Name: Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 56 s
Description: 학습하세요 생체 내 척골신경의 축삼흥분성 측정법으로 말초신경 기능을 평가하는 방법을. Long-Evans 쥐를 이용하여 신경퇴행성 변화를 조기에 감지하고 질병 진행을 특성화하는 데 활용할 수 있습니다.

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프로젝트는 Lundbeck 재단, Novo Nordisk 기초, 덴마크 의학 연구 위원회는 루트비히와 사라 Elsass 재단, 신경과 및 Jytte 연구 재단 및 Kaj Dahlboms 재단에 의해 지원 되었다. R.A 국가 건강과 의료 연구 위원회의 호주 (#1091006)의 초기 경력 장래가 친교에 의해 지원 됩니다.

여기 설명 하는 모든 실험 절차 동물 관리 및 윤리 위원회의 UNSW 시드니를 준수 하 고 국민 건강 및 의료 연구 위원회 (NHMRC) 동물 실험에 대 한 호주 규정의 수행 했다.
1. 실험 설정
참고: 12 주 오래 된, 여성 롱-에반스 쥐가이 절차에서 사용 되었다.
<ol><li>분 O2 흐름 율 당 4 %isoflurane 및 1 L를 사용 하 여 유도 실에서 쥐 anesthetize 충분 한 마 취 righting 반사에 대 한 테스트 하 여 확인 하 고 유도 챔버에서 동물을 제거 하기 전에 그것의 부재를 보장. 참고 다양 한 마 취 에이전트 신경 흥분10대 차동 효력이 있다.</li>
	<li>안전 하 게 동물의 주 둥이 원뿔 첨부 파일에 놓고 분 O2 흐름 율 당 2.5% isoflurane 1 L의 유지 보수 복용량을 제공 합니다.</li>
	<li>동물의 발가락을 꼬 집 고 그것의 눈을 만지고 부드럽게 페달 철수 및 각 막 반사 검사 하 여 적절 한 마 취를 확인 합니다. 참고: 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈, 수 의사 연 고의 응용 프로그램은 권장 하지만 절차는 일반적으로 동물 마다 30 분 걸립니다 중요 하지.</li>
	<li>피드백 제어 난방 매트와 직장 온도계 프로브를 사용 하 여 37 ° C에서 쥐의 체온을 유지 한다. 높은 온도 함께 발생 하는 모든 피부 손상을 방지 하기 위해 40 ° C에 난방 매트 및 통합된 몸 온도 센서를 설정 합니다. 참고:이 좋습니다 모니터 및 기록 생리 적 조치 (심장 박동, 산소 포화, 체온, 호흡 속도)는 동물 생리 적 모니터링 시스템의 사용과 모든 초. 최적의 녹음 절차 주변 온도 코어 온도11 (그림 1) 보다 추운 수 로컬 사지 온도 측정을 포함 해야 합니다.</li>
	<li>살 균 장갑을 착용 하 고 항상 절차에 걸쳐 병원 체 자유로운 환경을 유지 하 70% 에탄올, 청소 된 악기를 사용 합니다.</li>
</ol>2. electrophysiological 설정
<ol><li>이 절차에 대 한 낮은 임피던스 플래티넘 뇌 파 (EEG) 바늘 전극을 사용 합니다.</li>
	<li>Hypothenar 근육과 등 부분의 4 자리를 통해 참조 전극을 통해 녹음 바늘 전극 (그림 1에 표시 된 보라색);를 삽입 하 여 기록 바늘 전극을 준비 (그림 1에 표시 된; 오렌지) 복합 근육 활동 전위 (Cmap) 기록.</li>
	<li>피부를 통해 접지 전극을 사이의 자극 및 기록 전극 (그림 1에 표시 된 녹색); 팔 뚝의 우수한 측면에 놓습니다. 근육 조직을 피하기 위해 전극을 삽입 하는 때 주의 합니다.</li>
	<li>경 피 적인 자극 바늘 전극을 음극 (그림 1,에 이라는 파란색)을 삽입 하 여 준비 약 4 m m는 cubital에 원심 팔꿈치 터널. (그림 1,에 이라는 빨간색) 양극 삽입 proximally axillar 지역의의 피부를 통해 약 1 cm.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56102/56102fig1.jpg"> 그림 1: 쥐 forelimb에 바늘 전극 배치의 회로도. 음극 (청색)이 약 4 m m 팔꿈치 cubital 갱도에 말 초 삽입 되 고 양극 (적색) 삽입 proximally axillar 지역의의 피부를 통해 약 1 cm. (녹색) 지상 바늘 전극 자극 및 기록 전극 사이 팔 뚝의 우수한 측면에서 피부를 통해 삽입 됩니다. 4번째 손가락의 등 쪽 부분 및 hypothenar 근육 통해 녹음 (보라색) 및 참조 (오렌지) 바늘 전극 삽입 됩니다. 온도 프로브 (회색)는 thenar 근육의 우수한 측면에 배치 됩니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56102/56102fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
3. axonal 흥분 절차
<ol><li>설치류 모터 신경 반 자동화를 사용 하 여 TRONDNF 프로토콜을 수행, 컴퓨터 제어 axonal 흥분 프로그램 일정 전류 자극 기 및 증폭기에 연결 (재료의 표 참조). 50/60 Hz 노이즈 제거 기를 사용 하 여 초과 50 Hz 전기 노이즈를 제거 합니다.<ol>
<li>동시에 CMAP 형태를 시각화 하는 1을 적용 하 여 hypothenar 근육에서 CMAP 기록 ms 구형 파 펄스 음극 바늘 전극과 척 골 신경.<ol>
<li>최적의 녹음을 달성,까지 일정 한 진폭으로 최적의 복 형 응답 곡선 각도 및 음극의 위치를 신중 하 게 조정 (그림 2A) 달성. 최적의 위치를 결정 하는 일단 안정 repositionable 전극 홀더를 가진 음극 선. 참고: 자동으로 사용 하는 소프트웨어, 아래에 설명 된 테스트 자극을 제공 하 고 늘리거나 줄입니다 전류 임계값을 달성 하는 데 필요한.</li>
		</ol>
</li>
		<li>1의 자극 강도 점차적으로 증가 하 여 자극-반응 곡선을 기록 1 ms 전류 mA 최대 응답을 얻을 때까지. 참고: 그림 2B와 2c에 보라색과 녹색 라인은 각각 자극 강도 및 자동화 시스템의 증분 증가 나타냅니다. 임계값 추적 대상 진폭 자극-응답 곡선에 가파른 슬로프의 영역에 해당 하는 최대 진폭의 40%로 자동으로 설정 됩니다. '문 턱'에서 변화 (40%를 유도 하는 데 필요한 자극 즉 CMAP) 각종에 의해 유도 된 테스트 자극은의 변수는 프로토콜의 나머지를 통해 얻은.</li>
		<li>임계값 electrotonus (테)를 포함 하 여 여러 axonal 흥분 매개 변수 기록 전류 임계값 (I / V) 관계 및 복구 주기 (RC) 참조에 설명 된 대로12. 참고: 컴퓨터 제어 axonal 흥분 프로그램 임계값 (테) 100 ms subthreshold depolarizing 및 전류를 hyperpolarizing으로 설정 된 제어 임계값의 ±40 %와 ± 20% 현재를 평가 합니다. 변화 후에 depolarizing 및 hyperpolarizing 전류 임계값에 자동으로 기록 됩니다 14 시간 지점에서 12 점과 현재 편광 100 ms 동안 현재 편광 후. 간접적으로 임계값 electrotonus internodal conductances 평가 하 고 막 잠재력의 표식입니다. I / V 관계에서 + 50 강도 대체 200 ms subthreshold 컨디셔닝 전류와 평가-100 %10% 단위로 제어 임계값의 %. I / V 관계 기간에는 전류는 더 이상 테에 달리, 분극의 강도 점진적으로 50에서 변경-100% %와 임계값 변경 각 강도로 1 평가 ms 정지는 현재 편광 후. I / V 관계1축 삭 조정 속성에 대 한 통찰력을 제공 합니다. RC는 짝된 펄스 패러다임, 초기 supramaximal 컨디셔닝 자극 적용 됩니다 다음 테스트 자극의 시리즈 특정 간격 2.5 ms에서이 매개 변수는 꾸벅꾸벅 졸 기에 잘 정의 된 일련의 이벤트가 발생 하는 테스트 200 양 평가 supramaximal 자극에 따라 축 삭의 지역입니다. 이러한 이벤트를 포함, 더 어렵게 이후 응답을 유도 하 고 하 중 및 상대적인 내 화물 기간 1계량은 전압 개폐 나+ 채널의 비활성화. 이 위치인 및 높게 한 흥분 빠른 칼륨 채널, superexcitability에 의해 계량에 의해 중재의 기간 충전 옵니다. 마지막으로, 천천히 활성화 칼륨 채널 중재 subexcitability로 정량 감소 흥분의 늦은 기간.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56102/56102fig2.jpg"> 그림 2: axonal 흥분 테스트에서 원시 데이터 패널 A 척 골 신경 자극의 증분 증가 후 abiphasic CMAP 응답 곡선을 보여 줍니다. 패널 B와 C 각각 자극 강도 (mA) 및 CMAP (mV)의 진폭을 나타냅니다. B와 C의 녹색 구성 요소는 자극 강도 자동된 증분 감소 및 CMAP 임계값 추적에 필요한 관련된 sigmoid 모양의 감소 묘사.
4. 게시물 전기 생리학 절차
<ol><li>Sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 별도 케이지를 쥐를 전송 합니다. 두지 마십시오 동물 무인 및 다른 동물의 회사에는 마 취에서 완전히 복구 되었습니다 때까지. 일단 쥐는 완전히 마 취에서 회복 하 고, 그것의 원래 감 금으로 다시 전송.</li>
	<li>연구의 완성에서 쥐 바르 (예: lethabarb)의 동물, 예를 들어 치명적인 복 주사에 대 한 고통 없이 안락사.</li>
</ol>

<ol><li>Krishnan, A. V., Lin, C. S. -Y., Park, S. B., Kiernan, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+ion+channels+from+bench+to+bedside%3A+a+translational+neuroscience+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+neurobiol%22%5BJournal%5D)">Axonal ion channels from bench to bedside: a translational neuroscience perspective.</a> Prog neurobiol. 89 (3), 288-313 (2009).</li>
<li>Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Park, S. B., Kiernan, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effects+on+axonal+function+after+intravenous+immunoglobulin+therapy+in+chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+neurol%22%5BJournal%5D)">Modulatory effects on axonal function after intravenous immunoglobulin therapy in chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy.</a> Arch neurol. 68 (7), 862-869 (2011).</li>
<li>Park, S. B., Goldstein, D., Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Friedlander, M. L., Kiernan, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+abnormalities+of+sensory+nerve+function+associated+with+oxaliplatin-induced+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Acute abnormalities of sensory nerve function associated with oxaliplatin-induced neurotoxicity.</a> J. Clin. Oncol. 27 (8), 1243-1249 (2009).</li>
<li>Arnold, R., Pussell, B. A., Pianta, T. J., Lin, C. S. -Y., Kiernan, M. C., Krishnan, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+calcineurin+inhibitor+treatment+and+peripheral+nerve+dysfunction+in+renal+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Association between calcineurin inhibitor treatment and peripheral nerve dysfunction in renal transplant recipients.</a> Am. J. Transplant. 13 (9), 2426-2432 (2013).</li>
<li>Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitability+properties+of+motor+axons+in+the+maturing+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Peripher.+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">Excitability properties of motor axons in the maturing mouse.</a> J. Peripher. Nerv. Syst. 14 (1), 45-53 (2009).</li>
<li>Boërio, D., Kalmar, B., Greensmith, L., Bostock, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitability+properties+of+mouse+motor+axons+in+the+mutant+SOD1%28G93A%29+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Excitability properties of mouse motor axons in the mutant SOD1(G93A) model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Muscle & Nerve. 41 (6), 774-784 (2010).</li>
<li>Alvarez, S., Calin, A., Graffmo, K. S., Moldovan, M., Krarup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+motor+axons+of+SOD1%28G127X%29+mutant+mice+are+susceptible+to+activity-dependent+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci%22%5BJournal%5D)">Peripheral motor axons of SOD1(G127X) mutant mice are susceptible to activity-dependent degeneration.</a> Neurosci. 241, 239-249 (2013).</li>
<li>Fledrich, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+neuregulin-1+modulates+disease+pathogenesis+in+rodent+models+of+Charcot-Marie-Tooth+disease+1A%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Soluble neuregulin-1 modulates disease pathogenesis in rodent models of Charcot-Marie-Tooth disease 1A.</a> Nat. Med. 20 (9), 1055-1061 (2014).</li>
<li>Vianello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+doses+of+arginine+butyrate+derivatives+improve+dystrophic+phenotype+and+restore+membrane+integrity+in+DMD+models%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Low doses of arginine butyrate derivatives improve dystrophic phenotype and restore membrane integrity in DMD models.</a> FASEB J. 28 (6), 2603-2619 (2014).</li>
<li>Osaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anesthetic+agents+on+in+vivo+axonal+HCN+current+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Effects of anesthetic agents on in vivo axonal HCN current in normal mice.</a> Clin Neurophysiol. 126 (10), 2033-2039 (2015).</li>
<li>Biessels, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotyping+animal+models+of+diabetic+neuropathy%3A+a+consensus+statement+of+the+diabetic+neuropathy+study+group+of+the+EASD+%28Neurodiab%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Peripher.+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">Phenotyping animal models of diabetic neuropathy: a consensus statement of the diabetic neuropathy study group of the EASD (Neurodiab).</a> J. Peripher. Nerv. Syst. 19 (2), 77-87 (2014).</li>
<li>Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+mouse+motor+nerve+excitability+and+the+effects+of+polarizing+currents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Peripher.+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">A model of mouse motor nerve excitability and the effects of polarizing currents.</a> J. Peripher. Nerv. Syst. 16 (4), 322-333 (2011).</li>
<li>Arnold, R., Moldovan, M., Rosberg, M. R., Krishnan, A. V., Morris, R., Krarup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+excitability+in+the+rat+forelimb%3A+a+technique+to+improve+translational+utility%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Nerve excitability in the rat forelimb: a technique to improve translational utility.</a> J. Neurosci. Methods. 275, 19-24 (2017).</li>
<li>Moldovan, M., Alvarez, S., Krarup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+axon+excitability+during+Wallerian+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Motor axon excitability during Wallerian degeneration.</a> Brain. 132 (Pt 2), 511-523 (2009).</li>
<li>Madison, R. D., Robinson, G. A., Krarup, C., Moldovan, M., Li, Q., Wilson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+electrophoresis+and+in+vivo+electrophysiology+of+peripheral+nerve+using+DC+field+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">In vitro electrophoresis and in vivo electrophysiology of peripheral nerve using DC field stimulation.</a> J. Neurosci. Methods. 225, 90-96 (2014).</li>
<li>Moldovan, M., Krarup, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Na%2B%2FK%2B+pump+function+following+repetitive+activity+in+mouse+peripheral+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Na+/K+ pump function following repetitive activity in mouse peripheral nerve.</a> J. Neurosci. Methods. 155 (2), 161-171 (2006).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

설명된 절차 설명 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 최소한-침략 적 기법을 수 수 생물 속성의 평가 및 축 삭의 막 잠재력 시간의 짧은 기간에. 신경의 노출을 요구 하는 다른 더 침략 적 기법에 비해 axonal 흥분 테스트의 현재 방법 유도 최소한의 조직 손상의 생리 조건을 유지 비보에 평가 활성화는 관심의 신경 반복된 측정에 대 한 수 있습니다.
되도록 일관 된 결과 몇 가지 방법론 고려 사항 해결 될 필요가 있습니다. 1 개의 그런 요인은 농도 및 마 취의 종류입니다. 그것은 이전 입증 되었습니다 그 isoflurane hyperpolarization-활성화 고리형 뉴클레오티드 개폐 채널10에 효과가 있다. 또는 주 사용 마 취 혼합 medetomidine, midazolam과 butorphanol 조사 하 고 또한 시간10이상 신경 흥분에 효과 증명. Medetomidine/...

Electrophysiological 기술의 사용 신경 질환에서 말 초 신경 기능 vivo에서 조사를 위한 필수적인 도구입니다. 기존의 신경 전도 방법 supramaximal 자극 모터 활동 전위의 진폭 및 대기 시간을 기록 하는 데 사용 합니다. 이러한 기술은 빠른 섬유의 전도 속도 및 섬유의 수에 따라서 유용한 정보를 제공 합니다. 보완 하는 유용한 도구가 axonal 흥분 테스트입니다. 이 기술은 정교한 electrophysiological 자극 패턴을 사용 하 여 주변 신경, 이온 채널, 에너지 종속 펌프, 이온 교환 프로세스 및 막 잠재적인 활동의 생물 속성을 직접 평가 하기 위해 1.
Axonal 흥분 테스트는 pathophysiological 프로세스와 다양 한 신경 질환에 치료 내정간섭의 효과 조사 하는 임상 설정에서 일반적으로 이용 된다. 중요 한 것은, axonal 흥분 조치는 정 맥 면역 글로불린 (IVIg) 치료2, 등 말 초 신경 기능에 영향을 주는 치료 내정간섭에 민감한 화학 요법3 및 calcineurin 억제제 (CNI) 치료 4. 비록 이러한 연구는 중요 한 통찰력을 제공 하 고, 임상 연구는 종종 초기 질병 특성 및 새로운 치료 옵션5의 조사 배제. 따라서, 신경 성 질환의 동물 모델에서 이러한 메서드를 사용 하 여 최근 견인6,7,,89를 얻고 있다. 사실, 이러한 메서드는 따라서 변환 연구 전진이 질환과 관련 된 특정 신경 흥분 성 변화를 이해 하는 기회를 제공 합니다.
여기에 설명 된 절차는 그대로 쥐의 척 골 신경에 기록 axonal 흥분 조치 간단 하 고 신뢰할 수 있는 방법입니다.

<table><tbody><tr><td>QTracS 프로그램</td><td>Digitimer Ltd.</td><td></td><td>축삭 흥분성 프로그램</td></tr><tr><td>AM-Systems 2200, 아날로그 자극 아이솔레이터, 2200V/50Hz</td><td>SDR 과학</td><td>850005</td><td>자극기</td></tr><tr><td>고성능 AC 증폭기 모델 LP511</td><td>Grass Technologies</td><td></td><td>증폭기</td></tr><tr><td>Humbug 50/60Hz 노이즈 제거기</td><td>Quest Scientific Instruments</td><td>726310</td><td>노이즈 제거기</td></tr><tr><td>저임피던스 플래티넘 단극하 피하 바늘 전극</td><td>Grass Technologies</td><td>F-E2-24</td><td>기록 전극, 10mm 길이, 30</td></tr>게이지 <tr><td>저임피던스 백금 뇌파 검사 바늘 전극</td><td>Cephalon</td><td>9013L0702</td><td>자극 전극, 10mm 길이, 30</td></tr>게이지 <tr><td>다기능 I/O 장치 모델 USB-6341</td><td>National Instruments</td><td></td><td>다기능 입력/출력 장치</td></tr><tr><td>철베이스 플레이트 IP</td><td>나리시게 과학 기기 연구소</td><td></td><td>자극 바늘 전극을 제자리에 고정하는 데 사용</td></tr><tr><td>회전 X-block X-4</td><td>나리시게 과학 기기 연구소</td><td></td><td>자극 바늘 전극을 제자리에 고정하는 데 사용</td></tr><tr><td>마그네틱 스탠드 GJ-8</td><td>나리시게 과학 기기 연구소</td><td></td><td>자극 바늘 전극을 제자리에 고정하는 데 사용</td></tr><tr><td>Micromanipulator M-3333</td><td>Narishige Scientific Instrument Laboratory</td><td></td><td>자극 바늘 전극을 제자리에 고정하는 데 사용됩니다</td></tr></tbody></table>.

vivo에서 axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

전기 생리학 주변 신경 기능 비보의 객관적인 평가 수 있습니다. 전통적인 신경 전도 같은 진폭 및 대기 만성 축 삭 손실 및 검출 demyelination, 각각 측정 한다. "임계값 추적"으로 axonal 흥분 기술 이온 채널, 펌프 및 급성 기능 관련 고 퇴행 성 이벤트 앞에 있습니다 교환기의 활동에 관한 정보를 제공 하 여 이러한 조치에 따라 확장 합니다. 따라서, axonal 흥분 성 신경 질환의 동물 모델에서의 사용 새로운 치료 적 중재를 평가 하기 위해 유용한 vivo에서 측정을 제공할 수 있습니다. 여기는 쥐 척 골 신경에 모터 axonal 흥분 기술의 여러 측정값에 대 한 실험 설정에 설명합니다.
동물은 isoflurane와 취 고 신중 하 게 보장 하기 위해 모니터링 지속적이 고 적절 한 마 취의 깊이. 체온, 호흡 속도, 심장 박동과 혈액에 산소의 채도 지속적으로 모니터링 된다. Axonal 흥분 연구는 척 골 신경 및 녹음의 forelimb 발 hypothenar 근육에서의 경 피 적인 자극을 사용 하 여 수행 됩니다. 올바른 전극 위치와 진폭 자극 강도 증가 함께 증가 분명 복합 근육 활동 전위 기록 됩니다. 다음 순서로 5 특정 흥분 측정값을 생성 하는 전기 펄스의 시리즈를 제공 하는 자동화 된 프로그램 활용 다음: 전류 임계값, 임계값 electrotonus, 강도 기간 시간 상수, 자극 응답 동작 관계 그리고 복구 주기입니다.
여기에 제시 된 데이터 이러한 반복은 같은 날 부과 때 왼쪽과 오른쪽 척 골 신경 사이의 유사성을 보여 나타냅니다. 이 설정에서 이러한 기술의 제한 시간과 복용량 마 취의 효과입니다. 신중 모니터링 하 고 이러한 변수의 기록 분석 시 고려 사항을 위해 이루어져야 한다.

쥐 척 골 신경의 electrophysiological 조치는 현재 프로토콜을 획득 했다. 그림 3 에서는 12 주 된 여성 긴 에반스 쥐의 왼쪽된 척 골 신경에서 기록 하는 대표를 보여 줍니다. 복합 근육 활동 전위는 동시에 활성화는 섬유의 수를 관련이 있습니다. Supramaximal 피크 응답 (mV) (그림 3A)는 거기에에서는 변화가 없습니다 (그림 2B) 응답 될 때까지 자극을 점차적으로 증가 하는 때 피크 응답을 보여 줍니다.
그림 3B 나타내는 전류-전압 (I / V) 관계 기간 (200 ms) 및 그들의 강렬에 더 이상 전류에 의해 생산...

Axonal 흥분 기법 이상 및 퇴행 성 돌이킬 수 없는 이벤트를 앞 생물 변화를 검사 하는 강력한 도구를 제공 합니다. 이 원고는 마 취 쥐의 척 골 신경에 이러한 기술의 사용을 보여줍니다.

Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

이 기술의 전반적인 목표는 살아있는 쥐의 척골신경에 대한 일련의 흥분성 특성을 결정하는 것입니다. 이 방법은 비가역적인 신경 퇴행성 사건이 발생하기 전의 신경 기능의 병적 변화를 측정할 수 있는가와 같은 신경과학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 생체 내에서 말초 신경 기능을 간접적으로 평가할 수 있어, 질병 진행의 특성을 규명하기 위한 반복 측정이 가능하다는 점입니다.절차를 시작하기 전에, 12주령 female Long-Evans rat의 발 withdrawal 및 각막 반사를 통해 적절한 진정 수준을 확인하십시오. rat을 피드백 제어 가열 패드 위에 놓고 직장 체온계를 삽입하여 체온을 37 °C로 유지하십시오. 복합 근육 활동 전위를 기록하기 위해, 기준 전극은 네 번째 발가락의 등측에 삽입하고 기록 전극은 소지구근에 삽입하십시오.접지 전극을 자극 전극과 기록 전극 사이의 전완 상단 피부를 통해 배치합니다. 그다음 경피적 자극 바늘 음극을 팔꿈치 주관 터널(cubital tunnel)에서 원위부로 약 4 mm 지점에 삽입하고, 양극은 겨드랑이 부위 피부를 통해 근위부로 약 1 cm 지점에 삽입합니다. 다음으로 정전류 자극기와 증폭기가 연결된 반자동 컴퓨터 제어 축삭 흥분성 프로그램을 사용하여, 음극 바늘 전극으로 척골 신경에 1 ms 사각파 펄스를 가하고 가쪽 손바닥 근육(hypothenar muscle)에서 복합 근육 활동 전위를 기록합니다.일정한 진폭을 가진 최적의 이상성 반응 곡선이 나타날 때까지 음극의 각도 및/또는 위치를 세밀하게 조절하고, 위치 재조정이 가능한 전극 홀더로 음극을 고정합니다. 임계값 추적을 위해서는 자극에 대해 비례적인 반응이 나타나는 것이 매우 중요합니다. 성공적인 반응은 자극 반응 곡선에서 시그모이드 형태가 나타나는 것으로 확인됩니다.자극 반응 곡선을 기록하려면, 최대 반응이 나타날 때까지 1ms 펄스의 자극 강도를 점진적으로 증가시킵니다. 임계 전기긴장(threshold electrotonus), 전류 임계값 관계 및 회복 주기를 포함한 여러 축삭 흥분성 파라미터를 기록하십시오. 그 후, 쥐를 개별 케이지로 옮겨 완전히 회복될 때까지 모니터링하십시오.내향 및 외향 정류 전류는 전류-전압 파라미터의 탈분극 및 과분극 전류를 통해 평가할 수 있습니다. 절간 전도도 및 막 전위에 관한 데이터는 임계 전기긴장 파형으로 나타나는 장시간의

in-vivo-electrophysiological-measurement-rat-ulnar-nerve-with-axonal

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 추상은 화학 요법 치료를받은 환자에서 neurotoxicity의 발전을 평가하는 소설 방법을 설명합니다. 기존의 평가 방법은 신경 기능의 초기 변화를 감지하는 능력에 제한이 있지만, 신경 흥분 기술은 pathophysiology로 심각한 neurotoxicity와 통찰력 위험 환자의 조기 식별을 제공합니다.

화학 요법 - 유도 Neurotoxicity의 신경 흥분 평가

이 비디오는 척골 신경에 전기 자극을 가하고, 최적의 신호를 위해 전극을 조정하고, 신경 기능을 평가하기 위해 자극을 증가시켜 쥐의 복합 근육 활동 전위(CMAP)를 기록하는 절차를 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 신경 장애에서 말초 신경 기능에 대한 생체 내 조사를 할 수 있습니다.

쥐의 복합 근육 활동 전위의 생체 내 측정

이 비디오는 쥐의 C 섬유 신경 전도에 대한 단일 섬유 기록을 보여줍니다. 마취된 쥐는 하지에 감각 및 운동 공급을 제공하는 좌골 신경을 노출시키기 위해 절개됩니다. 그런 다음 개별 C-섬유가 노출됩니다. 발에 이식된 자극 전극을 사용하여 전기 자극이 제공되며, 단일 신경 섬유에서 반응이 기록됩니다.

쥐에서 좌골 신경 C-섬유의 생체 내 단일 섬유 기록

생체 내에서 신경의 전도 특성의 측정은 신경 근육 질환의 다양한 동물 모델을 특성화 할 수있는 강력한 도구를 예시. 여기서, 우리는 마취 된 쥐의 좌골 신경의 전기 생리 분석이 수행 될 수있는 간단하고 신뢰성있는 프로토콜을 제시한다.

마우스 좌골 신경에 생체 전기 생리 측정에서

이 작품 당뇨병 neuropathic 신경의 활동 전위를 차단 하 고 강도 집중 된 초음파를 적용 한 방법론을 제공 합니다.

당뇨병 쥐 모델에서 신경 전도 대 한 초음파 도구 차단

신경 유도의 측정 neurodegeneration의 마우스 모델을 평가 하는 유용한 도구 이지만 그것은 자주 hindlimbs에 좌 골 신경을 자극에 적용 됩니다. 여기, 복합 근육 활동 전위 (CMAP) vivo에서 상 완 신경 총에 의해 innervated 마우스 forelimb 근육에서 측정 하는 기술을 설명 합니다.

Vivo에서 모터 신경 퇴보의 마우스 모델에서 앞 발에서 복합 근육 활동 전위의 electrophysiological 측정

단일 섬유 기록은 중추 및 말초 신경계에 적용할 수 있는 효과적인 전기 생리학적 기술입니다. 부착 된 동골 신경과 함께 손상되지 않은 DRG의 준비와 함께 전도 실패의 메커니즘을 검사합니다. 두 프로토콜 모두 말초 신경계의 통증과의 관계에 대한 이해를 향상시킵니다.

전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

제시된 것은 쥐에서 상이한 유형의 중간 신경(MN) 병변 및 수리를 생성하는 프로토콜이다. 추가적으로, 프로토콜은 몇몇 비침범성 행동 시험 및 생리적인 측정을 사용하여 신경의 기능적 회복을 평가하는 방법을 보여줍니다.

쥐에서 중간 신경 재생을 평가하는 기능적 및 생리적 방법

호프만 반사(H-반사)에 기초한 경직의 임상 평가와 말초 신경의 전기 자극을 사용하는 것은 확립된 방법입니다. 여기에서 우리는 마우스 앞발에서 H-반사 정량화를 위한 말단 및 직접적인 신경 자극을 위한 프로토콜을 제공합니다.

마우스의 말단 H-반사 측정

이 기사에서는 설치류 비복근 근육에서 생체 내 (표면 및 바늘 전극 어레이 사용) 및 생체 외 (유전체 셀 사용) 전기 임피던스 근조영술을 수행하는 방법에 대해 자세히 설명합니다. 생쥐와 쥐 모두에서 기술을 시연하고 사용 가능한 수정 (즉, 비만 동물, 새끼)을 자세히 설명합니다.

설치류에서 생체 내 및 생체 외 전기 임피던스 근전도 수행

이 프로토콜은 생체외 전기생리학적 자극을 위한 래트 전체 좌골 신경 조직의 제조를 기술하고, 환경적으로 조절된, 두 구획, 관류 식염수 욕조에서 기록한다.

Ex Vivo 신경 생리학을위한 쥐 좌골 신경의 제조

학습하세요 생체 내 척골신경의 축삼흥분성 측정법으로 말초신경 기능을 평가하는 방법을. Long-Evans 쥐를 이용하여 신경퇴행성 변화를 조기에 감지하고 질병 진행을 특성화하는 데 활용할 수 있습니다.

Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

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