Name: 교차 reactivity 무료 및 정찰 병 무료 스냅 칩 샌드위치 Immunoassays 다중화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: 배우세요 스냅 칩 기술을 이용한 교차 반응 없는 다중 샌드위치 면역분석법으로 단백질을 정량하는 방법입니다. 이 기법은 복잡한 마이크로어레이 스포터 없이도 정확한 단백질 바이오마커 발굴이 가능합니다.

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우리는 잉크젯 정찰 병의 사용에 대 한 박사 롭 Sladek을 감사합니다. 우리는 최종 지원 캐나다 기관에서 건강 연구 (CIHR), 자연 과학 및 캐나다 엔지니어링 연구 위원회 (NSERC), 캐나다 암 학회 연구소 및 캐나다 재단에 대 한 혁신 (CFI)에 대 한 인정합니다. Dj가 감사 합니다 캐나다 연구의 자에서 지원합니다.

1. 스냅 칩 제조 및 저장 <ol><li>이전 방법 ( 그림 1a) <ol><li>자리 cAb 솔루션 400 µ g/mL 항 체를 포함 하 고 20% 글리세롤 인산 염 버퍼 염 분에 (PBS)을 nitrocellulose (또는 기능성된 유리)에는 잉크젯 microarray 정찰 병 13 60%의 상대 습도에서 분석 결과 슬라이드 (1.2 각 명소에 대 한 nL) 800 µ m 센터-센터 간격. 슬라이드 한 구석에 따르면 정찰 병 갑판에 고정 되어 있는지 확인 (여기, 왼쪽 아래 사용 되었다).</li>
		<li>60%의 상대 습도와 1 시간 실 온에서 발견된 분석 결과 슬라이드를 품 어.</li>
		<li>클램프 16 구획 16 우물으로 그것을 분할 하는 분석 결과 슬라이드에 슬라이드 모듈 가스 켓. 0.1%를 포함 하는 PBS의 80 µ L을 추가 하 여 슬라이드 세 번 씻어 트윈-20 (PBST) 각 잘 떨고 통, 5 분 각 시간에 450 rpm으로.</li>
		<li>차단 솔루션을 각각 잘 고 450 rpm에서 1 h에 대 한 동요의 추가 80 µ L.</li>
		<li>개 스를 제거 하 고 건조 한 질소의 스트림 분석 결과 슬라이드.</li>
		<li>정찰 병 갑판에 전송 슬라이드를 해결 하 고 정찰 병 갑판의 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 슬라이드의 왼쪽 아래를 밀어. 잉크젯 택시에 대 한 것과 동일한 레이아웃으로 정렬 표시 (폴리스 티 렌 마이크로-비즈 솔루션)의 배열을 자리.</li>
		<li>건조 맞춤 표시 하자. 이전 슬라이드를 대칭 이동 하 고 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 고정 정찰 병 갑판에 그것을 다시 넣어.</li>
		<li>20 µ g/mL 항 체, 20% 글리세롤과 1 %BSA 포함 하는 솔루션을 발견 하는 소량 준비.</li>
		<li>는 정찰 병을 사용 하 여 &#39; s 카메라, 맞춤 마크의 사진을. 이 그림을 표준으로 탐지 프로그램으로 구현 하 고 가장 상단 왼쪽된 마크를 식별 하기 위해 잉크젯 정찰 병의 이미지 인식 시스템. 좌표를 사용 하 여 dAb 배열의 첫 번째 장소. 드롭릿 800 µ m의 센터-센터 간격 당 자리 8 nL.</li>
	</ol></li> <li>이중 전송 방법 ( 그림 1b) <ol><li>전송 슬라이드 1 왼쪽된 하단에 대 한 잉크젯 정찰 병 갑판에 배치. 택시 솔루션, 포함 된 400 µ g/mL 항 체 20% 글리세롤, PBS에서 1 %BSA 60%의 상대 습도 잉크젯 microarray 정찰 병으로 슬라이드에 자리 (0.4 각 명소에 대 한 nL 및 ~ 200 µ m 직경에서). 센터-센터 간격은 400 µ m.</li>
		<li>스냅 스냅 장치 ( 그림 2)를 사용 하 여 분석 결과 슬라이드에 택시 물방울 전송 전송 슬라이드 코팅 nitrocellulose (또는 기능성된 유리) 분석 결과 슬라이드.
		<ol><li>차례 모든 6 버튼 잠금 열림 위치에서 모든 plungers를 90도 스냅 기구 측면. 잘린 모서리 고정된 포고 핀을 직면 하 고 그것의 소켓에서 슬라이드 홀더에 전송 슬라이드를 삽입 합니다. 3 개의 버튼으로 황금 포고 핀 plungers를 슬라이드 맞춤 핀에 대 한 적용 됩니다 있는지 확인 하십시오의 첫 번째 집합 설정.</li>
			<li>스냅 기구 거꾸로 앉아 4 포고 핀에에 니트로-코팅 슬라이드를 삽입 합니다. 실버 핀 plungers를 슬라이드 맞춤 핀에 대 한 적용 됩니다 있는지 확인 하는 3 개의 버튼의 두 번째 세트를 차례로.</li>
			<li>가기 셸 슬라이드 홀더 맞춤 기둥 구멍을 사용 하 여 정확한 위치에 배치 하 여 맞춤 장치를 닫습니다.</li>
			<li>그것의 감 금으로 닫힌된 스냅 기구를 삽입 하 고 밀어 폐쇄 탭 완전히 microarrays 적절 한 압력을 적용 하는 동안 얼굴을가지고. 1 분에 대 한 폐쇄 유지</li>
		</ol></li> <li>슬라이드를 분리. 60%의 상대 습도와 1 시간 실 온에서 분석 결과 슬라이드를 품 어. 세척, 차단, 및 단계 1.1.3-1.1.5에에서 설명 된 대로 분석 결과 슬라이드 건조.</li>
		<li>는 잉크젯 정찰 병 갑판에 밀어 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 또 다른 전송 슬라이드를 배치합니다. 자리 dAb 솔루션 50 또는 100 µ g/mL의 항 체 (표 1 참조), 20% 글리세롤과 PBS에서 1 %BSA 포함. 각 자리 0.8 인지 확인 nL와 관광 명소의 센터-센터 간격은 400 µ m.</li>
		<li>분석 결과 및 이전 슬라이드를 저장합니다. 분석 결과 전송 슬라이드 시키는 포함 하는 밀폐 봉지에 밀봉 하 고는-20 ° C 냉동 실에 넣어.</li>
	</ol></li></ol> 2. 스냅 칩 immunoassays 다중화 <ol><li>검색 냉장고에서 분석 결과 슬라이드. 슬라이드는 실내 온도에 올 때까지 30 분 동안 봉인 가방 두고.</li>
	<li>준비 7-포인트 시리얼 단백질 0.05%를 포함 하는 PBS에 급상승 하 여 샘플 솔루션을 희석 트윈 20. 
	참고: 여기, 5 희석 요소 사용 됩니다. 각 단백질에 대 한 시작 농도 표 1에 나와 있습니다.</li>
	<li>적절 한 준비 샘플 솔루션입니다. 예를 들어 PBST 버퍼에 4 번 인간의 혈 청을 희석.</li>
	<li>분석 결과 슬라이드에 16 실 가스 켓을 클램프.</li>
	<li>Pipetting으로 7 단백질 희석 솔루션 및 단백질-무료 PBST 버퍼 솔루션 8 우물의 한 열을 입력합니다. 같은 슬라이드에 다른 8 우물에서 샘플 솔루션을 플라스틱. 
	참고: 각에 들어갈 수 있는 80 µ L 솔루션 잘. 필요한 경우 추가 샘플을 측정 하 더 많은 슬라이드를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>실 온에서 1 h 또는 4 ° C. 세척 슬라이드 세 번 450 rpm, 5 분 때마다 통에 PBST에서 하룻밤을 위해 450 rpm에서 통에 샘플을 품 어. 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소 가스의 스트림 아래 슬라이드.</li>
	<li>는 냉장고에서 dAbs과 전송 슬라이드를 검색합니다. 실 온에서 30 분 동안 봉인 가방을 유지. 그런 다음 60% 습도 안정화 구슬 재에 대 일 분을 포함 하는 닫힌된 챔버 (예: 빈 팁 박스)에 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>는 DAb 물방울 전송 스냅 장치 ( 그림 2)를 사용 하 여 분석 결과 슬라이드와 전송 슬라이드 스냅. 1.2.2 스냅 기구 운영에 대 한 섹션을 참조 하십시오.</li>
	<li>슬라이드를 구분합니다. 품 어 60% 습도 안정화 구슬 1 h. 클램프 16 구획 가스 켓과 분석 결과 슬라이드를 포함 하는 닫힌된 챔버에 분석 결과 슬라이드와 슬라이드 4 번 린스 450 rpm, 5 분 때마다 통에 PBST를 사용 하 여.</li>
	<li>피펫은 80 µ L의 각 음에 PBS에 2.5 µ g/mL streptavidin fluorophore 포함 하는 솔루션. 450 rpm에서 통에 20 분 동안 품 어.</li>
	<li>450 rpm에서 통에 3 번과 PBST 슬라이드와 증류수 한 번 씻어. 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소 가스를 사용 하 여 슬라이드.</li>
</ol> 3. 검색 및 데이터 분석 슬라이드 <ol><li>635 nm 레이저를 사용 하 여 형광 microarray 스캐너로 분석 결과 슬라이드를 스캔.</li>
	<li>추출 분석 소프트웨어 (예: 배열 프로 분석기) 16를 사용 하 여 각 자리의 순 강도.</li>
	<li>통계 소프트웨어를 사용 하 여 각 단백질의 탐지 (LOD)의 계산 하 고 샘플에서 단백질 농도 결정. 
	주: LOD cu 표준의 Y 절편으로 정의 됩니다.rve 3 번 3 개의 독립적인 분석의 표준 편차 증가.</li>
</ol>

<ol><li>Mor, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+protein+markers+for+early+detection+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Serum protein markers for early detection of ovarian cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (21), 7677-7682 (2005).</li>
<li>Nicolini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensive+post-operative+follow-up+of+breast+cancer+patients+with+tumour+markers%3A+CEA%2C+TPA+or+CA15.3+vs+MCA+and+MCA-CA15.3+vs+CEA-TPA-CA15.3+panel+in+the+early+detection+of+distant+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intensive post-operative follow-up of breast cancer patients with tumour markers: CEA, TPA or CA15.3 vs MCA and MCA-CA15.3 vs CEA-TPA-CA15.3 panel in the early detection of distant metastases.</a> BMC Cancer. 6 (1), 1-9 (2006).</li>
<li>Hnasko, R., Lin, A., McGarvey, J. A., Stanker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+method+to+improve+protein+detection+by+indirect+ELISA%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">A rapid method to improve protein detection by indirect ELISA.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 410 (4), 726-731 (2011).</li>
<li>Percy, A. J., Chambers, A. G., Yang, J., Hardie, D. B., Borchers, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+multiplexed+MRM-based+protein+biomarker+quantitation+toward+clinical+utility%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta+-+Proteins+and+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Advances in multiplexed MRM-based protein biomarker quantitation toward clinical utility.</a> Biochim. Biophys. Acta - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 917-926 (2014).</li>
<li>Ekins, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-analyte+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Multi-analyte immunoassay.</a> J Pharm Biomed Anal. 7 (2), 155-168 (1989).</li>
<li>Mahlknecht, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+antibody+microarray+analysis+of+serum+cytokines+in+neurodegenerative+Parkinsonian+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Sci%22%5BJournal%5D)">An antibody microarray analysis of serum cytokines in neurodegenerative Parkinsonian syndromes.</a> Proteome Sci. 10 (1), 71-80 (2012).</li>
<li>Miller, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+microarray+profiling+of+human+prostate+cancer+sera%3A+Antibody+screening+and+identification+of+potential+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera: Antibody screening and identification of potential biomarkers.</a> Proteomics. 3 (1), 56-63 (2003).</li>
<li>Li, H., Leulmi, R. F., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+droplet+microarrays+with+trapped+antibody-functionalized+beads+for+multiplexed+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Hydrogel droplet microarrays with trapped antibody-functionalized beads for multiplexed protein analysis.</a> Lab Chip. 11 (3), 528-534 (2011).</li>
<li>Juncker, D., Bergeron, S., Laforte, V., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-reactivity+in+antibody+microarrays+and+multiplexed+sandwich+assays%3A+shedding+light+on+the+dark+side+of+multiplexing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cross-reactivity in antibody microarrays and multiplexed sandwich assays: shedding light on the dark side of multiplexing.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 18, 29-37 (2014).</li>
<li>Blank, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double-chip+protein+arrays%3A+force-based+multiplex+sandwich+immunoassays+with+increased+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Double-chip protein arrays: force-based multiplex sandwich immunoassays with increased specificity.</a> Anal. Bioanal. Chem. 379 (7), 974-981 (2004).</li>
<li>Albrecht, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA%3A+A+Programmable+Force+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">DNA: A Programmable Force Sensor.</a> Science. 301 (5631), 367-370 (2003).</li>
<li>Pla-Roca, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+Colocalization+Microarray%3A+A+Scalable+Technology+for+Multiplex+Protein+Analysis+in+Complex+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+proteomics%22%5BJournal%5D)">Antibody Colocalization Microarray: A Scalable Technology for Multiplex Protein Analysis in Complex Samples.</a> Mol. Cell. proteomics. 11 (4), (2012).</li>
<li>Li, H., Bergeron, S., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray-to-Microarray+Transfer+of+Reagents+by+Snapping+of+Two+Chips+for+Cross-Reactivity-Free+Multiplex+Immunoassays%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Microarray-to-Microarray Transfer of Reagents by Snapping of Two Chips for Cross-Reactivity-Free Multiplex Immunoassays.</a> Anal. Chem. 84 (11), 4776-4783 (2012).</li>
<li>Li, H., Munzar, J. D., Ng, A., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+snap+chip+for+high-density+sub-nanoliter+chip-to-chip+reagent+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">A versatile snap chip for high-density sub-nanoliter chip-to-chip reagent transfer.</a> Sci. Rep. 5, 11688(2015).</li>
<li>Li, H., Bergeron, S., Annis, M. G., Siegel, P. M., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+analysis+of+38+proteins+during+the+progression+of+human+breast+tumor+in+mice+using+an+antibody+colocalization+microarray%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Serial analysis of 38 proteins during the progression of human breast tumor in mice using an antibody colocalization microarray.</a> Mol. Cell. Proteomics. 14, 1024-1037 (2015).</li>
<li>Bergeron, S., Laforte, V., Lo, P. S., Li, H., Juncker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+mixtures+of+14+hygroscopic+additives+to+improve+antibody+microarray+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluating mixtures of 14 hygroscopic additives to improve antibody microarray performance.</a> Anal. Bioanal. Chem. 407 (28), 8451-8462 (2015).</li>
<li>Whiteaker, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+Multiplexed+Analyte+Quantification+Using+Peptide+Immunoaffinity+Enrichment+Coupled+to+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Sequential Multiplexed Analyte Quantification Using Peptide Immunoaffinity Enrichment Coupled to Mass Spectrometry.</a> Mol. Cell. Proteomics. 11 (6), (2012).</li>
<li>Xu, K., Wang, X., Ford, R. M., Landers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-Partitioned+Droplet+Array+on+Laser-Patterned+Superhydrophilic+Glass+Surface+for+Wall-less+Cell+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Self-Partitioned Droplet Array on Laser-Patterned Superhydrophilic Glass Surface for Wall-less Cell Arrays.</a> Anal. Chem. 88 (5), 2652-2658 (2016).</li>
<li>Lee, M. -Y., Park, C. B., Dordick, J. S., Clark, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolizing+enzyme+toxicology+assay+chip+%28MetaChip%29+for+high-throughput+microscale+toxicity+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Metabolizing enzyme toxicology assay chip (MetaChip) for high-throughput microscale toxicity analyses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (4), 983-987 (2005).</li>
<li>Fernandes, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture+microarray+for+high-throughput+studies+of+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture microarray for high-throughput studies of stem cell fate.</a> Biotechnol. Bioeng. 106 (1), 106-118 (2010).</li>
<li>Kwon, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-Eluting+Microarrays+for+Cell-Based+Screening+of+Chemical-Induced+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Drug-Eluting Microarrays for Cell-Based Screening of Chemical-Induced Apoptosis.</a> Anal. Chem. 83 (11), 4118-4125 (2011).</li>
<li>Jogia, G. E., Tronser, T., Popova, A. A., Levkin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+Microarray+Based+on+Superhydrophobic-Superhydrophilic+Patterns+for+Single+Cell+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microarrays%22%5BJournal%5D)">Droplet Microarray Based on Superhydrophobic-Superhydrophilic Patterns for Single Cell Analysis.</a> Microarrays. 5 (4), 28(2016).</li>
<li>Schena, M., Shalon, D., Davis, R. W., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Monitoring+of+Gene+Expression+Patterns+with+a+Complementary+DNA+Microarray%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative Monitoring of Gene Expression Patterns with a Complementary DNA Microarray.</a> Science. 270 (5235), 467-470 (1995).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sandwiched+microarray+platform+for+benchtop+cell-based+high+throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A sandwiched microarray platform for benchtop cell-based high throughput screening.</a> Biomaterials. 32 (3), 841-848 (2011).</li>
</ol>

맥 길 대학교는 발명가로 Huiyan Li와 데이비드 융 커와 함께이 작품의 몇 가지 측면에 특허 출원을 제기 했다.

이 작품에서는, 우리는 기본적인 실험 설치 연구자 멀티플렉스 교차 reactivity 무료 immunoassays 널리 이용할 수 있게 하는 스냅 칩 기술을 제시 했습니다. 다른 기존 항 체 microarrays, 아니 microarray 정찰 병은 최종 사용자를 위해 필요 합니다. 단일 및 이중 전송 방법을 시연 하 고 이중 전송 월급 우수한 정렬 정확도 ~ 40 μ m 63 µ m14의 가장 큰 오차와 98%의 관광 명소에 대 한. 새로운 스냅 기구가이 기술 연구에 액세스할 수 만들기, 일관 된 압력으로 두 개의 슬라이드를 편리 하 게 개발 되었다. 신뢰할 수 있는 시 약 전송 nitrocellulose-코팅 슬라이드에 뿐만 아니라 일반 유리 슬라이드에이 기술의 광범위 한 훈련의 필요 없이 응용 프로그램을 크게 확대 실현 된다. 단백질의 70% 범위의 pg/mL14에서 Lod를 달성 및 스냅 칩의 유용성을 보여 50-플렉스 immunoass...

높은 감도 특이성 암1,2등 복잡 한 질병의 진단에 단일 바이오 마커 보다 여러 단백질을 구성 하는 바이오 마커의 패널 제공할 수 있습니다. 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA) 골드 표준 기술 플라즈마, 낮은 pg/mL에 탐지의 제한 하지만 분석 결과3,,45당 하나의 대상에 한계를 달성 하는 임상 실험실에서 사용 되었습니다. 항 체 microarrays는 단일 현미경 슬라이드6,,78에 병렬로 실시 소형된 분석 실험의 수천을 수용에 대 한 개발 되었습니다. 그러나,이 방법의 멀티플렉싱 기능 dAbs, 혼합물의 응용 프로그램에서 발생 하는 시 약 기반 분으로 제한 하 고 대상9,10 의 증가 함께 더 많은 문제가 된다 , 11. Pla 외. 다중 샌드위치 분석 실험의 결과 취약점 확장 4N(N-1)로 N은 대상12의 수 명시 된 있다.
항 체 microarrays 항 체 colocalization microarray에에서 분 완화 (ACM) 멀티플렉스 샌드위치 분석 결과12에 대 한 우리의 실험실에서 개발 되었습니다. 캡처 항 체 (택시) microarray 정찰 병으로 기판에 발견 됩니다. 차단 샘플 표면에 적용 된 다음 개별 dAbs 택시-항 원 복합체와 같은 명소에 발견 후에. 항 체와 항 원 간의 모든 분 시나리오 ACM, 함께 완화 될 수 있습니다 그리고 pg/mL에 탐지의 한계 달성 되었습니다. 그러나 준비 하 고 비싸고 시간이 소모 되는 정렬 목적에 대 한 높은 정밀도 함께 현장 microarray 정찰 병을 사용 하 여,이 넓은 응용 프로그램 제한 실험 동안에 dAbs 안보 분석 결과 프로토콜에서 요구 하는, 다른 실험실입니다. 스냅 칩 라는 휴대용 ACM 개발 되었습니다 교차 reactivity 무료 고 샌드위치 immunoassays13,,1415다중화 정찰 병 무료. 택시와 dAbs는 사전 분석 결과 슬라이드와 microarray 형태로 각각 전송 슬라이드에 발견 하 고 저장. 분석 결과, 동안 슬라이드를 검색 하 고 dAbs microarray 단순히 함께 두 개의 칩을 스냅 하 여 분석 결과 슬라이드에 집단적으로 전송 됩니다. 스냅인 장치는 신뢰할 수 있는 시 약 전송을 위해 사용 됩니다. 그러나 니트로 코팅 슬라이드는 비교적 큰 항 체 바인딩 용량 액체 작은 물방울을 흡수 분석 결과 슬라이드로 사용 되 고 전송 시 약을 촉진,, 슬라이드는 더 비싼 보다 일반 유리 슬라이드와 microarray 비-투명 슬라이드와 호환 스캐너 신호 수집 필요 합니다.
이 작품에서 스냅 칩 다중 샌드위치 immunoassay 수행 프로토콜을 설명 합니다. 새로운 스냅인 장치 microarray microarray에서 보다 편리 하 고 믿을 수 있는 시 약 전송을 위해 개발 되었습니다. 중요 한 것은, 여기 우리가 시 전송 방법 스냅 칩 일반 유리 슬라이드에 설립 했다. 1024 명소 했다 성공적으로 전송 되 고 크게 확대 대부분 실험실에서이 기술 사용 하 여 유리 슬라이드에 정렬 됩니다.

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수 정제</td><td>Fisher Scientific</td><td>5246501EA</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-conjugated Cy5</td><td>Rockland</td><td>s000-06</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>p1379</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc</td><td>001-000-162</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>차단 솔루션: BSA가 없는 StabilGuard Choice 마이크로어레이 안정제</td><td>SurModics, Inc</td><td>SG02</td><td></td></tr><tr><td>니트로셀룰로오스 코팅 슬라이드</td><td>Grace Bio-Laboratories, Inc</td><td>305116</td><td></td></tr><tr><td>아미노실란 코팅 슬라이드</td><td>Schott North America</td><td>1064875</td><td></td></tr><tr><td>Snap Device</td><td>Parallex BioAssays Inc.</td><td>PBA-SD01</td><td></td></tr><tr><td>잉크젯 마이크로어레이 스포터</td><td>GeSiM</td><td>Nanoplotter 2.0</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 모듈 개스킷</td><td>Grace Bio-Laboratories, Inc</td><td>204862</td><td></td></tr><tr><td>습도 안정화 비드</td><td>Parallex BioAssays Inc.</td><td>PBA-HU60</td><td></td></tr><tr><td>어레이 프로 분석기 소프트웨어</td><td>미디어 사이버네틱스</td><td>버전 4.5</td><td></td></tr><tr><td>형광 마이크로 어레이 스캐너</td><td>애질런트</td><td>SureScan 마이크로 어레이 스캐너</td><td></td></tr><tr><td>생물 통계 소프트웨어</td><td>GraphPad 소프트웨어 GraphPad 프리</td><td>즘 6</td><td></td></tr><tr><td>엔도 글린 캡처 항체</td><td>R & D 시스템</td><td>MAB10972</td><td></td></tr><tr><td>엔도글린 단백질</td><td>R& D Systems</td><td>1097-EN</td><td></td></tr><tr><td>엔도글린 검출 항체</td><td>R& D 시스템</td><td>BAF1097</td><td></td></tr><tr><td>IL-6a(표 1 참조)</td><td>R& D Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IL-6b(표 1 참조)</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

교차 reactivity 무료 및 정찰 병 무료 스냅 칩 샌드위치 immunoassays 다중화

Snap Chip for Cross-reactivity-free and Spotter-free Multiplexed Sandwich Immunoassays

멀티플렉스 단백질 분석 우수한 진단 민감도 단일 단백질에 비해 정확도 보이고 있다. 항 체 microarrays는 단일 칩에 동시에 수행 하는 마이크로 스케일 immunoassays의 수천 수 있습니다. 샌드위치 분석 결과 형식 두 항 체, 각 목표를 감지 하 여 분석 결과 특이성을 향상 하지만 분 따라서 그들의 멀티플렉싱 기능을 제한 하는 시 약 사이에서 겪고 있다. 항 체 colocalization microarray (ACM) 교차 reactivity 무료 다중화 단백질 검출에 대 한 개발 되었습니다 하지만 microarray 제조 분석 실험 중에 비싼 반점을 찍는 현장. 이 작품에서는 단순히 맞춤 2 칩 함께, 따라서 아무 정찰 병 샘플 인큐베이션 및 탐지 항 체 (dAbs) 시의 후속 응용 프로그램 필요에 의해 microarray microarray에서 시 약을 전송 하는 스냅 칩 기술 시연 미리 발견된 슬라이드, 슬라이드 준비 분석 결과 실행에서 해리의 스토리지. 두 메서드 모두 단일 및 이중 전송 두 microarrays 사이 정확한 줄 맞춤을 달성 하기 위해 제공 됩니다 그리고 두 방법에 대 한 슬라이드 제작 설명. 결과 &#60; 40 μ m 맞춤 이중 전송, 625 명소/c m2의 배열 밀도 도달 달성 되었습니다. 50 plexed immunoassay 다중화 단백질 분석에 스냅 칩의 유용성을 설명 하기 위해 실시 되었습니다. 35 단백질의 검출 한계 범위의 pg/ml에서는 이다입니다.

단일 및 이중 전송 방법에 대 한 분석 결과 절차는 그림 1에 표시 됩니다. 단일 전송, 분석 결과 슬라이드에 직접 택시를 발견 하 고는 dAbs 분석 결과 슬라이드 거울 패턴의 택시 (그림 1a)에서 사용 시에 전송 됩니다. 하나의 전송 절차는 필요, 하지만이 방법은 주로 슬라이드와 잉크젯 갠트리 (그림 2) 사이 모 난 부정합으로 인 한 두 microarrays 사이의 부정합에서 겪고 있다. 이 문제를 해결 하기 위해 한 가지 방법은 택시와 분석 결과 슬라이드에 순차적으로 dAbs 구경, 그리고 스냅 장치에 슬라이드를 제대로 수정 후 전송 하는 것입니다 (그림 1b). 이 메서드를 사용 하 여 두 microarrays는 정확한 동일한 위치로 전송 됩니다. ...

두 슬라이드를 간단 하 게 스냅 하 여 교차 reactivity 무료 다중화 샌드위치 immunoassays를 수행 하기 위한 스냅 칩 기술을 설명 합니다. 스냅 기구 시 약 microarray microarray에서 안정적으로 전송 하는 데 사용 됩니다. 어떤 생 화 확 적인 반응을 교차 오염 없이 다른 시 약의 colocalization를 요구에 대 한 스냅 칩을 사용할 수 있습니다.

교차 reactivity 무료 및 정찰 병 무료 스냅 칩 샌드위치 Immunoassays 다중화

Multiplexed protein analysis has shown superior diagnostic sensitivity and accuracy compared to single proteins. Antibody microarrays allow for thousands ...

본 절차의 전반적인 목표는 시약 간의 교차 반응 없이 스포터(spotter)를 사용하지 않는 방식으로 샌드위치 면역 분석법을 이용하여 칩 상의 여러 단백질을 동시에 정량화하는 것입니다. 이 방법은 암에서의 후보 단백질 바이오마커 발견 및 검증과 같은 정량적 프로테오믹스 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다중 샌드위치 분석에서 항체와 항원 사이의 교차 반응이 없으며, 사용자가 복잡한 마이크로어레이 스포터를 사용할 필요가 없다는 점입니다.Parallex BioAssays의 과학 디렉터인 Heidi Larkin이 절차를 시연하겠습니다. 단일 전사법(single-transfer method)을 위한 슬라이드 준비를 시작하려면, 새로운 전사 슬라이드를 잉크젯 마이크로어레이 스포터 데크에 고정하십시오. 폴리스티렌 마이크로비드 용액 또는 30% glycerol을 사용하여 슬라이드 가장자리에 정렬 마크 어레이를 스폿팅하십시오.기기 소프트웨어와 스포터 카메라를 사용하여 품질 관리를 위한 정렬 마크 사진을 촬영합니다. 다음으로, 잉크젯 마이크로어레이 스포터 데크의 전송 슬라이드 왼쪽에 니트로셀룰로오스 또는 기능화된 유리 분석 슬라이드를 고정합니다. 정렬 마크를 이용하여 400 µm 중심 간격으로 포획 항체 용액의 어레이 24개를 스포팅합니다.어세이 슬라이드를 상대습도 60%의 실온 환경에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 24-웰 실리콘 가스켓을 어레이에 맞춰 슬라이드에 고정합니다. 각 웰에 PBS에 녹인 0.1% polysorbate 20 용액 80 µL를 피펫으로 분주합니다.슬라이드를 450 rpm으로 5분 동안 흔든 후 용액을 버립니다. 이 방식으로 슬라이드를 3회 세척합니다. 다음으로, 세척된 각 웰에 80 µL의 BSA free-blocking solution을 넣습니다.슬라이드를 450 rpm으로 1시간 동안 흔들어 줍니다. 그 후 용액을 버리고 실리콘 가스켓을 제거한 다음, 질소 가스나 원심분리기를 사용하여 분석 슬라이드를 건조합니다. 분석 슬라이드를 실리카겔 또는 다른 건조제와 함께 밀폐 봉투에 넣고 -20 °C에서 보관합니다.동일한 정렬 마크를 사용하여, 점 간 중심 거리를 400 micrometers로 하여 점당 3.2 nanoliters의 검출 항체 용액 24개 어레이를 스포팅합니다. 전송 슬라이드는 건조제와 함께 밀봉된 봉투에 넣어 minus 20 degrees Celsius에서 보관하십시오. 이중 전송법을 위한 슬라이드 준비를 시작하려면, 잉크젯 마이크로어레이 스포터 데크에 전송 슬라이드를 고정합니다.포획 항체 용액을 중심 간 거리 400 micrometers 간격으로 24개 어레이 형태로 스폿합니다. 그다음 스냅 장치의 플런저 스위치를 90도 돌려 플런저를 열린 위치로 고정합니다. 깎인 모서리가 고정 포고 핀에 맞닿도록 포획 전송 슬라이드를 장치에 끼웁니다.해당하는 플런저 스위치를 90도 뒤로 돌려 포고 핀을 해제합니다. 트랜스퍼 슬라이드가 포고 핀에 의해 단단히 고정되고 고정 정렬 핀과 수평을 이루는지 확인하십시오. 그런 다음, 코팅된 면이 아래로 향하게 하여 새로운 니트로셀룰로오스 또는 기능화된 유리 슬라이드를 포고 핀 위에 놓습니다.나머지 세 개의 스위치를 돌려 스트레이트 핀을 풉니다. 두 슬라이드가 고정 정렬 핀에 밀착되어 고정되었는지 확인합니다. 그런 다음 기둥이 정렬 구멍에 안착되도록 상단 셸을 슬라이드 홀더에 맞춥니다.닫힌 장치를 스냅 케이지에 넣고 잠금 탭을 완전히 누릅니다. 장치를 1분 동안 닫힌 상태로 둡니다. 그런 다음 잠금 탭을 위로 당겨 케이지에서 장치를 분리합니다.상단 셸을 제거하고 분석 슬라이드와 전송 슬라이드를 분리합니다. 분석 슬라이드를 1시간 동안 배양합니다. 그다음 24웰 실리콘 가스켓을 슬라이드에 고정하고 슬라이드를 3회 세척합니다.그런 다음 BSA가 없는 블로킹 용액으로 슬라이드를 1시간 동안 흔들어 줍니다. 가스켓을 제거하고 질소 가스 흐름 또는 원심분리기를 이용해 분석 슬라이드를 건조시킵니다. 다음으로 잉크젯 스포터 데크에 다른 전사 슬라이드를 고정합니다.전이 슬라이드를 제작하기 위해, 검출 항체 용액 24개 어레이를 슬라이드 위에 점당 3.2 nanoliters씩, 중심 간 간격 400 micrometers로 스폿팅합니다. 제작된 검출 전이 슬라이드는 minus 20 degrees Celsius에서 보관하십시오. 면역 분석을 시작하려면, 준비된 분석 슬라이드를 냉동고에서 꺼내 밀봉된 백 상태로 30분 동안 실온에서 온도를 높입니다.0.05% polysorbate 20가 포함된 PBS에 단백질을 단계적으로 희석하여 7가지 용액을 준비합니다. 동일한 버퍼를 사용하여 적절히 희석된 시료 용액을 준비합니다. 실온 상태의 분석 슬라이드에 24-well 실리콘 가스켓을 고정합니다.7개의 단백질 희석액을 한 열의 8개 웰 중 7개에 분주합니다. 해당 열의 마지막 웰에는 0.05% polysorbate 20가 포함된 단백질이 없는 PBS를 분주합니다. 나머지 웰에는 시료 용액을 분주합니다.슬라이드를 상온에서 1시간 동안 또는 4 °C에서 하룻밤 동안 450 rpm으로 흔들어 줍니다. 그 다음 슬라이드를 3회 세척합니다. 가스켓을 제거하고 질소 가스 기류 하에서 슬라이드를 건조시킵니다.다음으로 검출 항체 전송 슬라이드를 밀봉된 봉투에 넣은 채로 30분 동안 상온에서 가온합니다. 그 후, 어레이를 재수화하기 위해 상대 습도가 60%인 밀폐 챔버에서 슬라이드를 20분 동안 배양합니다. 포고 핀을 사용하여 검출 전송 슬라이드의 앞면이 위를 향하도록 스냅 장치에 고정합니다.어세이 슬라이드를 포고 핀 위에 뒤집어 놓은 다음, 직선 핀에 맞춰 슬라이드를 정렬합니다. 장치를 닫고 검출 항체를 어세이 슬라이드로 스냅 전이시킵니다. 장치에서 슬라이드를 꺼내 어세이 슬라이드를 1시간 동안 배양합니다.24-웰 실리콘 가스켓을 슬라이드에 고정하고 슬라이드를 세 번 세척합니다. 그다음 각 웰에 PBS에 희석된 2.5 µg/mL 농도의 streptavidin fluoro-4 용액 80 µL를 주입합니다. 슬라이드를 450 rpm으로 20분 동안 흔들어 줍니다.PBS에 0.1% polysorbate 20을 녹인 용액으로 슬라이드를 3회 세척하고, 증류수로 1회 세척합니다. 그 다음 가스켓을 제거하고 슬라이드를 건조시킵니다. 형광 스캐너로 슬라이드를 스캔하고 스폿 강도를 측정합니다.단백질 농도에 따른 검출 한계를 결정합니다. 16-웰 템플릿을 이용한 이중 전사법을 사용하여 두 종류의 형광 단백질을 니트로셀룰로스 코팅 슬라이드 위에 순차적으로 패턴화하였습니다. 두 번째 형광 단백질을 전사했을 때 교차 오염은 관찰되지 않았습니다.스팟 간 거리가 감소한 더 작은 스팟들을 매우 소수성인 표면을 가진 유리 슬라이드로 전사할 수 있었습니다. 이 이중 전사법을 통해 어레이의 각도 어긋남을 최소화할 수 있었습니다. 이 이중 전사법은 샌드위치 분석 형식으로 유방암 관련 단백질의 50-plex 면역 분석을 수행하는 데 사용되었습니다.교차 반응이 관찰되지 않아 각 항체 쌍을 독립적으로 최적화할 수 있었습니다. 분석을 통해 계산된 표준 곡선 결과, 50종의 단백질 중 35종이 pg/mL 수준의 검출 한계를 보였습니다. 이 기술에 숙달되면 약 3시간 이내에 완료할 수 있습니다.이 기술을 통해 과학자들은 마이크로어레이 기반 분석을 수행하고 시약을 나노 액적 형태로 전달할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 슬라이드를 스포팅 덱과 스냅 장치에 적절히 고정해야 함을 기억하십시오. 이 영상을 시청하고 나면 교차 반응이 없는 다중 샌드위치 면역 분석을 위해 스냅 장치를 사용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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이 비디오는 교차 반응성이 없는 멀티플렉스 샌드위치 면역 분석을 위한 스냅 칩 기술의 구현을 보여줍니다. 각각 다른 시약을 포함하는 두 개의 마이크로어레이 슬라이드를 스냅하는 간단한 동작으로 교차 오염 없이 시약 전달을 보장하고 샌드위치 면역 분석을 사용하여 여러 단백질을 검출하는 데 도움이 됩니다.

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