Name: 조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 배우세요 항진균 식물 디펜신이 Fusarium graminearum 균사체에 내재화되고 세포 소기관에 국소화되는 과정을 공초점 현미경 실시간 세포 이미징으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 항진균 작용 기전 연구에 활용됩니다.

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우리 박사 R. 하 워드 베 르 그, 도널드 댄 포트 식물 과학 센터, 그의 지도에 통합 현미경 시설의 감독 감사 하 고 도움이 confocal 현미경 검사 법. 저자는 선언에 충돌의 관심 있다.

1. 라벨 Defensins Fluorophores와의
<ol>
	<li>살아있는 세포 내부에 항균 성 속성으로 이해 및 지역화 defensin의 최소 효과가 fluorophore를 선택 합니다. 참고: 최적의 fluorophore 선택 특정 실험 목적에 따라 달라 집니다. 스펙트럼 및 화학 속성, photostability, 크기와는 fluorophore의 충전도 고려해 야 합니다.</li>
	<li>라벨 라벨 키트 상업용 공급 업체에서 제공 하는 적절 한 펩 티 드를 사용 하 여 선택한 fluorophore와 defensin. 또는, 화학적 fluorophore 표시 defensins 음성 합성. 이 연구에서는 DyLight550와 MtDef5 defensin 라벨 상업 라벨을 사용 하 여 제조 업체의 프로토콜 및 tetramethyl rhodamine (TAMRA)에 따르면 키트-화학적으로 상업적으로 합성 되었다 레이블 MtDef4 defensin. 참고: 것이 좋습니다는 fluorophore에 최소 효과 보장 하기 위해 펩 티 드의 N 또는 C 맨끝 잔류물을 연결할 수 있기 때문에 화학적 합성된 fluorophore 태그 펩 티 드 (특히에 대 한 짧은 펩 티 드 아미노산 50 이하로) 사용할 수는 항균 성 활동입니다. 3 개 이상의 이황화 채권 긴 펩 티 드의 종합 도전 이다. 이 경우에 펩 티 드 적합 한 상용 펩 티 드 라벨 키트를 사용 하 여 최적의 fluorophore와 함께 표시 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>레이블이 defensin의 생체 외에서 항균 성 활동을 테스트 하 고 조사를 곰 팡이 대 한 최소 억제 농도 (MIC)을 결정. 참고:이 연구에서 DyLight550 MtDef5 및 TMR MtDef4 마이크 Neurospora crassa Fusarium graminearum에 대 한 결정 되었다.</li>
</ol>
2. 곰 팡이 문화 및 성장 매체
<ol>
	<li>경사 관 보 글의 한 천 매체21 를 포함 하 고 5 일 동안 빛에서 실 온에서 품 어 N. crassa 주식 문화에서 conidia를 전송 합니다.</li>
	<li>5 일에 대 한 완벽 한 중간 (CM)22 28 º C에서를 포함 하는 접시에 F. graminearum PH-1 변형 문화. Conidia의 생산에 대 한 접종 F. graminearum PH 1의 5 일 오래 된 문화 4 (10 m m 직경) 플러그 carboxymethyl 셀 루 로스 (CMC) 매체 (15 g carboxymethyl 셀 루 로스, 효 모 추출 물, 0.5 g MgSO4.7 H2O, 1 g NH 1g의 50 mL에 4 아니3, 고 1 g KH2포4) 180 rpm 회전 통에 28 º C에서 4-7 일에 대 한 문화.</li>
</ol>
3. 준비의 Conidial 서 스 펜 션
<ol>
	<li>F. graminearum conidial 서 스 펜 션
	<ol>
		<li>소용돌이 F. graminearum 액체 문화 및 수집 conidia 2 mL microcentrifuge 관으로 여과 재료 (예: Miracloth)의 2 개의 층을 통해 1.5 mL 곰 팡이 문화를 필터링 하 여. 2 분 동안 microcentrifuge에 g 속도 x 13,226에서 conidial 정지 원심</li>
		<li>상쾌한, 삭제 하 고 펠 릿을 세척 살 균 물의 1 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>원심 2 분 삭제에 대 한 microcentrifuge에 g 속도 x 13,226에서 conidial 정지는 상쾌한 고 2 X SFM (합성 균 미디어)23의 1 mL에 펠 릿을 resuspend.</li>
		<li>Conidia는 가벼운 현미경 hemocytometer를 사용 하 여 계산 합니다.</li>
		<li>2 X SFM 함께 105 conidia/ml conidial 서 스 펜 션을 조정 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>N. crassa conidial 서 스 펜 션
	<ol>
		<li>적은 양의 성장 문화 (5 일 이전) N. crassa 보 글의 액체 매체의 2 개 mL를 포함 하는 microcentrifuge 관을 접종 루프를 사용 하 여 전송 합니다.</li>
		<li>소용돌이 conidial 정지 하 고 새로운 microcentrifuge 관으로 여과 소재를 통해 필터.</li>
		<li>원심 2 분 삭제에 대 한 microcentrifuge에서 최대 속도로 conidial 정지는 상쾌한 고 보 글의 액체 매체의 1 mL에 conidial 펠 릿 resuspend.</li>
		<li>Conidia는 가벼운 현미경 hemocytometer를 사용 하 여 계산 합니다.</li>
		<li>보 글의 액체 매체와 105 conidia/ml conidial 서 스 펜 션을 조정 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 샘플 준비와 Confocal 현미경 검사 법
<ol>
	<li>MtDef4 곰 팡이 세포로 defensin의 subcellular 지 방화
	<ol>
		<li>각 conidial 서 스 펜 션 (105 conidia/mL)의 50 µ L 35 m m 유리 하단 microwell 요리 10 m m microwell에 플라스틱. Conidia의 관찰, 직접 다음 단계로 또는 germlings 준비, N. crassa F. graminearum 의 피 펫 50 µ L 35mm 문화 요리에 conidia 진행이 고 실 온에서 3-6 h에 대 한 발 아 하 게.</li>
		<li>각 microwell 접시를 마이크에 붙일 레이블 defensin의 50 µ L을 추가 하 고 2.5 h에 대 한 품 어. 마이크는 fluorophore 표시 defensins 여기 사용 (1.3 단계)의 N. crassa 및 F. graminearum 3 µ M 이며 N. crassa 및 F. graminearum TMR-MtDef4의 마이크는 1 µ M 및 12 µ M, 각각.</li>
		<li>막 선택의 2 µ L 염색 FM4-64를 추가 (최종 농도: 5 µ M) 문화에 요리 하 고 30 분 동안 품 어 이미징 confocal 현미경에 즉시 탑재.</li>
		<li>화이트 빛 레이저 (WLL)을 선택 합니다. 두 개의 레이저 소스 488 nm을 사용 하 여 550 nm 각각 TMR MtDef4 그리고 FM4-64 염료를 흥분 시키기 위해. 580-700 nm에서 TMR MtDef4의 형광을 검출 하 고 690-800 nm FM4-64 염료 검출. 참고: 어두운 방에 있는 confocal 현미경 검사 법을 수행 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>MtDef5 defensin의 국제화의 시간 경과 영상
	<ol>
		<li>N. crassa F. graminearum conidial 정지 (105 conidia/mL)의 50 µ L 35 m m 유리 하단 microwell 요리 10 m m microwell로 플라스틱. 10 m m microwell 코팅 이며 하단에 제 1.5 커버 유리를 있다. Conidia의 관찰에 대 한 직접 다음 단계로 진행 합니다. Germlings의 관찰, 현미경 검사 법으로 진행 하기 전에 실 온에서 3-6 h conidia를 품 어.</li>
		<li>WLL을 켭니다. 550 레이저 라인 선택 fluorophore 표시 defensins 여기 사용 (1.3 단계) 그리고 FM4-64 1.00% 강도의 자극을 활성화 하 고 해당 감지기 nm. fluorophore 표시 defensins 여기 사용 (1.3 단계) 560-600 nm에서 검색 되었습니다 그리고 FM4-64dye 690-800 nm에서 검색 되었습니다. 참고: 높은 레이저 강도 라이브 곰 팡이 세포에 손상을 일으킬 수 있습니다 라이브 셀 이미징에 대 한 낮은 레이저 강도 사용 합니다.</li>
		<li>현미경에 microwell 접시를 탑재 합니다. 100 x로 전환 후 처음 10 x 목표를 사용 하 여 셀 찾기 / 1.44 높은 확대에 대 한 석유 목표. 참고: 스캔 모드를 설정 합니다 xyzt (Z-스택 및 시간 경과 모드의 조합), Z 위치, 줌, 이미지 캡처, 등의 주파수.</li></ol></li></ol>전에 다음 단계로 하는 절차
		<li>각 microwell 접시, 3 µ M의 마이크와 선택적 막 염료 FM4-64 (최종 농도 5 µ M)의 2 µ L에는 fluorophore 표시 defensins 여기 사용 (1.3 단계)의 50 µ L을 추가 하 고 시간 경과 영상 시작. 증발을 방지 하기 위해 microwell 요리에 젖은 필터 종이의 작은 조각을 놓으십시오. 이미지 캡처의 주파수는 3 분 30 s 그리고 총 기간 2 h 30 분 이었다. 참고: 추가 defensin 고 fluorophore 현미경에 장착 microwell 요리 관심 영역 defocus 수 있습니다 후. 따라서, 추가 defensin fluorophore는 microwell를, 후 관심 영역 필요가 refocused 수 이미지 수집 시간이 지연 될 수 있습니다.</li>
		<li>모든 confocal 이미징 confocal 현미경을 사용 하 고 어두운 방에 실 온에서 현미경을 수행.</li>

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</ol>

저자는 공개 없다.

이 연구에 붙일 레이블된 항진균 defensins 사용 하 여 신뢰할 수 있는 라이브 셀 이미징 방법론 곰 팡이 세포에 이러한 펩 티이 드의 국제화의 속도 론을 공부 하 고 그들의 subcellular 목표를 결정 하는 설명 했다. 이 방법은 일시적으로 그리고 공간 defensins와 곰 팡이 세포 사이 상호 작용의 역동성을 시각화 하는 강력한 도구입니다.
다양 한 방법은 국제화 식물 defensins 곰 팡이 세포에서의 세포내 지역화를 공부 하 고 사용 되었습니다. 이러한 방법에서 defensin 취급 세포는 일반적으로 고정 하 고 immunolocalization, 전자 현미경, 또는 x 선 단층 촬영15,,2425에 대 한 처리. 또한, 이러한 기술의 대부분 특정 시간에 보다 실시간으로 같은 살아있는 세포의 ...

식물 미생물 식물 병원 체1에 대 한 방어에 대 한 정교한 타고 난 면역 체계를 진화 했다. 그들은 수많은 유전자 인코딩 호스트 방어 펩 putative 항균 활동2익스프레스. 실제로, 많은 이러한 펩 티이 드의 항균 활동 생체 외에서3표시합니다. Defensins 식물 왕국4호스트 방어 펩 티 드의 가장 큰 그룹 중 구성 됩니다. 이 시스테인-부자, 양이온 펩 티 드 곰 팡이 대 한 강력한 성장 억제 활동 전시 및 micromolar 농도 및 이러한 병원 균5,6에 대 한 방어의 첫 번째 라인 중 하나에서 oomycete 병원 체. 그들의 강력한 항진균 활동 때문에 defensins agribiotechnological 저항 하는 질병 작물을 생성 하기 위해 응용 프로그램에 악용 될 수 있습니다. 여러 식물 defensins의 제정 overexpression 유전자 변형 작물6온실 및 필드 테스트에 질병 저항을 향상 시키기 위해 표시 되었습니다. 그것은 완전히 작물 보호를 위한 효과적인 도구로 서 자신의 잠재력을 활용 하기 위해서는 이러한 항진균 펩 티 드의 행동 (MOA)의 메커니즘을 해명 하는 것이 중요. 그러나, 이러한 식물 defensins MOA 제대로 이해 하 고. 현재 증거 그들이 다른 MOA5,6,,78전시 제안 합니다. 일부 defensins extracellularly 버섯에 행동 하 고 특정 세포 벽/플라즈마 막 주민 sphingolipids 대상, 막 무결성 고 세포 독성 경로9,,1011활성화 됩니다. 그러나 최근에,, 곰 팡이 세포로 이동 하는 항진균 defensins 발견된12,,1314있다. 일부 이러한 defensins 바인딩할 막 상주 생리 인지질, oligomeric 단지를 형성 하 고 플라즈마 막15,,1617permeabilize. 따라서, 식물 defensins의 MOA의 몇 가지 측면 해명 되어 있다. 그러나, 식물 defensins 가능성이의 MOA 아직 식별 및 포괄적인 모델에 통합 이벤트의 복잡 한 세트를 포함 한다. 특히, 이러한 펩 티이 드의 셀룰러 목표의 우리의 이해에 큰 간격이 남아 있습니다.
진보와 함께 최근 현미경 검사 법 기술 및 새로운 형광 프로브 개발, 라이브 세포 이미징 기술은 지금 자주 사용 된다 항균 성 펩 티 드 (암페어)의 모아 공부 하. 이러한 기술을 보완 형태에 항진균 펩타이드의 효과 분석 하는 주로 고용 immunolocalization, 전자 현미경, 원자 힘 현미경 또는 x 선 단층 촬영18등 널리 사용 되는 방법 및 세포 벽 무결성, 원형질 막 permeabilization로 셀 성장/분기 패턴 변경의 연구를 포함 하 여 고 죽이 곰 팡이 세포의 성장. 그럼에도 불구 하 고, 이러한 연구는 특정 시간 시점에서 셀 defensin 도전 하 응답 그들의 동적 변화를 모니터링 하는 같은 셀에 이미징 시간 경과 수행 하는 대신 펩 티 드와 치료 후 이미징에 국한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 라이브 셀 이미징 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 함께에서 붙일 레이블된 펩 티 드의 사용은 앰프-미생물 상호 작용의 역동성의 실시간 시각화를 활성화 하 고. 둘 다 자연스럽 게 정화 하 고 화학적으로 합성된 항진균 펩 티 드 형광 라벨 태그 될 수 있습니다 (예를 들어, DyLight, rhodamine, BODIPY, 또는 알 렉 사 Fluor 기반 염료) 직접 세포와의 상호 작용 하는 동안 시간 경과 의해 관찰 하 고 라이브 셀 이미지입니다. 이러한 펩 티 드를 표시의 사용은 크게 모드 항목, subcellular 지 방화, 세포내 매매, 및 살아있는 곰 팡이 세포 내 항진균 작업의 사이트를 포함 하 여 그들의 MOA의 다양 한 측면의 우리의 이해를 증가 18.
최근, 여러 연구 공장 defensins 포함 하는 다양 한 항진균 펩 티 드는 살고 곰 팡이 세포12,14,,1920내 면 나타났습니다. 이러한 defensins 가능성이의 MOA 세포내 목표와 상호 작용을 포함 한다. 우리 최근 두 ascomycete 버섯, Neurospora crassa 과 Fusarium graminearum에 MtDef4 defensin 식물의 항진균 액션을 보고 있다. MtDef4 곰 팡이 셀 항목 및이 균14subcellular 지 방화에 대 한 다른 경로 사용 하 여 표시 했다. 화학적으로 사용이 연구 합성 tetramethyl rhodamine (TAMRA)-중요 한 형광 염료 (막 선택적 염료, FM4-64; 막 permeant 염료, SYTOX 그린 셀 죽음 기자 염료, 요오드 화물 propidium)와 함께에서 MtDef4를 표시 하 고 신진 대사 억제제입니다. 이러한 분석의 MtDef4, 세포내 수송의 그것의 기계 장치 및 그것의 subcellular 대상14의 국제화 활동을 보여주었다.
여기, confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 라이브 셀 이미징에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 프로토콜 공장 defensin 곰 팡이 상호 작용, 특히 공부를 중요 한 형광 염료, 전 좌의 경로와 defensins 곰 팡이 세포에서의 세포내 표적 조합에 붙일 레이블된 펩 티 드를 이용 한다.

<table><tbody><tr><td>FM4-64 Dye</td><td>Life Technologies</td><td>T13320</td><td></td></tr><tr><td>DyLight 550 항체 라벨링 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>84530</td><td></td></tr><tr><td>유리 바닥 마이크로웰 접시</td><td>매트 TeK</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td></td></tr><tr><td>Mira 천</td><td>EMD Millipore Corp</td><td>475855-1R</td><td></td></tr><tr><td>SP8-X 컨포칼 현미경</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ 소프트웨어</td><td>이미지 분석을 위한</td> <td>FiJi</td><td></td></tr><tr><td>Imaris 소프트웨어</td><td>Bitplane</td><td></td><td>이미지 분석을 위해</td></tr></tbody></table>

조사 항목의 모드와 항진균 공장 defensins의 subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

작은 시스테인-부자 defensins 모든 식물에 호스트 방어 펩 티 드의 가장 큰 그룹 중 하나입니다. 많은 식물 defensins 곰 팡이 병원 균의 넓 스펙트럼에 대 한 강력한 생체 외에서 항진균 성 활동을 전시 하 고 따라서 유전자 변형 작물에 항진균 성 대리인으로 사용 될 가능성이 있다. 질병 제어를 위한 식물 defensins의 잠재력을 활용 하기 위해 그들의 행동 (MOA)의 메커니즘을 명료 하 게 결정적 이다. 고급 현미경 검사 법 기술의 도래와 함께 라이브 셀 이미징 식물 defensins의 항진균 MOA의 역학을 이해 하기 위한 강력한 도구가 되고있다. 여기, confocal 현미경 검사 법 기반 라이브 세포 이미징 방법 중요 한 형광 염료와 함께에서 두 붙일 레이블된 공장 defensins (MtDef4 및 MtDef5)를 사용 하 여 설명 합니다. 이 기술은 실시간 시각화 및 곰 팡이 세포에 MtDef4 및 MtDef5 국제화의 동적 이벤트의 분석을 수 있습니다. 중요 한 것은,이 분석 결과 다양 한 국제화 활동, 항목의 모드와 이러한 펩 티이 드의 subcellular 지 방화를 포함 하 여 정보를 생성 합니다. 다른 셀 생물 학적 도구를 이러한 방법 역학과 이러한 펩 티이 드의 MOA의 복잡성에 대 한 중요 한 통찰력 제공. 이러한 도구는 또한 다른 버섯에 대 한 이러한 펩 티이 드의 MOA 비교 하 사용할 수 있습니다.

라이브 셀 이미징 추적 하 고 국제화 및 두 defensins, MtDef4 및 MtDef5, 개자리속 truncatula;에서 subcellular 지 방화 비교 실시 되었다 버섯 모양 세포. TMR MtDef4 MtDef5 Dylight550으로 표시 했습니다 동안 합성 화학적으로 되었다 (Dylight550-MtDef5). Conidia 막 선택적 염료 FM4-64와 함께에서 어느 defensin 함께 알을 품을 했다. 그림 1 TMR MtDef4가 다른 밀매 경로 N. crassa F. graminearum에 비해 보여줍니다. N. crassa, FM4-64는 defensin와 공동 지역화 하지 않습니다 하지만 오히려 얼룩는 defensin 압수 하는 그들의 세포 막. F. graminearum, 다른 한편으로, TMR-MtDef4...

식물 defensins 병원 균에 대 한 식물 방어에 중요 한 역할을 재생. 대 한 항진균 요원, 액션 (MOA)의 그들의 모드를 이해로 이러한 항진균 펩 티 드의 효과적인 사용이 중요 합니다. 여기, 라이브 세포 이미징 방법 공부 이러한 펩 티이 드의 MOA의 중요 한 측면을 설명 합니다.

조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

이 살아있는 세포 이미징 방법의 전반적인 목표는 진균 세포 내에서 항진균 식물 디펜신(defensin)의 작용 기전의 핵심적인 측면을 연구하는 것입니다. 고급 공초점 현미경 기술의 등장으로, 살아있는 세포 이미징은 항진균 식물 디펜신의 작용 방식을 연구하는 강력한 도구가 되었습니다. 이러한 기술을 활용하여, 본 연구에서는 항진균 식물 디펜신의 작용 방식을 이해하는 데 있어 핵심적인 질문에 답하는 데 도움이 되는 방법을 제시합니다.본 연구의 초점은 이러한 펩타이드가 진균 세포 내로 어떻게 내입되는지, 그리고 이러한 펩타이드가 세포 소기관에 어떻게 국소화되거나 세포질 내에서 어떻게 확산되는지를 밝히는 것입니다. Fusarium graminearum PH-1 균주의 분생포자 현탁액을 만들기 위해, 먼저 완전 배지가 포함된 플레이트에서 해당 균주를 배양합니다. 이를 28 °C에서 5일 동안 배양합니다.분생포자를 생성하기 위해, 5일 된 배양물에서 지름 10mm 플러그 4개를 50mL의 carboxymethyl cellulose 배지에 접종합니다. 이 플러그들을 180rpm으로 설정된 회전 진탕기에서 28°C로 4~7일 동안 배양합니다. 배양액이 붉은색을 띠면 분생포자가 형성된 것입니다.분산액 상태로 분생포자를 수집하려면, 액체 배양액을 볼텍싱한 후 1 mL를 여과재 두 층을 통해 2 mL 마이크로 원심분리 튜브에 여과합니다. 분산액을 2분 동안 원심분리하고 상층액을 제거합니다. 그 다음, 펠렛을 1 mL의 멸균수로 세척하고 원심분리 과정을 반복합니다.다음으로, 펠렛을 1 mL의 2x SFM에 재현탁합니다. 그런 다음, 혈구계수기를 사용하여 분생포자 수를 측정하고, 현탁액의 밀도를 mL당 100,000개의 분생포자로 조정합니다. Neurospora crassa 분생포자 현탁액을 만들려면, 보관 배양액의 분생포자를 Vogel's 한천 배지가 들어 있는 사면관으로 옮긴 후, 상온의 지속 광원 아래에서 5일 동안 배양합니다.5일 후, 접종 루프를 사용하여 성장 중인 배양액의 소량을 2 mL의 Vogel 액체 배지가 들어 있는 마이크로원심분리 튜브로 옮깁니다. 루프에 묻은 분생포자가 잘 섞이도록 합니다. 그다음, 현탁액을 여과하고 원심분리한 후, 세척 단계 없이 분생포자 펠릿을 Vogel 배지에 다시 현탁합니다.마지막으로, 최종 현탁액의 농도를 ml당 100,000 conidia로 조정합니다. 공초점 현미경 관찰을 위한 발아관

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 형광 Aspergillus 리포터 분생포자를 사용하여 인간 호중구의 항진균 활성을 분석하기 위한 라이브 셀 이미징을 보여줍니다. 처음에는 적색 형광과 자홍색 형광이 모두 호중구 내에서 검출되는 반면, 적색 형광은 시간이 지남에 따라 감소하여 분생포자의 분해를 나타내고 호중구의 항진균 활성을 확인합니다.

1차 인간 면역 세포의 항진균 활성에 대한 실시간 평가

우리는 라이브 세포 영상 현미경에 대한 방법을...

곰팡이 병원체 Phagocytosis의 라이브 셀 비디오 현미경

여기, 우리는 라이브 셀 비디오 현미경과 함께 형광 아스 페르 길 루스 기자의 분생 포자를 이용하여 실시간으로 주요 인간 면역 세포의 항진균 활성을 평가하고 유동 세포 계측법 할 수있는 프로토콜을 설명합니다. 생성 된 데이터는 진균 작용, 식균 작용, 세포 이동 및 진균 성장 억제로 숙주 세포 - 아스 상호 작용에 대한 통찰력을 제공한다.

에 대한 응답으로 인간의 기본 호중구와 단핵구에 의해 항진균 활성의 라이브 영상<em&gt;를했다. 투스</em

형광 단백질 기반 접근 호스트 세포에 박테리아에 의해 은닉 하는 이펙터를 모니터링 하는 도전입니다. 형광 단백질 및 유형 III 분 비 시스템 간의 비 호환성 때문입니다. 여기, 최적화 된 분할 superfolder GFP 시스템 호스트 식물 세포에 박테리아에 의해 은닉 하는 이펙터의 시각화 사용 됩니다.

녹색 형광 단백질 박테리아에서 감염 하는 동안 전달 하는 이펙터를 시각화 하기 위해 시스템을 분하시오

중요한 형광 염료는 현대 곰팡이 세포 생물학에 있는 살아있는 세포 화상 진찰 분석을 위한 필수적인 공구입니다. 이 논문은 필라멘트 균류에서 플라즈마 막 역학, 내분비 / 외신 세포증 및 세포 벽 형태 형성을 추적하기위한 확립되고 덜 알려진 형광 염료의 응용 프로그램에 대해 자세히 설명합니다.

필라멘트 곰팡이의 살아있는 세포 이미징을 위한 막 및 세포벽 선택적 형광 염료의 적용

토양의 불투명도로 인해 구성 미생물 간의 상호 작용은 세포 분해능으로 쉽게 시각화 될 수 없습니다. 여기에서는 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 새로운 기회를 제공하는 두 가지 미세 유체 도구가 제시됩니다. 이 장치는 다재다능하고 사용하기 쉬우므로 세포 수준에서 높은 시공간 제어 및 고해상도 이미징이 가능합니다.

세포 수준에서 곰팡이 - 미생물 상호 작용을 조사하기위한 미세 유체 도구

이 원고는 곰팡이 식물 병원체와의 옥수수 상호 작용에 대한 재현 가능한 세포학적, 생리학적, 분자적 연구를 위해 분리된 옥수수 잎 덮개를 사용하는 최적화된 접종 프로토콜을 자세히 설명합니다. 잎 덮개는 고정되지 않은 조직에서 살아있는 식물과 곰팡이 사이의 세포 상호 작용을 실시간으로 관찰할 수 있도록 합니다.

곰팡이 잎 옥수수 병원체에 의한 감염의 살아있는 세포 이미징을 위한 분리된 옥수수 덮개

Xenopus 배아 상피 조직은 상피 morphogenesis 동안 극성 개발 및 형태의 변화와 같은 세포 행위를 연구하는 이상적인 모델 시스템입니다. 고정 샘플 전통 조직학 점점 라이브 셀 이미징 공촛점에 의해 보완되고있다. 여기 개구리 조직을 분리 및 라이브 세포 공촛점 현미경을 사용하여 라이브 상피 세포 및 cytoskeleton을 시각화하는 방법을 보여줍니다.

라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em

라이브 세포의 저장소로 작동하는 칼슘 항목의 형광 기반의 측정 : 교양 암 세포에서 골격근 섬유에

이 프로토콜은 DNA 손상뿐만 아니라 유사 분열 동안의 현지화에 대한 응답으로 활성화 DNA 이중 가닥 브레이크 신호 단백질을 시각화하는 방법을 설명합니다.

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조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

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