Name: 방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: 학습하세요 외상성 뇌 손상 마우스 모델에서 방사형 워터 트레드 미로를 이용한 비수영 기반 공간 기억 평가 방법을. 운동 장애가 있는 마우스의 인지 기능 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 Translational Health Sciences 시험 프로젝트 보조금 기회 (UL1TR000423), 워싱턴 대학 인력 개발 및 장애 센터, 워싱턴 대학 동물 행동 핵심 및 뇌 이미징 코어에서 지원되었습니다. 우리는 Warren Ladiges 박사가 여기에 제시된 원래의 Radial Water Tread 미로 설계 및 프로토콜의 개발 및 보급에서 자신의 역할에 대해 인정하고자합니다. 이 프로젝트에 도움을 준 Toby Cole에게도 감사드립니다.

모든 절차와 동물 취급은 국립 보건원 (National Institutes of Health)과 워싱톤 동물 보호 및 사용위원회 (The University of Washington Animal Care and Use Committee)가 발행 한 동물 관리 지침에 따라 수행되었습니다. 1. 수술 <ol><li> 무의식 때까지 유도 상자에 5 % isoflurane에서 마우스를 마취. 호흡 속도의 감소와 발가락 핀치에 따른 후퇴 반사의 부재로 마취를 확인하십시오. </li><li> 수술을 통해 2-2.5 %의 코 콘을 통해 마취를 유지하십시오. 마우스가 의식을 잃지 않도록 외과 수술 중 호흡률을 모니터링하십시오. </li><li> 마우스를 가열 패드에 놓고 귀마개를 사용하여 정위 장치에 마우스를 놓고 머리가 단단하고 평평한 지 확인하십시오. </li><li> 제모 크림을 사용하여 두피에서 모발을 제거하십시오. 식염수로 두피를 완전히 헹굽니다. </li><li> 교대 요오드와 70 % 에탄올 세척으로 수술 부위를 닦으십시오. </li><li> 행정관두피에서 Lidocaine과 Bupivacaine (1 mg / kg)을 피하 주사 하였다. </li><li> 외과 용 가위로 종아리 중앙선 절개를하고 피부를 수축시켜 두개골을 드러내십시오. </li><li> 5 mm 트라 파인 톱을 사용하여 좌측 frontoparietal cortex 위에 craniotomy를 시행하여 bregma 뒤 2.5 mm와 정중선 2.5 mm의 중심점을 얻습니다. 조심스럽게 뼈의 원을 제거하여 뇌를 노출시킵니다. </li><li> 임팩터 장치를 6 m / s 및 200 ms 드웰 시간으로 설정하십시오. </li><li> 3 mm 볼록 충격 팁이 브레그마 뒤 2.5 mm 및 정중선에서 2.55 mm 떨어진 지점에서 뇌 표면에 살짝 닿을 때까지 임팩터 장치를 배치하십시오. 충격 팁을 후퇴시키고 1 mm (충격 깊이) 낮추십시오. 준비가되면 장치를 발사하여 원하는 효과를냅니다. </li><li> 조직 접착제로 derma에 cemented 멸균 폴리 프로필렌 디스크로 craniotomy을 커버하고, 봉합 절개를 닫힙니다. </li><li> 마취에서 마우스를 제거하고 Bupr의 IP 주입(0.5 mg / kg). </li><li> 마우스를 열 패드로 따뜻하게하여 깨끗한 케이지에서 회복시킵니다. 마우스는 다음 24 시간 동안 통증이나 고통의 징후를 모니터링해야합니다. 참고 : 위장 대조군은 1.8-1.9 단계가 생략 된 위와 동일한 치료를 받아야합니다. </li></ol> 2. 방사형 워터 트레드 미로 건설 <ol><li> 1-1 / 2 인치 ABS DWV SPG x SJ 트랩 어댑터를 수용 할 수있을만큼 큰 32 개의 출구 아울렛 구멍을 32 인치 직경 아연 도금 강철 통의 둘레에 등 간격으로 배치하십시오. 이 배출구 구멍을 욕조 바닥에서 대략 2-1 / 4 인치 가운데에 놓습니다. </li><li> 각 출구 구멍에 1-1 / 2 인치 ABS DWV SPG x SJ 트랩 어댑터를 끼 우고 포함 된 링 너트로 고정하십시오. </li><li> 고무 마개를 사용하면 9 개의 캡 중 8 개를 장치 외부에서 배출 할 수 있습니다. 마지막으로 끝나지 않은 출구가 탈출 경로 역할을합니다. 어떤 탈출구가 탈출구로 지정되었는지는 중요하지 않습니다. </li><li> 90 ° ABS 부착엘보우를 나머지 출구의 바깥 쪽 끝에 붙이십시오. 90 ° 벤드는 시험 대상이 미로 내부에서 올바른 탈출 경로를 시각적으로 결정하는 것을 방지합니다. </li><li> 위생 처리가 가능한 약 30cm x 15cm x 15cm 크기의 불투명 한 상자에서 이스케이프 상자를 만듭니다. 90 ° ABS 엘보우를 수용 할 수있을만큼 큰 바닥 바로 위의 상자 측면에 구멍을 뚫습니다. </li><li> 탈출 박스를 90 ° ABS 엘보의 종단에 부착하십시오. </li><li> 바닥 표면 위의 이스케이프 상자 (1 인치 미만)를 약간 올립니다. 이렇게하면 전기 가열 패드 또는 기타 가열 원을위한 충분한 공간을 이스케이프 상자 아래에 둘 수 있습니다. </li><li> 최소한 5 가지의 독특한 시각적 단서를 인쇄하고 라미네이트하십시오. 장치 내부에서 쉽게 식별 할 수있는 단순하고 고 대비 인 이미지를 사용하십시오. 흑백 클립 아트 모양 (삼각형, 사각형, 원형)을 사용하는 것이 좋습니다. </li><li> 자석을 사용하여 시각적 단서를기구. 단서는 장치의 둘레를 중심으로 대략 동일한 거리만큼 떨어져야합니다. </li></ol> 3. 레이디 얼 워터 트레드 미로 프로토콜 참고 : 물 미로 테스트는 수술 부위가 치유 된 후에 만 ​​시작해야합니다 (수술 후 약 1 주일). <ol><li> 테스트 준비. <ol><li> 시험 시작 전 최소 30 분 동안 마우스를 시험 실에 익숙하게하십시오. </li><li> 70 % 에탄올 스프레이를 사용하여 장치를 살균하십시오. </li><li> 약 1 인치 (12-14 ° C)의 차가운 물로 장치를 채 웁니다. </li><li> 전기 가열 패드 또는 기타 열원을 탈출구 상자 바로 밑에 놓습니다. 테스트 기간 동안 도망 상자를 어둡고 따뜻하게 유지하십시오. </li><li> 장치 위에 밝은 광원을 배치하십시오. 참고 : 장치 자체에서 동물을 조사 할 때 볼 수있는 램프를 사용하는 경우 램프가 동일한 위치에 놓 이도록주의하십시오매일 육성. 램프 자체는 마우스가 이스케이프 상자를 찾는 데 사용하는 또 다른 시각적 단서를 나타낼 수 있으며 매일 마우스를 대폭 이동하면 결과가 복잡해질 수 있습니다. </li></ol></li><li> 테스트 프로토콜 <ol><li> 마우스를 케이지에서 부드럽게 꼬리 부분을 제거하고 장치의 중앙에 놓습니다. </li><li> 동물이 장비에 들어가 자마자 타이밍을 시작하십시오. </li><li> 동물이 올바른 출구를 발견하고 이스케이프 상자를 찾거나 입력했으면 타이밍을 멈추고 정확한 경로를 찾는 데 필요한 초 수를 기록하십시오. </li><li> 동물이 종결 구멍에 오르려고 시도하고 10 초 후에 자연스럽게 미로를 다시 입력하지 않으면 동물을 손으로 미로의 중심으로 다시 유도하십시오. </li><li> 동물이 3 분 (180 초) 내에 탈출구 상자로의 올바른 경로를 찾지 못하면 재판을 실패로 점수를 매기고 180 초로 기록하십시오. 동물을 올바른 경로로 조심스럽게 인도하십시오. </li><li> 허용마우스를 탈출 상자에 넣고 1 분 동안 시험 삼아 휴식을 취하십시오. </li><li> 1 분 휴식이 완료되면 탈출 상자에서 동물을 제거하고 홈 케이지로 돌아갑니다. </li><li> 철저히 탈출 상자를 위생 처리하고 마우스가 후각 신호를 사용하여 올바른 탈출 경로를 찾지 못하도록 70 % 에탄올 스프레이로 배출합니다. 이 단계는 몇 초가 걸리지 않아야합니다. </li><li> 다음 재판을 위해 마우스를 미로로 돌립니다. </li><li> 마우스가 총 3 회의 시도를 완료하고 탈출구 상자에 3 번 위치하거나 유도 될 때까지 단계 3.2.1-3.2.9를 반복하십시오. </li><li> 마지막 1 분 휴식 후 마우스를 홈 케이지로 가져갑니다. </li><li> 테스트 과정에서 온도가 일정하게 유지되도록 동물의 배수관을 배수하고 교체하십시오. </li><li> 테스트 할 각 마우스에 대해 3.2.1-3.2.12 단계를 반복하십시오. </li><li> 다음날, 준비 단계 3.2.1-3.2.5를 반복하십시오. 시각적 단서가 남아 있도록 특별한주의를 기울이십시오.테스트 일 사이의 일관된 위치에. </li><li> 위의 매일 테스트 프로토콜을 사용하여 동물을 하루 4 일 동안 3 번 (훈련 기간) 테스트하고, 5 일째의 메모리 보존을위한 마지막 3 가지 시도 테스트를 사용하여 동물을 테스트하십시오. 여섯 번째 세 가지 시험 (장기 기억 유지)은 일 12 일에 주어질 수 있습니다. </li><li> 5 일에서 12 일 사이에 테스트를 수행하지 마십시오. </li></ol></li><li> 분석 <ol><li> 마우스가 2 일 동안 180 초 이내에 미로를 완료하지 못하면 ( 즉, 총 6 번의 시도가 모두 180 초로 기록됨), 마우스가 테스트 조건에 의해 동기 부여가 불충분하다고 간주하고 분석에서 제거하십시오. </li><li> 해당 일에 대한 3 회의 일일 시험을 평균하여 시험 날짜별로 각 과목에 대한 미로를 완료하는 평균 대기 시간을 계산합니다. </li><li> 다섯 번째 날 테스트와 장기간 메모리 테스트 날짜에 그룹을 비교하기 위해 표준 t- 테스트를 사용하여 메모리 보존의 그룹 차이를 얻습니다. m두 그룹보다 더 많은 양을 비교하고 있다면, 얻은 중요성에 대해 후속 조치를 취하는 적절한 사후 분석 (예 : Tukey &#39;s test)이 뒤따른 일원 분산 분석을 사용해야합니다. </li><li> 반복 된 분산 분석을 통해 수집 기간 (1-4 일)에 그룹 차이를 얻습니다. </li></ol></li></ol>

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여기에 제시된 RWT 미로 프로토콜은 CCI 유도 TBI 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하며, MWM 및 Barnes 원형 미로의 대안으로 실현 가능한 마우스 중심의 솔루션입니다. 여기에보고 된 결과는 TBI 마우스 모델에서 RWT 미로만을 사용하는 것으로 나타 났지만,이 장치는 MWM을 사용하여 만든 스트레스 유발 불응 법으로 인한 스트레스 유발 불 준수가 비 효과적 인 노화 및 형질 전환 모델에서 성공적으로 사용되었습니다 15 , 17 , 18 , 19 . 비준수 또는 운동 부족이 잠재적 인 연구 관심사 인 다른 마우스 모델도이인지 과제로부터 이익을 얻을 수 있습니다. 앞에서 논의한 설계상의 이점 외에도 RWT 미로의 장점 중 하나는 구성...

메모리 손상은 외상성 뇌 손상 (TBI) 1, 2 다음 환자에 의해보고 된 가장 흔한 증상 중입니다. 그러므로 TBI의 동물 모델에서의 유사한 기억 상실의 정확한 확인과 평가는이 상태와 그 관리에 대한 우리의 이해에 필수적입니다. 여기서는 Radial Water Tread (RWT) 미로를 사용하여 TBI의 마우스 모델에서 공간 메모리를 테스트하기위한 프로토콜을 제시합니다. 이 장치는 이전에 통제 된 피질 충격 (CCI) 유발 TBI 3 의 마우스 모델에서인지 적 결손을 평가하는 것으로 나타 났으며, 쥐가 검증 한 수영 기반의인지 검사 대안이 될 수 있습니다. 트랜스 제닉 마우스 모델의 다양성과 유용성이 증대됨에 따라 과학 연구 4 에서 쥐를 이용한 마우스 사용이 최근 증가했다. 이러한 변화에도 불구하고 연구자들은 행동 주의적원래 설계되고 쥐 사용을 위해 검증 된인지 작업. 현재 마우스의인지 기능을 평가하기 위해 사용되는 가장 일반적인 시험은 모리스 물 미로 (MWM) 및 반스 원형 미로는, 구체적으로는 래트 5,도 6에서 발견 본능적 동작을 활용할 수 있도록 설계되었다. 이 두 종 4 사이에 존재하는 유전 neuroethological,인지의 차이를 고려하면, 놀랍지 생쥐 이러한 작업 7, 8에 지속적으로 업종 지수 상승률. 시험 능력의 종에 따른 차이는 특히 MWM과 같은 수영 기반인지 시험에 관한 것이다. 쥐와 쥐 모두 수영에 능숙한 반면, 연구자들은 수영에 기반한인지 능력이 9 , 10 , </11 , 12 , 13 . 야생형 동물에서도 쥐가 일반적으로 쥐보다 우월합니다 7 , 8 . 이것은 공간 기억의 종별 차이로 해석 될 수 있지만, 마른 육지 미로를 사용한 유사한 후속 테스트는인지 성능에 종에 따른 차이가 없음을 보여주었습니다 8 . 수영 능력이나 검색 전략의 종에 따른 차이를 포함하여인지와 무관 한 여러 요인이이 발견을 설명 할 수 있습니다. 실제로, MWM 마우스 특정 검색 전략의 요인 분석은 비인 지적 요소 (특히, thigomotaxis과 수동성이 [즉, 부동]) 공간 학습 (14)보다 MWM 성능이 더 중요한 역할을 할 수 있음을 보여준다. 여기에서 우리는 다음을 활용하기 위해 고안된인지 테스트의 사용을 보여줍니다.CCI 유도 된 TBI의 마우스 모델에서 공간 기억 장애를 측정하기 위해 생쥐의 진통 작용 및 수영을 필요로하지 않는 실험. RWT 미로 (도 1 A-B)를 MWM 반스 원형 미로 새로운 하이브리드로 이루어진 것으로되지만, 구체적으로 마우스 (15, 16)에 본능적 thigmotactic 동작을 이용할 수 있도록 설계되었다. 장치는 9 개의 균등하게 이격 된 출구 구멍이 뚫려있는 32 인치 직경의 아연 도금 강철 욕조로 구성됩니다. 구멍은 욕조의 바닥에서 2 ~ 1cm 중심에 있으며 일반적으로 사용 가능한 1-1 / 2 인치 ABS DWV SPG x SJ 트랩 어댑터에 맞게 크기가 지정됩니다. 8 개의 출입구는 바깥 쪽에서 뚜껑을 덮어 고무 마개로 1 인치 깊이까지 눈을 멀게합니다. 아홉 번째는 90 ° 아크릴로 니트릴 부타디엔 스티렌 (ABS) 엘보우로 불투명 한 플라스틱 상자에 연결되어 있으며 테스트 후 마우스를 쉽게 제거 할 수 있습니다. 과정 동안짧은 획득 기간 동안, 마우스는이 이스케이프 상자를 찾기 위해 미로를 감싸는 독특한 시각적 신호를 사용하도록 훈련되었습니다. 시험하는 동안, 미로는 충분히 차가워지는 물 (12-14 ° C)으로 채워지 며, 탈출을 촉진 할만큼 충분히 혐오감을 나타내지 만, 마우스가 수영 할만큼 충분히 깊지는 않습니다. RWT 미로는 MWM에 대한 저비용, 낮은 유지 보수 대안이며, TBI 3의 노화 및 형질 전환 생쥐 15 , 17 , 18 , 19 및 CCI 유도 마우스 모델에서 성공적으로 사용되었습니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 사전 손상 교육을 필요로하지 않는 공간 기억 장애 측정을위한 간단하고 효과적인 방법을 나타내며 연구 실험실의 특정 요구에 맞게 쉽게 수정할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>35 갤런. 핫 딥 스틸 라운드 터브</td><td>홈 디포</td><td>인터넷 #206638142</td><td>필요: 1</td></tr><tr><td>1-1/2 인치. ABS DWV SPG x SJ 트랩 어댑터</td><td>홈 디포</td><td>인터넷 #100344703, 스토어 SKU #188956</td><td>필요: 9</td></tr><tr><td>1-3/4 인치 x 1-7/16 인치. 검은색 고무 스토퍼</td><td>홈 디포</td><td>인터넷 #100114974 스토어 SKU #755844</td><td>필요: 8</td></tr><tr><td>1-1/2 인치. ABS DWV 90도 허브 x 허브 엘보우</td><td>홈 디포</td><td>인터넷 #100346663 스토어 SKU #188603</td><td>필요: 1</td></tr><tr><td>HDX 10 갤런 스토리지 토트</td><td>홈 디포</td><td>인터넷 #202523587 스토어 SKU #258804 스토어 SO SKU #258804</td><td>필요:</td></tr><tr><td>1 임팩트 원 스테레오택시 임팩터 CCI</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463920</td><td>필요:</td></tr><tr><td>1 버니어 스테레오택시 w/ 수동 파인 드라이브 스테레오택시 기기 작은 동물용</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463001</td><td>필요: 1</td></tr></tbody></table>

방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가

Assessing Spatial Memory Impairment in a Mouse Model of Traumatic Brain Injury Using a Radial Water Tread Maze

최근 과학 연구에서 마우스 모델을 사용하는 증가에도 불구하고 연구원들은 원래 의도적으로 설계된 쥐 사용을 위해 검증 된인지 작업을 계속 사용합니다. 공간 기억의 방사형 워터 트레드 (RWT) 미로 테스트 (마우스를 위해 특별히 설계되었으며 수영을 필요로하지 않음)는 이전에 피질 충격 유발 TBI 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 것으로 나타났습니다. 여기,이 작업을위한 상세한 프로토콜이 제시됩니다. RWT 미로는 쥐가 자연적으로 쥐를 잡아 당겨서 장치의 측면을 포옹하는 것을 방지하기위한 자연스러운 경향을 이용합니다 (thigmotaxis). 미로의 벽에는 장치의 바닥 위에 9 개의 탈출구가 있으며, 마우스는 시각적 신호를 사용하여 미로 밖으로 이어지는 탈출 구멍을 찾도록 훈련됩니다. 미로는 차가운 물로 채워져 도망 치기에 충분하지만 쥐가 수영을 할만큼 충분히 깊지는 않습니다. 획득 기간은 네 번의 교육 만 필요합니다.5 일간의 기억력 검사와 12 일째의 장기간 기억력 검사를 실시했다. 여기에보고 된 결과는 RWT 미로가 쥐가 검증 한 수영 기반인지 검사의 대안으로 공간적 평가 TBI 마우스 모델의 기억력 결핍.

RWT 미로 ( 그림 1 )는 통제 된 피질 충격 유발 TBI 또는 가짜 수술 중 하나를 받기 위해 무작위로 할당 된 생쥐의 상해 의존 공간 기억 장애를 조사하기 위해 사용되었습니다. 상해는 3 mm 볼록한 팁과 6 m / s 타격 속도, 1 mm 관통 깊이 및 200 ms 접촉 시간과 같은 손상 매개 변수를 사용하여 솔레노이드 구동 피질 충격을 사용하여 생성되었습니다. 쥐는 수술 후 35 일부터인지 검사를 받았고, 위의 5 일에 4 일간의 훈련 (획득 기간)과 5 일째의 기억력 검사와 12 일째의 장기 기억력 검사를 받았다. 실험 계획안. 그림 2 는 TBI 마우스와 가짜 컨트롤 간의 시간에 따른 미로를 완료하기위한 대기 시간의 명확한 구분을 보여줍니다. 여기에 제시된 데이터의 분석은 TBI 생쥐에 비해 가짜 대조군에서 잠복기가 유의하게 감소되었음을 나타냈다<h...

여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.

Despite the recent increase in use of mouse models in scientific research, researchers continue to use cognitive tasks that were originally designed and ...

본 방사형 수중 트레드 미로(Radial Water Tread Maze) 프로토콜의 전반적인 목표는 수영이 필요하지 않은 마우스 중심의 인지 과제를 사용하여 외상성 뇌 손상 마우스 모델의 공간 기억력을 테스트하는 것입니다. 이 방법은 운동 능력 저하 또는 동기 부여 부족으로 인해 Morris 수중 미로와 같은 수영 기반 인지 테스트 프로토콜을 적용하기 어려운 마우스 모델의 인지 능력을 테스트하는 데 특히 유용할 수 있습니다. 본 방법은 마우스의 외상성 뇌 손상 조절 피질 충격 모델에서 집단 간 차이와 인지 능력을 파악하는 인사이트를 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 수영 기반 테스트에서 성적이 낮은 것으로 알려진 노화 및 형질전환 마우스 모델의 인지 능력을 측정하는 데에도 유용하게 활용될 수 있습니다.모든 테스트일에 다음의 준비 단계를 수행하십시오. 먼저, 마우스가 홈 케이지에 담긴 상태로 테스트실에 최소 30분 동안 적응하도록 합니다. 원형 미로의 내벽을 따라 시각적 단서가 배치되어 있습니다.이동식 탈출 상자를 9개의 서로 다른 출구 구멍 중 하나에 배치합니다. 마우스가 적응하는 동안 70% ethanol 스프레이를 사용하여 출구와 상자를 소독합니다. 다음으로, 미로에 약 1인치 높이의 찬물을 채웁니다.시험 간에 수온을 일정하게 유지하는 것이 매우 중요합니다. 따라서 정확하게 측정하고 필요에 따라 조정하십시오. 이제 탈출 상자를 9개의 출구 구멍 중 하나에 배치하십시오.가열 패드를 사용하는 것이 이상적이며, 가열원을 사용하여 박스를 따뜻하게 유지하십시오. 또한, 박스를 빛으로부터 차단하십시오. 탈출 박스는 항상 어둡고 따뜻하며 냄새가 거의 없는 상태여야 합니다.광원 또한 단서가 될 가능성이 높으므로 시도 간에 위치를 변경하지 마십시오. 테스트용 마우스의 꼬리를 부드럽게 잡아 케이지에서 꺼낸 후, 장치의 중앙에 놓습니다. 그 다음 마우스가 출구를 찾는 데 걸리는 시간을 즉시 측정하기 시작합니다.마우스가 막힌 구멍(terminating hole)으로 들어가 20초 후에도 자발적으로 미로에 다시 진입하지 않는 경우, 실험을 중단하지 마십시오. 대신, 손으로 마우스를 미로 중앙으로 다시 안내하여 마우스가 실험을 완료하도록 하십시오. 3분이 지나도 마우스가 미로를 빠져나오지 못하면, 해당 실험을 실패로 처리하고 기록 시간을 3분으로 기록하십시오.그런 다음 손으로 동물을 조심스럽게 안내하여 출구까지 가장 직선 경로로 이동시킵니다. 탈출 상자에 들어가면 마우스를 그곳에 1분 동안 머물게 합니다. 그 후 미로를 재설정하는 동안 마우스를 원래의 홈 케이지로 옮깁니다.시행 간에는 마우스가 이전의 공장 단서를 이용하여 올바른 탈출 경로를 찾는 것을 방지하기 위해, 70% ethanol 스프레이로 탈출 박스와 출구를 철저히 소독하십시오. 이 작업은 빠르게 수행할 수 있습니다. 이제 동일한 마우스에 대해 시행을 두 번 더 반복하여 총 세 번의 연속적인 시행을 완료하십시오.모든 테스트일은 마우스 한 마리당 3회의 시험으로 구성됩니다. 이 횟수를 정확히 준수해야 합니다. 또한, 소독 외에도 서로 다른 마우스를 테스트하는 사이에 미로의 물을 빼고 새 물로 교체하십시오.수온을 12~14°C 사이로 유지하십시오. 얼음 용기나 더 차가운 온수를 사용하여 수돗물 온도를 이 범위 내로 조정하십시오. 테스트 일자 사이에는 미로 내부와 미로 주변 공간의 시각적 단서들이 일관되게 유지되는지 확인하는 것이 중요합니다.전체 테스트 과정은 모두 동일한 방식으로 진행되는 5일 연속의 테스트 일수로 구성됩니다. 5일째 되는 날은 기억 유지력을 측정하는 기준으로 간주됩니다. 6일째부터 11일째 사이에 별도의 테스트를 수행하지 않는다면, 12일째에 실시하는 테스트를 통해 장기 기억력을 측정할 수 있습니다.방사형 수중 미로를 사용하여 조절된 피질 충격으로 유도된 외상성 뇌손상 또는 가짜 손상을 입은 마우스의 손상 의존적 공간 기억력 결손을 조사하였습니다. TBI 수술은 텍스트 프로토콜과 2014년 Romin, Gao 및 Chen의 JoVE 논문에 자세히 설명되어 있습니다. 요약하자면, 손상은 3 mm 볼록 팁이 장착된 솔레노이드 구동 피질 충격 장치를 사용하여 유도되었습니다.위sham군은 수술을 받았으나 장치의 영향을 받지 않았습니다. 수술 35일 후, 앞서 설명한 테스트 체계를 수행하였습니다. 모든 마우스가 미로를 탈출하려는 의지에 대한 기준 테스트를 통과하였습니다.따라서 모든 개체가 분석에 포함되었습니다. 결과는 TBI 마우스와 가짜 수술 대조군 사이에 뚜렷한 차이가 있음을 보여줍니다. 탈출 잠복기는 훈련 첫째 날과 두 번의 기억 테스트일 모두에서 손상된 마우스의 경우 유의하게 더 길었습니다.따라서, 기술된 TBI는 동물의 학습 능력에 영향을 미쳤습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 마우스 전용 공간 인지 테스트를 사용하여 인지 기능을 적절하게 테스트하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 숙달하면, 적절하게 수행했을 때 동물 한 마리당 15분 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때, 시각적 단서의 위치와 수온이 모든 실험 회차에서 일정하게 유지되어야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

모리스 워터 미로는 hippocampal 종속적인 학습과 기억을 테스트하는 행동 작업입니다. 이것은 널리 설치류 모델에서 신경 생물학, 신경 약리학과 neurocognitive 장애의 연구에 사용되었습니다.

알츠하이머병 모델 마우스에서 학습 및 메모리 적자에 대한 모리스 워터 메이즈 테스트

이 비디오에서는 설치류의 작업 기억을 연구하는 데 사용되는 탐색 작업인 플랫폼 재배치를 사용한 Morris 물 미로 테스트에 대해 설명합니다.

플랫폼 재배치를 통한 물 미로: 작업 기억을 평가하는 방법

팔이 여덟 개인 방사형 물 미로는 피험자가 탈출 플랫폼을 찾기 위해 미로 밖의 신호를 사용하도록 요구하고 지상 기반 방사형 팔 미로 설계에서 관찰된 한계를 해결함으로써 참조 및 작업 기억 성능을 동시에 평가하도록 설계되었습니다.

Using of a Eight-arm Radial Water Maze to assess Working and Reference Memory following Neonatal Brain Injury(신생아 뇌 손상 후 작업 및 참조 기억을 평가하기 위한 8개의 팔 방사형 물 미로 사용)

신규 모델의 병적 알츠하이머 병 (AD)과 입력 조건을 조사하기 위해, 세 가지 동작 태스크 모터 제어,인지 행동 모두를 평가하는 것이 기재되어있다. 이러한 작업은 빔 도보 작업, 실린더 작업 및 모리스 물 미로를 포함한다.

뇌졸중과 알츠하이머 병의 유전자 변형 쥐 모델에서 모터 및 해마 종속 공간 학습 및 참조 메모리 평가

이 프로토콜 기능 학습/메모리 환기가 심장 마비 유발 뇌 허 혈에 평가 하는 수정 된 T-maze의 사용을 설명 합니다.

심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 T-Maze를 활용 하 여

본 명세서에서, 알츠하이머병 모델 마우스의 학습 및 기억 능력을 평가하고 이를 치료하기 위한 수동 침술의 효과를 평가하기 위한 모리스 수질 미로 시험을 수행하는 프로토콜이 기재되어 있다.

모리스 워터 미로를 이용한 알츠하이머 병 마우스 모델의 학습 및 기억 능력 분석

외상성 뇌 손상 (TBI) 일반적으로 메모리 손상과 관련 된. 여기서는 메트릭 작업을 통해 TBI 후 공간 작업 메모리를 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 메트릭 테스트는 TBI 후 공간 작업 메모리 장애를 연구하는 유용한 도구입니다.

외상성 뇌 손상 다음 성인 쥐에서 공간 작업 메모리를 평가 하기 위한 메트릭 테스트

여기에서는 급성 및 아급성 단계의 행동 징후와 관련하여 인간 mTBI와 현저한 유사성을 나타내는 폐쇄형 머리 경증 외상성 뇌 손상(mTBI) 쥐 모델과 검증을 제시합니다.

폐쇄 머리 경미한 외상성 손상의 쥐 모델 및 그 검증

이 프로토콜은 폐쇄성 두부 손상(CHI) 방법을 통해 유도된 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상(rmTBI)의 수정된 마우스 모델을 제시합니다. 이 접근법은 두개골 창과 유체 타악기를 사용하여 수막 노출로 인해 일반적으로 발생하는 염증을 줄이고 설치류의 rmTBI 모델링에서 재현성 및 정확도를 향상시킵니다.

얇아진 두개골 창과 유체 타악기를 통합한 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상의 수정된 마우스 모델

설치류에 대한 대부분의 행동 실험은 원래 쥐를 위해 고안되었습니다. 쥐와 생쥐의 행동 차이로 인해 때때로 생쥐에 대한 수정이 필요합니다. 우리는 생쥐의 공간 작업 기억을 테스트하여 작업 기억 작업 중 스트레스를 최소화하는 방법을 제시합니다.

반자동 8팔 방사형 미로에서 마우스를 위한 식욕을 유발하는 공간 작업 기억 작업, 미로에서 두려운 기억 연관성 감소

학습하세요 외상성 뇌 손상 마우스 모델에서 방사형 워터 트레드 미로를 이용한 비수영 기반 공간 기억 평가 방법을. 운동 장애가 있는 마우스의 인지 기능 연구에 활용할 수 있습니다.

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