험실에 적응할 수 있도록 합니다. 둥근 미로는 내벽을 따라 시각적 단서를 제공합니다.
9개의 서로 다른 출구 구멍 중 하나에 위치한 이동식 탈출 상자입니다. 생쥐가 적응하는 동안 70% 에탄올 스프레이를 사용하여 출구와 상자를 소독합니다. 다음으로, 약 1인치의 차가운 물로 미로를 채웁니다.
시험 사이에 수온을 일정하게 유지하는 것은 매우 중요합니다. 따라서 정확하게 측정하고 필요에 따라 조정하십시오. 이제 9개의 출구 구멍 중 하나에 탈출 상자를 배치합니다.
상자를 따뜻하게 유지하기 위해 열원을 사용하고 이상적으로는 가열 패드를 사용하는 것이 좋습니다. 또한 상자를 빛으로부터 밀봉하십시오. 탈출 상자는 항상 어둡고 따뜻하며 비교적 냄새가 없어야 합니다.
광원도 신호일 가능성이 높으므로 시도 사이에 위치를 변경하지 마십시오. 꼬리를 잡고 케이지에서 테스트 마우스를 부드럽게 제거하고 장치 중앙에 놓습니다. 그런 다음 마우스가 출구를 찾는 데 걸리는 시간을 즉시 측정하기 시작합니다.
쥐가 종결 구멍에 들어갔다가 20초 후에 자발적으로 미로에 다시 들어가지 않으면 시험을 중단하지 마십시오. 대신, 손으로 마우스를 미로 중앙으로 다시 안내하고 마우스가 시험을 완료하도록 합니다. 3분 후에도 마우스가 미로를 벗어나지 않으면 시도를 실패로 점수를 매기고 시간을 3분으로 기록합니다.
그런 다음 손으로 가장 곧은 길을 따라 출구까지 동물을 조심스럽게 안내하십시오. 탈출 상자에 들어가면 마우스를 1분 동안 그대로 두십시오. 그런 다음 미로가 재설정되는 동안 홈 케이지로 다시 옮깁니다.
시도 사이에 탈출 상자를 철저히 소독하고 70% 에탄올 스프레이로 출구를 제거하여 마우스가 올바른 탈출 경로를 찾기 위해 오래된 공장 신호를 사용하지 않도록 합니다. 이것은 매우 빠르게 수행 할 수 있습니다. 이제 동일한 마우스에서 시도를 두 번 더 반복하여 총 3회 연속 시도합니다.
모든 테스트는 마우스당 3번의 시험으로 구성됩니다. 그 이상도 그 이하도 아닙니다. 소독하는 것 외에도 미로를 배수하고 다른 마우스를 테스트하는 사이에 물을 새로 고칩니다.
수온을 섭씨 12도에서 14도 사이로 유지하십시오. 얼음 용기나 더 차가운 뜨거운 물을 사용하여 수돗물 온도를 이 범위로 조정하십시오. 테스트를 하는 날과 사이에는 미로와 미로를 둘러싼 공간의 시각적 신호가 일관되게 유지되는지 확인하는 것이 중요합니다.
완전한 테스트 체제에는 5일 연속 테스트가 포함되며 모두 동일한 방식으로 실행됩니다. 다섯째 날은 기억 유지의 척도로 간주됩니다. 6일째에서 11일 사이에 검사를 수행하지 않은 경우, 12일째 되는 날의 검사를 사용하여 장기 기억을 측정할 수 있습니다.
방사형 물 미로는 통제된 피질 충격, 유발된 외상성 뇌 손상 또는 가짜 손상을 받은 쥐의 부상 의존성, 공간 기억 결핍을 조사하는 데 사용되었습니다. TBI 수술은 텍스트 프로토콜과 2014년 Romin, Gao 및 Chen의 JoVE 기사에 자세히 설명되어 있습니다. 간단히 말해서, 부상은 3mm 볼록 팁과 함께 솔레노이드에 의한 피질 충격을 사용하여 생성되었습니다.
가짜는 수술을 받았지만 장치에 의해 영향을 받았습니다. 수술 후 35일이 지난 후, 설명된 검사 요법이 수행되었습니다. 모든 쥐는 미로를 탈출하려는 욕구에 대한 기준 테스트를 통과했습니다.
그래서 모두가 분석에 포함되었습니다. 결과는 TBI 마우스와 가짜 대조군 간에 명확한 차이를 보여줍니다. 탈출 잠복기는 훈련 첫날과 기억력 테스트를 한 두 날 모두 부상당한 쥐의 경우 훨씬 더 길었습니다.
따라서 설명된 TBI는 동물의 학습 능력에 영향을 미쳤습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 공간 인지에 대한 마우스 특정 테스트를 사용하여 인지 테스트를 올바르게 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행되면 동물 한 마리당 15분 이내에 완료할 수 있습니다.
이 절차를 시도하는 동안 시각적 신호의 위치와 수온이 모든 시도에서 일관되게 유지되어야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.
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이 기사는 뇌 외상 모델을 가진 마우스의 공간 기억을 평가하기 위한 수영을 포함하지 않는 마우스 특이적 인지 테스트 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 운동 결핍이나 동기 부여가 낮은 마우스에서 인지 능력을 평가하는 데 특히 유용하며, 전통적인 수영 기반 테스트가 비실용적인 경우에 적합합니다.
Assessing spatial memory in mouse models of traumatic brain injury is critical for target validation and mechanistic de-risking in neurotherapeutic development. The Radial Water Tread maze provides a mouse-specific, non-swimming cognitive assay that enables reliable detection of injury-induced cognitive deficits, supporting early discovery decisions. This approach improves predictive confidence by overcoming limitations of swimming-based tests in models with motor impairments or low motivation.
The Radial Water Tread maze fits within the discovery continuum from target validation through preclinical efficacy testing, particularly for neuroscience programs targeting cognitive endpoints in TBI.