Name: Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 학습하세요 Wolbachia에 감염된 Aedes aegypti 모기를 사육하고 유지하는 방법을. 이 프로토콜은 뎅기열 및 기타 바이러스 전파 억제를 위한 질병 관리 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

우리는 Heng 린 응, 크리스 패튼, Petrina 존슨 및 우리의 식민지 유지 관리 방법의 개발에 그들의 공헌에 대 한 클레어 Doig 및 원고를 개선 하는 데 도움이 그들의 제안에 대 한 3 명의 익명 검토자 인정 합니다. 우리의 연구 국민 건강에서 아에 프로그램 그랜트와 장학금에 의해 지원 됩니다 그리고 의료 연구 위원회 및 번역 Wellcome 트러스트에서 부여. 파 한 호주 정부 연구 훈련 프로그램 장학금의 받는 사람입니다.

멜버른 인간의 윤리 위원회의 대학에 의해 승인 되었다 혈액 인간 주제에 모기의 먹이 (승인 #: 0723847). 제공 하는 모든 자원 봉사자 정보 서 면된 동의.
1. 애벌레 양육
참고: 모기는 26 ± 0.5 ° C 및 50-70% 상대 습도,이 식민지 유지 관리 프로토콜에 대 한 12시 12분 h (빛: 다크) photoperiod와에서 개최 됩니다. 이러한 조건을 평균 기후 조건, 호주 및 최적의 열 범위 Ae aegypti 생존과 개발44,,4546대와 비슷합니다. 높은 온도 Wolbachia 감염 모기 식민지에서의 손실 될 수 있습니다 고 피할된47이어야 한다. 우리는 근 친 결혼;을 최소화 하기 위해 인구 당 적어도 500 개인 유지 더 작은 크기의 식민지 유지 피트 니스 결과 [로스 외 미 발표] 가질 수 있습니다. 이러한 조건과 가정 적절 한 영양에서 평균 세대 시간은 ( 표 1참조)는 28 일 이다.
<ol><li>물고기 음식의 ~ 300 mg에 트레이 (그림 1A) (역방향 삼 투 물 또는 세 수도 물, 수돗물 사용 전에 h 24 쟁반에 두어서 생성), 물 3 L를 포함 하는 기판에 계란을 잠수함 (분쇄 한 태블릿 테이블의 자료를 참조 하십시오)와 해칭48유도 활성 건조 효 모의 몇 가지 곡물.</li>
	<li>해칭, 후에 1 일 물 (그림 1B)의 4 L을 포함 하는 쟁반에 약 500 애벌레를 전송, 리모콘 카운터를 사용 하 여 계산 하는 유리 피 펫을 사용 합니다. 각 트레이를 두 짓 눌린된 물고기 음식 정제를 추가 합니다. 필요한 경우, 애벌레 (그림 1A), 양육에 대 한 다양 한 크기의 용기를 사용 하지만 애벌레 밀도 밀을 피하기 위해 0.5 애벌레/mL 이하로 유지.</li>
	<li>확인 매일 트레이 애벌레가 충분 한 음식; 매 2 일 쟁반에 약 2 개의 식품 정제를 추가 합니다. 식품 광고 libitum 제공 하지만 0.5 mg/유 충/일은 개발 동기 이며, 신체 크기를 보장 하기 위해이 기간 동안 사용할 수 있는 일치 하는, 실험의 결과 혼동 수 있습니다 그렇지 않으면 보장 (대표 결과 참조).</li>
	<li>애벌레의 지나치게 하지 않도록 주의 특히 작은 양육 용기 덜 물 면적 및 볼륨. 물 흐린 경우 또는 경우 상당한 애벌레 사망률, 신선한 물;로 대체 사망률은 애벌레 최적으로 먹이 면 무시할 수 있어야 합니다.</li>
</ol>2. 성인 출현
참고: 애벌레 먹이 잘 하는 경우 부 화 후 5 일에서 pupate에 시작 되 고 대부분 부 화 후 7 일에 의해 pupate 한다. 성인 26 ° C에서 최적으로 유지 하는 경우 pupation 후 약 2 일 신흥 시작 됩니다 ( 대표 결과참조). 애벌레의 개발 때 하지 Wolbachia 감염에 의해 일반적으로 영향을 받는 충분 한 음식23,,3949제공 됩니다.
<ol><li>부 화 후 7 일 좋은 메쉬를 통해 용지함의 전체 내용을 부 어 (기 공 크기 0.4 m m). Ovicups에서 나중에 사용에 대 한 필터링 된 애벌레 물을 유지 ("혈액 먹이 산란" 섹션 참조). 메쉬를 반전 하 고 번데기를 전송 하는 물 200 mL와 함께 플라스틱 용기에 그것을 찍어. 모든 애벌레 남아 있으면 추가 음식을 제공 합니다.</li>
	<li>10% 자당 해결책 (그림 1 층)의 2 개의 컵 및 건조 (그림 1E)을 방지 하기 위해 젖은 솜 털의 2 개의 컵을 제공 하 여 성인 출현 케이지 (그림 1C)을 준비 합니다.</li>
	<li>번데기 섹스에 의해 정렬할 필요가 없는 경우 pupae의 lidded 컨테이너 감 금 소에 놓고 뚜껑을 약간 성인으로 등장할 수 있도록 열려 떠나. 또는, 익사를 최소화 하기 위해 컨테이너를 통해 거꾸로 깔때기를 놓습니다. 케이지 방지 느린 개발자에 대 한 선택에서 컨테이너를 제거 하기 전에 모든 성인 등장 확인 합니다.</li>
</ol>3. 번데기 Outcrossing 대 파는
<ol><li>번데기는 섹스 (예를 들어, outcrossing 위한)에 의해 정렬할 필요가, 플라스틱 쟁반 애벌레에서 번데기 하 고 별도 남녀 (그림 2) 플라스틱 용기 (그림 1A)에 물 200 mL와 함께 모든 24 h 각 성의 원하는 번호까지 에 도달 했습니다. 용기에 뚜껑을 배치 하 고 폐쇄 그들을 두고.</li>
	<li>성인은 컨테이너;으로 나타날 것입니다. 감 금 소 (그림 2C)로 발표 하기 전에 그들의 섹스를 확인 합니다. 어른 sexed 하지 올바르게 출현의 24 시간 이내 흡 인기와 성적 성숙에 도달 하기 전에 제거 합니다. 일단 남녀 확인 되었습니다, 감 금 소 모든 24 h에 성인을 릴리스.</li>
	<li>
Wolbachia를-자연적인 인구에 유사한 유전 배경의 감염 된 식민지 outcross Wolbachia추가 하 여-의 여성을 실험실 식민지에서 감 금 소에 감염 되지 않은 남성 ovitraps에 의해 수집 된 계란에서 파생 된 감염 필드39, 인구 당 500 개인의 소정의 밀도 유지.
	<ol>
<li>적어도 87.5% 필드 인구39유전자와 유사한 식민지를 생산 하기 위해 적어도 3 개의 연속 세대 outcrossing 반복 합니다. 중요:이 단계에서 남녀 올바른지 확인 (단계 3.1 참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>여성 애 aegypti 는 일반적으로 내 화물50짝짓기의 시간 더 수정입니다. 때 식민지 outcrossing, 허용 여성 남성 2 일에 대 한 별도 연습장에 성숙 하 고 다음으로 남성 여성을 발음에 모든 남성에 게 동등한 기회를 제공 하.</li>
</ol>4. 혈액 먹이 산란
<ol><li>
적어도 3 일 후에 마지막 여성 혈액 충분 한 시간을 성숙 수 있도록 수 유 전에 나왔다 기다립니다. 혈액 특히 장 수22,,2449저하 Wolbachia 감염 모기에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 출현 후 2 주 이내 여성을 피드. 먹이 속도 향상 시킬 수 유 전날 설탕 컵을 제거 합니다.
	<ol>
<li>여성 모기 먹이를 수 있도록으로 그들의 팔 뚝을 삽입 하는 자원 봉사를 부탁 드립니다. 대부분 여성 투입 5 분 이내에 피드 해야 하지만 느린 모이 통에 대 한 선택 영역을 줄이기 위해 15 분, 또는 때까지 모든 암컷은 눈에 띄게 부풀어 오른; 장에 팔 뚝을 두고 물린에서 손을 보호 하기 위해 라텍스 장갑은 옵션 이지만 권장.</li>
		<li>혈액 수 유 후 2 일으로 계란을 낳 기 위해 여성에 대 한 애벌레 양육 물을 포함 하 고 샌드 페이퍼 (그림 1G) (또는 필터 종이 (그림 1 H))의 스트립을 늘어서 두 개의 플라스틱 컵을 놓습니다. 부분적으로 그것을 축축한 유지 하는 물에서 샌드 페이퍼 스트립 잠수함. 물 산란 컵 밖에 서 그들의 알을 낳은에서 여성을 방지 하기 위해 다른 소스를 제거 합니다. 참고:는 컵에 수돗물을 사용할 수 있습니다 하지만 애벌레 양육 물 산란51,52 장려 및 여성 더 동기적으로 그들의 알을 낳는 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 달걀 수집 및 컨디셔닝
<ol><li>여성은 바로 위에 물 선; 샌드 페이퍼에 알 것 이다 수집 하 고 더 많은 계란이 마련 매일 샌드 페이퍼 스트립 교체. Note는 산란 최대 1 주일까지 계속 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 30 종이 타월에 blotting에 의해 부분적으로 건조 샌드 페이퍼 스트립 s, 계란을 꺼내 려 하지 않도록 주의 복용. 그리고 건조 종이 타월의 시트에서 스트립 포장 접착 비닐 봉투 (그림 1I)에 배치 합니다.</li>
	<li>(그림 3) 해 현미경 계란의 상태를 확인 하십시오. 샌드 페이퍼 스트립 너무 젖, 계란 물 (그림 3B), 침수 되 고 전에 해치 수 있습니다 하지만 너무 가혹 하 게 건조, 달걀 (그림 3C) 축소 수 있습니다.</li>
	<li>계란 3 일 후 컬렉션 넘어 언제 든 해치 할 수 있습니다. 차세대 개인의 큰 임의의 수영장에서 샘플링은 되도록 물의 동일한 컨테이너에 있는 모든 일에 걸쳐 수집한 각 식민지에서 모든 달걀을 부 화 한다.</li>
	<li>장기 보관을 위해 계란에에서 계속 높은 (> 80%) 습도에 봉인 된 컨테이너 약 20 ° c.에 이러한 조건 하에서 높은 해치 요금53,54를 유지 하면서 몇 달 동안 Wolbachia 없이 계란을 저장할 수 있습니다.</li>
	<li>일부 Wolbachia 감염 크게 나이49,55와 계란의 가능성을 줄일 수, 해치 Wolbachia에서 계란-라인 컬렉션 관련에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 1 주일 이내 감염 변종입니다. 혈액 더 많은 알 필요 하면 1 주일 후 다시 여성을 피드.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>하루</td>
			<td colspan="3">단계</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td colspan="3">해치 계란</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td colspan="3">쟁반에 수 애벌레</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td colspan="3">애벌레와 번데기 식민지 연습장에 전송</td>
		</tr>
<tr>
<td>17</td>
			<td colspan="3">혈액 피드 여성 성인</td>
		</tr>
<tr>
<td>21</td>
			<td colspan="3">계란을 수집 시작</td>
		</tr>
<tr>
<td>25</td>
			<td colspan="3">계란을 수집 완료</td>
		</tr>
<tr>
<td>28</td>
			<td colspan="3">해치 계란</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 개요 26 Ae aegypti 식민지 유지 관리 일정의 ° c. 계란의 부 화는 여성의 혈액 공급의 타이밍은 유연 하지만, 이러한 단계에서 긴 기간 피해 야 한다 특히 모기가 Wolbachia, 사망률을 최소화 하기 위해 감염에 대 한. 이 일정에 따라 최적으로 애벌레는 먹이 빠르게 또는 느리게 개발 하거나 모든 생활 단계에서 성숙 하는 모기에 대 한 선택을 최소화 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig1.jpg"> 그림 1: 장비 실험실에서 Ae aegypti 양육. 부 화 계란 또는 애벌레 500, 볼륨을 양육에 대 한 사용 (A) 플라스틱 용기 750과 5000 mL (왼쪽에서 오른쪽). 물 4 L에 보통 500 애벌레 제어 밀도에 애벌레를 양육에 사용 되는 (B) 쟁반 (C) 19.7 L 및 (D) 3 패 케이지 주택 성인 사용. 25 성인의 밀도 또는 리터 당 충분 한 공간을 제공 하기 위해 유지 되어야 한다. (E) 성인 물 소스로 제공 촉촉한 솜 털과 35 mL 컵. 자당 솔루션 코드 또는 치과 심지를 통해 제공 하는 설탕의 근원으로 (F) 35 mL 컵. (HG-) 컵 애벌레 양육 물으로 채워지고 늘어서 샌드 페이퍼 또는 필터 종이의 산란 기판 (G , H, 각각). (나) 지퍼 잠금 가방 샌드 페이퍼 스트립 또는 필터 종이의 저장을 위해 사용. 샌드 페이퍼에 검은 반점은 모기 계란. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig2.jpg"> 그림 2: 측면 (A) 및 pupae와 성인 Ae aegypti (C) 보여주는 그들의 성적 동종이 형의 등 쪽 (B) 플레이. 남성은 왼쪽 및 오른쪽 각 패널에 여성에 배치 됩니다. 먹 일 때 최적으로, 남성과 여성의 번데기 크기;으로 구분 됩니다. 여성 남성 (A) 보다 더 큰 고 아첨 측면 (B)는 남성에 비해 상대적으로 주먹코 cephalothorax. 성인 남성은 그들의 plumose 안테나와 긴 palps에 의해 주로 여성 모든 양육 조건에 쉽게 구별입니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig3.jpg"> 그림 3입니다. 다른 조건 하에서 4 일 오래 된 Ae aegypti 계란. (A) 본래 어떤 보이는 수 분 하지 않고 높은 (> 80%)의 습도 유지 하는 샌드 페이퍼 스트립에 계란. 올바르게 유지 관리 하는 경우 해치 요금 야생-타입 Ae aegypti 에 대 한 90% 이상 이어야 한다. (B) 계란 물 (조 숙한 해칭)에 빠져들 되 고 전에 해치 분리 된 달걀 모자와 보이는 유 충에 의해 구별 된다. 샌드 페이퍼 스트립 너무 촉촉한 유지 했다 나타냅니다. (C) 알을 너무 가혹 하 게 건조 축소 수 있습니다, 그리고 그들의 오목한 모양에 의해 명확 하 게 볼 수 있습니다. 샌드 페이퍼 뻣 뻣 한 경우 또한 알이 너무 건조 수 있습니다 나타냅니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

여기에 제시 된 Wolbachia의 유지 보수에 대 한 프로토콜에 따라-감염 된 Ae aegypti 일관성 있는 품질의 건강 한 모기 실험에 대 한 생산 및 필드 자료 열을 확인 해야. (참조57참조) 모기의 대량 양의 생산 우선 순위를 지정 하는 다른 프로토콜, 달리 방법 모두 세대 편안한 양육 조건, 구현 하 여 고에서 자신의 체력을 극대화에 집중 근 친, 선택 및 실험실 적응을 최소화 하 여 세대. 이 프로토콜도 Ae aegypti Wolbachia 감염을 위해 특별히 설계 되었습니다 그러나 Ae aegypti의 모든 종류에 적합 해야 한다. 그러나, 그것은 인구 억제57,58를 달성 하기 위해 높은 숫자를 필요로 하는 살 균 또는 호환 되지 않는 곤충 자료에 필요한 수 있는 (순서 주 당 수백만)...

Aedes aegypti 모기는 뎅기열, Zika chikungunya1를 포함 하 여 세계에서 가장 중요 한 arboviruses의 일부를 전송 합니다. 이러한 바이러스 Ae aegypti 열 대 지방에 널리 분포2,,34를 확장 하는 계속 되 고 세계 보건에 대 한 증가 위협 되 고 있다. 여성 애 aegypti 우선적으로 인간의 피5 에 피드 하 고 따라서 인구는 가장 조밀한 도시 지역에서 특히 인 간에 게 가까운 근접에서 사는 경향이. 인간과이 가까운 협회를 통해 그들은 또한 타이어, 냄비, 하 수구 및 물 탱크6,7을 포함 하 여 인공 서식 지에서 번 식에 적응 했습니다. Ae aegypti 또한 쉽게 어디 그들은 유지 될 수 있는 어떤 특별 한 필요 조건 없이 Aedes 속8, 다른 종족과 달리 필드에서 직접 수집 후 실험실 환경에 적응 9,10. 유지 보수의 용이성 그들의 분야의 광범위 한 범위에 실험실에서 널리 공부 그들 본, 전송할 수 있습니다 궁극적으로 질병 모기 제어를 목표로 하는 것.
전통적으로, arboviral 제어 모기 인구를 줄이기 위해 살충제의 사용에 크게 의존 합니다. 그러나, 접근 수정된 모기 실험실에서 양육 하 고 자연적인 인구에 발표에서 증가 관심이 있다. 출시 된 모기는 유전자에11,12,13, 생물학14,15, 방사선 조사16, 화학 치료17,18를 통해 수정할 수 있습니다. 또는 결합 된 기법19 모기 인구를 억제 하거나 arboviral 전송20내 화물은 모기와 함께 그들을 대체 합니다.
Wolbachia 박테리아 arboviruses. 에 대 한 생물 학적 제어 에이전트로 현재 사용 되 고 있다 여러 변종의 Wolbachia 최근 Ae aegypti 배아 microinjection21,22,,2324를 사용 하 여 실험적으로로 소개 되었다. 이러한 변종 유포 및 떨어지면서 그들의 전송 잠재적인23,25,,2627,28 모기에 복제 하는 arboviruses의 용량을 줄일 . 그러나 Wolbachia 감염 감염 된 남성과 감염 되지 않은 여성22친구 때 특정 긴장 무 균을 유도 하는, 자손에 게 어머니에서 전송 됩니다. Wolbachia-감염 된 남성 최근에 다른 Aedes 종15,29에서 설명 하는 천연 모기 인구를 억제 하에 따라서 나올 수 있습니다. 그러나, 이후 Wolbachia 또한 Ae aegyptiarboviral 전송 억제, 모기 수 또한 나올 가난한 벡터 본토 인구를 바꿉니다. Ae aegypti Wolbachia 실험적으로 감염 됩니다 지금이 후자의 접근14,,3031를 사용 하 여 여러 국가에서 필드에 출시 되고있다.
Wolbachia-arboviral 컨트롤에 대 한 기반된 접근법 Wolbachia, 모기와 환경 간의 상호 작용의 소리 이해에 의존. Wolbachia 곤충의 광범위 한 범위에서 자연스럽 게 발생 하 고 모기에 도입 하는 긴장은 그들의 효과32에서 다양 한. Wolbachia 감염 신형 Ae aegypti24에 소개는, 그것은 모기 피트 니스, 재생산 및 다양 한 조건에서 arboviral 간섭에 미치는 영향에 대 한 각 스트레인을 특성화 하는 데 필요한. 실험실에서 엄격한 실험 따라서 Wolbachia 종자 분야에서 성공 하기 위한 잠재력을 평가 해야 합니다.
Wolbachia 감염 Ae aegypti 의 오픈 필드 자료 자주 출시 될 영역 당 모기의 수천 수만 수천 reared 각 주14,,3031요구할 수 있습니다. 초기 출시의 성공 그들의 통치33 과 짝짓기 성공34,35극대화에 큰 크기의 모기를 방출 하 여 개선할 수 있습니다. 그러나 모기도 그들은 행동과 필드 성능36,37에 영향을 줄 수 있는 생리에 변화를 일으킬 수 있습니다 장기 실험실 양육 분야에서 경험 하 게 됩니다 하는 조건에 적응 해야 38.
우리 애 aegypti 기본 장비를 사용 하 여 실험실에서 양육에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 두 야생-타입에 적합 및 Wolbachia-감염 모기, 후자는 요구할 수 있습니다 특별 한 관심으로 일부 Wolbachia 변종 모기 생활 역사 특색39, 에 상당한 영향을 미칠 40. 양육 조건과 밀 하 고 일관 된 크기는 벡터 역량 및 피트 니스 실험에 대 한 중요 하 고 모기는 필드 릴리스41에 대 한 건강 보장의 모기를 생산 하는 식품에 대 한 경쟁 방지 . 우리는 또한 선택 압력을 감소 시켜 실험실 적응 및 근 친 결혼을 최소화 하기 위해 예방 조치를 취해야 하 고 큰, 임의의 풀에서 샘플링은 되도록 다음 세대. 그러나, 실험실 환경 분명히 다른 필드 조건, 그리고 편안한 조건에서 장기적인 유지 관리 릴리스 필드37,42,43에 따라 모기의 피트 니스를 줄일 수 있습니다. . 우리가 따라서 크로스 여성 필드 수집 남성 주기적으로 실험실 라인에서 식민지 유전자 실험 비교에 대 한 유사 고는 대상 필드 인구39적응의 결과로. 방법 어떤 특수 장비를 필요로 하지 않는 및 필드 출시에 대 한 주당 개인의 수천의 수만 후방에 확장할 수 있습니다. 프로토콜은 또한 곤충 자연 인구에 설립에 대 한 운명에 대 한 중요 한 고려 사항 시간과 세대를 걸쳐 모기의 피트 니스 우선순위. 이 프로토콜은 특히 모기와 필드에 relatability의 일관 된 품질은 중요 한 실험적인 비교에 대 한 Ae aegypti의 유지 보수를 필요로 하는 대부분의 실험실에 적합 합니다.

<table><tbody><tr><td>야생 유형 Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>호주 퀸즐랜드의 현장 위치에서 수집, 자세한 내용은 Yeap 및 기타 참조39 참조</td></tr><tr><td>w Mel-infected Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>Monash University 제공. </td></tr><tr>Monash University에서 제공하는 균주<td>w<> AlbB에 감염된 Aedes aegypti</td>에 대한 정보는 Walker 및 기타23<td></td><td></td>를 참조하십시오<td>. </td></tr><tr>Monash University에서 제공하는 <td>MelPop 감염 Aedes aegypti</td><td></td><td></td> 균주<에 대한 정보는 Xi 및 기타21<>><> 참조하십시오<td>. McMeniman 및 기타를 참조하십시오22 균주</td></tr><tr><td>인스턴트 건조 효모</td><td>Lowan</td><td></td><td>은 알 부화를 자극합니다. 일반 식료품점에서 찾을 수 있습니다. 다른 브랜드는 5L</td></tr><tr><td>플라스틱 욕조</td><td>사분면</td><td>Q110950</td><td>유충을 부화시키고 기르는 데 사용됩니다. 다른 제품으로는</td></tr><tr><td>생선 사료 (Tetramin Tropical Tablets)Tetra</td><td></td> <td>16152</td> 를 사용할 수 있습니다<td>. 웹 주소: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td></tr><tr>유충을 기르는 데 사용되는<td>플라스틱 용기</td><td></td><td></td><td>. 500mL 이상의 모든 플라스틱 용기는 적합해야 합니다</td></tr>.<tr><td>유리 피펫</td><td></td><td></td><td>용기 간에 유충과 번데기를 옮기는 데 사용됩니다. 웹 주소: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td></tr><tr><td>Clicker counter</td><td>RS Pro</td><td>710-5212</td><td>유충, 번데기 및 알을 세는 데 사용됩니다. 웹 주소: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td></tr><tr><td>Rearing trays</td><td>Gratnells</td><td></td><td>유충을 기르는 데 사용됩니다. 웹 주소: http://www.gratnells.com</td></tr><tr><td>나일론 메쉬</td><td></td><td></td><td>유충과 번데기를 담수 용기로 옮기는 데 사용됩니다. 다른 브랜드를 사용할 수 있습니다. 웹 주소:</td></tr><tr><td>https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white Cages</td><td>BugDorm</td><td>DP1000</td><td>성충 모기가 서식합니다. 대체 제품을 사용할 수 있습니다. 웹 주소 : http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td></tr><tr><td>35 mL 플라스틱 컵</td><td>Huhtamaki</td><td>AA272225</td><td>성인 모기에게 물이나 자당을 제공하는 데 사용됩니다. 다른 브랜드는</td></tr><tr><td>35 mL 플라스틱 컵 뚜껑</td><td>Huhtamaki</td><td>GB030005</td><td>성인 모기에게 자당을 제공하는 데 사용됩니다. 다른 브랜드를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>솜</td>털 <td>Cutisoft</td><td>71841-13</td><td>촉촉한 솜털은 성인에게 물 공급원으로 제공됩니다. 다른 브랜드는</td></tr><tr>성체 모기에 설탕 공급원으로 제공되는<td>백설탕</td><td></td><td></td>을 사용할 수 <td>있습니다. 일반 식료품 점에서 발견</td></tr><tr><td>: Rope</td><td>M Recht Accessories</td><td>C323C / W</td>, <td>성인에게 자당 용액을 제공하는 데 사용됩니다. 다른 브랜드를 사용할 수 있습니다. 웹 주소: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td></tr> <tr><td>플라스틱 컵(대)</td><td></td><td></td><td>산란 용기로 사용됩니다. 100mL의 물을 담을 수 있는 모든 플라스틱 컵은 산</td></tr><tr>란 기판으로 제공되는<td>적절한 사포</td><td>Norton Master Painters</td><td>CE015962</td>이어야 합니다<td>. 대체 제품을 사용할 수 있지만 비교적 무취이기 때문에 이 브랜드를 사용합니다. 계란과의 대비를 위해 더 밝은 색상이 사용됩니다. 웹 주소: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td></tr><tr><td>여과지</td><td>Whatman</td><td>1001-150</td><td>대체 산란 기판으로 사용됩니다. 다른 브랜드의 사용Z560979</td></tr><tr><td>수 있습니다 라텍스 장갑</td><td>SemperGuard</td><td>혈액</td><td>수유 할 때 손에 모기에 물리는 것을 방지합니다. 다른 브랜드를 사용할 수 있습니다. 웹 주소: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td></tr></tbody></table>

aedes aegypti 모기 감염 wolbachia 유지

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

실험적 감염 Wolbachia aedes aegypti 모기는 뎅기열, chikungunya, Zika 등 arboviruses의 확산을 제어 하는 프로그램에서 활용 되고있다. Wolbachia-감염 된 모기 호환 되지 않는 matings 통해 인구 크기를 줄이거나 또는 바이러스 전송 내 화물은 모기와 인구 변환 필드에 나올 수 있습니다. 성공할이 전략에 대 한 실험실에서 필드에 출시 모기 네이티브 모기와 경쟁 해야 합니다. 그러나, 실험실에서 모기를 유지 될 수 있습니다 근 친, 유전적 부동 및 실험실 적응 분야에서 자신의 체력을 줄일 수 있으며 실험의 결과 혼동 수 있습니다. 테스트 하려면 배포에 대 한 다른 Wolbachia 감염의 적합성 분야에서 그것은 여러 세대에 걸쳐 제어 된 실험실 환경에서 모기를 유지 하는 데 필요한. 우리 모두 Wolbachia적합 실험실에서 Ae aegypti 모기를 유지 하기 위한 간단한 프로토콜 설명-감염 및 야생-타입 모기. 방법 실험실 적응을 최소화 하 고 필드 모기에 실험의 관련성을 높이기 위해 outcrossing 구현. 또한, 식민지는 오픈 필드 자료에 대 한 자신의 적합성을 극대화 하기 위해 최적의 조건에서 유지 됩니다.

그림 4 에서는 Ae aegypti 애벌레의 개발에 차선의 영양의 효과 보여 줍니다. 때 컨테이너 애벌레 하루 당 식품의 0.25 밀리 그램 제공 됩니다 또는, 개발 시간 증가 둘 다 남성과 여성, 하 고 음식의 0.5 mg와 용기에 보다 적게 동기 제공 됩니다. 적절 한 음식 애벌레의 개발 기간을 통해 제공 되지 않은 경우 유지 관리 일정에 부정적인 영향을 미칠 수이. 느린 개발 개인에 대 한 선택 되 고의 위험에 노출 되어, 혈액 공급이 지연 될 수 있습니다, 그리고 복제 발생 하기 전에 성인 사망률의 위험이 있다.
그림 5 에서는 다양 한 영양 정권 아래 reared Ae aegypti 성인의 날개 길이 (바디 크기의 견...

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 Wolbachia에 감염된 Aedes aegypti 모기의 사육 방법을 설명하는 것입니다. 이 모기들은 뎅기열 및 기타 바이러스의 전파를 억제하기 위해 전 세계적으로 방사되고 있습니다. Aedes aegypti 모기 사육을 위한 본 프로토콜은 모기를 이용한 실험이나 질병 제어 프로그램에 관심이 있는 모든 연구자가 활용할 수 있습니다.이 방법은 불임 곤충 방출을 포함하여 모기 개체군 조절 프로그램을 위한 유전자 변형 모기 사육에도 사용될 수 있습니다. 이 접근 방식에 적용된 원리는 다른 질병 매개체 종의 사육에도 적용 가능합니다. 본 프로토콜에서는 모기를 약 26 °C, 상대 습도 50~70%의 환경에서 적도 지역의 광주기를 적용하여 사육하십시오.더 높은 온도에서 사육할 경우 Wolbachia 감염이 소실될 수 있으므로, 군집을 과열시키지 마십시오. 근친교배를 최소화하기 위해 개체군당 약 500마리의 모기를 유지하십시오. 적절한 영양 공급과 함께 이 프로토콜을 사용하면 세대 주기가 28일이 됩니다.기질 위에 놓인 알로 시작합니다. 부화를 유도하기 위해 약 300 mg의 물고기 먹이와 소량의 활성 건조 효모가 포함된 3 L의 물이 담긴 트레이에 알을 담급니다. 부화 하루 후, 유리 피펫을 사용하여 약 500마리의 유생을 4 L의 물과 신선한 물고기 먹이가 담긴 트레이로 옮깁니다.유충에게 충분한 먹이가 공급되고 있는지 매일 트레이를 확인하십시오. 최적의 먹이 공급 상태를 유지하기 위해 이틀에 한 번씩 약 600 milligrams의 물고기 먹이를 추가하십시오. 과다 급여는 물을 흐리게 하여 폐사로 이어질 수 있으므로, 필요에 따라 물을 교체하십시오.영양 상태와 온도가 적절하게 유지된다면, 유충은 부화 후 5~7일 후에 번데기가 됩니다. 그리고 성충은 약 2일 후에 우화합니다. 부화 7일 후, 트레이의 모든 내용물을 고운 메쉬 망에 부어 내립니다.동일한 군락의 난 배치를 위해 여과된 물의 일부를 5리터 용기에 보관하십시오. 다음으로, 메쉬를 뒤집어 200밀리리터의 물이 담긴 플라스틱 용기에 담가 번데기를 옮깁니다. 남아 있는 유충에게 먹일 적절한 양의 먹이를 추가하십시오.이제 10% sucrose 용액이 담긴 컵 두 개와 건조를 방지하기 위한 젖은 솜 뭉치가 담긴 컵 두 개를 넣어 성충 우화 케이지를 준비합니다. 번데기를 성별로 분류할 필요가 없다면, 번데기가 들어있는 용기를 케이지 안에

maintaining-aedes-aegypti-mosquitoes-infected-with-wolbachia

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 세포가없는 배지에서 endosymbiont를 아노 펠 레스 gambiae 세포 라인에서 Wolbachia pipientis을 정화하고 culturing하는 방법을 설명합니다. 세균의 생존에 대한 분석이 증명됩니다.

셀없는 매체 Wolbachia을 유지

RIDL ®(지배적인 치명적인 곤충을 운반하는 곤충의 방출) 시스템을 사용하여 Aedes aegypti의 인구 억제를 달성하기 위해 많은 수컷 모기를 풀어야 합니다. 이를 위해서는 대량 사육 기술과 기술을 사용하여 고품질의 남성 모기의 최대 수를 얻기 위해 신뢰할 수 있는 시스템을 제공해야 합니다.

브라질에서 필드 릴리스에 대 한 유전자 변형 Aedes aegypti의 대량 생산

제시된 프로토콜은 봉쇄 환경에서 Zika와 같은 주어진 바이러스에 대한 Aedes aegypti 모기 집단의 벡터 역량을 결정할 수 있다.

지카 바이러스를 사용하여 Aedes aegypti 모기에 벡터 역량 분석

설명된 것은 계란을 계산하고 24개의 잘 조직 배양 판을 사용하여 개별 모기의 해치 비율을 결정하는 시간과 공간 절약 방법이며, 이는 실질적으로 fecundity 및 불임 검사의 규모와 속도를 증가시킬 수 있습니다.

24 잘 조직 배양 플레이트를 사용하여 Aedes aegypti에 대한 개선 된 Fecundity 및 불임 분석 (EAgaL 플레이트)

이 프로토콜은 CRISPR/Cas9 유전자 편집 도구와 함께 작동하도록 최적화된 Culex quinquefasciatus 태아를 위한 미세 주입 절차를 기술합니다. 이 기술은 이 저학질병 벡터에 있는 유전 기술을 구축하는 데 사용될 수 있는 사이트 특정, 유전성, 생식선 돌연변이를 효율적으로 생성할 수 있습니다.

컬렉스 퀸케파시아투스의 효율적인 부위 별 돌연변이 발생을 위한 배아 미세 주입 기술

현미경 기생충 에드hazardia aedis를배양하는 프로토콜. 기생충은 애벌레 단계에서 수평 전송을 통해 다음에 Aedes aegypti 모기의 한 세대에서 통과하고 성인 단계에서 수직 전송에 선행됩니다. 살아있는 포포라진은 감염된 계란에서 장기적으로 살아남습니다.

Aedes aegypti 모기에서 현미경 포리디안 기생충 에드hazardia aedis의 전파

무균 곤충 기술 (SIT)은 화학적 통제에 내성이있을 수있는 의학적으로 중요한 특정 모기 개체군을 통제하는 데 사용됩니다. 여기에서는 Aedes aegypti 모기를 표적으로 하는 운영 SIT 프로그램에서 방출하기 위해 무균 수컷 모기를 대량 사육하고 준비하는 방법을 설명합니다.

운영 멸균 곤충 기술 프로그램에서 방출하기 위해 조사되고 표시된 수컷 Aedes aegypti 모기 준비

여기서는 형광염을 마커로 사용하여 남성 Aedes aegypti의 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 여성 모기는 교화를 위해 표시되고 표시되지 않은 수컷 모두에 노출됩니다. 후 짝짓기, 그들의 정자는 그들의 짝짓기 파트너를 결정하기 위하여 형광 현미경의 밑에 검토됩니다.

형광염염을 사용하여 로다민 B, 남성 Aedes aegypti 모기에서 짝짓기 경쟁력을 연구하기 위해

네 가지 방법이 세포 내 Wolbachia를 검출하기 위해 사용되었는데, 이는 서로를 보완하고 항생제를 사용하여 네이티브 울바키아 감염의 Aa23 및 Aa23-T가 완치된 Aedes albopictus 유래 Aa23 및 Aa23-T의 Wolbachia 감염의 검출 정확도를 향상시켰다.

Aedes albopictus 세포주에서 Wolbachia 균주 wAlbB 검출

본 프로토콜은 Aedes aegypti 모기의 생식력, 날개 크기, 생식력, 성비, 생존 능력, 발달 시간, 수컷 기여도 및 성체 수명을 포함한 일반적인 생명 매개 변수 데이터를 측정하는 방법을 설명합니다. 이러한 측정은 유전자 변형 모기의 적합성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

형질전환 Aedes aegypti 모기의 피트니스 비용 정량화

세포주는 숙주 세포 외부에서 배양할 수 없는 세포 내 유기체에 대한 연구에 유용합니다. Wolbachia에 감염된 계통은 많은 발견을 가능하게 했지만 이러한 계통 내의 이질성으로 인해 다양한 실험 결과가 나올 수 있습니다. Wolbachia에 감염된 JW18 세포에서 단일 세포 클론 및 연속 배양을 생성하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성

학습하세요 Wolbachia에 감염된 Aedes aegypti 모기를 사육하고 유지하는 방법을. 이 프로토콜은 뎅기열 및 기타 바이러스 전파 억제를 위한 질병 관리 연구에 활용됩니다.

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

더 많은 동영상 탐색