Name: 왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 학습하세요 생쥐에서 최소 침습 가로 대동맥 수축 기술을 이용한 왼쪽 심실 비대 유도 방법을. 이 기법은 기관 삽입과 인공호흡 없이 심혈관 질환 연구를 가능하게 합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 실시간에 스위스 심장 재단의 그랜트 (N ° 32016)에 의해 지원 되었다

남성 C57BL/6J 마우스 (10 주, 25-30 g, n = 60)이이 프로토콜에 사용 됩니다. 동물 받을 인도적인 치료 농업의 고 등 교육 및 연구, 프랑스 내각에 의해 공식화 하는 지침을 준수 하 고 모든 절차는 1986 년 11 월 24 일의 유럽 공동체 위원회 지침에 따라 수행 됩니다 ( 86/609/EEC) 및 프랑스 법률. 프로토콜에 의해 승인 되었다는 &#34; 지역 윤리 위원회 동물 실험 CREMEAS &#34; (#2016092816207606).
 1. 수술을 위한 준비 <ol><li>표준 감 금 소, 음식 (자세한 내용은 참조 자료의 테이블)에 12 h/12 h 명암 주기, 동물 시설에 도착 후 1 주일 동안 생쥐를 유지 하 고 사용할 수 있는 광고를 물 libitum.</li>
	<li>작업 일에 장소 쥐 개별 연습장에 몇 분의 마 취 유도 전 동물에 어떤 추가적인 스트레스를 피하기 위하여. 수술 전날 모든 수술 기구를 소독.</li>
	<li>주사 intra-peritoneally 케 타 민 (51.4 mg/kg) 및 xylazine (3.3 mg/kg) 생리 식 염 수에 희석의 혼합물의 단 하나의 복용량 (0.9 %NaCl).</li>
	<li>발가락 후퇴 반사의 부재에 의해 마 취의 깊이의 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>상용 면도칼으로 목과 동물의 가슴을 면도 하 고 면도 지역 70% 알코올로 소독.</li>
	<li>동물 부정사 깨끗 한 코르크 작업 패드에 놓고 접착 테이프로 발 수정.</li>
</ol> 2. 수술 <ol><li>불 임 수술 기법 절차 전체에서 사용 됩니다. 자발적 호흡에서 동물, 중간 가슴 위에 sternal 노치에서 11-블레이드 나이프를 흉 골 ( 그림 1)을 노출 하려면 경도 중간 자 궁 경부 절 개를 10 밀리미터 이상 수행.</li>
	<li>Crile 나무 4/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합 바늘 홀더를 전달 하 여 갑 상선 철회와 작업 패드 테이프.</li>
	<li>기도 밝히기 위해 마이크로 수술 겸 미리 tracheal 근육 퉁 명 스럽게 구분.</li>
	<li>슬라이드 부드럽게는 부드럽게 밀고 기관지와 흉 골 뒤에 닫힌된 문 턱으로 마이크로 수술 겸 곡선.</li>
	<li>에 의해 신중 하 게 부드럽게 밀고 곡선된 microsurgical 집게의 문 턱을 개폐 수행 미리 tracheal 근육 아래와 이동 늑 흉 골 뒤에 무딘 해 부.</li>
	<li>부드럽게 밀고 바로 마이크로 수술 집게로 바로 위에-clavicular 근육을 파악 하 고 동물의 가슴을 부드럽게 올려.</li>
	<li>흉 골 아래 뼈 집게의 열 등 한 턱 고 3-4 m m 상단 부분 sternotomy ( 그림 2)를 수행 하십시오. 직접 미니 sternotomy 왼쪽으로 약간의 아래 부분.</li>
	<li>는 마이크로 수술 바늘 홀더를 사용 하 여 미니 sternotomy의 각 측면에 두 번째 있는 공간을 통해는 7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합에서 안쪽에 밖으로 전달 합니다. 가까워 있는 및 내부 흉부 혈관 이나 늑 막에 부상을 피하기 위해 비용 sternal 각도.</li>
	<li>7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합을 사용 하 여 각 측면에 sternal 가장자리를 확산 하 고 접착 테이프로 작업 패드 수정.</li>
	<li>부드럽게 옆으로 이동 중 tracheal 근육, mediastinal 지방 및 낮은 전원 확대 (2-3 배)에서 대동맥 아치를 시각화 하기 위해 microsurgical 집게 곡선 thymus 부드럽게 밀고 사용 하 여 ( 그림 3). 터치 또는 매 개발을 방지 하기 위해 정수 리 늑 막 손상 특정 주의.</li>
	<li>집게 ( 그림 4) 매 서 대동맥 아치 아래 부드러운 조직을 노출 하 고 그것의 턱을 부드럽게 확산. 부드럽게 열고 닫는 부드러운 조직에서 턱으로 두 번째 연결 집게와 대동맥 아치 아래 부드러운 조직에 터널을 준비.</li>
	<li>왼손 대동맥 아치 아래에 개최 결 찰 원조 ( 그림 4 B)의 눈을 통해 스레드 6/0 실크 합자의 세그먼트를 통과 하 고 오른손의 사이 집게를 매 서 검색 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 ( 그림 5).</li>
	<li>27 게이지 바늘 5mm의 길이로 잘라 고 Crile 바늘 홀더를 가진 그들을 눌러 양쪽 끝을 둔. 부드럽게 밀고 바로 마이크로 수술 집게와 대동맥 아치 ( 그림 6) 옆에 있는 무딘된 27 게이지 바늘을 놓고 바늘 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 사이 대동맥 주위 snugly 봉합 넥타이 두 연결 집게 ( 그림 7)를 사용 하 여 동맥. 석판에 봉합 넥타이, 뒤에 4 개의 추가 노트 초기 이중 매듭을 수행 합니다. 모든 매듭 플랫 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>결 찰, 후 신속 하 게 하지만 부드럽게 0.4 m m 직경 축소 달성 하기 바늘 및 제거 재현할 수 가로 65-70% 대동맥 수축.</li>
	<li>는 Hemostasis의 sternal 가장자리와 미리 tracheal 근육의 대동맥 아치, 주위 연 조직에 대 한 확인합니다. 관찰은 혈액의 돌아다니며 어디 resorbable hemostatic 거 즈를 넣어. 7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 sternal 가장자리 확산에 사용 되는 봉합 유지 제거.</li>
	<li>왼쪽된 두 번째 있는 공간 내부에 외부에서 마이크로 수술 바늘 홀더를 가진 간단한 6/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 봉합 통과 그리고에서 내부에 바로 두 번째 있는 공간 외부. 가까워 있는 및 내부 흉부 혈관 이나 늑 막에 부상을 피하기 위해 비용 sternal 각도.</li>
	<li>함께 sternal 가장자리 여가지고 Crile-나무 매는 6/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 봉합 바늘 홀더.</li>
	<li>피부 봉합에서에서 실행 한 레이어 Crile 나무 바늘 홀더 5/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 닫습니다.</li>
	<li>가짜 절차 동일 수축 작업을 하지 않고 대동맥 주위 봉합 매.</li>
</ol> 3. 수술 복구 <ol><li>동물을 매우 밀접 하 게 모니터. 마우스는 개별 케이지 전송과 경향이 위치에 놓습니다.</li>
	<li>허용 마우스까지 완전히 지구 온난화 빛에서 복구를 깨어 (마 취 유도 후 1 시간 미만).</li>
	<li>수술 무 통 주사 buprenorphine의 0.1 mg/kg intraperitoneally. 표시 된 대로 첫 3 일에 대 한 buprenorphine 모든 8 h의 0.1 mg/kg의 피하 주사를 반복.</li>
	<li>표준 케이지 (cage 당 최대 3 마우스) 및 케이지 당 최소 2 마우스 운영된 쥐 에서도.</li>
</ol> 4. 수확을 심장 <ol><li>분석의 날, 케 타 민 솔루션 마우스를 안락사 300 mg/kg 및 xylazine 20 mg/kg 복 주입 하 여 염 분.</li>
	<li>먼저 열 등 한 베 나 정 맥에서 혈액을 수확 하 고 동일한 라인을 통해 염 분에 2.6 m m EDTA의 솔루션의 5 mL 주입.</li>
	<li>마음을 수확는 심 방을 제거 하 고 심장 (심 방 하지 않고 왼쪽 및 오른쪽 심)를 무게.</li>
	<li>분리 왼쪽 오른쪽 ventr에서icle 심장은 좌 심 실 부분에 나머지와 함께. 두 조직 샘플 무게 및 액체 질소에 그들을 동결.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVerma%2C+SK+%22Manual+of+Research+Techniques+in+Cardiovascular+Medicine%22">Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine</a>. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).</li>
<li>Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+blood+pressure+and+morphological+traits+in+cardiovascular-related+organs+in+13+different+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3164086/">Transverse aortic constriction in mice.</a> J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).</li>
<li>Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447656">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC3402700/">IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li>
<li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).</li>
<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
<li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li>
<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

저자는 공개 충돌의 관심 있다.

이 프로토콜의 목표 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축에 대 한 수술 방법의 단계별 그림을 제시 하는입니다. 마우스에 가로 대동맥 수축의 자세한 기술 설명 다른 저자2,8에 의해 보고 되었습니다. 그러나이 수술을 수행 하는, 삽 관 법 및 동물의 환기. 삽 관 법-환기의 추가 단계를 사용 하 여 복잡성과 전체 절차의 기간은 증가 하 고 글로벌 스트레스 동물에 노출 됩니다. 이러한 이유로, 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 개념 몇 가지 관심을 받고 있다. 마우스에 최소한 침략 적 가로 대동맥 수축 왼쪽된 심 실 비 대와 심장 마비9,,1011의 진행을 유도 하는 데 사용 됩니다. 이러한 연구의 왼쪽된 심 실 비 대, 심장 마비, 창세기에 관련 된 경로에 수술...

지난 년 동안 심장 마비의 연구에서 실시 되었습니다 가능한 동물 모델1. 심장 마비의 대형 동물 모델에 비해, 작은 동물 모델 수많은 잠재적인 이점이 있다. 주택 및 유지 보수 비용 절감, 옆에 작은 동물 모델 때문에 덜 복잡 한 필요 시설2더 많은 연구를 액세스할 수 있습니다.
마우스 심장 마비 모델 쥐 모델과 동일한 이점의 많은 제공합니다. 또한에 감소 된 주택 비용3, 마우스 모델 혜택 관련 유전자 변형 및 녹아웃 (KO) 긴장의 가용성. 셀 형식 관련, 유도할 수 있는 코 또는 유전자 변형 전략의 가능성에서 심장 마비의 병 인을 공부 하 고 새로운 치료 regimens3을 식별 하려고 하는 귀중 한 도구가 마우스를 확인 합니다.
마우스 가운데 심장 마비의 모델에는 현재4사용, 가로 대동맥 수축 (TAC) Rockman5 에 의해 처음으로 설명 하는 압력 과부하 유발 왼쪽된 심 실 비 대 (LVH)1 을 생성 하는 기본 모델 , 3.이 모델의 가장 큰 장점은 LVH2층 리를 수 있도록 하는 기능입니다, 비록 왼쪽 심 실 개장 하는 전술에 대 한 응답에는 다른 마우스 긴장 중 변수. 특히, C57BL/6 마우스 개발 다른 긴장4,,67발생 하지 않을 수 있습니다 전술 후 빠른 LV 팽창 합니다.
전술 원인으로 달성 하는 고혈압의 갑작스런 발병은 약 50% 증가 LV 질량에 2 주 이내 빠르게 변조 LVH4의 개발을 목표로 하는 약리학 또는 분자 개입의 활동을 검사 허용. 전술에 의해 심한 고혈압의 급성 유도 않습니다 정확 하 게 진보적인 왼쪽된 심 실 비 대를 재현 하 고 대동맥 협 착 증 또는 동맥 고혈압의 임상 설정에서 관찰 개장. 그럼에도 불구 하 고,이 모델 많은 조사자에 의해 식별 하 고 심장 마비4소설 치료 목표를 수정 하는 데 사용 됩니다.
마우스에 전술 수행 LVH 및 후속 심장 마비2를 유도 하는 데 사용 하는 다른 기술에 대 한 필요한 것 보다 더 큰 외과 전문을 필요 합니다. 대부분 작성자 intubating 및 환기는 동물2,8, 더 요구 하 고 시간이 걸리는이 절차를이 수행 하 게 하 고 동물에 대 한 수술 부담을 추가 하 여이 절차를 수행 합니다. 몇 가지 조사 수술9,,1011에 대 한 간략 한 참조와 함께 그들의 연구에서 최소한 침략 적 전술을 사용 했습니다.
이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 절차의 중요 한 단계를 강조 하는 쥐의 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 단순 하 고 사용 하기 쉬운 기술. 이러한 주요 단계에 따라, 하나 쉽게이 기술을 수행할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>수술용 현미경</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>면도기</td><td>Rowenta</td><td>Nomad</td> TN3650FO<td></td></tr><tr><td>Sutures:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene 6/0</td><td>Bbraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>Silk 6/0 ligature&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr><tr><td>Drugs:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Merial</td><td>Imalg&egrave; ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td>Instruments:&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bone 니퍼</td><td>미세 수술 도구</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>결찰 보조</td><td>정밀 수술 도구</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>묶는 집게</td><td>미세 수술 도구</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더 Crile-Wood</td><td>미세 수술 도구</td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>미세 수술 집게&nbsp;</td><td>세밀한 수술 도구</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>미세수술용 집게&nbsp;</td><td>정밀 수술 도구</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>조직 겸자</td><td>정밀 수술 도구</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>미세 수술 바늘 홀더</td><td>정밀 수술 도구</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>미세 수술 가위</td><td>정밀 수술 도구</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Mayo 가위</td><td>정밀 수술 도구</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>11날 나이프</td><td>정밀 수술 도구</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>RNA 추출 및 qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagent</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit 형광 측정 RNA 분석</td><td>Fisher Scientific</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>RNA 6000 나노 키트</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>고용량 cDNA 키트</td><td>Fisher Scientific</td><td>10400745</td><td></td></tr><tr><td>Taqman 마스터 믹스</td><td>Fisher Scientific</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>Taqman BNP 프라이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ANP 프라이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ACE 프라이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Col1a1 프라이머&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman TGFb 프라이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Gapdh 프라이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Thermocycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td>Software:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Prism 7</td><td></td></tr><tr><td>Animal food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Complete diet for adult rats/mouses</td><td>안전한</td><td>UB220610R</td><td></td></tr></tbody></table>

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

마우스에 가로 대동맥 수축 (TAC) 왼쪽 심 실 비 대 (LVH) 및 그것의 진행 성을 심장 마비에 압력 과부하 유발 실험 조사를 위한 가장 일반적으로 사용 된 수술 기법 중 하나입니다. 대부분의 보고 된 조사,이 절차는 삽 관 법 및 환기를 요구 하 고 시간이 걸리는 그것을 렌더링 하 고 동물을 수술 부담을 추가 동물의 수행 됩니다. 이 프로토콜의 목표는 삽 관 법 없이 침 습 전술의 단순화 된 기술과 쥐의 환기를 설명 하는. 기술의 중요 한 단계 낮은 사망률과 LVH 유도에 높은 효율을 달성 하기 위하여 강조 된다.
남성 C57BL/6 마우스 (10 주 오래 된, 25-30 g, n = 60) 마 취 제와 xylazine의 혼합물의 단일 복 주사로 마 취 되었다. 자발적 호흡에 다음 3-4 m m 상단 부분 sternotomy 동물 6/0 비단 봉합 결 찰 원조의 눈을 통해 스레드 세그먼트 대동맥 아치 아래에 전달 되었고 무딘된 27 게이지 주사 바늘에 연결. 운영 하는 가짜 동물 수술 같은 수술 준비 대동맥 수축 하지 않고. LVH 유도에 절차의 효능은 심장/몸 무게 비율에 있는 상당한 증가 의해 증명 된다. 이 비율은 3, 7, 14, 28 일 수술 후에 얻은 것입니다 (n = 6-10 각 그룹 및 각 시간 점). 우리의 기술을 사용 하 여, LVH 주 7 일 28 통해에서 가짜 동물에 비해 전술에서 관찰 됩니다. 요원 하 고 늦은 (이상 28 일) mortalities는 둘 다 매우 낮은 1.7%에.
결론적으로, 마우스에 최소한 침략 적 전술의 우리의 비용 효과적인 기술 매우 낮은 수술 및 수술 후 mortalities을 실시 하 고 LVH 유도에 매우 효율적입니다. 그것은 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다. 그것은이 프로토콜에서 설명 하는 중요 한 단계를 수행 하 여 쉽게 수행할 수 있습니다.

요원 및 늦은 생존 요원 생존은 매우 높은 전체 시리즈 (전술과 운영 하는 가짜 동물) 98.3% (60 명 중 59). 만 요원 죽음 가짜 작업 이었습니다 마우스에 출혈 합병증 때문 이었다. 28 일의 관찰 기간 동안 수술 생존 또한 98.3% (58 명 중 59) 우수 했다. 단지 늦게 수술 죽음 심장 근원의 아마 날 (D) 16, 전술 마우스에서 발생 했습니다.
기술의 유효성 검사 제시 방법은 매우 안정적이 고 재현입니다. Innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 사이 봉합의 정확한 위치는 전술 진행 하는 모든 동물의 조직 수확 하는 동안 확인 되었다.
왼쪽된 심 실 비...

이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 최소 침 습 가로 대동맥 수축 (TAC) 생쥐에서의 기술. 삽 관 법 그리고 일반적으로 사용 되는 표준 절차 필수는 환기의 제거, 최소 침 습 전술 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다.

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

이 프로토콜의 전체적인 목적은 마우스에서 최소 침습적 횡대동맥 협착을 구현하는 것입니다. 이 방법은 대동맥궁 아래에 통로를 만드는 방법과 같이, 마우스에서 횡대동맥 협착을 시행하는 것과 관련된 핵심적인 질문들에 대한 답을 얻는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 간단하고 사용자 친화적이며, 마우스의 기관 삽관 및 인공호흡의 필요성을 없앴다는 점입니다.저는 포스트닥 시모나 넴스카(Simona Nemska)와 함께 시연을 진행할 예정이며, 시모나 님이 수술 전 동물 준비 및 수술 후 모니터링 단계를 수행할 것입니다. 시술 당일, 마취된 마우스의 목과 가슴 부위를 제모하고 노출된 피부를 70% ethanol로 소독하십시오. 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 적절한 진정 수준을 확인한 후, 동물을 깨끗한 코르크 작업 패드 위에 배측(supine position)으로 고정하십시오.다음으로, 11번 메스 날을 사용하여 흉골절흔부터 가슴 중앙까지 10mm 길이의 종방향 정중 경부 절개를 통해 흉골을 노출시킵니다. Crile-Wood 바늘 홀더를 사용하여 4-0 단필라멘트 폴리프로필렌 스테이 봉합사를 통과시켜 갑상선을 견인합니다. 그리고 봉합사를 작업 패드에 테이프로 고정합니다.그 다음 working pad를 수술 현미경 아래로 옮기고, 미세 수술용 포셉을 사용하여 기도 전근을 둔성 박리하여 기도를 노출시킵니다. 곡선형 미세 수술용 포셉의 닫힌 팁을 기도 위와 흉골 뒤쪽으로 부드럽게 밀어 넣은 후, 곡선형 포셉을 조심스럽게 열고 닫아 흉막을 둔성 박리합니다. 직선형 미세 수술용 포셉을 사용하여 우측 쇄골상근을 잡고 흉부를 부드럽게 들어 올립니다.본 니퍼(bone nipper)의 하단 팁을 흉골 아래로 밀어 넣어 3~4mm의 상부 부분 흉골 절개술을 수행하며, 미니 흉골 절개술의 하단부를 약간 왼쪽으로 향하게 합니다. 미세외과용 지침기로 미니 흉골 절개술 양측의 제2 늑간 내측에서 외측으로 7-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 고정 봉합사를 통과시킵니다. 7-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 고정 봉합사를 사용하여 양측의 흉골 가장자리를 벌립니다.그다음 곡선 핀셋을 사용하여 기관전근, 종격동 지방 및 흉선을 조심스럽게 옆으로 밀어 저배율 확대경으로 대동맥궁을 관찰합니다. 대동맥궁 아래의 연조직을 노출시키려면, 끝부분을 다문 상태의 결찰 핀셋을 궁 아래로 삽입한 후 핀셋을 조심스럽게 엽니다. 두 번째 결찰 핀셋을 사용하여 연조직 내에서 핀셋을 조심스럽게 열고 닫음으로써 대동맥궁 아래 연조직에 터널을 만듭니다.그 다음, 결찰 보조 도구의 바늘구멍에 6-0 실크 결찰사를 끼워 대동맥궁 아래로 통과시킨 후, 결찰 포셉을 사용하여 우측 무명동맥과 좌측 총경동맥의 기점 사이에서 봉합사를 회수합니다. 이 절차에서 가장 어려운 단계는 봉합사를 대동맥궁 아래로 삽입하는 것입니다. 대동맥궁 아래에 터널을 만들 때 충분한 주의를 기울이면 이후의 봉합사 배치가 더 수월해집니다.이제 직선 핀셋을 사용하여 뭉툭하게 처리된 27 gauge 바늘을 대동맥궁 옆에 배치하고, 두 개의 결찰 핀셋을 사용하여 우측 무명동맥과 좌측 총경동맥 사이의 바늘과 대동맥 주위를 봉합사로 단단히 묶습니다. 봉합사가 고정되면 바늘을 빠르고 조심스럽게 제거하여 0.4 millimeter 직경의 협착과 재현 가능한 65~70%의 횡단 대동맥 수축을 유도합니다. 지혈 상태를 확인한 후, 흉골 가장자리를 벌리는 데 사용한 7-0 monofilament polypropylene 유지 봉합사를 제거합니다.미세수술용 니들 홀더를 사용하여 6-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 왼쪽 제2 늑간 공간의 외부에서 내부로, 그리고 오른쪽 제2 늑간 공간의 내부에서 외부로 단순 봉합합니다. Crile-Wood 니들 홀더를 사용하여 6-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 흉골 가장자리를 서로 결합합니다. 그런 다음 Crile-Wood 니들 홀더를 사용하여 5-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 연속 봉합사로 피부를 한 층으로 봉합하여 닫습니다.그 다음, 동물을 복와위 자세로 케이지에 다시 넣고, 완전히 회복될 때까지 보온 상태에서 모니터링합니다. 좌심실 비대 유도의 효능은 수술 후 3, 7, 14, 28일째에 위동물(sham animals)과 실험 동물의 심장 무게 대비 체중 비율을 비교하여 검증할 수 있습니다. 결찰된 동물은 위동물 그룹에 비해 수술 후 7일부터 비율이 유의하게 증가하며, 수술 후 28일까지 협착된 동물에서 유의하게 높은 상태로 유지됩니다.관찰된 심장 대 체중 비율의 증가는 전적으로 좌심실 체중 비율의 상승으로 인한 것이며, 전체 관찰 기간 동안 횡대동맥 결찰 동물과 가짜 수술 동물 간의 우심실 체중 비율은 유사하게 유지되었습니다. 또한, 좌심실 심비대의 양성 대조군인 뇌 나트륨 이뇨 펩타이드의 mRNA 발현이 14일 차에 가짜 수술 대조군 동물에 비해 대동맥 결찰 동물에서 유의하게 더 높게 나타나, 이 기술의 효율성이 더욱 입증되었습니다. 이 기술을 숙달하여 적절하게 수행한다면 20분 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때는 본 프로토콜에서 사용된 것과 유사한 결찰 보조 도구와 결찰용 포셉을 사용하는 것이 중요합니다. 개발 이후, 이 기술은 압력 과부하로 유도된 좌심실 비대의 발생 기전을 탐구하기 위한 신뢰할 수 있고 단순화된 모델을 제공해 왔습니다. 이 영상을 시청한 후에는, 특히 대동맥궁 아래 통과 과정에 중점을 둔 생쥐의 최소 침습적 횡대동맥 수축술 수행 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.대동맥궁 아래에 통로를 만드는 것이 이 절차에서 가장 중요한 단계이며, 결찰 보조 도구와 결찰 겸자를 사용하면 대동맥궁의 손상 위험을 상당히 줄일 수 있다는 점을 잊지 마십시오.

technique-minimally-invasive-transverse-aortic-constriction-mice-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스의 가로 대동맥 수축 (TAC)은 심장 비대 및 심장 마비 개발을 기본 메커니즘을 연구하기 위해 일반적으로 사용되는 실험적인 모델입니다. 여기, 우리는 절차가 생쥐에서 심장 비대의 재현성 학위를 만들 수있는 대동맥을 수축에 대해 설명합니다.

마우스의 가로 대동맥 수축

이 비디오에서는 압력 과부하로 인한 심부전을 조사하기 위해 마우스에서 최소 침습적 횡단 대동맥 수축에 대한 실험 프로토콜을 시연합니다.

마우스 모델의 횡방향 대동맥궁 밴딩: 좌심실에서 고압 유도를 위한 마우스의 최소 침습 기술

우리는 작은 금속 클립을 사용하여 상행 대동맥의 수축에 의해 위 스타 쥐의 압력 과부하 및 좌심실 비대를 만들기위한 단계별 절차를 설명합니다. 이 모델은 광범위하게 심장 비대 동안 리모델링 변경을 공부하고 이러한 변화의 회귀를위한 전략을 파악하고 평가하기 위해 사용된다.

압력 과부하 심장 비대 모델의 창조를위한 쥐의 대동맥 수축 오름차순

최소한의 침습적 조작으로 마우스의 심근 경색에 대한 재현성이 높은 모델을 설명합니다. 모델을 쉽게 수행할 수 있어 재현성과 생존율이 높습니다. 따라서 설명된 모델은 3R 원칙(Replacement, Refinement and Reduction)에 의해 요청되는 대로 필요한 동물의 수를 줄일 것입니다.

쥐 심근 경색을 유도 최소 침습 수술

이 프로토콜의 목적은 비 침습적 및 M B- 모드 초음파 심장 검진 및 컬러 / 맥파 도플러 촬상을 이용하여 횡 대동맥 수축에 의해 생성 된 심장 질환의 마우스 모델에서 심장 구조적 및 기능적 변화를 평가하는 것이다.

심 초음파 이미징에 의해 가로 대동맥 수축의 마우스 모델에서 심장 형태 학적 평가 및 기능 변경

기관 삽관과 인공 호흡기의 사용을 제거하면서 최소 침습 가로 대동맥 수축 (MTAC)는 일반 가로 대동맥 수축 (TAC)의 본질을 절약합니다. 그것은 특히 병진 연구에서 좌심실 과부하에 높은 처리량 연구를위한 매우 바람직한 방법으로 증명한다.

마우스의 최소 침습 가로 대동맥 수축

여기, 선물이 측면 thoracotomy 통해 가로 대동맥 수축 (TAC)의 프로토콜. 이 기술은 압력 과부하 및 마우스 활용 표준 전술 실험실 설정에서에서 심장 마비를 시뮬레이션을 최소 침 습, 닫힌 가슴 수술입니다.

마우스에 가로 대동맥 수축 유도를 폐쇄 가슴 모델

여기에서, 우리는 우심실 실패의 기계장치를 공부하기 위한 유용한 접근을 제공합니다. 폐 동맥 수축에 대한 보다 편리하고 효율적인 접근법은 사내에서 만든 수술 기구를 사용하여 확립됩니다. 또한, 심초음파 및 카테터화에 의한 이러한 접근법의 품질을 평가하는 방법이 제공된다.

폐 동맥 수축에 의한 우심실 장애 유도 및 마우스의 우심실 기능 평가

여기서 우리는 대동맥 수축의 잘 확립 된 마우스 모델에서 탈밴드 수술 대동맥의 단계별 프로토콜을 설명합니다. 이 절차는 비대의 좌심실 역 리모델링 및 회귀의 근본적인 메커니즘을 연구할 뿐만 아니라 심근 회복을 가속화할 수 있는 새로운 치료 옵션을 테스트할 수 있습니다.

설치류에서 대동맥 탈밴드에 의해 왼쪽 심실 역 리모델링 공부

이 프로토콜은 흡수 가능한 봉합사를 사용하여 일시적인 심근 비대증을 얻는 향상된 방법을 제시하며 압력 과부하를 제거 한 후 좌심실 비대 감소를 시뮬레이션합니다. 심근 대위 축 대 사전 조절에 대 한 연구에 대 한 가치가 있을 수 있습니다.

과도 심근 비대증을 얻기 위해 흡수 가능한 봉합사와 횡단 대동맥 수축 을 작동

본 프로토콜은 자체 제작 견인기를 사용하여 최소 침습적 횡 대동맥 수축(TAC) 절차를 사용하여 수정되고 단순화된 기술을 설명합니다. 이 절차는 인공 호흡기 또는 현미경없이 수행 할 수 있으며 압력 과부하를 유발하여 결국 심장 비대 또는 심부전으로 이어집니다.

생쥐의 횡방향 대동맥 수축에 대한 수정된 기술

학습하세요 생쥐에서 최소 침습 가로 대동맥 수축 기술을 이용한 왼쪽 심실 비대 유도 방법을. 이 기법은 기관 삽입과 인공호흡 없이 심혈관 질환 연구를 가능하게 합니다.

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

더 많은 동영상 탐색