Name: 환자 Glioblastoma 절제술에서 세포 미세 환경의 정량적 면역 조직 화학 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: 배우세요 환자 글리오블라스토마 절제 조직에서 염색 면역조직화학과 ImageJ를 이용한 종양 미세환경 정량 분석 방법을. 이 기법은 복잡한 종양 미세환경 연구에 활용됩니다.

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저자는 Drs. Fahad Bafakih와 Jim Mandell, 면역 조직 화학에 도움을 준 Garrett F. Beeghly, 심장 혈관 연구 센터 Histology Core 및 Biorepository and Tissue Research Facility, University of Virginia의 Biomolecular Analysis Facility에 대한 지원 샘플 수집, 면역 조직 화학 및 영상.

이 프로토콜은 은행 임상 환자 샘플에 일반적 인 것처럼 포르말린 고정 파라핀 임베디드 (FFPE) 샘플의 세포 구성 요소를 식별합니다. 파라핀 삽입은 세포 및 조직 형태의 최적 유지뿐만 아니라 절편의 수명을 연장시킵니다. 이 분석에 사용 된 샘플은 University of Virginia Biorepository and Tissue Research Facility를 통해 확인할 수있었습니다. 환자 샘플은 2010 년과 2013 년 사이에 버지니아 대학에서 종양 절제술을 완료했다 아교 모세포종 (성상 세포종, WHO 등급 IV)의 최종 진단에 따라 신경 병리학에 의해 선정되었으며,이 분석 11 이전에 해제 확인되었다. 1. FFPE 샘플 탈 파라핀 및 재수 화 참고 : 프로토콜의이 부분은 FFPE 샘플에만 해당됩니다. 파라핀 포매 된 샘플은 세포 및 t의 보존 때문에이 분석에 더 유용 할 수 있지만형태학 문제를 해결하기 위해이 분석은 고정 된 섹션에서도 수행 할 수 있습니다. 동결 절편을 사용하는 경우이 부분을 생략하고 직접 발색 면역 조직 화학 법으로 진행할 수 있습니다. <ol><li> 크실렌, 크실렌, 100 % 에탄올, 100 % 에탄올, 95 % 에탄올, 95 % 에탄올, 70 % 에탄올, 탈 이온수, 탈 이온수 각각 5 분 동안 다음 세척을 수행하십시오 </li></ol> 2. 항원 검색 참고 : 프로토콜 의이 부분은 FFPE 샘플의 포르말린 고정하는 동안 형성된 메틸렌 다리를 깨고 항체가 바인딩 할 항원 사이트를 노출하는 데 필요합니다. <ol><li> 증류수 제조사의 권장 사항에 따라 Tris 기반 고 pH 항원 비 차단 용액을 희석하십시오. </li><li> 전자 레인지를 사용하여 열 매개 항원 검색을 수행하십시오. 다른 형태의 열 중재 검색 (예 : 압력솥, 야채 증기선 또는 끓는 물)도 충분합니다. <ol><li> 희석 된 언 마스킹 용액을 밀봉되지 않은 전자 레인지에 첨가한다.용기. 슬라이드에 슬라이드를 넣으십시오. 슬라이드를 전자 레인지에 놓습니다. </li><li> 고출력으로 20 분간 끓입니다. 증발을위한 액체 레벨을 모니터하고 필요에 따라 증류수를 보충하십시오. </li></ol></li><li> 실온에서 1 시간 동안 시료를 냉각시킨다. </li></ol> 3. 염색체 면역 조직 화학 <ol><li> 샘플을 덮는 데 필요한 시약의 양을 최소화하기 위해 소수성 펜으로 조직 샘플의 윤곽을 잡습니다. 참고 : 조직 샘플을 수분 상태로 유지하고 염색 효능에 영향을 미치기 때문에 건조시키지 마십시오. </li><li> 조직 샘플 (일반적으로 약 100 - 200 μL)을 충당 할 수 있도록 충분한 투과성 용액 (TBS-TBS (Tris-buffered saline) + 0.01 % Triton-X)을 피펫에 넣습니다. </li><li> 용액을 제거하고 버리고 3.2 단계를 반복하십시오. </li><li> 블로킹 용액 (2.5 % 말 혈청 + 투과 액)으로 실온에서 샘플을 인큐베이션한다. </li><li> 4 ºC에서 1 차 항체 희석 한 채 밤새차단 용액. 참고 : 여기에 사용 된 모든 1 차 항체는 1 : 200으로 희석 되나 제조업체 권장 사항부터 일련 희석을 사용하여 최적 희석을 결정할 수 있습니다. 이 프로토콜에 사용 된 항체에 대한 자세한 정보는 이전에 출판되었습니다 11 . </li><li> 제조 프로토콜에 따라 일차 항체 호스트 동물에 해당하는 양 고추 냉이 퍼 옥시다아제 폴리머 시약을 사용하여 일차 항체를 검색합니다. </li><li> 피펫은 조직 시료를 덮고 5 분 동안 배양하기에 충분한 투과성 솔루션을 제공합니다. </li><li> 용액을 제거하고 버리고 3.7 단계를 반복하십시오. </li><li> 15 분 1X TBS에서 0.3 % H 2 O 2 로 슬라이드를 품어. </li><li> 원하는 염색 강도가 달성 될 때까지 peroxidase diaminobenzidine (DAB) 기질로 시료를 2 ~ 10 분 동안 발색하십시오. </li><li> 헤 마톡 실린 (hematoxylin)과 같은 세포 핵을 확인하기 위해 샘플을 대조 제제 (counterstain)하여 제조사 프로토콜을 따른다. </li><li> 100 %에탄올 및 자일 렌. </li><li> 샘플을 마운팅 미디어로 영구 마운트하십시오. </li></ol> 4. 관심 지역 <ol><li> 밝은 영역 현미경으로 이미지 슬라이드가 고해상도 이미지를 낼 수 있습니다. 참고 : 이미징 셀룰러 구성 요소는 최소 20x 해상도로 사용하십시오. </li><li> 조직 샘플 전체에서 특정 관심 영역으로 카메라를 이동하십시오. </li><li> 이미지를 TIFF 파일로 저장하여 정량화하십시오. </li></ol> 5. 이미지 분석 <ol><li> 이미지 적용 범위의 정량화를 위해 ImageJ에서 이미지를 엽니 다. </li><li> Threshold Color 플러그인을 사용하여 hematoxylin으로 염색 된 핵에서 자주색을 제거합니다. </li><li> 이미지를 8 비트로 변환하십시오. </li><li> 어두운 배경없이 임계 값을 추가하십시오. </li><li> 17 개의 미리로드 된 ImageJ 임계 값 필터 중 하나 ( 예 : MaxEntropy)를 사용하여 이미지를 처리하므로 DAB로 염색 된 부분 만 임계 값에 포함됩니다. 참고 : 최소화 된 최적의 미리로드 된 임계 값 필터를 선택하십시오배경 염색의 포함. 이는 항체의 염색 및 특이성에 달려 있습니다. 각 환자 샘플 내의 모든 기술 복제물에 대해 동일한 임계 값을 사용하십시오. </li><li> 임계 값을 적용하십시오. </li><li> 임계 값 이미지의 백분율을 측정합니다. </li><li> 각 표본의 여러 영역에 대한 평균 영역 범위입니다. </li></ol>

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<li>Placone, A. L., Quiñones-Hinojosa, A., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+astrocytes+in+the+progression+of+brain+cancer%3A+complicating+the+picture+of+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Tumor+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of astrocytes in the progression of brain cancer: complicating the picture of the tumor microenvironment.</a> Tumor Biol. 37 (1), 61-69 (2016).</li>
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</ol>

우리의 방법은 전통적인 chromogenic immunohistochemistry를 사용하여 염색 된 조직 학적 샘플을 분석하는 정량적 접근법입니다. 이 유형의 분석을위한 현재의 방법론은 유사한 염색 프로토콜과 독립적 인 병리학 자의 채점을 포함합니다. 이 방법은 신뢰할 만하다. 그러나 많은 응용에서 종양과 관련된 이질성에 대한 더 나은 이해와 생체 외 연구를위한 종양의 정확한 재현과 같은 세포 구성에 대한보다 정확한 이해가 필요하다. 이 프로토콜은 뇌종양 microenvironment 내 glial 세포의 인구를 정량 분석을위한 간단한 기술을 보여줍니다. 이 기술은 광범위하게 적용 가능하며 유방이나 췌장과 같은 다른 암뿐만 아니라 혈관, 케모카인 등 미세 환경의 많은 다른 구성 요소를 식별하기 위해 확장 될 수 있습니다.더 큰 parenchymal 지역. 또한이 기법을 사용하면 등방성, 클러스터링, 방향 등 복잡한 형태 결과를 셀 크기, 세포 둘레를 평가하는 데 사용할 수 ...

아교 모세포종 (GBM), 가장 일반적인 악성 뇌종양은 주변의 건강한 뇌 실질 1, 2에 기본 종양 부피에서 매우 확산 침공에 의해 특징입니다. 이 확산 침투는 종양을 완전히 절제하는 것을 특히 어렵게 만들고, 치료 후 남아있는 침입 암 세포는 피할 수없는 재발의 가장 흔한 원인입니다 2 , 3 , 4 . 이전에, 우리는 그러나 조금 GBM의 침략에 기여하는 복잡한 메커니즘에 대해 알려진, 확산 신경 교종 세포 침공 (5) 치료 도움이 될 억제 발견했다. 암 주변 종양 미세 환경, 또는 조직은,도 7은 여러 암 6 종양의 진행에 관여한다. 교 모세포종 종양 미세 환경, p관절염은 성상 세포, 미세 아교 세포 및 희소 돌기 아교 세포뿐만 아니라 세포 외 기질, 용해성 인자 및 생물 물리학 적 인자와 같은 다수의 신경교 세포를 구성하는 비교적 특징이 낮고 독특하게 복잡합니다. 실험적으로, 성상 세포 및 미세 아교 세포는 신경 교종의 진행과 침공 8, 9, 10을 증가시키는 것으로,하지만 원래 인간의 뇌의 미세 환경에있는 모든 신경 교세포의 구성을 알 수있다. 우리는 이전에 미세 환경 구성 요소가 glioblastoma microenvironment의 세포 구성 요소를 정량 분석하고 비례 위험 모델 11에 우리의 분석을 통합하여 환자의 생존을 예측할 수 있음을 보여주었습니다. 여기, 우리는 glioblastoma 환자에서 종양 대량 및 종양 절제의 인접 지역 내의 glial 세포의 인구를 식별하기위한 정량 분석 ​​방법을 설명합니다에스. 우리는 각질 세포군에 대한 염색의 비율 적용 범위를 분석하기 위해 염색체 면역 조직 화학을 사용하여 신경 교세포 집단과 ImageJ를 확인했습니다. 커버리지 비율을 평가하면 세포, 특히 암세포와의 상호 작용에 의해 영향을받는 세포의 형태 학적 차이를 측정하기위한 간단한 측정이 가능합니다. 조직 병리학 적 염색을 정량화하기위한 이전의 연구는 항체 기반 면역 조직 화학 염색의 특이성을 이용하지 않는 헤 마톡 실린 (hematoxylin)과 에오신 (eosin) 12 또는 Masson &#39;s trichrome 13 과 같은 표준 염색법을 사용한다. 우리의 방법은 glioblastoma 환자의 종양 절제술에서 glial 집단을 직접 정량화하기 위해 개발되었으며, 복잡한 glioblastoma microenvironment를 밝히기 위해 사용합니다.

<table><tbody><tr><td>Xylene</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3P</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>고pH 항원 마스크 해제 솔루션</td><td>Vector Labs</td><td>H-3301</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Amresco</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>말 세럼</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>안티-ALDH1L1&nbsp;</td><td>아브캠&nbsp;</td><td>ab56777</td><td></td></tr><tr><td>안티 IBA1&nbsp;</td><td>아브캠&nbsp;</td><td>ab5076</td><td></td></tr><tr><td>항희소돌기아교세포 특이적 단백질1&nbsp;</td><td>아브캠&nbsp;</td><td>ab53041</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS 안티 염소</td><td>Vector Labs</td><td>MP-7405</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS 유니버설(안티 마우스/토끼)</td><td>Vector Labs</td><td>MP-7500</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>시그마 Aldrich</td><td>216763</td><td></td></tr><tr><td>ImmPACT DAB 기판</td><td>Vector Labs</td><td>SK-4105</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin counterstain</td><td>ThermoScientific</td><td>72404</td><td></td></tr><tr><td>Histochoice 마운팅 미디어</td><td>Amresco</td><td>H157-475</td><td></td></tr><tr><td>Aperio 스캔스코프</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이미지 스캔스코프</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Super HT PAP 펜</td><td>연구 제품 국제</td><td>195506</td><td></td></tr></tbody></table>

환자 glioblastoma 절제술에서 세포 미세 환경의 정량적 면역 조직 화학

Quantitative Immunohistochemistry of the Cellular Microenvironment in Patient Glioblastoma Resections

종양의 미세 환경에 대한 관심이 증대됨에 따라 가장 치명적이고 가장 침습적 인 뇌암 인 아교 모세포종 환자의 표본에서 미세 환경 성분을 구체적으로 결정하는 방법을 개발하기 시작했습니다. 병이있는 조직을 정확하게 묘사하기 위해 정량적 방법이 유용 할뿐만 아니라 잠재적으로 더 정확한 예후, 진단 및 조직 공학 시스템과 대체물의 개발에 기여할 수 있습니다. 아교 모세포종에서, 소교 세포 및 성상 세포와 같은 신경 교세포는 병리학 자의 등급에 기초하여 불량한 예후와 독립적으로 상관되어왔다. 그러나, 이들 세포 및 다른 교세포 구성 요소의 상태는 정량적으로 잘 기술되어 있지 않다. 이러한 glial 세포를 표시하는 큰 프로세스로 인해 어려울 수 있습니다. 또한 대부분의 조직 학적 분석은 전체 조직 표본에 초점을 맞추거나 종양의 대부 분에만 초점을 맞 춥니 다.매우 이질적인 조직. 여기, 우리는 glioblastoma 환자의 종양 절제술의 종양 대량 및 인접 지역 내의 glial 세포의 인구를 식별하고 양적으로 분석하는 방법을 설명합니다. 우리는 색소 성 면역 조직 화학을 사용하여 환자의 종양 절제술에서 glial 세포 집단을 확인하고 ImageJ는 각 glial 집단에 대한 염색의 비율 범위를 분석했습니다. 이러한 기술로 우리는 신경 교종 종양 미세 환경의 영역에 걸쳐 신경아 교세포를 더 잘 묘사 할 수 있습니다.

이 분석을 위해 우리의 종양 절제술 (주로 종양 벌크와 인접한 부위, 주로 확산 성 침윤 암세포가있는 건강한 조직으로 구성된 두 영역)의 두 관심 영역이 헤 마톡 실린과 에오신 염색 환자에서 신경 병리학자를 협동하여 확인되었습니다 ( 그림 1A , 1B ) 견본. 각 환자 표본 내에서 색소 성 면역 조직 화학을 통해 성상 교세포 ( 그림 1C ), 미 글로리아 ( 그림 1D ) 및 희소 돌기 아교 세포 ( 그림 1E )에 대한 양성 염색이 확인되었다. 이들 개체군은 일차 항체 ALDH1L1, Iba1 및 희소 돌기 아교 세포 특정 단백질 (OSP1)은 각각 11을 사용하여 확인 하였다....

이 프로토콜은 chromogenic immunohistochemistry 및 ImageJ를 사용하여 glioblastoma 환자 절제술에서 종양 microenvironment 구성 요소를 정량적으로 식별하기 위해 개발되었습니다.

환자 Glioblastoma 절제술에서 세포 미세 환경의 정량적 면역 조직 화학

With the growing interest in the tumor microenvironment, we set out to develop a method to specifically determine the microenvironment components within ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 발색 면역조직화학 염색과 Image J를 사용하여 교모세포종 환자 절제 조직 내의 종양 미세환경 구성 성분을 정량적으로 식별하는 것입니다. 이 방법은 이러한 구성 성분들이 환자 샘플에서 어떻게 나타나는지, 그리고 세포의 생리학적으로 유의미한 비율을 어떻게 결정할 수 있는지와 같은 종양 미세환경 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 환자 샘플 분석에 매우 직접적이고 간편하다는 것입니다. 이 기술의 응용 범위는 특성이 충분히 규명되지 않은 복잡한 교모세포종 종양 미세환경을 밝히는 것까지 확장됩니다.일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 조직의 과발색 및 포화를 방지하기 위해 발색 반응 시간을 세밀하게 모니터링해야 하므로 어려움을 겪을 수 있습니다. 동봉된 텍스트 프로토콜에 명시된 세척 과정을 수행하여 프로토콜을 시작하십시오. 제조사의 권장 사항에 따라 Tris 기반 고 pH 항원 마스킹 제거 용액과 증류수를 희석하십시오.희석된 언마스킹 용액(unmasking solution)을 밀폐되지 않은 전자레인지용 용기에 넣고 열 매개 항원 회복(heat mediated antigen retrieval) 단계를 진행하십시오. 슬라이드를 용기에 넣습니다. 그런 다음 슬라이드가 담긴 용기를 전자레인지에 넣으십시오.다음으로, 용기를 고출력에서 20분 동안 가열합니다. 액체 수준의 증발 여부를 모니터링하고, 필요한 경우 증류수를 보충합니다. 샘플을 용액 상태로 실온에서 1시간 동안 식힙니다.시료를 덮는 데 필요한 시약의 양을 최소화하기 위해 소수성 펜으로 조직 시료의 외곽선을 그립니다. 그런 다음, 조직 시료가 잠길 정도로 충분한 양의 투과화 용액(100~200 µL)을 파이펫으로 넣습니다. 해당 용액을 제거하여 버린 후, 조직 시료를 투과화 용액으로 다시 덮어줍니다.블로킹 용액과 함께 시료를 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 그 다음, 블로킹 용액에 희석한 1차 항체와 함께 시료를 4°C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 1차 항체의 숙주 동물에 상응하는 horseradish peroxidase 폴리머 시약을 사용하여 1차 항체를 검출합니다.조직 샘플이 잠길 정도로 충분한 양의 투과화 용액을 주입하고 샘플을 5분 동안 배양합니다. 용액을 제거하여 버린 후, 다시 한번 투과화 용액으로 조직 샘플을 덮어 5분 동안 배양합니다. 슬라이드를 0.3% hydrogen peroxide와 IX TBS에 넣고 15분 동안 배양합니다.원하는 염색 강도가 나타날 때까지 peroxidase diaminobenzidine 또는 dab 기질로 2분에서 10분 동안 시료를 발색시킵니다. 제조사의 프로토콜에 따라 hematoxylin 등을 사용하여 세포핵을 식별하기 위한 대조 염색을 수행합니다. 100% ethanol과 xylene으로 시료를 탈수합니다.마지막으로, 마운팅 매질을 사용하여 샘플을 영구 마운팅합니다. 협력 신경병리학자가 헤마톡실린 및 에오신 염색된 환자 샘플을 통해 종양 절제물 내의 두 가지 관심 영역인 일차 종양 본체(Bulk)와 주로 건강한 조직과 확산 침윤된 암세포로 구성된 인접 영역(Adjacent regions)을 식별하였습니다. 발색 면역조직화학 염색을 통해 각 환자 샘플 내에서 성상교세포, 미세아교세포 및 희소돌기아교세포에 대한 양성 염색을 확인하였습니다.음성 대조군을 위해 1차 항체 없이 염색을 수행했습니다. anti ALDH 1l1 항체의 경우, 세포체와 돌기의 양성 염색이 최적화되면서 배경 잡음이 최소화되는 1:200 희석 배수를 결정하기 전 제조사의 권장 사항에 따라 추가 희석을 진행했습니다. Image J를 사용하여 OSP-1 양성 희소돌기아교세포 염색의 백분율 범위(percent coverage)를 정량화하여 최종적으로 관심 영역 간의 차이를 비교했습니다.이미지에 적절한 임계값이 적용되면, 해당 임계값을 통한 백분율 커버리지를 측정하여 여러 환자 간에 비교할 수 있습니다. 교모세포종(glioblastoma) 또는 GBM 환자 샘플의 인접한 5개 영역과 벌크 영역을 정상 뇌 조직과 함께 oligodendrocyte-specific protein one 또는 OSP1 백분율 커버리지에 대해 비교하였습니다. 염색 기술을 숙달하면, 적절히 수행했을 때 첫째 날에 4시간, 둘째 날에 2시간 내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행하는 동안 조직의 염색 강도와 수화 상태를 면밀히 모니터링하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Núñez, F. J., et al. 파라핀 함유 3D 신경교종 신경구 배양에 대한 면역조직화학에 의한 신경교종의 바이오마커 평가. J. Vis. 특급. (2019).이 비디오는 파라핀이 포함된 뇌종양 신경구에서 종양 바이오마커를 라벨링하기 위한 면역조직화학 기술을 보여줍니다. 신경구 절편은 파라핀 제거 및 재수화 과정을 거친 후 바이오마커 부위를 노출시키는 치료를 받습니다. 그런 다음 1차 및 2차 항체를 적용하여 이러한 바이오마커를 라벨링합니다. 2차 항체는 아비딘 접합 과산화효소(avidin-conjugated peroxidase enzyme)에 결합되어 있으며, 이 효소는 발색 기질을 산화시켜 바이오마커 위치를 나타냅니다. 마지막으로, 현미경 분석을 위해 핵 counterstaining 및 slide preparation이 완료됩니다.

뇌종양 신경구 절편에서 바이오마커의 면역조직화학적 염색

혈청이 없는 신경권 배지에서 해리된 고급 신경종 수술 용 시편을 전파하여 암 줄기 세포 표현형을 가진 세포를 선택한다. 신경구로 성장하지 못하는 표본의 경우 대체 프로토콜이 제안됩니다. 면역 세포화학을 위한 3D 신경구 아키텍처를 유지하기 위한 파라핀 임베딩 기술이 설명된다.

임상적으로 관련동물 모델 및 3D 면역화학에 사용하기 위한 외과 표본에서 고학년 신경교종 세포 배양의 최적화

초기 뇌 종양 미세 환경에 진입 면역 세포의 수와 활성 상태에서 시간에 따른 양적 데이터를 산출 교종 함침 말초 혈액 단핵 세포의 분리 및 유세포 분석을위한 간단한 방법이 여기에서 제시 하였다.

분리 및 신경 교종-침투 말초 혈액 단핵 세포의 유세포 분석

여기 우리가 설립된 피하 종양에서 종양 면역 및 비 면역 microenvironment의 구성 요소를 풍부 하 게 분리 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 종양 면역 침투 및 비 면역 종양 분수는 종양 면역 microenvironment의 포괄적인 특성화를 허용할 수 있는 별도 분석에 대 한 수 있습니다.

농축 및 설립된 피하 Murine 종양에서 종양 면역 및 비 면역 Microenvironments의 특성

여기, 선물이 orthotopic 인간의 기본 뇌 종양을 들고 immunodeficient 마우스에 준비 및 수용자 인간 림프 톨의 stereotaxic 관리에 대 한 프로토콜. 이 연구는 타당성과 세포 immunotherapies intrabrain 전달의 antitumor 효능에 대 한-의 증거-개념을 제공합니다.

정위 적 입양 전송 Orthotopic 인간 세포종 님 Xenografts Murine 모델에서 세포 독성 면역 세포의

Neurospheres 3D 문화로 성장 glioma 생물학을 공부 하는 강력한 도구를 구성 합니다. 여기 선물이 immunohistochemistry 파라핀 포함 통해 glioma neurospheres의 3 차원 구조를 유지 하면서 수행 하는 프로토콜. 이 메서드는 stemness 등 신경 분화 glioma neurosphere 속성의 특성을 수 있습니다.

Immunohistochemistry 파라핀 임베디드 3D Glioma Neurosphere 문화에 의해 Glioma 바이오 마커의 평가

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

단백질체 조절 장애는 확산 침윤성 신경교종의 확산에 중요한 역할을 하지만 몇 가지 관련 단백질은 아직 확인되지 않았습니다. 디지털 공간 처리(DSP)는 침윤성 신경교종의 침습 및 이동에 기여할 수 있는 후보 단백질의 차등 발현을 특성화하기 위한 효율적인 고처리량 접근 방식을 제공합니다.

성인형 미만성 침윤성 신경교종의 미세환경 특성화를 위한 디지털 공간 프로파일링

간질액 흐름을 포함하는 침습적 전면부에서 신경교종 종양 미세환경을 복제하는 방법을 제시합니다. 이 모델은 유체 압력 헤드를 적용할 수 있는 조직 배양 삽입물에 포함된 히알루론산-콜라겐 I 하이드로겔입니다. 침입을 정량화할 수 있으며 세포를 분리하거나 용해할 수 있습니다.

간질 흐름이 있는 침습적 신경교종 미세환경의 광중합 가능한 히알루론산-콜라겐 모델

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 이용해 교모세포종 샘플로부터 충분한 고품질 신생혈관 조직을 성공적으로 준비하여 종양 혈관형성의 정량적 단백질체학 분석을 수행하여, 전통적으로 주로 혈관형성 인자에 초점을 맞춘 연구의 한계를 극복하고 교세포종 혈관신생의 대규모 단백질체학 프로파일을 제공하였습니다.

종양 혈관신생의 정량적 단백질체학 분석을 위한 인간 교모종 조직에서 신생혈관 조직 준비

배우세요 환자 글리오블라스토마 절제 조직에서 염색 면역조직화학과 ImageJ를 이용한 종양 미세환경 정량 분석 방법을. 이 기법은 복잡한 종양 미세환경 연구에 활용됩니다.

환자 Glioblastoma 절제술에서 세포 미세 환경의 정량적 면역 조직 화학

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