시각화 및 Adeno 관련 바이러스 및 Confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 Organotypic 뇌 조각에서 Oligodendrocyte 세포의 라이브 영상

Myelinating oligodendrocytes는 급속 한 활동 전위 전파 및 신경 생존을 촉진합니다. 여기에 설명 된은 organotypic에 형광 단백질의 oligodendrocyte 특정 식에 대 한 프로토콜 후속 시간 경과 화상 진 찰과 뇌 조각입니다. 또한, 흠 없는 수 초를 시각화에 대 한 간단한 절차 제공 됩니다.

이 바이러스 형질도입 및 타임랩스 기록의 전반적인 목표는 유기형 뇌 절편에서 희소돌기아교세포 미토콘드리아의 움직임을 시각화하는 것입니다. 이 방법은 희소돌기아교세포 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 희소돌기아교세포와 그 소기관이 지역 환경의 변화에 어떻게 반응하는지. 이 기술의 가장 큰 장점은 서로 다른 모든 뇌 세포가 존재하고 희소돌기아교세포가 조밀한 미엘린을 생성하는 준비에서 희소돌기아교세포 구조 및 소기관 역학에 대한 자세한 정보를 제공한다는 것입니다. in vitro(체외(in vitro) 7일째에 슬라이스 배양에서 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)를 형질도입합니다. 먼저 슬라이스당 1.3마이크로리터의 희석된 AAV를 뽑습니다. 피펫 팁의 바깥쪽이 건조한지 확인하고, 피펫 팁으로 슬라이스를 건드리지 않고 피펫 위에 있는 피펫을 가능한 한 가깝게 잡고 피펫에서 용액을 천천히 밀어냅니다. 용액이 슬라이스에 닿을 때, 피펫 팁을 피텍스 위로 움직여 용액을 전체 피질 영역에 펴 바릅니다. 한 접시의 모든 조각이 옮겨지면 접시를 인큐베이터로 되돌린 다음 다른 접시에 이 과정을 반복합니다. 형광 마커의 발현을 위해 슬라이스를 검사하고 형광 마커의 발현 수준이 충분하고 슬라이스가 건강해 보일 때 슬라이스를 이미지화합니다. 모델링 점토를 사용하여 45로 구부러진 주사기 바늘을 부착하여 이미징 수조 설정을 시작합니다.