Name: 대동맥 반지 공동 문화 분석 결과: Mesenchymal Stromal 세포에 생체 외에서 의 신생 잠재력을 평가 하는 편리한 도구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 4 s
Description: 배우세요 대동맥 반지 공동 문화 분석을 통해 생체 외에서 중간엽 기질 세포의 혈관 신생 잠재력을 정량적으로 평가하는 방법을. 이 기술은 재생 의학 연구에서 세포 치료 후보의 효율성을 분석하는 데 활용됩니다.

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저자는 다음 직원을 감사 하 고 연구 인력: 앙드레 Gauthier 피셔, 매튜 Librach, 타 냐 Barretto, Tharsan Velauthapillai, 그리고 사라 Laronde.

동물 관련 된 모든 연구 실시 하 고 도착 지침 29에 따르면 보고 했다. 모든 연구 기관 연구 윤리 위원회 승인 (REB 수 4276) 수행 했다. 모든 절차는 대학 건강 네트워크 (토론토, 캐나다), 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었다 동물과 모든 동물 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드, 8 번째 판 (준수 인도적인 치료 받은 2011 년 건강의 국가 학회).
 1. 대동맥 반지 분석 결과 설치 <ol><li>분리 쥐 대동맥.
	<ol><li>Euthanize 8-10 주 된 Sprague-Dawley 쥐 CO 2 질을 사용 하 여: 20% 설정 CO 2 챔버 가스 교체 (유량 챔버 볼륨/분 x 0.2 =). Palpating 가슴 여 핀치 반사와 심장 박동의 부재에 의해 확인.</li>
		<li>젖은 70% 에탄올으로 소독된 거 즈를 사용 하 여 가슴 지역에 모피. 소독된 집게와가 위를 사용 하 여 가슴 중간에 절 개 하 고 피부와 근육 레이어를 통해 잘라.</li>
		<li>흉 곽을 노출 되 면 각 측에 흉 곽을 잘라 고 각 측에 흉 골에서 위쪽으로 약 5 mm. 신선한 시신에 있는 동맥에서 예상은 일부 출혈.</li>
		<li>폐 조직과 심장 대동맥을 폭로 해 부 오른쪽으로 밀어. 대동맥은 백색 용기 있는 척추 열에 인접 한 색.</li>
		<li>(대동맥 아치) 후 대동맥을 공략 하 여 수술가 위 집게와 대동맥을 잡고 첫 번째 절 개를 사용 하 여 집게를 사용. 대동맥을 절단, 시 흉 혈액으로 신속 하 게 채울 것입니다, 따라서 그것은 혈액 응고 전에 대동맥을 신속 하 게 작업에 중요 한.</li>
		<li>대동맥 그리고 척추에서 부드럽게 껍질을 아래쪽으로, 대동맥 겸 자 사용. 풀 추가 절 개 없이 있는 동맥 끊을 것 이다. 대동맥은 복 부 구멍에서 두 가지로 나누고 시체에서 대동맥을 잘라 전에 약 10 cm의 조직 및/또는 얻을. 꼬리 방향에 낮은 대동맥의 섹션에 액세스 하는 데 필요한 경우 횡 경 막 밀어. 
		참고: 강렬한 힘 눈물을 일으킬 수 있기 때문에 대동맥을 부드럽게 껍질. 대동맥 눈물 몇 초 동안 혈액 응고를 허용 coagulated 혈액을 제거 하는 종이 타월을 사용 하는 경우 수 있도록 나머지 대동맥의 가시성.</li>
		<li>차가운 행 크의 10 mL 15 mL 튜브에 대동맥을 배치 &#39; s 균형 소금 솔루션 (HBSS) 보충 1% 페니실린/스 (P/S). 얼음에 튜브를 계속 
		참고: 대동맥 조직 얼음에 1-2 시간 지속 될 수 있습니다 하지만 최대한 신속 하 게 처리 하는 것이 좋습니다.</li>
	</ol></li> <li>살 균 biosafety 내각 (BSC)에 대동맥 반지 분석 결과 문화 미디어 준비.
	<li>준비 2% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 1 %gentamicin 및 성장 요인 (재료의 표 참조)으로 보충 내 피 기저 매체 (EBM)의 500 mL를 필터링 하 여과 장치를 사용 하 여 내 피 성장 매체 (EGM) <ol>. 37에 구슬 또는 물 목욕으로 필터링 된 미디어의 50 mL을 배치 ° c.</li>
		<li>다른 여과 장치를 사용 하 여 필터링 100 mL 2 %FBS 1% 보완 하는 EBM의 P/S는 EBM 준비 2 %FBS (EBM-FBS) 4에서 저장 ° c.</li>
	</ol></li> <li>12 음 조직 문화 접시 기저 막 추출 (공학은)를 가진 얼음에 작업 하는 동안 코트.
	<li>장소 (대형 아이스 팩 또는 트레이) 차가운 표면에 12-잘 접시 <ol>. 200 µ L/갓 해 동 공학은 사용 하 우물 피 펫 팁을 냉장 하 고 심지어 코팅 되도록 공학은 소용돌이 추가 합니다. 공학은의 불균일 중 합 방지를 신속 하 게 작업. 
		참고: 전형적인 대동맥 절단 20 대동맥 고리를 생성합니다. 대동맥 반지 분석 실험 사이 가변성에 대 한 계정, 치료 그룹 당 최소한 3 개의 대동맥 반지 분석 실험을 설정 하 고 컨트롤 포함. 소스, 허용 하는 경우 치료 그룹 당 6 링 좋습니다.</li>
		<li>습도 인큐베이터 (95% 상대 습도, 37 ° C, 5% CO 2;이 모든 습도 보육 단계에 적용이 조건)으로 코팅된 판 장소 30 분 장소 1000 µ L 피 펫 팁 다시 단계 1.5.3-20 ° C에. 
		참고: 기저 막 추출 물 재고 농도에서 사용 하는 동안 그것의 일관성 및 강성은 엄격 하 게 제어 중 합 시간. 모든 패 러 랠 및 독립적인 실험에 대 한 정확한 동일한 중 합 시간을 지키는 것을 확인.</li>
	</ol></li> <li>균일 한 반지로 대동맥을 섹션.
	<ol><li>15 mL 튜브에서 대동맥 하 고 신선한 HBSS 보충 1%의 10 mL와 10 cm 접시에 배치 P/s.</li>
		<li>집게의 두 세트를 사용 하 여 신중 하 게 초과 결합 조직, 지방 조직, 그리고 대동맥에 연결 되어 있는 동맥의 나머지 지점에 대 한 메스를 사용 하 여 분리. 이 잔여 조직의 다른 수준에 따라 링 장치 사이 가변성을 감소 시킨다. 어떤 잔여 대동맥 내부에서 혈액 응고 제거.</li>
		<li>는 눈금자 나 눈금을 정확 하 게 1-2 m m 메 마른 메스와 집게를 사용 하 여 대동맥의 넓은 섹션 10 cm 접시 아래 놓습니다. 섹션을 단위 사이 가변성을 줄이기 위해 가능한 정확한 컷.</li>
	</ol></li> <li>공학은에 대동맥 고리 포함. 
	참고: 대동맥 링의 단면 공학은 합 부 화 하기 전에 완료 되지 않으면, 습도 인큐베이터에서 코팅된 접시를 제거 하 고는 중 합 종료 각 잘 하 EBM의 100 µ L를 추가. 정확한 타이밍은 공학은의 오버 합 내 피 네트워크 개발 및 셀 마이그레이션 방해 수 있습니다 중요 합니다. 일단 대동맥 고리 준비가 우물에서는 EBM을 제거 하 고 단계 1.5.2에서에서 계속.
	<ol><li>습도 인큐베이터에서 공학은 코팅 웰 스를 제거 하 고 BSC 돌아갑니다.</li>
		<li>는 신중 하 게 집게와 개별 대동맥 고리를 선택 하 고 각 공학은 코팅 잘 가운데 하나. 나머지 대동맥 반지에 대 한 반복. 
		참고: 대동맥 반지 함께 전송 미디어 보관 해야 합 비리를 방지 하기 위해 최소한의.</li>
		<li>사용 냉각 (-20 ° C) 1000 µ L 피 펫 팁 각 대동맥 고리 위에 공학은의 300 µ L을 추가 하 고 균등 하 게 배포 우물 주위 공학은.</li>
		<li>30 분에 대 한 습도 인큐베이터에 포함 된 대동맥 반지 반환</li>
		<li>습도 인큐베이터에서 포함 된 대동맥 링 플레이트를 제거 하 고 천천히 피펫으로 두어서 EGM (준비 및에서 예 열 단계 1.2.1)의 1000 µ L 문화의 벽에 잘 팁 추가. 
		참고: 직접는 공학은에 미디어를 pipetting 수 polymerized 공학은 고 내 피 네트워크 지속적인 개발을 방해 됩니다. 적절 한 멀티 채널 피 펫을 사용 하 여 사용 가능한 경우.</li>
		<li>24 h, EGM의 1000 µ L을 제거 하 고 준비 단계 1.2.2에서 다시 천천히 잘 문화의 측에 대하여 pipetting EBM FBS의 1000 µ L를 바꿉니다.</li>
	</ol></li> <li>신선한 EBM-FBS (37 ° C)의 500 µ L 모든 48 h. EBM FBS의 500 µ L을 대체 하 여 대동맥 반지 분석 결과 유지 
	참고: 참조 초MSC를 시작 하는 2 기 문화 대동맥 반지 분석 결과 설립으로 같은 날에 확장. 내 피 네트워크 준비가 MSCs 공동 문화에 대 한 준비는 이렇게 하면.</li>
	<li>대동맥 반지 분석 결과 내 피 네트워크 개발에 따라 밝은 분야 현미경 검사 법 사용 (최적의 네트워크 개발에 대 한 참조로 그림 1 참조). 일단 내 피 네트워크 측면은 그림 2와 같이, 대동맥 반지 분석 결과-MSC 공동 문화 (제 3)를 설정으로 진행. 내 피 네트워크 이미징의 자세한 내용은 4.1 단계를 참조 하십시오.</li>
</ol> 2. 조직 문화 <ol><li>조직 문화 미디어의 준비 재고 솔루션.
	<ol><li>문화 FTM HUCPVCs (이전 설립, n &#8805; 각 3 독립 라인) 30과 알파-MEM 10 %FBS 1% 보충에 상용 BMSCs P/s.</li>
		<li>0.2 µ m 기 공 크기 필터 병을 사용 하 여 미디어를 소독.</li>
		<li>준비 미디어 솔루션 4 ° C에서 최대 3 주 동안 저장.</li>
	</ol></li> <li>습도 incubators에 단계 대조 현미경 검사 법에 의해 결정 하는 70-80 %confluency 통행 유지 FTM HUCPVC 및 BMSC 문화. 사용 하 여 적절 한 양의 조직 문화 접시의 크기에 대 한 미디어 사용 (즉, 10 cm 접시에 10 mL). 이러한 문화 조건을 유지 하 고 뿌리고 MSCs를 사용 하 여.</li>
	<li>해리 뿌리고 위한 MSC monolayers 또는 대동맥 반지 분석 결과-MSC 분리 효소 솔루션 (요리 4 mL/10 cm)를 사용 하 여 공동 문화 및 3 분 밝은 분야 현미경 검사 법을 사용 하 여 셀의 확인 분리를 위한 습도 부 화기에서 품 어; 품 어 필요한 경우 추가 1-2 분.</li>
	<li>15 mL 튜브를 5 분에 대 한 400 x g에서 원심 분리기로 해리 셀 전송</li>
	<li>는 상쾌한 셀 펠 렛을 방해 하지 않고 발음 하 고 셀 카운터를 사용 하 여 계산에 대 한 적절 한 배양 (대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화에 대 한 셀 또는 EBM FBS를 뿌리고 대 한 완전 한 알파-MEM 미디어)의 1 mL에 셀 resuspend.</li>
</ol> 3. 대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화 준비 <ol><li>씨앗 10 4 MSCs 각 포함 대동맥 반지 (9000 셀/cm 2 / 12-잘 접시). 가능한, 함 형광 염료와 MSCs 얼룩 중 대동맥 반지 분석 실험의 수에 따라 달라 집니다. 컨트롤 그룹에 대 한 MSCs 없이 대동맥 고리의 적어도 3 개의 우물을 유지 합니다.
	<ol><li>10 5 MSCs/mL EBM FBS 미디어 얼룩, 가능한의 2.5 µ L을 추가, 양도 형광 염료/mL 미디어 (5 µ M) 15 mL 튜브와 30 분에 대 한 습도 인큐베이터에서 부드럽게 혼합 튜브는 인큐베이션을 통해 중간.</li>
		<li>다음에 30 분 부 화, 스테인드 셀에 신선한 EBM FBS의 1 볼륨을 추가 하 고 5 분에 대 한 400 x g에서 회전</li>
		<li>는 상쾌한을 제거 하 고 다시 EBM FBS 미디어의 1 mL에 셀 펠 릿을 중단. 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 MSCs의 성공적인 얼룩 확인.</li>
	</ol></li> <li>습도 인큐베이터에서 대동맥 반지-포함 된 번호판을 제거 하 고 각 우물에서 EBM-FBS의 500 µ L를 제거.</li>
	<li>신중 하 게 고르게 내 피 네트워크 주위 pipetting으로 각 임베디드 대동맥 고리에 EBM FBS의 500 µ L에 10 4 MSCs 씨. 부드럽게 문화 접시를 떨고 하 여 분배를 확인 합니다.
	<ol><li>대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화에 미디어의 총 볼륨 1000 µ L을 추가 EBM FBS 추가.</li>
	</ol></li> <li>형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 시각화 대동맥 반지 분석 결과에 놓여있는지 이라는 MSCs.</li></ol>
 4. 현미경 <ol><li>대동맥 반지 분석 결과/MSC 전에 쥐 내 피 네트워크 이미지를 사용 하 여 밝은 분야 현미경 검사 법은 공동 내 피 네트워크 속성 (예:, 네트워크의 기준선 (0 일) 측정을 위한 문화 길이, 네트워크 루프)입니다. 해당 사분면 내 내 피 네트워크의 더 부분을 대동맥 링에서 잘 당 4 사분면 이미지.
	다음 대동맥 반지 <ol><li>이미지는 대동맥 링 네트워크 분석 결과/MSC 공동 3, 5, 7 일에 문화. 이러한 이미지를 사용 하 여 내 피 네트워크 개발에 MSC 효과 계량.</li>
	</ol></li> <li>형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 이미지 사전 이라는 MSCs 대동맥 반지 분석 결과에.
	<ol><li>다음 24 h 대동맥 반지 분석 결과/MSC의 공동 문화, MSC 추적, 신장 및 내 피 네트워크와 통합 시각화를 형광 현미경 검사 법을 사용 합니다. Colocalization 두 종류의 세포를 관찰 하는 내 피 세포의 밝은 필드 이미지와 MSCs의 형광 이미지를 오버랩.</li>
		<li>이미지 대동맥 링 조직에 인접 개발된 내 피 네트워크 내에서 지역화 된 MSCs 및 새로 개발 원심 대동맥 링 조직 ( 그림 2)에 네트워크 내에서 지역화 된 MSCs.</li>
	</ol></li></ol> 5. Flow Cytometry 및 정량 <ol><li>대동맥 링 내 피 네트워크를 해리 한 전날 녹여 냉동된 dispase에서 4 ° C O/명. 섹션 5.3 cytometry 및 정량에 대 한 동일.</li>
	<li>Dispase의 고 37 ° C 구슬 또는 물 목욕 트립 신 0.5%의 50 mL 50 mL 따뜻한.</li>
	<li>대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화에서 분석에 대 한 셀을 검색합니다.
	대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화의 <ol><li>후 1 주 문화 미디어를 제거 하 고 1 mL의 Phosphate-Buffered 염 분 (PBS) 천천히 하 각 3 분 잘 제거를 추가. 이 세척 두 번 더 반복.</li>
		<li>추가 800 µ L의 사전 각 우물에 dispase를 예 열 하 고 15 분에 대 한 습도 인큐베이터에서 품 어</li>
		<li>습도 인큐베이터에서 플레이트를 제거 하 고 공학은, 헤어 (5-10 x)를 pipetting으로 dispase를 일시 중단 하 고 별도 15 mL 튜브 각의 내용을 전송.</li>
		<li>반복 단계 5.3.3 다시 아니 잔여까지 신선한 미리 데워 진된 dispase 공학은 관찰 된다 문화에 잘. 1 볼륨 PBS 3%와 보충의 추가 dispase을 비활성화 하려면 dispase-세포 현 탁 액을 FBS. 피 펫 팁을 사용 하 여 세포 현 탁 액에 떠 있는 대동맥 고리 제거.</li>
		<li>5 분은 상쾌한 신중 하 게 제거, 15 mL 튜브에 세포 현 탁 액 3 mL을 떠나는 대 한 400 x g에서 셀 정지 회전. 
		참고:은 분명 하 고, 단단한 펠 릿 보이지 않을 수 있습니다 하지만 셀 및 공학은.</li>
		<li>세포 현 탁 액 및 적극적으로 resuspend (5-10 x pipetting으로) 세포를 트립 신 0.5 %prewarmed의 3 mL를 추가합니다. 10 분에 대 한 습도 인큐베이터에서 trypsinized 셀 솔루션을 품 어</li>
		<li>습도 인큐베이터에서 trypsinized 셀 정지를 제거 하 고 추가 3 %FBS resuspend 보충 PBS의 6 mL 몇 팀es입니다. 5 분에 대 한 400 x g에서 셀 정지 스핀</li>
		<li>신중 하 게 튜브에 셀 펠 릿을 떠나 모든 상쾌한, 제거 하 고 1 ml PBS 3% 보충 셀 resuspend 각 관에서 FBS.</li>
		<li>필터링 세포 현 탁 액에서 집계 된 셀 및 잔여 공학은 제거를 70 µ m 셀 스 트레이너를 사용 하 여 1ml 세포 현 탁 액. 셀 카운터를 사용 하 여 셀 서 스 펜 션의 1 mL에 셀.</li>
	</ol></li> <li>Cytometry 셀 준비.
	<li>품 셀 <ol>정지 (3% 보충 200 µ L PBS에서 10 5 셀 FBS) fluorophore 활용 (FITC 또는 APC) 기본 항 체와 (TRA-1-85-CD146, CD31) 농도 = 1시 40분) 4 ° C에서 30 분, 빛 으로부터 보호. 
		참고: cytometry MSCs에 대 한 홍 외, 2013 28 최적화 했다. 최소 10000 셀은 정확한 판독에 필요한.</li>
		<li>2 ml PBS 3 %FBS 원심 분리기 (400 x g, 5 분) 보충의 셀 resuspend 30 분 부 화 다음.</li>
		<li>Cytometry (적어도 1 x 10 4 이벤트)에 의해 분석까지 1 시간 이내 빛 으로부터 보호 하는 4 ° C에서 계속 셀. 제어 전략에 대 한 보충 그림 1을 참조 하십시오. 인간의 MSCs 안티-TRA-1-85 (APC)를 사용 하 여 정렬 (농도: 1시 40분 및 0.5 %FBS에서 / PBS) 및 정량 분석을 위한 세포 세포의 용 해 버퍼의 350 µ L로 셀 정렬. 
		참고: Lysed 세포 수 저장 될-80 ° C에서 미래의 정량 분석에 대 한 최대 3 개월.</li>
	</ol></li> <li>정량 분석에 대 한 셀을 준비.
	<ol><li>열 기반 RNA 격리 키트를 사용 하 여 lysed 세포에서 RNA를 분리 하 고 RNA 농도 품질을 결정.</li>
		<li>100 당 RNA의 최대 5 µ g에서 준비 cDNA µ L 역전사 반응. RNA 수익률이 낮은 경우에 사전 증폭 단계를 수행 (&#60; 10 ng / µ L). 100의 사용 RNA의 ng false 네거티브의 높은 속도에서 발생 합니다. 
		참고: cDNA 템플릿을 저장할 수 있습니다 추가 분석을 위해-20 ° C에서 최대 4 개월.</li>
		<li>정량 유전자 발현에서 변화를 감지 하 신생 식 프로파일러 어레이 사용 하 여 수행 합니다. 반응 (40 주기, 어 닐 링/확장 온도 60 ° C) 당 cDNA의 사용 5 ng. 배 undifferentiated MSC 파생 된 cDNA 샘플에 비해 표현의 변화를 표현 한다. 적절 한 부정적인 컨트롤 (대동맥 반지 인간의 MSCs 없이) 실행.</li>
	</ol></li></ol> 6. 정량화 다음 대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화 네트워크 <ol><li>신생 분석기 플러그인 31 함께 ImageJ 같은 이미징 소프트웨어 다운로드.</li>
	<li>찍은 내 피 네트워크 이미지를 가져오고 소프트웨어를 사용 하 여 열기.</li>
	<li>변환 사용 하는 현미경의 사양에 따라 이미지 비늘.</li>
	<li>직선 도구를 사용 하 여 방사형 네트워크의 성장 측정.</li>
	<li>계산 셀 카운터 도구를 사용 하 여 내 피 네트워크 루프 (루프 4 면으로 계량 한다).</li>
	<li>네트워크 속성의 추가 정량화를 사용 하 여 신생 분석기 플러그인 또는 다른 유사한 플러그인 마스터 세그먼트 분석 대 한 총 세그먼트 길이, 총 네트워크 지역과 연결의 수. 흐리게 마스크 도구를 사용 하 여 대동맥 링 조직 및 거짓 긍정적인 계산을 피하기 위해 빈 공간을 흐림.</li>
	<li>대동맥 반지 분석 결과/MSC 공동 문화에 따라 통계 프로그램 및 그래프 내 피 네트워크 속성에 값을 전송.</li>
</ol>

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닥터 클 리 포드 L. Librach는 특허의 공동 소유자: 격리의 첫 번째 임신 탯 조직에서 파생 된 셀의 사용 방법. 캐나다와 호주에 부여.

성공적인 대동맥 반지 분석 결과 MSC 공동 문화 실험 설정에 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 첫째, 분리 하 고 대동맥을 구분 하는 경우 가장 중요 한 단계는: 1) 대동맥;의 독점적으로 흉부 세그먼트를 취득 2) 신중 하 게 분기 혈관, 결합 및 지방 조직 제거 및; 각 분석 결과 사이 가변성을 제한 하는 대동맥 (~ 1 m m)의 3) 절단도 섹션입니다. 둘째, 공학은으로 대동맥의 성공적인 포함은이 분석 결과 대 한 중요 합니다. 경우는 공학은 완전히 생산 또는 균등 하 게 생산, 대동맥 고리는 공학은에 포함 내 피 돋 아를 시작할 수 없습니다 또는 그들은 불연속 내 피 네트워크를 개발할 수 있습니다. 공학은 합 충분 하지 않으면 분석 정량화에 대 한 신뢰할 수 없습니다. 셋째, 완전 한 요인 농축 내 피 미디어 돋 아 시작 하 대동맥 반지에 대 한 영양을 제공 하는 데 필요한입니다. 일단 대동맥 링 반지 선박 돋 아 시작, 다음 중요 한 곧 나오는 단계 테스트 셀 형식을 포함 한다. 이 위해 MSCs 성공적으로 미리 ...

신생의 복잡 한 프로세스 향상 하 고 기존 맥 관 구조1에서 새로운 선박 개발을 추진 하 여 조직 관류를 유지 합니다. 프로-신생 및 안티-신생 요인에 의해 단단히 규제, 공정한 과정 이다. 어떤 결핍이이 시스템에 부족 한 선박 유지 보수 또는 성장, 심근 질환, 뇌졸중, 신경 장애 등 심각한 허 혈 성 질환을 일으키는 발생할 수 있습니다. 그러나, 과장 된 혈관 개발 조건 암, 염증 성 질환2를 포함 하 여 특징입니다.
유리한 조직 재생을 달성 하기 위해 신생을 제어 하는 것을 목표로 하는 치료를 개발 하는 것은 중요입니다. 광범위 한 전 임상 및 임상 조사에도 불구 하 고 신생 프로 신생 요인과 microRNAs를 사용 하 여 자극 하려고 원하는 결과3,,45달성 못했다. 일시적 효과 대 한 가능한 이유: 신생 단백질 및 핵 산의 한정 된 수의 제한 된 장 수 대상 성장 요인6,7. 수용 성 신생 요소는 신생을 시작에 대 한 필수, 유지 보수 및 맥 관 구조의 기능 세포 유형 pericytes 및 평활 근 세포8을 포함 하 여 지원에 따라 다릅니다. 프로-신생 요법의 분야는 지금 잠재적인 줄기 세포 그리고 조상 세포 원 맥 관 구조, 자동 갱신 또는로 차별화 개발 물리적으로 새로 지 원하는 신생 요소를 로컬로 제공할 수 있습니다 탐험 내 피 같은 셀9,10. 찾는 최적의 신생 세포 유형 이러한 기능적 요구 사항을 충족 하는 기능으로 허 혈 성 조직 재생에 대 한 위대한 약속을 보유 하고있다.
임상으로 잠재적인 세포 기반 치료를 성공적으로 번역 하기 위해 전 임상 연구 하 그들의 효능을 입증 하 고 기본 신생 메커니즘을 강조 해야 합니다. 설립 된 신생 분석 실험의 높은 숫자에도 불구 하 고 필드 "금 표준" 생체 외에서 분석 결과 안정적으로 잠재적인 후보 셀 유형11,12, 의 효능을 평가할 수 있는 부족 13. 대부분 체 외에서 신생 분석 실험 (내 피 확산, 마이그레이션 및 관 형성 분석을 포함 하 여) 일반적으로 내 피 세포의 phenotypical 변화 나 감 별 법으로 셀 또는 화합물의 효과 평가 관 및 네트워크 구조14,15. 이러한 기능은 신생에 대 한 중요 한 동안, "번역" 분석 결과 또한 평가 해야 한다: 1) 확대 또는 pericytes 또는 평활 근 세포, ECM, 지하실 막의 2) 처리를 포함 하 여 지원 세포 유형의 교체 및 3) 기능 microvasculature의 형성을 촉진 하는 효율성. 각 막 분석 결과 및 Matrigel 플러그 분석 결과를 포함 하 여 신생 모델, vivo에서 독특한 vivo에서 microenvironment을 정리 하지만 추적 관리 셀의 어려움에 의해 도전 물리적 상호 작용을 관찰 하. 또한, vivo에서 모델 이종 면역 거부 잠재 수용자 세포 치료 후보16테스트 하는 동안 발생할 수 있습니다. 신생 모델 비보 전 특히 대동맥 반지 분석 결과 제공할 수 있습니다: 1) 쉽게 관찰과 3) ECM 호스트와 인공 공급에서의 염증 성 제외 4) 관 형 구조, 2) 액세서리 지원 셀의 정량화 구성 요소, 및 5) 신속 하 고 저렴 한 설치17,18. 일반적으로, 대동맥 반지 분석 결과 작은 분 비 단백질, 약리학 대리인, 및 유전자 변형 쥐 모델19,,2021의 신생 잠재력을 테스트할 수 있습니다.
MSCs는 주로 그들의 paracrine 중재 효과22,,2324통해 혈관 재생을 위한 유망한 후보자. 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF), Hepatocyte 성장 인자 (HGF)를 포함 한 주요 신생 요인 분 비 MSCs 보였다 인슐린 같은 성장 인자-1 (IGF-1), 기본적인 섬유 아 세포 성장 인자 (bFGF), 및 angiopoeitin-1 (중앙-1)25 ,26. 그러나 MSCs도 검색할 수 있습니다 그리고 집에 허 혈 성 또는 염증 조직, 조사를 받고 아직도, 정확한 메커니즘은. 점점, 문학 가설 대부분 MSCs 혈관 주위 세포에서 발생 하는 공동 pericyte 마커, 표현 그리고 pericytes27처럼 행동 수를 지원 합니다. HUCPVCs는 인간의 탯 줄의 혈관 주위 지역에서 파생 하는 MSCs의 젊은 소스입니다. 그들은 pericyte 같은 속성으로 MSCs의 인구를 대표 하 고 용어와 FTM 탯에서 특징. FTM HUCPVCs CD146 및 높은 증식 및 multilineage 잠재력 NG2 면역 권한 속성을 비롯 한 pericyte 마커의 높은 식 설명 하 고 강력한 paracrine 프로필28을 표시 합니다. FTM HUCPVCs pericyte 같은 속성을 통해 새로운 맥 관 구조의 프로 모션을 통해 손상 된 조직의 재생을 촉진 하는 이상적인 후보자 셀 유형입니다.
신생 잠재력과 인간의 MSCs의 pericyte 같은 속성을 테스트 하려면 신생 분석 실험의 매우 제한 된 수 있으며 사용할 수 있는 긍정적인 angiotropic 마이그레이션 ("추적" 라 함), ECM 처리, 물리의 개발 셀 형식 간의 상호 작용 microvasculature 개발에 양적 데이터를 가져오는 동안, 조사 될 수 있다.
이로써 선물이 대동맥 반지 분석 결과의 새로운 응용 프로그램을 설명 하는 프로토콜. 인간의 MSCs 공동 개발 쥐 파생 대동맥 내 피 네트워크 형성, 성숙, 및 항상성 튜브에 그들의 기여를 평가 하기 위해 경작 했다. 이 버전의 대동맥 반지 분석 결과 평가 능력과 집 신생의 사이트를 수행 하 고 ECM 처리를 중재 pericyte 같은 물리를 수립을 통해 내 피 관 개발을 세포 치료의 힘 상호 작용입니다. 생체 외에서 내 피 네트워크 형성에 MSCs의 그물 효과 측정 하 고 세포 상호 작용을 관찰, 뿐만 아니라 우리는 또한 공동 문화에서 MSCs를 분리 하는 프로토콜 최적화. Cytometry 및 정량 Pcr을 수행 하 여 특성화 MSC 표현 형 및 유전자 식 공동 문화에 따라 변화 가능 하다. 모델 셀 유형으로 우리 ontogenetically 일찍 비교 (태아)와 인간의 MSCs의 늦은 (성인) 소스: FTM HUCPVCs와 인간의 골 수 파생 된 MSCs (BMSC), 대동맥 반지 분석 결과에서 각각. 우리는 신생 재생 응용 프로그램에 대 한 조사를 받고 때 어떤 물리적으로 지 원하는 셀 형식의 신생 잠재력 연구 대동맥 반지 분석 결과 사용할 수 있습니다 제안 합니다.

<table><tbody><tr><td>Alpha-MEM</td><td>Gibco</td><td>12571071</td><td>FTM, HUCPVC 및 BMSC 배양 배지용.</td></tr><tr><td>APC-활용 항 인간 TRA-1-85</td><td>R & D Systems</td><td>FAB3195A</td><td>유세포 분석 및 세포 분류를 위한 인간 특이적 세포 마커</td></tr><tr><td>기저막 추출물(BME)(Matrigel)</td><td>Corning</td><td>354234</td> 대<td>동맥 포매용</td></tr><tr><td>Bullet-kit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>포함: Gentamicin/Amphotericin-B (GA)human Epidermal Growth Factor(hEGF); 혈관 내피 성장 인자(VEGF); R3- 인슐린 유사 성장 인자-1(R3-IGF-1); 아스코르브산; 하이드로 코르티손; 인간 섬유아세포 성장 인자-베타(hFGF-&beta;); 덤플링을; 소 태아 혈청 (FBS). EGM 준비에 필요</td></tr><tr><td>CellTracker Green CMFDA Dye</td><td>Thermo-fisher</td><td>C2925</td><td>MSC 염색을 위해 MSC에 의해 녹색을 최적으로 포착</td></tr><tr><td>CKX53 배양 현미경</td><td>Olympus</td><td></td><td>내피 네트워크 개발의 명시야 이미징 용</td></tr><tr><td>Countess 자동 세포 계수기 Invitrogen</td><td></td><td>C10227</td><td>MSC 배양, 유세포 분석 및 qPCR</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>를 위한 세포 계수StemCell 기술</td><td>7923</td> 대<td>동맥 고리-MSC 공동 배양 해리용(37°C에서 예열; C)</td></tr> <tr><td>일회용 멸균 메스</td><td>VWR</td><td>21909-654</td> 대<td>동맥 절단용</td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>PBS. 1X, 염화칼슘 및 염화마그네슘 없음</td></tr><tr><td>내피 기저 매체(EBM)</td><td>Lonza</td><td>CC-3156</td><td>대동맥 고리 분석 배양에 필요한 기저 배지-MSC 공동 배양(37°°C에서 따뜻함; C를 사용하기 전에). EGM 및 EBM-FBS에 필요</td></tr><tr><td>, 에탄올, 70%, 생명공학 등급</td><td>VWR</td><td>97064-768</td><td>표면 살균 위해</td></tr><tr><td>EVOS</td><td>Life Technologies</td><td></td><td>MSC 이동 및 통합을 추적하기 위한 사내 형광 현미경</td></tr><tr><td>소 태아 혈청(FBS) (Hyclone)GE</td> <td>Healthcare</td><td>SH3039603</td><td>세포 배양 배지의 혈청 구성</td></tr><tr><td>요소 FITC-conjugated anti-CD31 항체</td><td>BD</td><td>558068</td><td>유세포 분석을 위한 인간 내피 마커</td></tr><tr><td>FITC-conjugated anti-CD146antibody</td><td>BD</td><td>560846</td><td>유세포 분석을 위한 인간 pericyte 마커</td></tr><tr><td>겸자</td><td>Almedic</td><td>7727-A10-704</td><td>쥐 조직 전달용. 유사한 집게를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Life Technologies</td><td>14175-094</td><td>1X 염화칼슘 및 염화마그네슘 없음</td></tr><tr><td>HERAcell 150i CO2 인큐베이터</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>51026410</td> 세포 <td>인큐베이팅용</td></tr><tr><td>Human Angiogenesis RT2 프로파일러 PCR 어레이</td><td>Qiagen</td><td>PAHS-024Z</td><td>인간 특이적이며 혈관 신생에 관여하는 84 개의 유전자에 대한 프라이머를 포함합니다. 각 웰은 1 프라이머 반응</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td></td><td></td><td>오픈 소스 이미지 처리 소프트웨어입니다. 혈관 형성 분석기 플러그인</td></tr><tr><td>LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>UHN SickKids FC 시설이 필요합니다. 유세포 분석용.</td></tr><tr><td>MoFlo Astrios</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>UHN SickKids FC 시설. 셀 정렬용.</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>완충액 및 세포 배양 배지에 대한 항생제 성분</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>RNA 정제용. 세포 용해 완충액 RT</td></tr><<tr><td>sup>2Easy 첫 번째 스트랜드 키트</td><td>Qiagen</td><td>330421</td><td>qPCR용 cDNA 준비용</td></tr><tr><td>RT2PreAMP cDNA 합성 키트</td><td>Qiagen</td><td>330451</td><td>저수율 RNA인 경우 cDNA의 사전 증폭</td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14059-11</td><td>피부, 근육 및 대동맥 절단용</td></tr><tr><td>멸균 거즈</td><td>VWR</td><td>3084</td><td>가슴 털을 적시고 살균하기 위해</td></tr><tr><td>TrypleE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12605036</td><td>MSC 해리 효소는 37°°C에서 예열합니다. C</td></tr><tr><td>0.2 &무; m 기공 여과 장치</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>566-0020</td><td>조직 배양 배지</td></tr><tr><td>0.25% 살균 Trypsin/EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>세포 해리를 위해 37°C에서 예열; C</td></tr><tr><td>10cm 조직 배양 접시</td><td>Corning</td><td>25382-428</td><td>대동맥 및 MSC 세포 배양 세척 및 절단용</td></tr><tr><td>12 웰 세포 배양 플레이트</td><td>Corning-Sigma Aldrich</td><td>CLS3513</td><td>대동맥 고리 분석 설정용-MSC 공동 배양</td></tr><tr><td>15mL 튜브</td><td>BD Falcon</td><td>352096</td><td>일반 조직 배양 절차용</td></tr><tr><td>70 &mu; m cell strainer</td><td>Fisherbrand</td><td>22363548</td><td>유세포 분석 또는 분류 전에 단일 세포 현탁액을 보장합니다</td></tr></tbody></table>.

대동맥 반지 공동 문화 분석 결과: mesenchymal stromal 세포에 생체 외에서 의 신생 잠재력을 평가 하는 편리한 도구

The Aortic Ring Co-culture Assay: A Convenient Tool to Assess the Angiogenic Potential of Mesenchymal Stromal Cells In Vitro

신생은 복잡 하 고, 높은 규제 프로세스를 제공 하 고 적절 한 조직 관류를 유지에 대 한 책임. 지나치게 풍부한 혈관 개발은 암 및 염증 성 질환 관련 된 부족 한 맥 관 구조 유지 보수 및 병 적인 기형 심한 허 혈 성 질환에서 발생할 수 있습니다. 프로-신생 치료의 유망한 형태 신생 셀 소스, 새로 개발 하는 맥 관 구조에 대 한 규제 요인으로 물리적 지원을 제공할 수 있는의 사용 이다.
Mesenchymal Stromal 세포 (MSCs)를 감지 하 여 허 혈 성 또는 염증 조직에 집 혈관 재생 paracrine 효과 및 그들의 능력에 대 한 광범위 하 게 조사 후보자 이다. 특히, 처음 3 달 동안 인간 탯 줄 혈관 주위 세포 (FTM HUCPVCs)는 그들의 pericyte 같은 속성, 높은 증식 및 multilineage 잠재력, 면역 권한 속성, 및 강력한 paracrine 매우 유망한 후보 프로 파일입니다. 효과적으로 평가 하 고 잠재적으로 신생 재생 세포, 그것은 그들에 신뢰할 수 있는 및 "번역" 전 임상 분석 실험 테스트는 필수 이다. 대동맥 반지 분석 결과 비보 전 신생 모델입니다 관 내 피 구조의 쉬운 정량화를 허용, 액세서리 지원 세포와 세포 외 기질 (ECM) 호스트에서 염증 구성 요소를 제외 하며는 빠르고 저렴 한 설정. 이것은 (예를 들어, 각 막 분석 결과, Matrigel 플러그 분석 결과); vivo에서 모델에 비해 유리 대동맥 반지 분석 결과 관리 셀을 추적 하 고 이종 면역 거부를 피하고 있는 동안 세포 상호 작용을 관찰할 수 있습니다.
선물이 개발 쥐 대동맥 내 피 네트워크 공동 문화에서 인간의 MSCs를 포함 하는 대동맥 반지 분석 결과의 새로운 응용 프로그램에 대 한 프로토콜. 이 분석 결과 관 형성 및 물리적 pericyte 같은 상호 작용을 통해 개발에 MSC 기여와 신생의 사이트를 적극적으로 마이그레이션하기 위한 그리고 그들의 능력을 수행 하 고 중재를 평가 하기 위한 그들의 힘의 분석에 대 한 허용 ECM 처리입니다. 이 프로토콜은 MSC 표현 형 유전자 표현 공동 문화에 따라 변화에 추가 정보를 제공 합니다.

대동맥 반지/MSC 공동 문화 분석 결과 설정에 대 한 구조 작업 흐름은 그림 1에 설명 했다. 주요 단계를 포함: 쥐 대동맥 절연, 단면 및 대동맥의 포함, 내 피 돋 아 및 네트워크 개발, 모니터링 및 마지막으로 라벨 및 MSCs를 관리. 내 피 네트워크 분석의 타임 라인 창 공동 경작의 각 기간에 대 한 가능한 분석에 대 한 설명: 5 일 1, &#38; 7. 추가 참고 점선 상자로 강조 표시 됩니다.
대동맥 반지 내 피 세포 배양에서 구조적으로 뚜렷한 지역 식별 밝은 분야 현미경 검사 법, 대동맥 고리 ECM (그림 2)에 포함 된 후 3-5 d에 의해 수행 됩니다. 구조화 되지 않은 지역 (그림 2A</stron...

여기, 선물이 대동맥 반지 분석 결과의 새로운 응용 프로그램 prelabelled 중간 엽 세포는 쥐 대동맥 파생 내 피 네트워크와 공동 경작. 이 새로운 메서드 Mesenchymal Stromal 세포 (MSCs) 유도 및 내 피 네트워크와 통합의 시각화, 네트워크 속성의 정량화 및 MSC immunophenotypes 고 진 식의 평가 수 있습니다.

대동맥 반지 공동 문화 분석 결과: Mesenchymal Stromal 세포에 생체 외에서 의 신생 잠재력을 평가 하는 편리한 도구

Angiogenesis is a complex, highly regulated process responsible for providing and maintaining adequate tissue perfusion. Insufficient vasculature ...

본 전임상 기능 분석의 전반적인 목표는 재생 치료용 중간엽 줄기세포의 혈관 형성 잠재력을 관찰하고 정량적으로 평가하는 것입니다. 이 방법은 작용 기전 및 세포 치료 후보 물질의 효율성과 같이 혈관 표적 재생 의학 분야의 핵심 질문에 대한 답을 얻는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 인비트로(in vitro) 분석의 제어 및 용이한 평가 특성을 유지하면서 인비보(in vivo) 환경의 핵심 요소를 제공한다는 점입니다.이 새로운 기술의 함의는 허혈성 질환의 세포 치료로 확장될 수 있으며, 이는 해당 분야에서 신뢰할 수 있고 사용하기 쉬운 기능적 분석법이 매우 부족한 상황이기 때문입니다. 본 절차의 시연은 제 연구실의 박사 과정 학생인 Farwah Iqbal과 연구원인 Peter Szaraz가 진행할 예정입니다. 쥐의 대동맥을 분리하고 텍스트 프로토콜에 따라 배지를 준비한 후, 먼저 12-well 조직 배양 플레이트를 아이스 팩과 같은 차가운 표면에 올려 코팅하십시오.냉장 피펫을 사용하여, 갓 해동한 기초 막 추출물(basal membrane extract) 또는 BME 200 µL를 플레이트의 각 웰에 첨가합니다. 그런 다음, BME의 불균일한 중합을 방지하기 위해 BME를 빠르게 회전시켜 균일하게 코팅되도록 합니다. 코팅된 플레이트를 가습 인큐베이터에 30분 동안 넣어둡니다.1,000 µL 피펫 팁을 다시 -20 °C 냉동고에 넣습니다. 잔류 조직으로 인해 링 유닛 간에 발생할 수 있는 변동성을 줄이기 위해, 대동맥을 10 mL의 신선한 HBSS가 담긴 10 cm 배양 접시에 넣고 두 세트의 포셉을 사용하여 과도한 결합 조직과 지방 조직을 조심스럽게 분리합니다. 수술용 가위를 사용하여 대동맥에 연결된 늑간 동맥의 나머지 분지들을 분리하고, 대동맥 내부의 잔류 응고 혈액을 제거합니다.10 centimeter 디쉬 아래에 자 또는 그리드를 배치하고, 멸균된 메스와 핀셋을 사용하여 대동맥을 1~2 밀리미터 너비의 섹션으로 정밀하게 절단합니다. 인큐베이터에서 BME 코팅 플레이트를 꺼낸 후, 핀셋을 이용해 개별 대동맥 링을 조심스럽게 집어 BME 코팅된 웰의 중앙에 각각 배치하여 BME에 매립합니다. 냉각된 1,000 microliter 피펫 팁을 사용하여 각 대동맥 링 위에 300 microliters의 BME를 첨가하고, 웰 주변에 BME가 고르게 분포되도록 합니다.모든 대동맥 링의 포매가 완료되면

the-aortic-ring-co-culture-assay-convenient-tool-to-assess-angiogenic

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

이 동영상은 체외의 angiogenesis 분석에의 프로토콜을 보여줍니다 angiogenesis의 recapitulates 여러 단계의 것을. 시간 저속 돋아의 이미지, 루멘 형성, 분기 및 문합 - angiogenesis의 주요 기능은 - 표시됩니다.

Angiogenesis 연구에 최적화된 섬유소 젤 비드 분석

Angiogenesis는, 기존 vasculature의 혈관이 돋아는 자연과 병리 학적 프로세스를 모두와 연결되어 있습니다. 여기 angiogenic potentiators와 억제제가 직접 문화에 대동맥 링으로 추가할 수 대동맥 고리 분석을 보여줍니다. 돋아 및 neovessel의 파생물은 6-12 일 기간 동안 대동맥 고리를 조사하여 결정하실 수 있습니다.

대동맥 링 분석

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

이 문서는 휴대 자기 조립에 의해 세포 - 파생 조직 반지를 만드는 다양한 방법을 설명합니다. 평활근 세포는 링 모양의 아가로 오스 웰스의 집계 7 일 이내에 강력한 입체 (3D) 조직을 형성하기 위해 계약을 씨뿌린. 밀리 대규모 조직 반지는 기계 테스트에 도움이되는이며 조직 조립 블록을 건물로 제공하고 있습니다.

자기 조립 셀룰러이 Biomechanical 분석 및 조직 공학을위한 셀 유래 조직 반지를 조작하는 감독

여기에서는 외성장 배양 분석으로 일차 마우스 심외막 세포를 분리하고 생체 외 심장 배양 시스템을 사용하여 표피 유래 세포(EPDC)의 기능적 이동을 평가하는 방법을 설명합니다. 이러한 프로토콜은 EMT(epicardial epithelial-to-mesenchymal transition) 및 운동성의 유전적 및 화학적 조절자를 식별하는 데 적합합니다.

심 외막 파생물 문화 분석 및<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 심 외막 유래 세포 마이그레이션 평가

이 원고는 통제된 환경에서 내피 세포관 형성을 사용하여 혈관 신생에 대한 주어진 화합물 또는 조건의 효과를 정량화하기 위한 튜브 형성 분석을 설명합니다.

전략적 내피 세포 관 형성의 분석 : 감소 세포 외 매트릭스 세포 외 기질과 성장 인자를 비교

저항 동맥의 세포 문화 모델, 신호 경로 내 피, 평활 근, 또는 피와 부드러운 근육 (myoendothelial 교차점) 사이 해 부에 대 한 수 있도록 설명 되어 있습니다. 이 셀 문화 모델을 사용 하 여 면역 형광 검사, 전자 현미경, 또는 단백질 격리, 촉진제의 선택적 응용 프로그램을 활용할 수 있습니다.

저항 동맥의 세포 문화 모델

3차원 공동 배양 스페로이드 혈관신생 분석 시스템은 생리적 혈관신생을 모방하도록 설계된다. 공배양 스페로이드는 두 개의 인간 혈관 세포 전구체, ECFC 및 MSC에 의해 형성되고, 콜라겐 겔에 내장된다. 새로운 시스템은 혈관 신생 변조기를 평가하는 데 효과적이며 생체 내 연구에 보다 관련성이 있는 정보를 제공합니다.

내피 콜로니 형성 세포및 중간엽 줄기 세포에 의해 형성된 공동 배양 스페로이드를 이용한 3차원 혈관신생 분석 시스템

이 프로토콜은 마이크로 혈관 증식의 전 생체 모델인 초로이드 발아 분석체를 제시합니다. 이 분석체는 코로이드 마이크로 혈관의 증식에 관여하는 경로를 평가하고 야생 유형 및 유전자 변형 마우스 조직을 사용하여 약물 치료를 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

안구 미세 혈관 신생의 전 비보 코로이드 발아 분석

이 연구는 2차원(2D) 스크래치 상처 이동 분석 및 3차원(3D) 스페로이드 발아 분석과 함께 RNA 추출 및 면역세포화학을 포함한 각각의 다운스트림 분석 방법과 함께 in vitro 혈관 신생을 연구하는 데 적합한 분석법으로 제시합니다.

Scratch Wound Migration Assay와 Spheroid Sprouting Assay를 활용하여 기능적, 분자적 수준에서 혈관신생을 조사합니다.

배우세요 대동맥 반지 공동 문화 분석을 통해 생체 외에서 중간엽 기질 세포의 혈관 신생 잠재력을 정량적으로 평가하는 방법을. 이 기술은 재생 의학 연구에서 세포 치료 후보의 효율성을 분석하는 데 활용됩니다.

대동맥 반지 공동 문화 분석 결과: Mesenchymal Stromal 세포에 생체 외에서 의 신생 잠재력을 평가 하는 편리한 도구

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