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Immunology and Infection
제자리에서 MHC tetramer 얼룩 및 정량 분석 위치, 풍부, 및 조직에서 항 원 특정 CD8 T 세포...
제자리에서 MHC tetramer 얼룩 및 정량 분석 위치, 풍부, 및 조직에서 항 원 특정 CD8 T 세포...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
In Situ MHC-tetramer Staining and Quantitative Analysis to Determine the Location, Abundance, and Phenotype of Antigen-specific CD8 T Cells in Tissues

제자리에서 MHC tetramer 얼룩 및 정량 분석 위치, 풍부, 및 조직에서 항 원 특정 CD8 T 세포의 표현 형을

Full Text
12,941 Views
08:37 min
September 22, 2017

DOI: 10.3791/56130-v

Shengbin Li1, Gwantwa Mwakalundwa1, Pamela J. Skinner1

1Department of Veterinary and Biomedical Sciences,University of Minnesota

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a method that integrates in situ MHC-tetramer staining with immunohistochemistry to analyze antigen-specific CD8 T cells in tissues. The protocol enables researchers to assess the localization, phenotype, and quantity of these T cells in various tissue types.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Cell Biology
  • Tissue Analysis

Background

  • Understanding the role of CD8 T cells in immune responses is crucial.
  • Antigen-specific T cells are vital for targeted immune responses.
  • Spatial distribution of T cells can influence their function.
  • Current methods may not provide comprehensive localization data.

Purpose of Study

  • To determine the location and abundance of antigen-specific CD8 T cells.
  • To analyze the phenotype of these T cells within tissue contexts.
  • To provide a method for quick assessments of T cell characteristics.

Methods Used

  • In situ MHC-tetramer staining.
  • Immunohistochemistry techniques.
  • Fresh tissue preparation and sectioning.
  • Analysis of T cell localization relative to other cell types.

Main Results

  • Successful identification of antigen-specific CD8 T cells in tissue samples.
  • Quantification of T cell populations relative to other cells.
  • Detailed spatial mapping of T cell distribution.
  • Insights into the phenotypic characteristics of T cells in situ.

Conclusions

  • This method provides a robust approach to study T cell dynamics in tissues.
  • It enhances understanding of immune responses at the tissue level.
  • The protocol can be adapted for various tissue types and antigens.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this method?
The main advantage is its ability to determine the spatial distribution of antigen-specific CD8 T cells within tissues.
What type of tissue is demonstrated in this protocol?
The protocol demonstrates the use of rhesus macaque spleen tissue.
Who demonstrates the procedure?
The procedure is demonstrated by Shengbin Li and Gwantwa Mwakalundwa.
What is the purpose of using MHC-tetramer staining?
MHC-tetramer staining is used to identify and quantify antigen-specific T cells.
How are tissue samples prepared for this method?
Fresh tissue is cut into approximately 0.5 x 0.5 centimeter pieces for analysis.

여기, 우리가 immunohistochemistry 지역화, 표현 형, 및 조직에서 항 원 특정 T 세포의 양을 결정 하에 현장에서 MHC tetramer 얼룩 결합 하는 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 다른 세포 유형 및 조직 구조 항 원 특정 CD8 T 세포의 공간 및 phenotypic 특성을 결정 하는 데 사용 됩니다.

이 절차의 전반적인 목표는 관심 조직 내에서 항원 특이적 CD8 양성 T 세포의 위치, 풍부도 및 표현형을 결정하는 것입니다. 이 방법은 거의 모든 항원 특이적 CD8 T 세포 및 조직을 찾고, 정량화하고, 표현형을 분석할 수 있는 수단을 제공함으로써 CD8 T 세포에 대한 간단한 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 이 기술의 주요 장점은 관심 조직 내의 다른 세포 및 구조와 비교하여 항원 특이적 CD8 양성 T 세포의 공간 분포를 결정할 수 있다는 것입니다.

Shengbin Li와 함께 절차를 시연하는 것은 Gwantwa Mwakalundwa가 될 것입니다. 시술 첫날, 메스를 사용하여 신선한 조직을 약 0.5 x 0.5cm 조각으로 자릅니다. 여기에서는 붉은털 원숭이 비장 조직이 표시됩니다.

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