Name: 학습 할 간단한 신경계 상해 방법론 Drosophila 모터 뉴런 변성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: 학습하세요 Drosophila 운동신경 변성을 위한 간단한 기계적 손상 방법론. 이 기법은 신경퇴행성 질환 연구에서 세포 사건의 시간적 순서를 밝히는 데 활용됩니다.

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우리는 Quinnipiac University의 Keller와 Magie 연구소의 모든 구성원에게 도움이되는 제안을 해주신 것에 대해 감사드립니다. 특히 Keller Lab에서이 부상 분석법을 개발 한 Barron L. Lincoln II에 감사드립니다. 우리는 또한 LC Keller에게 수여 된 Quinnipiac University of Arts and Science Grant-In-Aid에 감사드립니다.

1. 시약 및 장비 준비 <ol><li> 1x 절개 버퍼 (70 MM NaCl, 5 MM KCl, 0.02 MM CaCl 2 , 20 MM MgCl 2 , 10 MM NaHCO 3 , 115 MM 자당, 5 MM 트레 할 로스, 5 MM HEPES, pH 7.2)를 준비합니다. </li><li> 1x Phosphate-Buffered Saline (PBS)을 준비하십시오. </li><li> 0.01 % Triton X-100 1x PBS를 사용하여 1x PBT를 준비하십시오. </li><li> 과일 주스 한천 접시를 준비하십시오. 14, 간단히, H 2 O 압력솥 700 mL에 30g의 아가를 섞는다. 메틸 파라벤 0.5 g을 에탄올 10 mL에 녹이고 과즙 (포도 또는 사과) 300 mL에 넣는다. 농축 물을 고압 가압 멸균 한천 용액에 섞고 10mm x 35mm 페트리 접시의 뚜껑에 부으십시오. 참고 : 포도 한천 전원 premix는 여러 회사에서 구입할 수도 있습니다 ( 재료 표 참조). </li><li> 유충을 기계적으로 손상시키는 크기 5 포셉을 얻습니다. </li><li> 표준 Drosophila CO 2를 사용하십시오. </sub&gt; 기반 마취 장치. </li></ol> 2. Drosophila Larvae의 선택 <ol><li> 25 ° C에서 배양 한 방랑하는 제 3 기성 유충이 들어있는 약병 또는 병에 넣은 Drosophila 를 가져갑니다. </li><li> 외관에 따라 10 개의 개별 2 번째 또는 3 번째 체아 유충을 선택하십시오. 제 3 기 애벌레는 앞쪽에 분지 된 기둥 모양으로 나타나며, 제 2 기 애벌레는 작아지고 클럽 모양의 앞쪽에있는 기둥이 더 많습니다. 참고 : 애벌레 단계도 타이밍에 따라 식별 할 수 있습니다. 25 ℃에서 부화 후 약 2 시간 후 두 번째 유충이 나타나고, 약 24 시간 후에 3 번째 유충이 탈피한다. NMJ에서 신경 퇴행을 검사하는 데 관심이 있다면, 두 번째 instar 애벌레가 부상 당할 필요가있다. </li></ol> 3. 기계 상해를위한 Drosophila Larvae 준비 <ol><li> 조심스럽게 집게 또는 페인트 붓으로 개별 유충을 선택하십시오.어쨌든 압축하지 마라. </li><li> 차가운 1X PBS 또는 해부 완충액이 들어있는 유리 접시에 10 개의 애벌레를 직접 놓아 음식 잔해물을 제거하고 애벌레의 운동성을 감속시킵니다. </li></ol> 4. Drosophila Larvae의 기계적 상해 및 치료 <ol><li> 공동 2 마취 장치에 각각의 유충을 놓는다. </li><li> 절개 현미경 아래에서 큐티클을 통해 분절 신경을 시각화하기 위해 각 유충을 등쪽에 조심스럽게 굴립니다. </li><li> 위치 크기 5 포셉은 입 갈고리에서 시작 유충의 길이를 약 1 / 2 ~ 2 / 3 방법. 일단 위치, 크기 5 포 셉를 가진 segmental 신경을 포함하는 복부 표피의 약 1/3을 집어. <ol><li> 유충의 분절 신경이 손상되었는지 확인하려면 분열 신경을 분쇄하는 데 충분한 힘을 가하고 큐티클은 그대로 두십시오. 정확한 양의 힘을 결정하려면 10 개의 유충을 분쇄하고5 시간 후의 사망률은 50 % 미만이다. </li></ol></li><li> 부상 후 약 0.5 g의 효모 페이스트가 들어있는 과일 주스 한천 플레이트에 애벌레를 조심스럽게 옮깁니다. 각 유충을 앞쪽 끝이 효모 페이스트에 놓 이도록하여, 방해받은 운동성에도 불구하고 계속 먹이십시오. 참고 : 애벌레 분절 신경이 손상되었는지 확인하기 위해 한천 플레이트로 옮긴 후 분열 된 애벌레 운동성을 관찰 할 수 있습니다. 부상당한 유충은 부상 부위 뒤쪽에서 효과적으로 마비되지만 구강 후크와 사료를 움직일 수 있습니다. 부상 후 동물의 사망률이 높기 때문에 실험에 필요한 것보다 20-50 % 이상의 동물을 다치는 것이 가장 좋습니다. </li><li> 빈 100x15mm 페트리 접시 바닥에 효모 붙여 넣기와 부상당한 유충 10 개가 들어있는 한천 플레이트를 놓습니다. 종이 타월이 애벌레 나 한천 플레이트에 닿지 않도록 젖은 종이 타월로 한천 플레이트에 부상당한 유충이 들어있는이 페트리 플레이트를 덮습니다. 이것을 배치하십시오RT에서 더 큰 기밀 용기에 페트리 접시. </li><li> 부상당한 후 일정 기간 (6, 12 또는 24 시간) 후에 해부학 검사를하십시오. 참고 : axonal cytoskeleton에 손상의 즉각적인 영향을 검사하기 위해, 애벌레는 부상 직후 해부 수 있습니다. axonal 수송 결함을 검사하기 위해, 애벌레는 부상 후 약 6 시간 후에 해부 될 수 있습니다. 손상 후 약 12 ​​시간 후에 유비퀴틴 화 된 단백질의 축적이 관찰 될 수 있으며 손상 후 24 시간 후에 NMJ에서 운동 뉴런의 퇴행이 관찰 될 수있다. </li></ol> 5. NMJ에서의 신경 퇴행 분석 <ol><li> 앞서 설명한대로 Drosophila larval NMJ를 해독하십시오. 해부 버퍼의 드롭에 핀 (15, 16) 등쪽면을 따라 절단 한 짧게하는 실 가드 판 위에 핀 유충 및 필렛 체벽 근육을 노출시킨다. 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA) 또는 Bouin &#39;s Solution 중 유충을 항생제에 따라 고정뉴런과 근육을 시각화하는 데 사용되는 신체. 참고 : 녹색 형광 단백질 (GFP)과 같은 형광 단백질 태그가 Bouin의 고정액이 너무 거칠 수 있으므로 시각화해야하는 경우 PFA 고정을 사용해야합니다. </li><li> 이전에 11 , 13 , 16 , preynaptic 모터 뉴런과 인접 postsynaptic (SSR) 근육 주름을 표시하기 위해 설명한 immunofluorescence을 수행합니다. 형광 결합 conjugated 양 고추 냉이 퍼 옥시다아제 (HRP) (1시 300 분) 17 presynaptic 막 및 axons을 시각화하고 활성 영역은 anti-Bruchpilot (Brp) 항체 (nc82; 1 : 100, Developmental Studies Hybridoma Bank)를 사용하여 염색 될 수 있습니다. anti-Dics Large (Dlg) 항체 (1 : 10,000)로 시냅스 후 근육을 동시에 라벨링합니다. 18 </li><li> 이전에 설명한대로 NMJ에서 신경 퇴화를 정량화하기위한 확립 된 분석을 수행하십시오. 8 </sup&gt; , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 간단히 시냅스 전후의 구획에 대해 개별 NMJ를 동시에 시각화하십시오. postsynaptic 마커로 표시되었지만 presynaptic 마커로 표시되지 않은 모든 부음은 신경 퇴화 부위를 나타냅니다 ( 그림 1 ). 동물당 NMJ 당 평균 부 턴수와 평균 NMJ 수를 정량화 할 수 있습니다. </li></ol>

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<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9 (3), 235-244 (2016).</li>
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</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

앞에서 설명한 신경 손상은 여기에서 입증되었는데 Drosophila 유충의 분절 신경에서 상해 / 스트레스를 유도하는 데 사용될 수 있습니다. 4, 5, 6, 14이 실험 기술은 신경 퇴행을 초래하는 이벤트의 시간적 순서를 해부뿐 아니라 부상을 올리는 운동 신경 세포체에 전사 변화를 조사하기 이전에 사용되어왔다. 5 (14) 또한,이 기술은 관찰 초파리 유충에서 축삭 변성 및 재생을 연구하기 위해 마이크로 유체 칩과 관련하여 기술되었다. 이 기술의 7 제한으로 인해 부상의 도입 동안 표피의 천자에 유충의 죽음을 포함한다. ...

신경 세포의 퇴행은 정상적인 발달 중에 발생하며 자연 노화 과정, 상해, 스트레스 또는 질병 상태에 의해 유발 될 수 있습니다. 초파리 인 Drosophila melanogaster 는 뉴런의 퇴행을 유발하는 분자 메커니즘의 현저한 유사성으로 인해 신경 퇴화를 연구 할 수있는 간단하고 강력한 모델 유기체를 제공합니다. 이러한 유사점은 질병 관련 인간 유전자의 약 70 %가 Drosophila 동족체를 가지고 있다는 사실에 의해 강조됩니다. (1) 또한, 많은 분석과 인간의 신경 퇴행성 질환을 연구하는 기술 도구 개발 및 초파리에 활용되고있다. 2 , 3 Drosophila 내에서, 신경근 접합부 (NMJ)는 세포 및 전기 생리 학적 성질의 분석을 가능하게하며, 눈에 보이는 n으로 인해 신경근 질환을 연구하는 중요한 시스템임이 입증되었다euron-muscle 연결. (2) 본 연구에서는 분절 신경의 재현 부상을 허용 초파리 유충의 생체 신경 세포의 손상 분석을 설명합니다. 이 motoneuron 부상 NMJ 24 시간 부상에서 neurodegeneration의 결과 세포 조건의 일시적인 결과가 발생합니다. 신경 퇴행을 유발하는 운동 신경 세포를 재현성있게 손상시키는 능력은 퇴행성 과정에 필요한 특정 유전자의 확인, 신경 손상에 대한 전사 반응의 해부 및 보호 신호 전달 계통의 분석과 같은 다양한 용도를 갖는다. 4 , 5 , 6 이 방법은 살아있는 동물의 신경 변성과 재생을 연구하기 위해 미세 유체와 함께 사용되었습니다. 7 우리는 모터 뉴런 degenerat을 검사하기 위해 정량 분석을 사용합니다이온은 기계적 부상 후 Drosophila NMJ에서 발견된다. 이 분석은 시냅스 후 막과 단백질의 손실이 postsynaptic 근육 막 폴드로 특징 지어진 subynaptic reticulum (SSR)의 해체에 선행한다는 사실에 근거합니다. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 이시 험은 시냅스 전의 뉴런이 인접한 시냅스 후 근육에 연결을 잃은 &quot;시냅스 발자국&quot;의 정량화를 허용합니다. 퇴행성 과정 유생 (12)에 걸쳐 점진적인 것으로 도시되었으며, 변경된 시냅스 개발 또는 발아에 의해 설명 될 수 없다. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 광고기존의 돌연변이보다 기계적 상해를 사용하는 유리한 점은 NMJ에서 신경 퇴행으로 이끄는 세포 사건의 시간 순서를 해부 할 수 있다는 것이다. 13

<table><tbody><tr><td>미세 해부 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td>어떤 사람들은 크기 3을 선호하고 다른 사람들은 크기 5를 선호</td></tr>합니다 <tr><td>Dumont #5 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-30</td><td>어떤 사람들은 크기 3을 선호하는 반면 다른 사람들은 크기 5를 선호</td></tr>합니다 <tr><td>CO2 Air Tank</td><td>Tech Air</td><td>UN 1013</td><td>다양한 탱크 크기를 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>CO2 마취 장치</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 핀, 크기 0.1</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>SylGard 184 실리콘 엘라스토머, 염기 및 경화제</td><td>Dow Corning</td><td>3097358-1004</td><td>해부 플레이트를 붓기 위해</td></tr><tr><td>Bouin's Solution</td><td>Sigma</td><td>HT 10132-1L</td><td>항체는 Bouin's 및 PFA에서 효율성을 테스트해야</td></tr> 합니다.<tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)의 4% 파라포름알데히드(PFA)</td> <td>Affymetrix</td><td>FLY-8030-20</td><td>항체는 Bouin's 및 PFA</td></tr><tr><td>Dissecting Stereo MIcroscope</td><td>AmScope</td><td>SM-1BZ</td><td></td></tr><tr><td>광원</td><td>AmScope</td><td>HL150-AY-220V</td><td></td></tr><tr><td>anti-nc82 항체에서 효율성을 테스트해야 합니다.</td><td>발달 연구 Hybridoma Bank</td><td>nc82-s</td><td></td></tr><tr><td>anti-discs large antibody</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>AF3</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor anti-horseradish peroxidase</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>123-545-021; 123-585-021; 123-605-021</td><td>One can you Alexa Fluor&reg; 488, 594 또는 647</td></tr><tr><td>Flystuff 포도 주스 한천 프리믹스</td><td>Genesee Scientific</td><td>47-102</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Genesee Scientific</td><td>29-101</td><td></td></tr><tr><td>유리 커버슬립</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-87</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene 유틸리티 박스</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-484C</td><td>유충 회복을 위한 습한 챔버를 만드는 데 사용</td></tr></tbody></table>

학습 할 간단한 신경계 상해 방법론<em&gt; drosophila</em&gt; 모터 뉴런 변성

A Simple Neuronal Mechanical Injury Methodology to Study Drosophila Motor Neuron Degeneration

뉴런의 퇴행은 정상적인 발달과 상해, 스트레스 및 질병에 대한 반응으로 발생합니다. 신경 세포 변성의 세포 특징은 인간과 무척추 동물에서 이러한 과정을 유도하는 분자 메커니즘과 현저하게 유사합니다. 초파리 Drosophila melanogaster 는 강력하지만 단순한 유전 모델 유기체로서 신경 퇴행성 질환의 세포 복잡성을 연구합니다. 실제로 질병 관련 인간 유전자의 약 70 %는 Drosophila 상 동체를 가지고 있으며 인간의 신경 퇴행성 질환을 연구하기 위해 파리를 사용하여 과다한 도구와 분석법이 기술되었습니다. 더 구체적으로 Drosophila 의 신경근 접합점 (neuromuscular junction, NMJ)은 신경 세포와 근육 사이의 구조적 연결을 분석 할 수 있기 때문에 신경근 질환을 연구하는 효과적인 시스템으로 입증되었습니다. 여기, 우리는 Drosophila의 생체 내 운동 신경 손상 분석에 대해보고합니다.재현 가능하게 24 시간까지 NMJ에서 신경 퇴행을 유도한다. 이 방법론을 사용하여 우리는 운동 신경 세포의 퇴행을 초래하는 세포 사건의 시간 순서를 기술했다. 부상 방법은 다양한 응용 분야를 가지고 있으며, 신경 퇴행에 필요한 특정 유전자를 확인하고 신경 손상에 대한 전사 반응을 해부하기 위해 활용되어왔다.

여기에 제시된 절차를 사용하여, 우리는 기계적 신경 상해가 신경 퇴행성 사건의 일시적인 해부를 허용한다는 것을 증명했습니다. 14 , 18 사건의 순서는 이전에 특징 지어졌고 세포 골격의 즉각적인 붕괴, 축색 성 인신 매매 결함, ubiquitinated 단백질의 축적, 그리고 후속 적으로 24 시간의 신경 손상 이후에 시작된다. 손상되기 전에, WT NMJs는 전체 NMJ ( 그림 1A )에 걸쳐 postsynaptic 마커 Dlg에 apposition에 presynaptic 활성 영역 마커 Brp를 보여줍니다. 분절 신경의 기계적 손상은 중등도에서 중증의 신경 변성을 유도 할 수 있는데, Dlg로 염색 된 부음에는 현재 시냅스 활성 영역 단백질 Brp가 결핍되어 있습니다 ( <strong class="xfig...

여기에 우리는 세 번째 instar 애벌레의 neuromuscular 접합 (NMJ)에서 모터 뉴런의 신경 퇴화를 시각화하고 계량하기 위해 초파리 유충의 분절 신경을 손상시키는 간단하고 널리 액세스 할 수있는 방법을 설명합니다.

학습 할 간단한 신경계 상해 방법론<em&gt; Drosophila</em&gt; 모터 뉴런 변성

The degeneration of neurons occurs during normal development and in response to injury, stress, and disease. The cellular hallmarks of neuronal ...

본 절차의 전체적인 목표는 초파리(Drosophila) 유충의 운동 신경세포에 기계적 손상을 유도하는 것입니다. 이 방법은 신경퇴행으로 이어지는 세포 사건의 시간적 순서와 같이, 신경퇴행 연구 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비용이 저렴하며 대부분의 초파리 연구실이 이미 보유하고 있는 장비를 사용한다는 점입니다.이 기술의 함의는 신경 퇴행을 유도하는 분자적 메커니즘의 이해로 확장됩니다. 프로토콜을 시작하려면, 25°C에서 배양된 방황기 3령 유충이 들어 있는 Drosophila 바이알 또는 병에서 2령 또는 3령 유충 10마리를 선택하십시오. 핀셋이나 붓을 사용하여 유충이 눌리지 않도록 주의하며 개별 유충을 조심스럽게 집어 올리십시오.10마리의 유충을 차가운 1x PBS가 담긴 유리 접시에 직접 넣어 먹이 찌꺼기를 제거하고 유충의 운동성을 늦춥니다. 전방 분지 기문을 통해 3령 유충을 식별하고, 더 작은 크기와 곤봉 모양의 전방 기문을 통해 2령 유충을 식별합니다. 각 유충을 CO2 마취 장치 위에 올립니다.해부 현미경 하에서 각 유충을 등쪽으로 조심스럽게 굴려 큐티클 전체에 걸친 분절 신경을 시각화합니다. 손상을 입히기 전 큐티클을 통해 분절 신경을 시각화하기 위해서는 각 유충을 등쪽으로 세심하게 굴려주는 것이 필수적입니다. 구강 갈고리(mouth hooks) 부분부터 시작하여, 5번 사이즈 핀셋을 유충 길이의 약 1/2에서 2/3 지점에 배치합니다.배치 후, 분절 신경이 포함된 복측 큐티클의 약 3분의 1을 5호 핀셋으로 집습니다. 유충의 분절 신경이 손상되도록, 분절 신경을 으깨기에 충분한 힘을 가하되 큐티클은 손상되지 않게 합니다. 적절한 가압 강도를 결정하기 위해 10마리의 유충을 으깬 후, 5시간 뒤의 사망률이 50% 미만인지 확인하십시오. 손상 후, 유충을 약 0.5 g의 효모 페이스트가 포함된 과일 주스 아가 플레이트로 조심스럽게 옮깁니다.각 유충의 앞부분이 효모 페이스트 위에 놓이도록 하여 계속해서 먹이를 섭취하게 합니다. 효모 페이스트와 손상된 유충 10마리가 포함된 아가 플레이트를 빈 100 by 15 millimeter 페트리 접시 바닥에 놓습니다. 젖은 페이퍼 타월로 페트리 접시를 덮되, 페이퍼 타월이 유충이나 아가 플레이트에 닿지 않도록 주의합니다.그런 다음 페트리 접시를 실온의 밀폐 용기에 넣습니다. 마지막으로, 손상 후 지정된 기간이 지난 뒤 해부를 위해 유충을 회수합니다. 손상 전의 야생형 신경근 접합부(neuromuscular junctions, NMJs)에서는 전체 NMJ에 걸쳐 시냅스 전 활성 구역 마커인 Brp가 시냅스 후 마커인 Dlg와 인접하게 나타납니다.분절 신경의 기계적 손상은 중등도에서 중증의 신경 퇴행을 유도할 수 있으며, 이 과정에서 Dlg로 염색된 버튼(buton)은 더 이상 시냅스 전 활성 구역 단백질인 Brp를 포함하지 않게 됩니다. 이 기술은 개발 이후, 신경 손상을 연구하는 연구자들이 초파리의 신경근 접합부에서 신경 퇴행으로 이어지는 세포 사건의 시간적 순서를 탐색할 수 있는 길을 열어주었습니다.

a-simple-neuronal-mechanical-injury-methodology-to-study-drosophila

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

초파리 신경근 접합부(NMJ)는 시냅스의 형태와 기능을 연구하기 위한 모델로 사용됩니다. 이 비디오는 연구자들이 NMJ를 특성화하기 위해 정량화하는 중요한 특징에 대해 설명합니다. 예제 프로토콜은 정량화를 자동으로 수행할 수 있는 소프트웨어를 보여줍니다.

초파리 신경근접합부(NMJ) 정량화: 시냅스 형태 및 기능을 평가하는 방법

이 비디오는 Drosophila melanogaster 유충에서 축삭의 이광자 레이저 절제와 부상을 유도하고 부상 부위를 이미지화하는 예제 프로토콜에 대해 설명합니다.

Two-Photon Laser-Induced Neural Injury: A Method to Observation Axon Degeneration and Regeneration in Drosophila larvae (이광자 레이저 유도 신경 손상: 초파리 유충에서 축삭돌기 퇴행 및 재생을 관찰하는 방법)

이 비디오는 기계적 손상을 통해 초파리 유충 분절 신경에 신경 퇴화를 유도하는 방법을 보여줍니다. 마취된 유충의 복부 표피는 집게를 사용하여 꼬집어 분절 신경에 손상을 입힙니다. 다친 유충은 음식으로 유지되며, 이로 인해 신경의 운동 뉴런이 퇴화되어 신경근 접합부(NMJ)가 파괴될 수 있습니다.

신경퇴행을 유도하기 위해 초파리 유충 분절 신경을 기계적으로 손상시키는 것

이 비디오는 초파리의 등쪽 종방향 근육에서 신경근 접합부의 구조적 무결성을 평가하기 위한 프로토콜을 보여줍니다. 이 절차에는 뉴런과 근육을 두 개의 서로 다른 항체로 염색하고 돌연변이 파리와 야생형 파리 사이의 형광 패턴을 비교하는 것이 포함됩니다. 돌연변이 파리에서 신경 염색의 감소는 근육 구조가 손상되지 않은 상태에서 신경 퇴행을 나타냅니다.

Drosophila에서 등쪽 종근 신경근 접합부의 구조적 무결성 평가

중추 신경계 재생 및 수리를 조사 Drosophila 애벌레의 복부 신경 코드를 사용하여 부상 패러다임이 설명되어 있습니다. 의도적으로 개발 한 소프트웨어 및 유전학과 정량 분석​​과 함께 시간 경과 및 고정 표본에서 공 촛점 현미경을 스캔 레이저, 다음 찌른 곳은 CNS 재생 및 수리의 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용됩니다.

에 중추 신경 시스템 복구를 조사하기 위해 상해 패러다임<em&gt; Drosophila</em

초파리 애벌레는 그들의 반투명 표피와 강력한 유전학 라이브 영상을위한 매력적인 모델 시스템이다. 이 프로토콜은 3 차 령 초파리 유충의 신경 세포 내에서 세포 프로세스의 실시간 이미징을위한 '유충 칩'이라는 단일 층 PDMS 장치를 활용하는 방법에 대해 설명합니다.

라이브 이미징 및 상해 응답의 연구에 대한 마이크로 유체 칩을 사용<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레

여기, 우리로 초파리 감각 신경- vivo에서 결합 하는 수지상 arborization (다) 신경 부상 모델, 라이브 영상, 2 광자 레이저 axotomy/dendriotomy, 그리고 강력한 비행 유전 도구 상자, 를 사용 하 여 프로토콜을 제시 잠재적인 발기인 및 neuroregeneration의 억제제 상영을 위한 플랫폼.

주변에 Neuroregeneration 중앙 신 경계를 연구 하 고 대 한 Vivo에서 초파리 부상 모델

우리는 친유성 형광 염료를 사용하여 Drosophila 배아 운동 뉴런의 역행 추적방법을 기술한다.

친유성 형광 염료를 사용하여 Drosophila 배아 모터 뉴런의 역행 추적

여기에서, 우리는 절단된 축색및 그들의 시냅스의 형태학적 그리고 기능적인 보존을 평가하기 위하여 Drosophila melanogaster에 있는 3개의 간단한 상해 유도한 축사 변성 (축세포 죽음) 분석사를 능력을 발휘하는 프로토콜을 제공합니다.

드로소필라 멜라노가스터에서 축사 사망 시축과 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

이 절차의 목표는 Drosophila melanogaster를사용하여 신경 퇴행성 질환 모델에서 DLM 신경 근육 접합 (NMJs)의 구조적 무결성을 평가하기 위해 등쪽 세로 근육 (DLM) 조직을 해부하는 것입니다.

신경변성과 관련하여 성인 Drosophila에서 시냅스 퇴성을 시각화

우리는 신경 근육 접합의 건축을 보존하고 성인 Drosophila 다리에 있는 운동 신경의 상세한 면역 세포화학 연구 를 가능하게 하는 해부 기술을 기술합니다.

확인된 모터 뉴런을 위한 신경근육 정션에서 변경을 검출하기 위하여 Drosophila 성인 다리의 해부 및 면역 조직 화학

학습하세요 Drosophila 운동신경 변성을 위한 간단한 기계적 손상 방법론. 이 기법은 신경퇴행성 질환 연구에서 세포 사건의 시간적 순서를 밝히는 데 활용됩니다.

학습 할 간단한 신경계 상해 방법론

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