생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성

이 프로토콜의 전반적인 목표는 in vitro에서 대장직장의 감각 신경에 대한 전기생리학적 기록 방법론을 입증하는 것입니다. 이 방법은 통각 과민증을 교정하기 위한 외측 주변 발포 민감도의 기여도와 같은 체외 펜 필드의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 경동맥 구별이 생체 내, 동물 또는 환자에서 수행되는 것과 유사한 방식으로 결장직장의 구별을 허용한다는 것입니다.

이 방법을 시각적으로 시연하는 것은 신경절을 찾고 신경을 해부하는 것이 상대적으로 어렵기 때문에 중요합니다. 이 절차를 시작하려면 메스를 사용하여 복벽의 정중선 절개를 수행하여 심하게 마취된 쥐의 복강을 노출시킵니다. 그런 다음 장간막과 다른 조직을 옆으로 당겨 결장직장을 노출시킵니다.

그런 다음 동물을 해부 현미경 아래에 놓습니다. 신중한 절개를 통해 왼쪽 골반 신경절을 찾고 골반 신경과 여기에 합류하는 요추 스플플랑크 신경을 확인합니다. 그런 다음 골반 신경절에서 몇 밀리미터 떨어진 곳에서 이 신경을 잘라냅니다.

골반 신경절의 위치를 파악하고 신경을 절제하는 것은 이 절차에서 가장 중요하고 어려운 단계입니다. 다음으로 심포근을 절개하여 직장을 노출시킵니다. 결장직장 위의 조직을 제거하고 골반 신경절이 손상되지 않도록 주의하십시오.

펜토바르비탈을 과다 투여하여 쥐를 제물로 바친 후, 골반 신경절에서 약 3cm 위의 결장을 절제하고 겸자를 사용하여 동물의 결장직장을 제거합니다. 그런 다음 colorectum을 사전 냉각된 Krebs 용액으로 채워진 Petri 접시로 옮깁니다. 결장을 부드럽게 씻어내어 대변을 제거합니다.

다음으로, 골반 신경절을 손상시키지 않고 남은 방광 및 기타 조직을 조심스럽게 제거합니다. 이 절차에서는 결장을 기록 챔버에 넣고 발암화된 크렙스 용액으로 조직을 지속적으로 주입합니다. 다음으로, 구강과 항문 말단 모두에서 결장직장을 캐뉼레이트한 다음 구강에서 항문 방향으로 식염수와 함께 결장의 내강내 주입을 시작한 다음 해부 현미경 아래에서 주요 골반 신경절을 찾고 곤충 핀을 사용하여 신경절을 노출시킵니다.

조심스럽게 해부하여 신경절에서 나와 결장을 향해 뻗어 나오는 미세한 신경 가지를 찾은 다음, 신경절에 가까운 신경을 잘라냅니다. 다음 단계를 수행하기 전에 가열 수조를 켜고 Krebs 용액을 섭씨 34도로 유지하십시오. 이제 해부 현미경 아래에서 미리 당겨진 유리 피펫을 검사합니다.

한 쌍의 집게로 전극 끝을 부러뜨려 기록할 신경의 직경과 호환되는 크기가 되도록 합니다. 그런 다음 팁을 더 밝은 플레어에 가깝게 배치하여 비스듬하게 만듭니다. 이 방법을 처음 접하는 방법은 신경의 크기에 맞는 전극 끝을 경사지게 하는 것도 까다로울 수 있습니다.

다음으로, 경사진 전극을 전극 홀더에 놓고 10ml 주사기를 홀더의 측면 포트에 연결하여 전극에 음압 또는 양압을 가합니다. 그런 다음 홀더를 바이오 앰프의 헤드 스테이지에 연결하고 헤드 스테이지를 매니퓰레이터에 장착합니다. 그런 다음 전극을 티슈 수조로 옮기고 홀더의 은선에 닿을 때까지 부드럽게 흡입하여 전극에 Krebs 용액을 채웁니다.

다음으로, 전극 끝을 신경의 절단된 끝 부분에 가깝게 놓고 음압을 가하여 신경을 전극으로 빨아들입니다. 그런 다음 더 많은 음압을 가하여 신경의 약 1mm가 전극으로 당겨져 단단히 밀봉되도록 합니다. 이제 바이오 증폭기를 켜고 필터를 300에서 3,000헤르츠로 설정합니다.

오실로스코프의 신호를 모니터링하고 스파이크 데이터 처리 소프트웨어에 신경 신호와 내강 압력 신호를 기록합니다. 다음으로, 배출구 캐뉼라의 3방향 탭을 닫아 결장의 램프 팽창을 적용하면서 지속적으로 발광내로 주입합니다. 수은이 60mm에 도달할 때까지 루미널 내 압력을 모니터링한 다음 배수 캐뉼러의 3방향 탭을 엽니다.

15분 간격으로 이 절차를 반복하고 구심성 신경의 화학적 민감성을 테스트하기 위해 추가 또는 광내로 약물을 적용합니다. 다음은 원위 신경에서 골반 신경절까지의 대표적인 기록과 함께 생체 외 튜브 결장직장 준비를 위한 실험 설정의 개략도입니다. 정상적인 쥐의 제제에서, 결장 구심성 신경은 일반적으로 규칙적인 자발적 활동의 낮은 수준을 가지고 있습니다.

결장의 경사로 팽창은 발화 속도의 점진적인 증가를 유도합니다. 각 신경의 기계감각적 특성은 내강내 압력 구심성 신경 반응 곡선을 플로팅하여 나타냅니다. 또는 골반 신경절에 근접한 골반 신경의 한 지점에서 기록을 할 수 있습니다.

근위 골반 신경의 기계감각 활동의 프로필은 일반적으로 골반 신경절 원위 신경에서 볼 수 있는 것과 유사합니다. 다중 장치 기록에서 활동 전위의 파형에 대한 주성분 분석은 단일 장치 활동을 구별하기 위해 수행될 수 있습니다. 다음은 두 개의 개별 골반 구심성의 중첩된 파형입니다.

이 기술을 숙달하면 제대로 수행되면 2시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 주요 골반신경절과 다른 신경의 해부학적 구조를 잘 이해하게 될 것이며, 신경절을 찾아 신경을 해부하고 구심성 활동을 기록할 수 있을 것입니다. 이 프로토콜의 장점은 골반 신경과 스플랑크닉 구심성 신경의 전기생리학적 특성과 약리학적 프로파일을 비교할 수