Name: 생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 학습하세요 생체 외 쥐 대장-직장 준비물을 이용한 결장 감각 신경의 전기생리학적 기록 방법을 통해 내장 통증의 신경 메커니즘을 연구하는 기법입니다. 이 프로토콜은 기계감각 특성 분석에 활용됩니다.

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이 프로토콜은 국가 자연 과학 재단의 중국 (#31171066, #81270464)와 중국-독일어 과학 센터 (GZ919)에서 연구 보조금에 의해 지원 되었다.

여기에서 보고 된 실험 프로토콜은 동물 윤리 위원회의 상하이 교통 대학의과 대학 (# SYXK2013-0050)에 의해 승인 되었습니다. 그대로 신경 절 및 신경 colorectum의 해 부 트렁크는이 기술에 아주 경험 있는 사람에 대 한 최소 15 분 걸립니다. 그것은 깊은 마 취 동물 살아 있지만 해 electrophysiological 기록에 대 한 조직의 생존을 보장 하기 위해 수행 하는 동안 유지 하는 데 필요한 따라서.
 1. 관류 솔루션의 준비 및 시험 화합물 <ol><li>준비 5 L 크레브스 솔루션의: 113 mM NaCl, 5.9 m m KCl, 1.2 m m NaH 2 포 4, 1.2 m m MgSO 4, 25 m m NaHCO 3, 1.2 m m CaCl 2 , 및 11.5 m m 포도 당. 95% O 2 + 5% CO 2 가스 혼합 솔루션을 포화. 미리 냉장고에 산소 Krebs의 ~ 500 mL를 냉각.</li>
	<li>준비 aliquots 재고의 필요에 따라 화합물 (에탄올과 10 m m 5-hydroxytryptamine (5-HT) 염 분에에서 1 mM capsaicin)를 테스트 합니다. 그냥 사용 하기 전에 최종 농도에 Krebs (목욕 용)와 염 분 (intraluminal 관리)에 대 한 재고 희석.</li>
</ol> 2. 기록 전극의 준비 <ol><li>표준 유리에서 기록 전극 없이 기존의 전극 끌어당기는 사람을 사용 하 여 내부 필 (1.5 m m 외부 직경) 튜브 풀. 열에 대 한 끌어당기는 설정을 조정 하 고 당기는 가져온된 전극의 칼 20 사이 25 m m.</li>
</ol> 3. 조직 컬렉션 <ol><li>Anaesthetize 나트륨 pentobarbital (80 mg/kg, i.p.)를 사용 하 여 깊이 쥐. </li> <li>무 균을 보장 하면서 메스를 사용 하 여 복 부 벽에 midline 절 개를 수행 하 여 복 부 구멍을 노출. mesentery 및 옆으로 colorectum를 폭로 다른 조직.</li>
	<li>해 현미경 동물을 배치합니다. 조심 해 부를 통해 왼쪽된 PG 찾아서는 PN과 합류 하는 LSN을 식별 합니다. 이 신경은 페이지 멀리 몇 밀리미터 잘라 
	참고: PG 장 교차점에 가까운 속 인 다. 일반적으로 3-4 PN lumbosacral 척수 및 LSN 프로젝트에서 PG ( 그림 1)를.</li>
	<li>항문 노출 관절 뼈를 잘라. Colorectum; 위의 조직 (즉, 오 줌 방광, 등) 제거 PG를 그대로 조심.</li>
	<li>는 Pentobarbital의 과다 복용의 정 맥 주입 하 여 쥐를 희생. 콜론 세 위에 약 3cm transect 고 집게를 사용 하 여 동물에서 제거 하는 colorectum.</li>
	<li>사전 냉각된 Krebs 솔루션으로 가득 페 트리 접시에는 colorectum를 전송 합니다. 부드럽게 콜론을 플러시하는 배설물을 제거 합니다. 남은 오 줌 방광 및 다른 조직에 페이지를 손상 없이 신중 하 게, 제거</li>
</ol> 4. 저 승 구심 성 신경의 해 부 <ol><li>콜론 녹음 챔버 (20 mL)로 놓고 perfuse carbogenated Krebs 솔루션을 지속적으로 조직. 15 mL/분에서 관류 속도 설정</li>
	<li>구강과 항문 끝에 colorectum cannulate. 염 분에서 항문 방향으로 구두 10 mL/h의 속도로 콜론의 intraluminal 주입 시작.</li>
	<li>해 현미경 주요 PG를 찾습니다. 곤충 핀을 사용 하 여 노출 된 신경 절. 조심 해 부, 신경은 신경 절에서 유출 하 고 콜론 ( 그림 1)으로 실행의 좋은 지점을 찾을. 가까이 신경 절의 신경 절단. 
	참고: 그림 1에 나와 있는 페이지에 말 초 신경 지점에서 녹음 신경은 골반과 요 추 splanchnic 구심 성 섬유의 혼합물을 아마도 포함 되어 있습니다. 또는, 녹음은 PN 및 LSN 인접 하는 페이지에서 만들어질 수 있다</li>
	<li>난방 목욕과 따뜻한 34 ± 0.5 ° c.에 챔버 온도 유지에 Krebs 솔루션 설정</li>
</ol> 5. 흡입 전극의 준비 <ol><li>미리 가져온된 유리 피 펫 (2 단계) 하 고 해 현미경 검사. 그것은 호환 기록 신경의 직경 크기의 집게의 쌍 전극의 팁을 부.</li>
	<li>라이터 플레어 가까이 배치 하 여 팁을 경사.</li>
</ol> 6. Electrophysiological 녹음 <ol><li>연결 전극 홀더를 경사진된 전극. 측면 포트 전극에 부정적 또는 긍정적인 압력을 적용 하려면 소유자에 10 mL 주사기를 연결.</li>
	<li>소유자는 bioamplifier의 headstage에 연결 하 고 조작자에 headstage를 탑재.</li>
	<li>조직 목욕 전극 이동한 소유자의 실버 와이어 연결 될 때까지 부드러운 흡입을 적용 하 여 전극 Krebs 솔루션을 작성 합니다. 신경의 절단된 끝 가까이 전극 팁 놓고 신경 전극으로 빨 아 부정적인 압력을 적용 합니다. ~ 1 m m는 신경의 전극으로 당겨 하 고 단단한 물개를 형성 더 부정적인 압력을 적용.</li>
	<li>회전 설정 필터 300 3000 Hz. 하 고 bioamplifier에 오실로스코프에 신호를 모니터링 하 고 기록 신경 신호 (20 kHz 샘플링 속도) 및 스파이크 데이터 처리와 컴퓨터를 사용 하 여 intraluminal 압력 신호 (100 Hz 샘플링 속도) 소프트웨어.</li>
</ol> 7. 저 승 성의 감도 테스트 지속적으로 intraluminally를 일으키는 동안 콘센트 정에 3 방향 탭을 닫아서 콜론의 <ol><li>적용 램프 팽창. 그것에 도달할 때까지 60 mmHg, 오픈 시간에 배출 정에 3 방향 탭 intraluminal 압력 모니터링.</li>
	<li>15 분 적용 약물 추가-또는 intraluminally의 구심 성 신경 화학 감도 테스트를 정기적으로이 절차를 반복.</li>
</ol>

<ol><li>Al-Chaer, E. D., Traub, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+basis+of+visceral+pain%3A+recent+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Biological basis of visceral pain: recent developments.</a> Pain. 96 (3), 221-225 (2002).</li>
<li>Christianson, J. A., Traub, R. J., Davis, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+spinal+distribution+and+neurochemical+phenotype+of+colonic+afferents+in+mouse+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differences in spinal distribution and neurochemical phenotype of colonic afferents in mouse and rat.</a> J Comp Neurol. 494 (2), 246-259 (2006).</li>
<li>Wynn, G., Rong, W., Xiang, Z., Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+mechanisms+contribute+to+mechanosensory+transduction+in+the+rat+colorectum%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Purinergic mechanisms contribute to mechanosensory transduction in the rat colorectum.</a> Gastroenterology. 125 (5), 1398-1409 (2003).</li>
<li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairments+of+the+Primary+Afferent+Nerves+in+a+Rat+Model+of+Diabetic+Visceral+Hyposensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Impairments of the Primary Afferent Nerves in a Rat Model of Diabetic Visceral Hyposensitivity.</a> Mol Pain. 11, (2016).</li>
<li>Lynn, P. A., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+recordings+of+afferent+fibres+with+receptive+fields+in+the+serosa%2C+muscle+and+mucosa+of+rat+colon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vitro recordings of afferent fibres with receptive fields in the serosa, muscle and mucosa of rat colon.</a> J Physiol. 518 (Pt 1), 271-282 (1999).</li>
<li>Page, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+contributions+of+ASIC+channels+1a%2C+2%2C+and+3+in+gastrointestinal+mechanosensory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Different contributions of ASIC channels 1a, 2, and 3 in gastrointestinal mechanosensory function.</a> Gut. 54 (10), 1408-1415 (2005).</li>
<li>Hockley, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P2Y+Receptors+Sensitize+Mouse+and+Human+Colonic+Nociceptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">P2Y Receptors Sensitize Mouse and Human Colonic Nociceptors.</a> J Neurosci. 36 (8), 2364-2376 (2016).</li>
<li>Peiris, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+visceral+afferent+recordings%3A+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Human visceral afferent recordings: preliminary report.</a> Gut. 60 (2), 204-208 (2011).</li>
<li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+silent+afferents+in+the+pelvic+and+splanchnic+innervations+of+the+mouse+colorectum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300 (1), G170-G180 (2011).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+guanylate+cyclase-C+attenuates+stretch+responses+and+sensitization+of+mouse+colorectal+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents.</a> J Neurosci. 33 (23), 9831-9839 (2013).</li>
<li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Functional+Characterization+of+Mouse+Colorectal+Afferent+Endings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings.</a> J Vis Exp. (95), e52310(2015).</li>
<li>Nullens, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Recording+of+Mesenteric+Afferent+Nerve+Activity+in+Mouse+Jejunal+and+Colonic+Segments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In Vitro Recording of Mesenteric Afferent Nerve Activity in Mouse Jejunal and Colonic Segments.</a> J Vis Exp. (116), (2016).</li>
<li>Rong, W., Hillsley, K., Davis, J. B., Hicks, G., Winchester, W. J., Grundy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jejunalafferent+nerve+sensitivity+in+wild-type+and+TRPV1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Jejunalafferent nerve sensitivity in wild-type and TRPV1 knockout mice.</a> J Physiol. 560 (Pt 3), 867-881 (2004).</li>
<li>Brierley, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+chemosensory+function+and+receptor+expression+of+splanchnic+and+pelvic+colonic+afferents+in+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential chemosensory function and receptor expression of splanchnic and pelvic colonic afferents in mice).</a> J Physiol. 567 (Pt 1), 267-281 (2005).</li>
<li>Brierley, S. M., Jones, R. C. 3rd, Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127 (1), 166-178 (2004).</li>
<li>La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+the+expression+of+transient+receptor+potential+channel+V1%2C+transient+receptor+potential+channel+A1+and+mechanosensitive+two+pore-domain+K%2B+channels+between+the+lumbar+splanchnic+and+pelvic+nerve+innervations+of+mouse+urinary+bladder+and+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Differences in the expression of transient receptor potential channel V1, transient receptor potential channel A1 and mechanosensitive two pore-domain K+ channels between the lumbar splanchnic and pelvic nerve innervations of mouse urinary bladder and colon.</a> Neuroscience. 186, 179-187 (2001).</li>
<li>Wang, G., Tang, B., Traub, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+processing+of+noxious+colonic+input+by+thoracolumbar+and+lumbosacral+dorsal+horn+neurons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Differential processing of noxious colonic input by thoracolumbar and lumbosacral dorsal horn neurons in the rat.</a> J Neurophysiol. 94 (6), 3788-3794 (2005).</li>
</ol>

저자는 충돌의 관심을 선언합니다.

여기에 제시 된 프로토콜 쥐의 저 승 afferents의 electrophysiological 속성을 평가 하기 위해 비교적 간단한 실험 방법입니다. (신경 녹음을 설정 하 고 조직 해 부)에서 프로토콜 일반적으로 완료 하는 데 약 2 시간 걸립니다. 조직 컬렉션 (3 단계) 및 흡입 전극 (5 단계)의 준비는 중요 한 단계가 있습니다. 그것은 PG, LSN와 PN 주의 하지 신경 절 및 신경 조직의 해 부 동안에 손상 수 있을 중요 합니다. 유리 피 펫의 끝은 깨진 고 크기 신경 다발과 호환을 입체 해야 합니다.
준비는 일반적으로 실행 가능한 몇 시간 동안은 mechanosensitivity, chemosensitivity, 및 대 장 구심 성 신경의 약리 프로필의 연구에 대 한. "플랫 시트" 준비11, 기계적 자극 점 막 쓰 다듬어 또는 원주 스트레칭 통해 적용에 비해이 "튜브" 준비 램프에 대 한 허용 또는 팽창의 응용 프로그램에...

위장 지역 (GIT) 풍부한 외부 구심 성 신경 중앙 신 경계를 용기에서 감각 신호를 전달 하 고 창 자-두뇌 상호 작용에 기여 innervated입니다. 이러한 외부 afferents의 변경 된 흥분 뿐만 아니라 구심 성 입력의 변경 된 중앙 처리 기본 내장 고통 및 다른 증상 기를 포함 한 조건 기능과 염증 성 장 질환1. 감각 정보는 colorectum에서 주로 thoracolumbar/하복과 lumbosacral/골반 신경 (PN)2를 통해 전달 됩니다. 공부 하는 설치류 질병 모델에서 이러한 기본 구심 성 섬유의 electrophysiological 속성에 대 한 관심 증가 되었습니다. 그러나, 설치류에 저 승 afferents의 비보에 electrophysiological 녹음 기술 도전 이며 상당한 수술 기술이 필요 합니다. 또한, hemodynamic 변화, 조직 운동, 그리고 마 취약 떨어질 수 있습니다 또한 신경 활동과 감도 비보에자극 테스트를. 따라서, 최근 몇 년 동안, 연구의 증가 고용 체 외에서 (ex vivo) 준비의 다른 종, 포함 쥐, 쥐, 기니 피그, 및 인간, 저 승에서 감각 전달의 메커니즘을 검토 하 afferents와 질병 상태에서 변경 된 흥분입니다. 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8
두 가지 유형의 저 승 준비 비보 전 주로 보고 되었습니다: "플랫 시트" 준비5,,910 고 "튜브" 준비3,4. "플랫 시트" murine colorectum 준비를 위한 비디오 프로토콜11이전에 게시 되었습니다. 이 프로토콜은 PN과 마우스 colorectum), 요 추 splanchnic 신경 (LSN) 조직 챔버에 수확 하 고 superfused 또는. colorectum 경도, 오픈 절단 그리고 신경 번들 파라핀 기름을 가득 녹음 구획으로 확장 됩니다. 신경 활동 monopolar 백 금-이리듐 전극을 사용 하 여 기록 됩니다. 프로토콜 편견된 전기 자극을 사용 하 여 개별 구심 성 섬유의 수용 필드의 식별에 대 한 수 있습니다. 그것은 localizes 화학 자극의 응용 프로그램 뿐만 아니라 다른 기계적 자극 패러다임의 응용 프로그램 (예를 들어, 초점 점 막 프로 빙 및 원주 스트레치), 구심 신경 엔딩. 그것은 비교적 긴; 연결 된 신경 유지 하는 중요 한 신경 조직 약 실에서 별도 챔버를 확장 해야 합니다, 때문에 신경의 성공적인 절 개 그 도전이이 방법론에 새로운 포즈. 더 최근에, Nullens 그 외 여러분 murine jejunal에 저 승 세그먼트12mesenteric afferents의 생체 외에서 녹화를 위한 비디오 프로토콜을 출판. 이 "튜브" 준비에 연결 된 mesentery와 창 자 세그먼트 등급된 팽창 및 다른 화학 제품의 내부 및 추가 luminal 관리 되므로 그대로 유지 됩니다. Mesentery 신경 조직 가까이 배치 될 수 있습니다, 흡입 전극을 사용 하 여 기록 됩니다 이후 mesentery 신경은 상대적으로 짧은 하더라도 성의 활동을 기록할 수 있습니다. 그러나, mesentery 신경 자극 공장 vagal 및 척수 구심 섬유의 혼합된 인구 구성 또는 thoracolumbar 하복. Lumbosacral 골반 afferents 자극이 프로토콜에 차별 수 없습니다 colorectum. 여기, 선물이 electrophysiological 쥐 저 승 afferents "튜브" colorectum 준비는 그대로 페이지와 함께 사용 하 여 녹음에 대 한 자세한 프로토콜 이 방법은 splanchnic 요 추의 기능 특성의 특성에 대 한 수 있습니다 (하복) 및 lumbosacral 골반 afferents.

<table><tbody><tr><td>Sodium Pentobarbital</td><td>Shanghai Westang Bio-Tech</td><td>B558</td><td></td></tr><tr><td>Capsaicin</td><td>Sigma</td><td>M2028</td><td></td></tr><tr><td>전극 풀러</td><td>MicroData Instrument Inc</td><td>PMP107</td><td></td></tr><tr><td>Neurolog System (Bioamplifier)</td><td>Digitimer, Ltd</td><td>Neurolog System</td><td></td></tr><tr><td>A/D converter</td><td>Cambridge Electronic Design</td><td>Micro1401</td><td></td></tr><tr><td>데이터 처리 소프트웨어</td><td>Cambridge Electronic Design</td><td>Spike2 버전 6</td><td></td></tr><tr><td>Silver wire</td><td>World Precision Instruments</td><td>EP12</td><td></td></tr><tr><td>Glass tubes</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td></td></tr><tr><td>전극 홀더</td><td>World Precision Instruments</td><td>MEH3SBW</td><td></td></tr><tr><td>Heating</td><td>bath Grant</td><td>GR150</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>Leica</td><td>Zoom2000</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>세계 정밀 기기</td><td>PZMIII-BS</td><td></td></tr><tr><td>담배 라이터</td><td>모든</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>수술 도구</td><td>세계 정밀 기기</td><td>NA</td><td></td></tr> 곤충 <tr><td>핀</td><td>집에서 만든 0.1 mm 스테인레스 스틸 와이어</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>3 방향 매니퓰레이터</td><td>World Precision Instruments</td><td>KITF-R</td><td></td></tr><tr><td>Rats</td><td>Any</td><td>NA</td><td>모든 변형률/성별을 사용할 수 있습니다.</td></tr></tbody></table>

생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 electrophysiological 속성의 특성

In Vitro Characterization of the Electrophysiological Properties of Colonic Afferent Fibers in Rats

저 승 감각 신경의 기능 장애 이상 기능 및 염증 성 대 장 질환과 당뇨병을 포함 하 여 몇 가지 일반적인 조건에 연루 되었습니다. 여기, 우리가 쥐에 있는 저 승 afferents의 electrophysiological 속성 생체 외에서 특성에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그대로 골반 신경 절 (PG),와 함께 colorectum; 쥐에서 제거 carbogenated 녹음 실;에서 Krebs 솔루션으로 superfused 그리고 팽창 수 있도록 구강과 항문 끝 cannulated. PG에서 나오는 미세 신경 번들을 식별 하 고 multiunit 구심 성 신경 활동 흡입 전극을 사용 하 여 기록 됩니다. 저 승 세그먼트의 팽창 multiunit에 점진적 증가 elicits. 주성분 분석은 낮은 임계값, 높은 임계값 및 넓은 동적 범위 구심 섬유 차별화 위해 수행 됩니다. 저 승 afferents의 화학 감도 시험 화합물의 목욕 또는 intraluminal 관리를 통해 공부 될 수 있다. 이 프로토콜은 다른 종, 쥐, 기니 피그, 등과 정상에서 하강 콜론의 thoracolumbar/하복 및 lumbosacral/골반 afferents의 electrophysiological 속성의 차이 연구 하는 응용 프로그램에 대 한 수정할 수 및 병 적인 조건입니다.

그림 1 은 비보 전 "튜브" colorectum 준비는 페이지에 말 초 신경에서 기록 하는 대표에 대 한 실험적인 체제의 구조 그림 신경은 아마도 골반과 요 추 splanchnic afferents의 혼합물을 포함. 정상 쥐에서 준비, 저 승 구심 성 신경은 일반적으로 불규칙 한 자발적인 활동의 저수준이 있다. 콜론의 램프 팽창 발사 속도 (그림 1B)에 있는 점진적 증가 유도합니다. 각 신경의 mechanosensory 속성은 intraluminal 압력 구심 신경 응답 곡선 (그림 1C)를 그려서 표시 됩니다. 평균된 압력-응답 곡선 그룹 사이 비교 될 수 있다 (즉, 제어 대 취급) 여부는 치료 (참조 룽 외. 저 승 구심 성 신경의 mechanosensor...

비정상적인 감각 기능 내장 고통 및 다른 증상 기능 및 염증 성 대 장 질환의 기초. 프로토콜에는 비보 전 쥐 colorectum 저 승 구심 성 신경의 electrophysiological 녹음에 대 한 여기에 제공 됩니다.

생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성

Dysfunction of the colonic sensory nerves has been implicated in the pathophysiology of several common conditions, including functional and inflammatory ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 체외(in vitro)에서 결장 직장의 감각 신경에 대한 전기생리학적 기록 방법론을 입증하는 것입니다. 이 방법은 외측 말단 구심성 신경의 민감도가 직장 과민증에 기여하는 정도와 같은 체외 연구 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동물이나 환자를 대상으로 생체 내(in vivo)에서 경동맥 박리가 수행되는 것과 유사한 방식으로 결장 직장을 박리할 수 있다는 점입니다.신경절의 위치를 찾고 신경을 박리하는 과정이 비교적 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 이 절차를 시작하려면, 메스로 복벽에 정중선 절개를 가하여 깊게 마취된 쥐의 복강을 노출시키십시오. 그 후, 장간막과 다른 조직들을 옆으로 밀어 결장직장을 노출시킵니다.그다음, 동물을 해부 현미경 아래에 둡니다. 세심한 해부를 통해 왼쪽 골반 신경절을 찾고, 여기에 연결된 골반 신경과 요늑신경을 확인합니다. 이어서, 골반 신경절에서 몇 mm 떨어진 지점에서 이 신경들을 절단합니다.골반 신경절의 위치를 찾고 신경을 박리하는 것이 이 절차에서 가장 중요하고 어려운 단계입니다. 다음으로, 직장을 노출시키기 위해 치골 결합부를 절단하십시오. 결장직장 상부의 조직을 제거하되 골반 신경절이 손상되지 않도록 주의하십시오.펜토바르비탈을 과량 정맥 주사하여 쥐를 희생시킨 후, 골반 신경절에서 약 3cm 위쪽의 결장을 절단하고 포셉을 사용하여 동물로부터 직결장(colorectum)을 적출합니다. 이어서 직결장을 미리 냉각된 Krebs 용액이 채워진 페트리 접시에 옮깁니다. 결장을 부드럽게 세척하여 분변을 제거합니다.다음으로, 골반신경절(pelvic ganglion)이 손상되지 않도록 주의하며 남은 방광과 기타 조직들을 조심스럽게 제거합니다. 이 과정에서 결장을 기록 챔버에 넣고 카보겐 처리된 Krebs 용액으로 조직에 지속적으로 관류합니다. 이어서 결장직장의 구강측 끝과 항문측 끝에 각각 캐뉼라를 삽입한 후, 구강에서 항문 방향으로 생리식염수를 결장 내강으로 주입하기 시작합니다. 그 후 해부 현미경으로 주요 골반신경절의 위치를 찾아 곤충 핀을 사용하여 신경절을 노출시킵니다.주의 깊게 해부하여 신경절에서 나와 결장 방향으로 뻗어 있는 미세한 신경 가지를 찾은 후, 신경절에 가까운 곳에서 해당 신경을 절단합니다. 다음 단계로 넘어가기 전, 항온 수조를 켜서 Krebs 용액을 34 °C로 유지합니다. 이제 해부 현미경 하에서 미리 당겨진 유리 피펫을 검사합니다.핀셋을 사용하여 전극의 끝부분을 기록하려는 신경의 직경과 호환되는 크기로 부러뜨립니다. 그 다음, 라이터 불꽃 가까이에 전극 끝을 가져가 경사지게 깎아냅니다(bevel). 이 방법론이 처음인 경우, 신경 크기에 맞게 전극 끝을 경사지게 깎는 과정이 까다로울 수 있습니다.다음으로, 베벨형 전극을 전극 홀더에 끼운 다음, 전극에 음압 또는 양압을 가할 수 있도록 홀더의 측면 포트에 10 milliliter 주사기를 연결합니다. 그 후 홀더를 바이오 증폭기의 헤드 스테이지에 연결하고, 헤드 스테이지를 조작기에 장착합니다. 이어서 전극을 조직 욕조로 이동시키고, 전극이 홀더의 은선에 닿을 때까지 부드럽게 흡입하여 전극 내부를 Krebs 용액으로 채웁니다.다음으로, 전극 팁을 신경의 절단단 근처에 배치하고 음압을 가하여 신경이 전극 내부로 흡입되게 합니다. 그 후, 음압을 더 가하여 신경의 약 1mm가 전극 안으로 끌려 들어가 단단히 밀봉되도록 합니다. 이제 바이오 앰프를 켜고 필터를 300에서 3,000 Hz로 설정합니다.오실로스코프에서 신호를 모니터링하고, 스파이크 데이터 처리 소프트웨어에 신경 신호와 관강 내 압력 신호를 기록하십시오. 그다음, 관강 내로 지속적으로 주입하면서 배출 캐뉼라의 3방향 콕(three way tap)을 닫아 결장의 램프 팽창(ramp distention)을 유도하십시오. 관강 내 압력이 60 mmHg에 도달할 때까지 모니터링한 후, 배출 캐뉼라의 3방향 콕을 여십시오.이 절차를 15분 간격으로 반복하고, 구심성 신경의 화학적 민감도를 테스트하기 위해 약물을 외부 또는 관강 내로 투여하십시오. 여기는 골반 신경절 원위부 신경의 대표적인 기록이 포함된 ex vivo 튜브 결장-직장 표본의 실험 장치 모식도입니다. 정상 쥐의 표본에서 결장 구심성 신경은 일반적으로 낮은 수준의 규칙적인 자발적 활동을 보입니다.결장의 램프 팽창(Ramp distention)은 발화율의 점진적인 증가를 유도합니다. 각 신경의 기계적 감각 특성은 관강 내 압력 구심성 신경 반응 곡선을 도식화하여 나타냅니다. 또는 골반 신경절에 인접한 골반 신경의 분지에서 기록을 수행할 수 있습니다.근위 골반 신경의 기계적 감각 활동 프로파일은 일반적으로 골반 신경절 원위부 신경에서 관찰되는 프로파일과 유사합니다. 다단위 기록(multiunit recording)에서 얻은 활동 전위 파형의 주성분 분석(Principal component analysis)을 통해 단일 단위 활동을 구별할 수 있습니다. 여기 두 개의 개별 골반 구심성 신경의 중첩된 파형이 제시되어 있습니다.이 기술을 완전히 숙달하고 적절하게 수행한다면 2시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 주요 골반 신경절과 다른 신경들의 해부학적 구조를 충분히 이해하고, 신경절의 위치를 찾아 신경을 박리하고 구심성 활동을 기록할 수 있어야 합니다. 이 프로토콜의 장점은 골반 구심성 신경과 내장 구심성 신경의 전기생리학적 특성 및 약리학적 프로파일을 비교할 수 있다는 점입니다.

in-vitro-characterization-electrophysiological-properties-colonic

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 생체 외 쥐 결장에서 결장 구심성 신경의 활동을 기록하는 방법을 보여주며, 양쪽 끝에 캐뉼레이션하고 식염수를 주입하여 내강 내압을 증가시키는 방법을 보여줍니다. 압력이 증가하면 신경 신호가 증가하여 자극을 나타냅니다.

생체 외 쥐 결장에서 결장 구심성 신경의 전기생리학적 기록

이 비디오는 구심성 신경 활동에 대한 조직 압력과 운동 변화의 영향을 연구하기 위해 절개된 마우스 제주널 분절에서 장간막 구심성 신경의 전기 신호를 기록하는 과정을 보여줍니다.

생체 외 마우스 Jejunum 분절에서 장간막 구심성 신경 활동의 기록

이 비디오는 쥐의 C 섬유 신경 전도에 대한 단일 섬유 기록을 보여줍니다. 마취된 쥐는 하지에 감각 및 운동 공급을 제공하는 좌골 신경을 노출시키기 위해 절개됩니다. 그런 다음 개별 C-섬유가 노출됩니다. 발에 이식된 자극 전극을 사용하여 전기 자극이 제공되며, 단일 신경 섬유에서 반응이 기록됩니다.

쥐에서 좌골 신경 C-섬유의 생체 내 단일 섬유 기록

출처: Fried, D. E., Gulbransen, B. D. In situ ca2+ 장 신경계의 영상. J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 칼슘을 보여줍니다. 마우스 Colonic Myenteric plexus 제제에서 장 뉴런 및 신경교세포의 활동을 시각화하고 분석하기 위한 이미징.

Calcium Imaging of enteric Neuron and Glia Activities in a Mouse Colonic Myenteric Plexus(마우스 결장 근육총에서 장 뉴런 및 신경교 활동의 칼슘 이미징)

출처: Lai, J., et al. 설치류 뇌에서 억제제의 동시 전기생리학적 기록 및 미세 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 쥐 상골에서 동시 신경 기록 및 억제를 위한 미세 주입 기반 기술을 보여줍니다. 이 절차에는 정위 표적화, 두개골 드릴링, 신경 활동을 기록하면서 억제성 신경 전달 물질을 전달하는 주사대 삽입이 포함됩니다. 빛 자극은 활동 전위를 유발하는 반면 약물 미세 주사는 신경 흥분성을 억제합니다. 신경 전달 물질 수치가 감소함에 따라 신경 활동이 기준선으로 돌아가 억제와 회복에 대한 연구가 가능해집니다.

쥐에서 신경 활동의 억제 및 전기생리학을 사용한 검출

우리는 장용 신경계의 신경 세포 및 교세포 구성 요소의 직접적인 연구를위한 세포 배양 프로토콜을 보여줍니다. coverslips는에 신경 / glia의 혼합 문화, 면역 전기 생리학, 개별 신경 세포와 아교 세포 기능을 검사 할 수있는 기능을 제공하는 성인 마우스 myenteric 신경 얼기에서 준비가되어...

<em&gt; 체외</em성인 마우스 Myenteric 신경총에서 분리 된 장내 뉴런과 교세포의&gt; 준비

이 비디오는 시험관 내 마우스 결장직장 신경 제제에서 단일 섬유 전기생리학적 기록을 수행하기 위한 프로토콜을 보여줍니다.

마우스 대장 수입 성의 엔딩의 생체 기능 특성에

장간막 구심성 신경은 위장관에서 뇌로 정상적인 항상성과 병태생리학에 관한 정보를 전달합니다. 위장 구심성 신경 활동은 구심성 신경이 부착된 분리된 장 분절을 장기 욕조에 장착하고, 신경을 분리하고, 기저 활동과 자극 활동을 평가하여 평가할 수 있습니다.

마우스 Jejunal과 대장 세그먼트에서 장간막 구 심성 신경 활동의 생체 외 녹음에서

Axonal 흥분 기법 이상 및 퇴행 성 돌이킬 수 없는 이벤트를 앞 생물 변화를 검사 하는 강력한 도구를 제공 합니다. 이 원고는 마 취 쥐의 척 골 신경에 이러한 기술의 사용을 보여줍니다.

Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

단일 섬유 기록은 중추 및 말초 신경계에 적용할 수 있는 효과적인 전기 생리학적 기술입니다. 부착 된 동골 신경과 함께 손상되지 않은 DRG의 준비와 함께 전도 실패의 메커니즘을 검사합니다. 두 프로토콜 모두 말초 신경계의 통증과의 관계에 대한 이해를 향상시킵니다.

전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

학습하세요 생체 외 쥐 대장-직장 준비물을 이용한 결장 감각 신경의 전기생리학적 기록 방법을 통해 내장 통증의 신경 메커니즘을 연구하는 기법입니다. 이 프로토콜은 기계감각 특성 분석에 활용됩니다.

생체 외에서 쥐에 있는 저 승 구심 성 섬유의 Electrophysiological 속성의 특성

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