Name: 자기 조립 펩타이드와 아미노산의 조합을 사용 하 여 수 용액에서 소수 성 화합물의 용 해도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: 배우세요 자기 조립 펩타이드와 아미노산을 활용하여 수용액에서 소수성 화합물을 용해하는 방법을. 이 기술은 독성 공용매 없이 임상 적용 가능한 약물 전달 솔루션을 제공합니다.

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이 작품은 건강 연구의 캐나다 학회에 의해 지원 하 고, 걸 레-42546 및 걸 레 119514 부여 운영 합니다.

1. 준비의 아미노산 솔루션 <ol><li>준비 및 레이블 두 50 mL 원뿔 원심 분리기 튜브 각 아미노산에 대 한 (하나 둘 다를 위해 각 &#34; 낮은 &#34; 및 &#34; 높은 &#34; 농도).</li>
	<li>순화 된 물 (18.2 ㏁ 25 ° C에서)를 포함 하는 큰 2 L 플라스 크를 준비.</li>
	<li>원하는 농도 도달 (그램)에서 각 아미노산의 양을 계산 하 고 주걱을 사용 하 여 그들의 각각 50 mL 원심 분리기 튜브로 아미노산의 적절 한 금액을 무게. 
	: 참고는 &#34; 높은 &#34; 2의 농도 부정 청구 아미노산, PBS 물 대신 사용 됩니다. 우리는 그들의 낮은 물 가용성 및 낮은 pH를 유지 하기 위해 물 수 대신 PBS를 사용 하 여 그들의 농도 증가 하지 않을 수 있습니다. 또한, 농도 계산 각 아미노산 솔루션에 대 한 40 mL의 최종 볼륨을 사용 하 여 얻은 했다. 모든 아미노산 농도 표 3에 설명 되어 있습니다. 오염을 피하기 위하여 아미노산 사이 주걱을 씻어 해야 합니다. 물 린스, 70% 에탄올으로 닦아 다음 것이 좋습니다.</li>
	<li>순화 된 물 (PBS)의 각 50 mL에 추가 40 mL 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여 튜브. 튜브와 소용돌이 닫습니다 또는 해산 때까지 적극적으로 악수. 물 목욕 쥡니다 (실내 온도, 130 W, 40 kHz) 용 해도 프로세스에 도움을 사용할 수 있습니다. 
	참고: 다음 아미노산 솔루션은 빛에 민감한 및 알루미늄 호 일로 덮어야 한다: 트립토판, 페닐알라닌, 티로신 (이루어져 방향족 고리 구조) 시스테인 (반응-SH 그룹).</li>
</ol> 2. SAP-AA 솔루션의 준비 <ol><li>준비 20 mL 섬광 튜브 자기 조립에 대 한 펩 티 드. 주어진된 자기 조립 펩 티 드에 대 한 준비 아미노산 솔루션 (각 조합에서에서 이루어집니다 별도 유리병) 당 한 유리병을 준비.</li>
	<li>각 유리병의 바닥에 약 1 ± 0.2 mg 펩 티 드의 무게 (와 함께 한 가독성 또는 그이 하 0.1 mg까지), 높은-성능 분석 균형을 사용 하 여. 무게 후 뚜껑과 뚜껑에 펩 티 드의 정확한 무게를 기록</li>
	<li>펩 티 드, 펩 티 드 (0.1 mg/mL 16 아미노산의 길이가 긴 펩 티 드 또는 0.2 mg/mL에 대 한 자기 조립의 원하는 농도 도달 하기 위하여 포함 된 각 유리병에 적절 한 양의 아미노산 솔루션 (섹션 1에서 준비 하는) 플라스틱 8 아미노산의 길이가 짧은 펩 티 드).</li>
	<li>는 물 목욕 sonicator (130 W, 40 kHz) 실내 온도에, 튜브 내에서 솔루션 물 목욕에 완전히 몰입 하 보장에서 10 분 Sonicate.</li>
</ol> 3. DMSO 약물 또는 약물 에탄올 재고 솔루션의 준비 <ol><li>결합 (이 경우에는 100 %DMSO curcumin)에서 약물의 1 mg와 두 개의 재고 솔루션을 만드는 100% 에탄올과 다른 1mg. 
	참고: 우리는 DMSO curcumin와 에탄올 curcumin 주식 되었고 5 mg/mL 2.5 mg/mL, 각각, 각 용 매;에 있는 다양 한 가용성 때문에 DMSO와 400 µ L 에탄올의 200 µ L을 추가 그러나, 그것은 재고의 집중 관심의 소수 성 약물에 따라 조정 되어야 한다 주의 하는 것이 중요입니다. 약물 용 해도 등 효과적인 생물학 농도 요인이이 가치 결정에 중요 하다. 또한, 그 재고 것입니다 희석 약 및 50-fold DMSO와 에탄올 정립에서 각각, SAP AA 솔루션 (섹션 4 참조)와 함께 하는 마음에 계속. 공식 요구의 수에 따라 재고의 더 큰 볼륨을 준비를 선호 수 있습니다 &#8211;이 경우에, 약 1 mg 이상 사용 될 것 이라고. 주식-20 ° C에 저장 될 수 있다 얼음에 소용돌이 사용 하기 전에 해 동.</li>
	<li>소용돌이 15 리 바이 알 약을 완전히 분해 하는 s.</li>
</ol> 4. 약물 제형의 준비 <ol><li>준비, 1.5 mL microcentrifuge 튜브 각 배합에 대 한. 펩 티 드, 아미노산 (고 농도), 자체 조립 하는 의도를 레이블 튜브 반드시과 공동 용 매.</li>
	<li>마약 DMSO 주식, 또는 적절 한 microcentrifuge 튜브 20 µ L 마약 에탄올 재고 추가 10 µ L.</li>
	<li>추가 990 µ L의 SAP AA 산 성 솔루션을 적절 한 분류 마약 DMSO 주식과 마약 에탄올 주식 포함을 980 µ L을 포함 하는 microcentrifuge 튜브. 이 1 %DMSO 또는 2% 에탄올 1 mL 약물 제형 생산. 
	참고: 모든 curcumin 공식의 최종 농도 프로토콜에 따라 0.5 mg/mL 이었다. 다시 말하지만,이 때 달라 집니다 다른 소수 성 화합물을 사용 하 여 또는 다른 재고 농도와 시작 (단계 3.1 참조)</li> <li>30에 대 한 적극적으로 소용돌이 s 30 분 동안 휴식을 공식 허용</li></ol>
 5. 가용성 테스트 <ol><li>휴식 기간, 소용돌이 적극적으로 한 번 다시 30 후 미</li>
	<li>1 분에 대 한 14,220 x g에서 공식 원심</li>
	<li>강수량 microcentrifuge 관의 하단 (시각화) 하 여 분석.</li>
</ol>

<ol><li>Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+neurite+outgrowth+and+active+synapse+formation+on+self-assembling+peptide+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97 (12), 6728-6733 (2000).</li>
<li>Davis, M. E., Motion, J. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+self-assembling+peptide+nanofibers+create+intramyocardial+microenvironments+for+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Injectable self-assembling peptide nanofibers create intramyocardial microenvironments for endothelial cells.</a> Circulation. 111 (4), 442-450 (2005).</li>
<li>Matson, J. B., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+scaffolds+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide scaffolds for regenerative medicine.</a> Chem. Commun. 48 (1), 26-33 (2012).</li>
<li>Tatman, P. D., Muhonen, E. G., Wickers, S. T., Gee, A. O., Kim, E., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides+for+stem+cell+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides for stem cell and tissue engineering.</a> Biomater. Sci. 4 (4), 543-554 (2016).</li>
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<li>French, K. M., Somasuntharam, I., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+delivery+of+therapeutics+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based delivery of therapeutics for myocardial infarction.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 96, 40-53 (2016).</li>
<li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90 (8), 3334-3338 (1993).</li>
<li>Bowerman, C. J., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+amphipathic+%CE%B2-sheet+peptides%3A+insights+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of amphipathic β-sheet peptides: insights and applications.</a> Biopolymers. 98 (3), 169-184 (2012).</li>
<li>Amidon, G., Lennernäs, H., Shah, V., Crison, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+theoretical+basis+for+a+biopharmaceutic+drug+classification%3A+the+correlation+of+in+vitro+drug+product+dissolution+and+in+vivo+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability.</a> Pharm. Res. 12 (3), 413-420 (1995).</li>
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<li>Liu, J., Zhang, L., Yang, Z., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+of+paclitaxel+from+a+self-assembling+peptide+hydrogel+formed+in+situ+and+antitumor+study+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Controlled release of paclitaxel from a self-assembling peptide hydrogel formed in situ and antitumor study in vitro.</a> Int. J. Nanomed. 6, 2143-2153 (2011).</li>
<li>Wu, Y., Sadatmousavi, P., Wang, R., Lu, S., Yuan, Y., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+anticancer+effect+of+ellipticine+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance anticancer effect of ellipticine in vitro and in vivo.</a> Int. J. Nanomed. 7, 3221-3233 (2012).</li>
<li>Fung, S. Y., Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.200800860/abstract">Self-Assembling Peptide as a Potential Carrier for Hydrophobic Anticancer Drug Ellipticine: Complexation, Release and In Vitro Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. 19 (1), 74-83 (2009).</li>
<li>Fung, S. -Y., Oyaizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+nanoscale+combinations+of+self-assembling+peptides+and+amino+acids+of+the+Src+tyrosine+kinase+inhibitor+in+acute+lung+injury+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential of nanoscale combinations of self-assembling peptides and amino acids of the Src tyrosine kinase inhibitor in acute lung injury therapy.</a> Biomaterials. 32 (16), 4000-4008 (2011).</li>
<li>Pacheco, S., Kanou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+of+hydrophobic+therapeutics+with+self-assembling+peptide+and+amino+acid%3A+A+new+platform+for+intravenous+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Formulation of hydrophobic therapeutics with self-assembling peptide and amino acid: A new platform for intravenous drug delivery.</a> J. Control. Release. 239, 211-222 (2016).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

수립 절차에서 다양 한 중요 한 단계 및 문제 해결에 고려해 야 할 점이 있다. 첫째, 우리는 다양 한 구성 요소와 농도 일으로 프로토콜을 통해 여러 개의 소용돌이 단계 모든 농도 균일 하 고 올바른 인지 확인 합니다. 고 농도, 소수 성 아미노산 솔루션의 일부 수 있습니다 여전히 하지 완전히 용 해 vortexing, 후 고이 경우에, 그들은 과정에서 도움을 손으로 적극적으로 흔들릴 수 있습니다. 마찬가지로, 그것은 필수 SAP AA 솔루션 얼 간 자연스럽 게 하는 경향이 단계 2.4에서에서 설명한 쥡니다 단계 받아야 집계 및 쥡니다 분할 SAP 클러스터, 더 획 일 한 해결책에 따라서 결과에 도움이 될 것입니다. 둘째, 주어진된 소수 성 약물에 대 한 재고 및 SAP AA 공식 내에서 최종 농도 생물 학적 설정에서 화합물의 효과적인 농도에 달려 있어야 한다. 프로토콜이 활성 농도 맞게 적절 하 게 수정 한다. 또한, 마약 적재 능력은 또한 고려; 하는 중요 한 요소 그것은 각 약물이이 전략을 사용 하 여 독특한 로드 용량 해...

얼 간 재생 의학1,2,,34에서 3D 공중 발판으로 광범위 하 게 연구 하는 생체 재료의 클래스는. 그러나 최근에, 그들은 있다 되었습니다 악용 치료제 때문에 그들의 독특한 생물 속성5,6,,78의 납품을 위한 차량으로. 얼 간 자연스럽 게 안정 nanostructures9, 마약 캡슐화 하 고 보호 하는 수단 제공으로 조립. 얼 간은 amphipathic, 소수 성 및 친수성 아미노산 반복, 운전의 특정 패턴의 구성 그들의 자기 조립을9,10 , 소수 성 및 친수성 사이 매체 역할을 수 있도록 환경입니다. 따라서, 소수 성 약물-임상 배달에 있는 매우 낮은 생체 이용률과 신체에 흡수 수성 환경11,12 -가용성의 부족으로 인해 얼 간은 배달 약속 차량입니다. 또한, 그들의 순서 패턴 또한 그 얼 간 합리적으로 설계 하 고 수 하 어떤 주어진 약물 호환성 최대화 또는 복합 (즉, 기능 그룹에 따라) 추가 가용성 엔지니어링을 의미 합니다.
얼 간 효과적인 마약 배달 차량 많은 생체 외에서 그리고 vivo에서 설정13,14,,1516으로 적용 되어 있다. 그들은 또한 중대 한 안전 및 생체 적합성 표시. 그러나, SAP 약물 준비의 낮은 osmolarity, 때문에 그들은 임상 설정13에서 정 맥 주사에 대 한 사용할 수 없습니다. 이 구속을 고려 하면 우리 최근 얼 간 독성 공동의 사용을 감소 하 고 배합 osmolarity 증가 아미노산 솔루션과 결합 하는 전략을 개발 했다 따라서, 임상 관련성. 우리 얼 간의 빌딩 블록으로 아미노산을 사용 하기로 이미 임상 허용, 고 얼 간와 함께, 그들은 증가 소수 성 약물의 용 해도17,18필수 SAP의 양을 줄이는.
우리는 자세히 조사 SAP AA 조합 소수 성 약물의 용 해도 및 후속 배달을 위한 일반화 된 플랫폼으로 여러 단계의 심사 파이프라인을 만들고 Src 반응 억제제, PP2 모델 소수 성 화합물으로 서 그것을 적용 하 여. 이 과정에서 우리는 정립의 구성 요소를 변경-궁극적으로 테스트 6 다른 얼 간, 2 다양 한 농도 (낮은, 높은, 낮은에 따라 기존 임상 응용 프로그램에 높은 농도에서 모두 20 아미노산의 효과 검사 농도 했다 2 배, 3 배, 또는 물에서 각 아미노산의 최대 용 해도 기반으로 하는 임상 농도 5 배), 그리고 2 다른 공동 용 매-및 추가 분석을 위해 PP2 solubilized 선택한 조합. 이 약물 배합 vivo 모델 intratracheal 및 정 맥 행정을 사용 하 여 세포 배양에 약 배달 차량으로 효과가 입증 했다. 마찬가지로, 우리의 작업 solubilizing 여러 SAP AA 조합의 다양성에 감동을; 수성 환경에서 구조적으로 다른 소수 성 화합물 특히,는 약 rottlerin 및 curcumin18. 이 원고는 SAP AA 배합 방법 및 우리의 심사 파이프라인에서 기본 단계의 예로 curcumin 가용성의 분석을 설명합니다. 이 프로토콜 어떤 주어진된 소수 성 화합물을 분해 최적의 SAP AA 조합에 대 한 화면으로 간단 하 고 재현성을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>EAK16-I</td><td>캔펩타이드 Inc.</td><td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: AEAKAEAKAEAKAEAK, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화, HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-II</td><td>CanPeptide Inc</td>.에 의한 >95% 순도<td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: AEAEAKAKAEAEAKAK, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화, HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-IV</td><td>CanPeptide Inc</td>.에 의한 >95% 순도<td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: AEAEAEAEAEAKAKAK, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화, HPLC</td></tr><tr><td>EFK8-II</td><td>CanPeptide Inc</td>.에 의한 >95% 순수<td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: FEFEFKFK, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화, HPLC</td></tr><tr><td>A6KE</td><td>CanPeptide Inc</td>.에 의한 >95% 순도<td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: AAAAAAKE, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화, HPLC</td></tr><tr><td>P6KE</td><td>CanPeptide Inc</td>.에 의한 >95% 순도<td>맞춤형 펩타이드</td><td>서열: PPPPPPPKE, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화>, HPLC</td></tr><tr><td>알라닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>A7469-100G</td><td>L-알라닌</td></tr><tr><td>이소류신</td><td>시그마-알드리치</td><td>I7403-100G</td><td>L-이소류신</td></tr><tr><td>류신</td><td>시그마-알드리치</td><td>L8912-100G</td><td>L-류신</td></tr><tr><td>메티오닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>M5308-100G</td><td>L-메티오닌</td></tr><tr><td>프롤린</td><td>시그마-알드리치</td><td>P5607-100G</td><td>L-프롤린</td></tr><tr><td>발린</td><td>시그마-알드리치</td><td>V0513-100G</td><td>L-발린</td></tr><tr><td>페닐알라닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>P5482-100G</td><td>L-페닐알라닌</td></tr><tr><td>트립토판</td><td>시그마-알드리치</td><td>T8941-100G</td><td>L-트립토판</td></tr><tr><td>티로신</td><td>시그마-알드리치</td><td>T8566-100G</td><td>L-티로신</td></tr><tr><td>글리신</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>G8790-100G</td><td>, L-글리신</td></tr><tr>,<td>아스파라긴</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>A4159-100G</td><td>, L-아스파라긴</td></tr>, <tr><td>글루타민</td><td>, 시그마-알드리치</td><td>G8540-100G</td><td>, L-글루타민</td></tr>, <tr><td>세린</td><td>, 시그마-알드리치</td><td>A7219-100G</td><td>, L-세린</td></tr><tr><td>, 트레오닌</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>T8441-100G</td><td>, L-트레오닌</td></tr><tr><td>히스티딘</td><td>시그마-알드리치</td><td>H6034-100G</td><td>L-히스티딘</td></tr><tr><td>라이신</td><td>시그마-알드리치</td><td>L5501-100G</td><td>L-라이신</td></tr><tr><td>아르기닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>A8094-100G</td><td>L-아르기닌</td></tr><tr><td>아스파르트산</td><td>시그마-알드리치</td><td>A7219-100G</td><td>L-아스파르트산</td></tr><tr><td>글루탐산</td><td>시그마-알드리치</td><td>G8415-100G</td><td>L-글루탐산</td></tr><tr><td>시스테인</td><td>시그마-알드리치</td><td>C7352-100G</td><td>L-시스테인</td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>시그마-알드리치</td><td>D4540-500ML</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>시그마-알드리치</td><td>277649-100ML</td><td>무수</td></tr><tr><td>커큐민</td><td>시그마-알드리치</td><td>08511-10MG</td><td>소수성 약물, 커큐민</td></tr><tr><td>로틀러린</td><td>EMD 밀리포어</td><td>557370-10MG</td><td>소수성 약물, 로틀러린</td></tr><tr><td>PP2</td><td>엔조&nbsp;</td><td>BML-EI297-0001</td><td>소수성 약물, PP2</td></tr><tr><td>섬광 바이알</td><td>VWR</td><td>2650-66022-081</td><td>붕규산 유리, 나사 캡 포함, 20mL. 펩타이드 칭량용 바이알.</td></tr><tr><td>Falcon 50 mL 원추형 원심분리 튜브</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>폴리프로필렌, 멸균, 50 mL. 아미노산 용액용.</td></tr></tbody></table>

자기 조립 펩타이드와 아미노산의 조합을 사용 하 여 수 용액에서 소수 성 화합물의 용 해도

Solubility of Hydrophobic Compounds in Aqueous Solution Using Combinations of Self-assembling Peptide and Amino Acid

자가 조립 펩 티 드 (얼 간)는 임상 응용 프로그램; 소수 성 치료제의 배달에 대 한 유망한 차량 그들의 amphipathic 속성의 수성 환경에서 소수 성 화합물을 분해 하도록 수 있습니다. 그러나, 자가 조립 펩 티 드 솔루션은 가난한 혈액 호환성 (예를 들어, 낮은 osmolarity), 정 맥 행정을 통해 그들의 임상 응용 프로그램을 방해. 우리는 최근이 아미노산 솔루션 (SAP-AA) 약물 용 해도 향상 및 배합 osmolarity 임상 사용에 대 한 요구 사항에 도달 증가 얼 간 결합 소수 성 약물 전달에 대 한 일반화 된 플랫폼을 개발 했습니다. 이 공식 전략 3 구조적으로 다른 소수 성 화합물-PP2, rottlerin, 및 curcumin-그 다양성을 설명 하기 위하여의 맥락에서 철저 하 게 테스트 되었습니다. 또한, 우리 6 다른 얼 간, 낮은 농도에서 20 자연스럽 게 기존 아미노산 및 두 개의 서로 다른 공동 용 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 및 에탄올을 분석 하 여 배합 구성 요소 변경의 효과 검사 합니다. 특정된 소수 성 약물 및 공식화 억제제, PP2, 치료 기능에 대 한 구성 요소를 최적화에 효과가 입증 하는 우리의 전략은 체 외에서 그리고 vivo에서모두 관찰 되었다. 이 원고는 소수 성 화합물 및 기능적 연구에이 공식의 사용 가능성을 향한 첫 걸음으로 용 해도의 분석에 대 한 SAP-AA 조합을 사용 하 여 우리의 일반적인된 배합 방법을 설명 합니다. 우리는 소수 성 화합물, curcumin의 정립에 대 한 대표적인 용 해도 결과 포함 하 고 어떻게 우리의 방법론 미래 생물학 연구 및 질병 모델에 대 한 플랫폼 역할을 토론.

소수 성 약물, curcumin에 대 한 우리 공식 증거의 원칙으로 하나의 SAP, EAK16-II와 함께에서 낮은 농도에서 아미노산을 자연스럽 게 존재 하는 모든 20를 사용 하 여 제작. 우리는 또한 공식 공동 용 매로 DMSO와 에탄올을 사용 하 여 테스트. 총에서이 각각 서로 다른 구성 요소를 포함 하는 40 curcumin 공식 생산. Src 억제제, PP2를 사용 하 여 우리의 이전 연구에 우리 SAP (6 총)와 아미노산 농도 대 한 더 많은 옵션을 포함, 주의 하는 것이 중요 하다 (임상, 높은 농도 뿐만 아니라)는 480 다른 정립의 총 생산. 이 작품에서 동향으로이 연구에 대 한 SAP EAK16 II를 선택할 때 계정에 찍은. 다양 한 부품의 농도 표 1, 표 2및 표 3 에 참조로 포함 됩니다. 모든 소수 성 약물 제형 시각화, 약물 용 해도 대 한 상영 고 ...

이 프로토콜 자체 조립 펩타이드와 아미노산 솔루션의 조합을 사용 하는 수성 환경에서 소수 성 화합물을 녹 이기의 임상 적용 방법을 설명 합니다. 우리의 방법은 소수 치료 학, 임상 설정으로 안전 하 고 효율적 수단 가용성 및 배달 방법의 부족의 주요 한계를 해결 합니다.

Self-assembling peptides (SAPs) are promising vehicles for the delivery of hydrophobic therapeutics for clinical applications; their amphipathic ...

이 방법의 전반적인 목표는 임상 적용 가능성을 위해 수용액 내 소수성 화합물의 용해도를 높이는 것입니다. 이 방법은 혈액과 같은 수성 시스템에서의 낮은 용해도로 인해 임상 현장에서 소수성 화합물을 사용하지 못하는 의료 분야의 주요 한계점을 해결합니다. 이 기술의 주요 장점은 독성 공용매를 거의 사용하지 않고도 소수성 화합물을 수용액에 용해시킬 수 있다는 점입니다.먼저, 각 아미노산당 50 liter 원추형 원심분리 튜브 두 개에 라벨을 붙입니다. 정제수가 담긴 커다란 2 liter 플라스크를 준비합니다. 원하는 농도를 위해 각 아미노산의 양을 계산한 후, 스패튤라를 사용하여 해당 아미노산을 각각의 원심분리 튜브에 적절한 양만큼 무게를 달아 넣습니다.세로로지컬 피펫을 사용하여 각 원심분리 튜브에 정제수 40 milliliters를 추가합니다. 튜브의 캡을 닫은 후, 샘플이 용해될 때까지 볼텍싱합니다. 고성능 분석 저울을 사용하여 약 1 ± 0.2 milligrams의 펩타이드를 20 milliliter 신틸레이션 바이알 바닥에 잽니다.캡에 펩타이드의 정확한 무게를 기록하고 바이알의 캡을 돌려 닫습니다. 다음으로, 자기 조립 펩타이드의 원하는 농도에 도달할 수 있도록 각 바이알에 적절한 부피의 아미노산 용액을 피펫으로 넣습니다. 바이알 내의 용액이 수조에 완전히 잠기도록 하여 상온의 수조 초음파 세척기에서 샘플을 10분 동안 초음파 처리합니다. 원하는 약물 1 mg을 적절한 양의 DMSO와 혼합하고, 또 다른 약물 1 mg을 에탄올과 혼합하여 두 가지 약물 스톡 용액을 준비합니다.그 후, 약물을 완전히 용해시키기 위해 두 용액을 15초 동안 볼텍싱합니다. 이어서 각 제형별로 자기 조립 펩타이드, 아미노산 및 공용매를 표시하여 1.5 milliliter 마이크로 원심분리 튜브에 라벨을 붙입니다. 해당 마이크로 원심분리 튜브에 약물 DMSO 스톡 용액 10 microliters 또는 약물 에탄올 스톡 용액 20 microliters를 첨가합니다.다음으로, 약물 DMSO 스톡 용액이 들어 있는 마이크로 원심분리 튜브에 자기 조립 펩타이드 아미노산 용액 990 µL를 첨가합니다. 약물 에탄올 스톡 용액이 들어 있는 마이크로 원심분리 튜브에는 펩타이드 아미노산 용액 980 µL를 첨가합니다. 모든 약물 제형을 30초 동안 격렬하게 볼텍싱합니다.그런 다음, 알루미늄 호일로 덮고 용해성 테스트 전까지 제형을 30분 동안 그대로 둡니다. 30분 후, 제형을 30초 동안 강하게 볼텍싱합니다. 이어서, 제형을 14,220 ×g에서 1분 동안 원심 분리합니다.원심분리 후, 마이크로 원심분리 튜브 바닥에 침전물이 있는지 육안으로 확인합니다. 본 연구에서 테스트한 40가지 제형 중 7가지가 소수성 약물인 curcumin을 성공적으로 용해시켰습니다. 제형을 성분별로 그룹화하여 분석한 결과 두 가지 주요 경향이 확인되었습니다.에탄올이 커큐민을 용해하는 데 더 적합한 공동 용매로 보이며, 양전하를 띤 아미노산인 라이신과 아르기닌이 커큐민 용해를 위한 최적의 성분인 것으로 보입니다. 아르기닌과 라이신을 포함하는 제형에서 나타나는 색상 변화는 커큐민이 알칼리성 조건에서 용해되었음을 보여준다는 점이 흥미롭습니다. 적절한 장비를 갖추고 아미노산 용액을 미리 준비한다면, 이 기술을 숙달한 후 2~3시간 내에 수행할 수 있습니다.이 절차에 따라, 용해된 약물의 생물학적 효능이나 안전성을 직접 평가하고 비교하기 위해 가용성 약물 제형을 in vitro 및 in vivo에서 추가로 테스트할 수 있습니다. 개발 이후, 이 제형 방법은 급성 폐 손상 예방을 위한 PP@라고 불리는 소수성 스톡 억제제의 in vivo 전달을 가능하게 했습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 주어진 소수성 약물을 용해시키기 위해 자기 조립 펩타이드와 아미노산 조합을 적용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

기본 장비 및 상용 시약과 관련된 단순하고 일반적인 수동 peptoid 합성 방법은 peptoids 쉽게 대부분의 실험실에서 합성 수있게 설명되어 있습니다. amphiphilic peptoid의 36mer의 합성, 정제 및 특성은 물론 높은 주문한 nanosheets로의 자기 조립과 같이 설명되어 있습니다.

높은 명령으로 Nanosheets에 Peptoid 폴리머 및 자기 조립의 고체 상 합성 Submonomer

이 논문은 자기 조립의 자연 프로세스에 의해 주문한 높은 펩타이드 기반 구조의 형성을 설명합니다. 이 방법은 시판 펩티드 및 일반적인 실험실 장비를 이용한다. 이 기술은 펩티드의 큰 다양성에 적용 할 수 있으며, 새로운 펩티드 어셈블리의 발견으로 이어질 수있다.

짧은 펩타이드의 자기 조립에 의해 주문 생체 고분자 구조의 형성

Polyamine 기반 펩타이드 amphiphiles (PPAs)의 합성은 이러한 반응 기능 마스크 그룹 보호의 사리 분별이 사용 여러 아민 nitrogens의 존재로 인해 중요 한 도전 이다. 이 문서에서 우리는 자기 조립 분자의 이러한 새로운 클래스의 준비에 대 한 손쉬운 방법을 설명합니다.

Polyamine 기반 펩타이드 Amphiphiles (PPAs) 및 관련된 생체 자기 조립의 합성에 대 한 손쉬운 프로토콜

1, 2-dithiolane의 합성에 대 한 프로토콜 펩 티 드와 펩 티 드에서 자기 조립 결과 supramolecular 구조의 특성 수정.

합성 및 특성 1, 2-Dithiolane의 수정 자가 조립 펩 티 드

이 프로토콜 lysine-티로신-페닐알라닌 (KYF) tripeptide로 안정 된 올레 acids-platinum(II) 공액 nanoemulsion 합성 하는 효율적인 방법을 설명 합니다. 된 KYF는 공액의 자기 조립을 통해 가벼운 합성 조건에서 nanoemulsion 양식.

올레산의 Tripeptide 안정 Nanoemulsion

정보 부호화 된 펩토이드 올리고머의 합성과 동적 공유 반응체 쌍 및 루이스 산성 희토류로 아민과 알데히드를 사용하여 분자 사다리로 이러한 펩토이드의 시퀀스 지시자가 조립하기 위한 프로토콜이 제시됩니다. 다중 역할 시약으로 금속 triflates.

정보 베어링 펩토이드의 합성과 시퀀스 지향 동적 공유자 자체 조립

우리는 구리 (II) 2,9,16,23 테트라 - 테르트 - 부틸 -29H,31H -phthalocyanine (CuPc) 분자와 지질 이중 층을 도핑하여 물 / 공기 인터페이스에서 하이브리드 지질 막을 생산하기위한 프로토콜을보고합니다. 그 결과 하이브리드 지질 막에는 지질/CuPc/지질 샌드위치 구조가 있습니다. 이 프로토콜은 또한 다른 기능성 나노 물질의 형성에 적용될 수 있다.

물/공기 인터페이스에서 소수성 유기 분자와 함께 도핑 하이브리드 지질 막의 자체 조립

이 문서는 유기 용매 혼합물에서 감마 변형 펩타이드 핵산 올리고머로부터 나노 구조의 설계 및 자체 조립을 위한 프로토콜을 제공합니다.

감마 변형 펩타이드 핵산의 자가 조립을 유기 용매 혼합물의 복잡한 나노 구조로

이 프로토콜은 환경 조건을 사용하여 펩타이드가 하이드로겔로 자가 조립되도록 하는 세 가지 빠르고 간단한 준비 방법을 제시합니다. 또한 펩타이드 하이드로겔의 특성 분석이 설명되어 이러한 간단한 조건에서 기계적으로 안정적인 펩타이드 하이드로겔을 형성할 수 있음을 보여줍니다.

기계적으로 안정적인 자체 조립 펩타이드 하이드로겔의 제조

비 침습적으로 위 비우는의 결정...

를 사용하여 비 비만 당뇨병 마우스의 위 비우는의 평가 [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoic 산성 호흡 시험

배우세요 자기 조립 펩타이드와 아미노산을 활용하여 수용액에서 소수성 화합물을 용해하는 방법을. 이 기술은 독성 공용매 없이 임상 적용 가능한 약물 전달 솔루션을 제공합니다.

자기 조립 펩타이드와 아미노산의 조합을 사용 하 여 수 용액에서 소수 성 화합물의 용 해도

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