Name: 레이저 도플러 이미징 및 모니터링을 사용 하 여 쥐에서 척수 미세 분석 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: 배우세요 레이저 도플러 이미징과 모니터링을 사용하여 쥐 척수의 국소 혈류와 산소 포화도를 측정하는 방법을. 이 기법은 척수 손상 후 미세순환 변화를 연구하는 데 효과적입니다.

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저자 아무 승인 있다.

실험 동물 관련 된 동물 프로토콜 여는 국립 보건원 (NIH)을 설립 하는 지침을 따 랐 고 동물 관리 및 사용 위원회의 주요한 의학 대학에 의해 승인 했다.
문화를 도입 하 고 측정 하는 레이저 도플러 장비 아래에 설명 된 사용 하 여 척수의 BF의 절차는 게시 된 연구1에서 사용 되었다.
1입니다. 수술을 위한 준비
<ol><li>염 분에 pentobarbital 나트륨 솔루션 3% (w/v)을 준비 하 고 35 mg/kg의 복용량에서 관리. 주의: pentobarbital 나트륨은 제어 물질 이다. 자세한 레코드를 보관 해야 하 고 안전 하 고 잠긴 위치에 저장 된 솔루션.</li>
	<li>장비를 소독 하 고 수술 영역을 준비 합니다.<ol>
<li>다음 단계와 수술 장비를 청소: 75% 에탄올 청소, 다음 30 분 동안 121 ° C에 고압 다음 건조는 60 ° C 오븐에 하룻밤. 수술 지역 75% 알코올로 소독.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 수술에 대 한 쥐의 준비
<ol><li>Pentobarbital 나트륨 (35 mg/kg)의 복 주사와 쥐 anesthetize 전체 절차는 수술, 봉합, BF 측정 등 30-40 분 소요 됩니다.</li>
	<li>목에 허리에서 쥐의 등 영역을 면도. 머리는 가능한 한 짧게 잘라 되어야 합니다. 일정 한 체온을 유지 하기 위해 패드를가 열 하는 40 ° C에 쥐를 놓습니다.</li>
</ol>3. laminectomy 및 척수에 뇌 진 탕
참고: 가짜 그룹에 대해서만 laminectomy를 수행 하려면 다음과 같이 3.1에서 3.6.
<ol><li>최대 동물 등 쪽 위치. 면도 부분 75% 알코올 멸 균 면봉을 사용 하 여 다음 요오드 소독. 흉부 척추 T7 T11 포함 laminectomy 사이트를 통해 메스로 피부 절 개 (4 cm)를 확인 합니다.</li>
	<li>잘라 연결 된 근육 양쪽에 T8에서 노출 하기, spinous 프로세스, 패싯 관절 T10.</li>
	<li>메스를 사용 하 여 T10, T11 사이 접합 분리 절 개를 만들기 위해. 더 신중 하 게 해 부 근육 층 떨어져 뼈를 노출 하 여 접합 하 여 노출 합니다.</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 더 작은 자르는와 작은 꽃 자루는 lamina에서 안팎 근육을 취소. T10에서 척추와 T11 사이의 작은 공간 열립니다 (그림 1A). 천천히 그리고 민감하게이 간격으로 한 hemostatic 집게를 삽입 하 고 작은 꽃 자루 (그림 1B) 휴식. 집게의 곡률 코드에서 옆으로, 위치는 항상 다는 것을 확인 하십시오. 다른 측면에서 반복 합니다.</li>
	<li>척수 (그림 1C) 고 신중 하 게 해제 하 고는 lamina를 끊다. 반드시 하지 어떤 무료 또는 가변 뼈 파편을 남겨두고.</li>
	<li>T9와 T8 하기를 더 제거 하는 과정을 반복 합니다.</li>
	<li>충돌 장비 테이블에 동물을 이동 하 고 테이블에 연결 된 Adson 집게의 쌍을 사용 하 여 t 7과 T11, spinous 프로세스에 클램핑 함으로써 동물의 척추를 안정 다음 척추 (그림 1D)을 집게를 조정.</li>
	<li>충돌에서 동물, 파업 막대 노출된 척수의 중심을 목표로 넣고 낮은 척수의 표면의 3-5 mm 이내에 막대.</li>
	<li>충격 힘 같은 충격 매개 변수 설정 (160 KD) 및 유지 시간 (1 s)<ol>
<li>소프트웨어 인터페이스에서 "실험 시작" 버튼을 클릭 하 여 SCI는 유도 다음 영향을 자동으로 시작 하는 다음 인터페이스에 "예"를 클릭 합니다. 충격, 후 소프트웨어 설정된 매개 변수 옆에 있는 영향의 실제 데이터를 표시, 그것은 설정 포인트 (그림 1E) 가까운 되도록 데이터 확인. 참고: 실험의 성공에 대 한 일반적인 표시는 충격 후 무의식적인 꼬리 스윙과 사지 운동의 짧은 기간 이었다. 사지 반사를 확인 하는 꼬리에 자극 또한 할 수 있었다. 그러나, 바소, 비 티, 그리고 Bresnahan (BBB) 운동 규모22,23 등 운동 평가 유도 상해의 효과 결정할 필요가 있다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 레이저 도플러 검사
<ol><li>이 연구에 사용 되는 레이저 도플러 스캐너의 세부 사항에 대 한 테이블의 자료 를 참조 하십시오. 노출 된 척수를 검색 하려면 검정, 비 반사 배경에 쥐 등 쪽을 놓습니다.</li>
	<li>
매개 변수를 검색 설정: 스캐닝 소프트웨어를 열고, "측정"를 측정 그래픽 사용자 인터페이스를 입력 하 여 스캐너 설정 인터페이스를 열 "스캐너 설정" 버튼을 클릭 클릭. 작은 지역 등이 실험을 검색 하려면 "고해상도"는 "스캔 크기 및 표시 옵션에서" 고급 검색 모드에 대 한 더 높은 해상도 (256 × 256 포인트 4 × 10 c m2를 덮고)를 선택 합니다 (그림 2A). 스캐닝 경계 (그림 2B)를 확인 하려면 "이미지 검색" 옵션을 클릭 하십시오.</li>
	<li>"비디오 및 거리" 옵션 라이브 비디오 이미지를 확인을 클릭 합니다. 스캐너 위치 수술 창 고 이동 센터 검색 창 (그림 2C)에 노출 된 척수 동물 배경 위에 10-13 cm.</li>
	<li>"먼 자동" 기능을 사용 하 여 잘 스캔 높이 조정, 스캔의 높이 모든 측정 실험 그림 2C에 걸쳐 일관성이 유지 되어야 한다.</li>
	<li>한 창 nonreflective 커버를 사용 하 여 추가 백그라운드를 최소화 하 고 동물의 방향 표시에 외과 영역을 노출.</li>
	<li>"반복 스캔"을 클릭, 검사 (우리가 사용 8 반복 검사 경우에) 수를 설정 다음 반복 스캔 인터페이스를 열고 "확인"을 클릭 합니다. 검색을 시작 하려면 시작 버튼을 클릭 하 고 전체 과정 (그림 2D) 약 3-4 분 소요 됩니다.</li>
</ol>5. 레이저 도플러 모니터링
<ol><li>우리는 시간이 지남에 BF 등 등등2 VP3 무딘 바늘 끝 배달 프로브 스캐너 모니터를 사용합니다. 모니터링 장비를 설정 하려면 stereotaxic 악기에 수직 레이저 도플러 프로브를 연결 합니다.</li>
	<li>올려 쥐 stereotaxic 기구 등 쪽 측에, 스티로폼 노출된 척수를 필요한 경우의 작은 조각으로 동물 아래에 배치 합니다.</li>
	<li>모니터 BF 척수에 프로브를 낮춥니다. 참고: 단계 5.3는 데이터 수치는 조사에 적용 하는 압력에 민감한 측정의 재현성에 대 한 중요 한, 따라서 여분의 주의 필요를 하지 오버-또는 아래-위치 조사 합니다.<ol>
<li>절 개를 검토 하 고 과도 한 액체 또는 혈액 메 마른 목화 패드를 사용 하 여 제거.</li>
		<li>2 mm rostral 노출된 척수의 중심점에 프로브를 사용 하는 기구의 X 및 Y 축 또는 병 변 고 중앙 정 맥을 방지.</li>
		<li>Z 축을 사용 하 여 천천히 낮은 수준 그냥 감동 척수의 표면에 조사. 프로브는 너무 느슨한 하지에 접점의 측면에서 밝은 빛을 허용 하지만 척수의 표면을 터치 그냥 한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
데이터 기록
	<ol>
<li>데이터 수집 소프트웨어를 열고, 설치 인터페이스를 열고 "새로운 실험" 버튼을 클릭 합니다. "일반" 옵션에서 시스템 구성에 대 한 확인을 클릭 합니다 "" (그림 3A), 디스플레이 설정에서 BF에 대 한 채널을 선택 등2 와 클릭 "다음" (그림 3B).</li>
		<li>파일 정보를 입력 하 고 클릭 합니다 "" (그림 3C) 입력 데이터 기록 인터페이스를 조사 (그림 3D)에서 녹화를 시작 하려면 녹색 삼각형 버튼을 클릭 합니다.</li>
		<li>일단 신호 8 연속 분 안정, 레코드 데이터입니다. 다음 프로브를 들어올리고 절 개를 봉합 하 고 수술 치료로 동물을 넣어 stereotaxic 기구에서 동물을 제거 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 봉합 및 사후 운영 관리
<ol><li>절 개를 봉합: 절 개의 양쪽에 근육 봉합 바늘을 삽입. 조직을 함께 당기고, 그로 인하여 제거 하기의 사이트에 노출 된 척수를 덮고, 스레드를 당겨. 바늘 홀더를 사용 하 여 당겨 양식을 통해 전체 스레드 3 스퀘어 매듭 하 고 가능한 노트 주변으로 스레드를 트림.</li>
	<li>절 개, 봉합으로 같은 방법으로 3-4 광장 매듭을 가진 피부를 봉합 한 다음 노트에서 스레드 약 1 cm 트림.</li>
	<li>수술 사이트와 케이지 바닥 사이의 접촉을 피하고 그것의 감 금에 그것의 사이드에 쥐를 놓습니다. 감 금 소는 난방 패드에 배치 되어야 합니다.</li>
	<li>때까지 아무 수술 후 출혈을 보장 하기 위해 마 취에서 깨어나서는 봉합 폐쇄 남아 있는 동물을 모니터링 합니다.</li>
	<li>수술, 120 mg/kg 1 한 일 동안 벤 질 페니실린 나트륨 쥐에 피하 주사. Intraperitoneally에 1 일에 대 한 수술과 모든 6 시간 후 수술 후 즉시 Buprenorphine (0.05 mg/kg) 주사.</li>
	<li>동물 충분 한 음식과 물에 대 한 액세스 권한이 있는지 확인 하려면, 확장된 spouts와 물 병에 맞게 하 고 감 금 소에는 동물에 가까운 음식을 넣어. 참고: 우리 실시 BBB 등급 규모 0, 위의 bbb 등급 점수와 함께 동물을 제외 하 동물 24 h 후 부상의 hindlimb 운동 기능 평가에 따라서 보장 동물 유도 부상으로 마비 되었다.</li>
	<li>수술 후 필요한 경우 부드럽게 복 부에 압력을 적용 매일 두 번, 오 줌 방광의 수동 빈 제공.</li>
</ol>

<ol><li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meliorating+microcirculatory+with+melatonin+in+rat+model+of+spinal+cord+injury+using+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Meliorating microcirculatory with melatonin in rat model of spinal cord injury using laser Doppler flowmetry.</a> Neuroreport. 27 (17), 1248-1255 (2016).</li>
<li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+prevents+blood+vessel+loss+and+neurological+impairment+induced+by+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Spinal+Cord+Med%22%5BJournal%5D)">Melatonin prevents blood vessel loss and neurological impairment induced by spinal cord injury in rats.</a> J Spinal Cord Med. , 1-8 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescuing+vasculature+with+intravenous+angiopoietin-1+and+alpha+v+beta+3+integrin+peptide+is+protective+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Rescuing vasculature with intravenous angiopoietin-1 and alpha v beta 3 integrin peptide is protective after spinal cord injury.</a> Brain. 133 (Pt 4), 1026-1042 (2010).</li>
<li>Gerzanich, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+expression+of+Trpm4+initiates+secondary+hemorrhage+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">De novo expression of Trpm4 initiates secondary hemorrhage in spinal cord injury.</a> Nat Med. 15 (2), 185-191 (2009).</li>
<li>Phillips, J. P., Cibert-Goton, V., Langford, R. M., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+assessment+in+rat+spinal+cord+tissue+using+photoplethysmography+and+laser+Doppler+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Perfusion assessment in rat spinal cord tissue using photoplethysmography and laser Doppler flux measurements.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (3), 037005(2013).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Brown, A., Nabel, A., Oh, W., Etlinger, J. D., Zeman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+imaging+of+spinal+cord+contusion%3A+injury-induced+blockade+and+partial+reversal+by+%CE%B22-agonist+treatment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery-Spine%22%5BJournal%5D)">Perfusion imaging of spinal cord contusion: injury-induced blockade and partial reversal by β2-agonist treatment in rats.</a> Journal of Neurosurgery-Spine. 20 (2), 164-171 (2014).</li>
<li>Olive, J. L., McCully, K. K., Dudley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+response+in+individuals+with+incomplete+spinal+cord+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Blood flow response in individuals with incomplete spinal cord injuries.</a> Spinal Cord. 40 (12), 639-645 (2002).</li>
<li>Yamada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+blood+flow+and+pathophysiological+changes+after+transient+spinal+cord+ischemia+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Spinal cord blood flow and pathophysiological changes after transient spinal cord ischemia in cats.</a> Neurosurgery. 42 (3), 626-634 (1998).</li>
<li>Gordeeva, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Pathology+of+Ischemia%2FReperfusion+Injury+of+Rat+Small+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Vascular Pathology of Ischemia/Reperfusion Injury of Rat Small Intestine.</a> Cells Tissues Organs. , (2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+treatment+restores+islet+microvascular+vasomotion+function+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin treatment restores islet microvascular vasomotion function in diabetic mice.</a> J Diabetes. , (2016).</li>
<li>Drain, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDrain%2C+L+%22The+laser+Doppler+technique%22">The laser Doppler technique</a>. , Wiley, USA. (1980).</li>
<li>Rajan, V., Varghese, B., van Leeuwen, T. G., Steenbergen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+methodological+developments+in+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Review of methodological developments in laser Doppler flowmetry.</a> Lasers Med Sci. 24 (2), 269-283 (2009).</li>
<li>Dohare, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroprotective+properties+of+the+superoxide+dismutase+mimetic+tempol+correlate+with+its+ability+to+reduce+pathological+glutamate+release+in+a+rodent+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The neuroprotective properties of the superoxide dismutase mimetic tempol correlate with its ability to reduce pathological glutamate release in a rodent model of stroke.</a> Free Radic Biol Med. 77, 168-182 (2014).</li>
<li>Bai, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-treatment+with+LCZ696%2C+an+orally+active+angiotensin+receptor+neprilysin+inhibitor%2C+prevents+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-treatment with LCZ696, an orally active angiotensin receptor neprilysin inhibitor, prevents ischemic brain damage.</a> Eur J Pharmacol. 762, 293-298 (2015).</li>
<li>Vertiz-Hernandez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-arginine+reverses+alterations+in+drug+disposition+induced+by+spinal+cord+injury+by+increasing+hepatic+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">L-arginine reverses alterations in drug disposition induced by spinal cord injury by increasing hepatic blood flow.</a> J Neurotrauma. 24 (12), 1855-1862 (2007).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvasc Res. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Boyle, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+laser+Doppler+is+a+useful+technique+to+assess+foot+cutaneous+perfusion+during+femoral+artery+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Scanning laser Doppler is a useful technique to assess foot cutaneous perfusion during femoral artery cannulation.</a> Critical Care. 3 (4), 95-100 (1999).</li>
<li>Emmanuel, A. V., Chung, E. A. L., Kamm, M. A., Middleton, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+gut-specific+autonomic+testing+and+bowel+dysfunction+in+spinal+cord+injury+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Relationship between gut-specific autonomic testing and bowel dysfunction in spinal cord injury patients.</a> Spinal Cord. 47 (8), 623-627 (2009).</li>
<li>Sheu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+cilostazol+and+clopidogrel+attenuates+rat+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Combination of cilostazol and clopidogrel attenuates rat critical limb ischemia.</a> J Transl Med. 10, 164(2012).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graded+histological+and+locomotor+outcomes+after+spinal+cord+contusion+using+the+NYU+weight-drop+device+versus+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection.</a> Experimental Neurology. 139 (2), 244-256 (1996).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Sensitive+and+Reliable+Locomotor+Rating-Scale+for+Open-Field+Testing+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A Sensitive and Reliable Locomotor Rating-Scale for Open-Field Testing in Rats.</a> Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).</li>
<li>Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+motion--a+disturbance+in+the+laser-Doppler+blood+flow+signal%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Health+Care%22%5BJournal%5D)">Tissue motion--a disturbance in the laser-Doppler blood flow signal?</a> Technol Health Care. 7 (2-3), 185-192 (1999).</li>
<li>Tenland, T., Salerud, E. G., Nilsson, G. E., Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+variations+in+human+skin+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microcirc+Clin+Exp%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal variations in human skin blood flow.</a> Int J Microcirc Clin Exp. 2 (2), 81-90 (1983).</li>
<li>Kernick, D. P., Tooke, J. E., Shore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+zero+signal+in+laser+Doppler+fluximetry+-+origins+and+practical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">The biological zero signal in laser Doppler fluximetry - origins and practical implications.</a> Pflugers Arch. 437 (4), 624-631 (1999).</li>
<li>Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circulation+of+the+fetus+in+utero.+Methods+for+studying+distribution+of+blood+flow%2C+cardiac+output+and+organ+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The circulation of the fetus in utero. Methods for studying distribution of blood flow, cardiac output and organ blood flow.</a> Circ Res. 21 (2), 163-184 (1967).</li>
<li>Dubory, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+Enhanced+Ultrasound+Imaging+for+Assessment+of+Spinal+Cord+Blood+Flow+in+Experimental+Spinal+Cord+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Jove-Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Contrast Enhanced Ultrasound Imaging for Assessment of Spinal Cord Blood Flow in Experimental Spinal Cord Injury.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (99), e52536(2015).</li>
<li>Kuliga, K. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Microvascular+Blood+Flow+and+Oxygenation+Measured+Simultaneously+in+Human+Skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Microvascular Blood Flow and Oxygenation Measured Simultaneously in Human Skin.</a> Microcirculation. 21 (6), 562-573 (2014).</li>
<li>Li, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvascular Research. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Muck-Weymann, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory-dependent+laser-Doppler+flux+motion+in+different+skin+areas+and+its+meaning+to+autonomic+nervous+control+of+the+vessels+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Respiratory-dependent laser-Doppler flux motion in different skin areas and its meaning to autonomic nervous control of the vessels of the skin.</a> Microvasc Res. 52 (1), 69-78 (1996).</li>
<li>Stefanovska, A., Bracic, M., Kvernmo, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wavelet+analysis+of+oscillations+in+the+peripheral+blood+circulation+measured+by+laser+Doppler+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ieee+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Wavelet analysis of oscillations in the peripheral blood circulation measured by laser Doppler technique.</a> Ieee Transactions on Biomedical Engineering. 46 (10), 1230-1239 (1999).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜을 수행할 때 몇 가지 세부 정보를 발견 한다. 첫째, 신속 하 고 우아하게 동물 소개 스트레스를 최소화 하기 위해 가능한 마 취와 수술의 과정 수행 되어야 합니다. 결과에 방해를 줄이기 위해, 동물 상대적으로 평화적이 고 안정적인 상태로 유지. 둘째, 혈액 잠재적으로 읽기를 방해할 수 있기 때문에, 레이저 도플러 장비를 사용 하 여 측정 하는 동안 출혈을 더 많은 주의 지불 합니다. 마지막으로, 데이터 기록 하는 동안 동물 온도 차이 의해 발생 하는 일관 되지 않은 결과 방지 하는 온도 제어 환경에서 유지 되어야 한다.
연구자는 레이저 도플러 검사를 사용할 때 고려해 야 하는 몇 가지 중요 한 요인이 있다. 프로토콜에서 설명 했 듯이, 스캔 거리 비교 결과 대 한 실험에 걸쳐 일관성이 유지 되어야 한다. 작은 영역에 대 한 고해상도를 여러 검사와 BF의 신뢰할 수 있는 데이터를 생성 하는 것이 좋습니다. 또한, 멸 균 거 즈만 추가 배경 최소화를 노출 하는 작은 창으...

척수의 조직 매우 vascularized 이며 매우 민감한 척수 상해 (SCI)에 의해 유도 된 저 산소 증. 우리의 이전 연구 보여주었다 척수의 혈 뇌 진 탕 부상1,2모터 기능의 적자에 관련이 있을 수 있습니다 후 크게 감소 했다. 최근 연구 결과 SCI에 따라 혈관의 무결성은 잘 상관 감각 모터 기능3의 개선 나타났습니다. 그것은 향상 된 vascularity 백색 질, 향상 된 기능4직접 이끌어 구출 수 있습니다 보고 되었습니다. 따라서, 포스트 상해 척수 관류의 유지 보수는 생존 능력 및 기능 유지에 대 한 기본 중요성의 것 처럼 보였다.
SCI 후 관류에 다양 한 치료의 효과 과학5,,67의 실험 모델에서 다양 한 기법을 사용 하 여 수많은 수사에 의해 검사 되어 있다. 레이저 도플러, 잘 설립 된 기술로, 의심할 여 지 없이 여러 인간과 동물 연구8,9,,1011에 관류 측정 하는 유용한 방법. 기술은 조명 빛에 붉은 혈액 세포를 이동 하 여 유도 된 도플러 이동12 측정 기반으로 합니다. 1980 년대 초반에 기술 상용화 이후 큰 진전이 했다 레이저 기술, 광섬유 및 관류 측정을 위한 신호 처리에서 레이저 도플러 기기13을 신뢰할 수 있는 기술에 LDF를 만든.
현재 연구에서 두 방법 모두 레이저 도플러 측정의 진 탕 쥐의 척수에 혈액의 흐름 (BF) 평가에 적용 했다. 기술과 그것의 간단한 설치의 비 침 투 적인 특성상 우리의 프로토콜은 척수의 BF 측정에 대 한 민감한, 신속 하 고 안정적인 방법을 제공 한다. 더 중요 한 것은,이 방법은 각 시간 지점에서 동물 희생 없이 BF 게시물 진 탕 SCI의 종 적 연구를 수 있습니다.
때문에 조직의 BF와 자극 동안 관류의 빠른 변화를 평가 하는 능력, 그것은 대뇌 BF14,15 를 평가 하 고 측정 하는 다른 조직 간16, 등이 프로토콜을 적용 하 17, 피부18,19, 그리고 창 자20. 중간 대뇌 동맥의 일시적인 폐색의 쥐 모델에서 레이저 도플러 신호는 ischemic penumbra14에서 예상 되는 수준으로 BF 속도의 적절 한 감소를 위해 사용 되었다. 중요 한 사지 허 혈 (CLI) 유도 받은 쥐에서 레이저 도플러 검사 및 CLI 절차 후 전과 치료21후 다른 기간 동안 뒷 다리 BF 관찰에 적용 되었습니다. 또한, 생체 이용률 및 일부 약물의 대사 정리 LDF16에 의해 발견 되었다 간 BF에 달려 있었다. 따라서, LDF 실험 모델 pharmacodynamic, 및 pharmacokinetic 평가에서 널리 이용 될 수 있었다.

<table><tbody><tr><td>레이저 도플러 라인 스캐너</td><td>무어 인스트루먼트</td><td>moorLDLS2</td><td></td></tr><tr><td>레이저 도플러 모니터</td><td>무어 인스트루먼트</td> 모니터 용 <td>moorVMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>프로브</td><td>무어 인스트루먼트</td><td>VP3</td><td>무딘 바늘 끝 전달 프로브</td></tr><tr><td>임팩터</td><td>정밀 시스템 및 계측</td><td>IH-0400</td><td></td></tr><tr><td>페노 바르비탈 나트륨</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>시그마-알드리치</td><td>B-908</td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td>Becton Dickinson Medica (s)</td><td>Pte.Ltd 300841</td><td></td></tr><tr><td>실이 있는 외과용 봉합사 바늘</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd</td><td></td><td>18T0329 (배치 번호) /4-0</td></tr><tr><td>Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.의</td> <td>메스</td> 수술 기구 공장<td>J11030 4#</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td>작동 기기 공장 Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J12130 20#</td><td></td></tr><tr><td>안과 겸자</td><td>Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.의 수술 기구 공장</td><td>JD1040</td><td></td></tr><tr><td>지혈 겸자</td><td>작동 기구 공장 Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J31050</td><td></td></tr><tr><td>벤질 페니실린 나트륨</td><td>North China Pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td>F6072116(배치 번호)</td></tr><tr><td>75% 알코올</td><td>Dezhou Anjie Gaoke 소독 제품 Co., Ltd</td><td></td><td>150421R(배치 번호)</td></tr><tr><td>요오드</td><td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd</td><td></td><td>20170102(배치 번호)</td></tr><tr><td>Rat</td><td>Laboratory Animal Center, The Academy of Millitery Medical Sciences</td><td></td><td>Sprague-Dawly (쥐 균주)</td></tr></tbody></table>

레이저 도플러 이미징 및 모니터링을 사용 하 여 쥐에서 척수 미세 분석 하

Using Laser Doppler Imaging and Monitoring to Analyze Spinal Cord Microcirculation in Rat

레이저 도플러 flowmetry (LDF)를 측정 하는 척수의 microcirculatory 변경 시키는 혈액 흐름 (BF) 측정에 대 한 비 침 투 적인 방법입니다. 이 문서에서는, 우리의 목표 척수 부상 후 BF의 변화를 분석 하 레이저 도플러 영상 및 모니터링을 사용 했다. 레이저 도플러 이미지 스캐너와 프로브/모니터 각 판독을 고용 되 고. LDPI 데이터 부상 사이트 관류에 대 한 개요를 준 하 고 다른 위치 사이에서 BF의 비교 분석에 대 한 접근 했다 BF의 로컬 배포를 제공 합니다. 강렬 하지 시간 동안 검색 영역 측정, 결합 된 프로브 전체 척수 관류와 산소 공급을 보여주는 척수의 BF 및 산소 포화를 동시에 측정 하 사용 되었다. 자체 LDF 신호 감도 운동, 및 생물 학적 0 상대 플럭스, 같은 몇 가지 제한이 있다. 그러나, 기술은 그것의 간단한 설치와 BF의 빠른 측정 실험과 임상 연구에 적용 되었습니다.

LDPI 척수, 척수의 rostral 꼬리 축 선형 프로필 (그림 4)를 추출 하 여 계량 했다 BF 측정 하 사용 되었다. 그림 5A 와 그림 5B 가짜 그룹 문화 그룹의 척수의 유출 이미지를 각각 나타냅니다. 그림 5C 및 그림 5D 가짜 그룹 문화 그룹의 척수의 rostral 꼬리 축 변경 BF를 각각 나타냅니다. 그림 5A 와 그림 5B 의 비교 시연 SCI BF의 감소를 유발 진원지의 BF rostral 코드와 꼬리 코드 보다 낮은 했다.
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여기 우리 레이저 도플러 관류 (LDPI) 이미징의 조합을 제시 하 고 소개 하는 척수에 대 한 표준화 된 절차 뿐만 아니라 국부 적으로 혈액 흐름과 산소 포화 (2등), 코드 레이저 도플러 관류 모니터링 (LDPM) 척추를 측정 하 쥐에 외상입니다.

Laser Doppler flowmetry (LDF) is a noninvasive method for blood flow (BF) measurement, which makes it preferable for measuring microcirculatory ...

본 절차의 전반적인 목표는 척수 국소 혈류량과 산소 포화도를 측정하기 위한 레이저 도플러 이미징 및 모니터링의 조합과, 쥐에게 척수 외상을 유도하는 표준화된 절차를 제시하는 것입니다. 이 방법은 척수 손상 후 시간이 경과함에 따라 혈류가 어떻게 재분배되는지 및 주변 영역에 미치는 영향과 같이 미세 순환 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 레이저 도플러 이미징과 모니터링 장치를 모두 사용함으로써 혈류의 국소적 분포 데이터와 일정 기간 동안의 혈류 변화를 신속하게 도출할 수 있어, 문제 영역의 혈류에 대한 더욱 정밀한 분석이 가능하다는 점입니다.먼저 마취된 쥐의 발가락을 집어 반응이 없는지 확인하여 수술 가능한 마취 단계에 도달했는지 점검하십시오. 쥐의 하단 허리부터 목까지 등 부위를 제모합니다. 그런 다음 체온을 일정하게 유지하기 위해 쥐를 40°C 가열 패드 위에 등 쪽이 위로 오도록 놓습니다.요오드에 적신 솜 뭉치로 닦아낸 후 75% 알코올로 닦아 제모된 부위를 멸균합니다. 흉추 T7에서 T11까지를 포함하는 척추궁 절제술 부위의 피부를 절개한 후, 극돌기, 척추궁 및 후관절이 노출되도록 T8에서 T10까지 양측의 부착된 근육을 절단합니다. 메스를 사용하여 T10과 T11 사이의 접합부를 분리하는 절개를 실시합니다.근육층을 조심스럽게 절개하여 뼈를 드러냄으로써 접합부를 추가로 노출시킵니다. 가위를 사용하여 엽판(lamina)과 추궁판(pedicle) 주변의 근육을 조금씩 잘라내어 더 깨끗하게 제거합니다. 이렇게 하면 T10과 T11 척추 사이에 작은 공간이 생깁니다.지혈 겸자를 이 틈 사이에 천천히 조심스럽게 삽입하여 척추경을 분쇄합니다. 반대편에서도 동일하게 반복합니다. 척수 신경을 노출시키고, 뼈 조각이나 거친 파편이 남지 않도록 주의하며 척추궁판을 조심스럽게 들어 올려 제거합니다.T9 및 T8 엽판을 추가로 제거하기 위해 이 과정을 반복합니다. 이제 실험군에서 진탕 손상을 유도하기 위해 임팩터를 사용할 수 있습니다. 노출된 척수를 스캔하려면 쥐의 등 쪽이 위로 향하게 하여 검은색의 비반사 배경 위에 놓은 후, 소프트웨어에서 Measure를 클릭하여 측정 그래픽 사용자 인터페이스(GUI)로 진입하고 Scanner Setup 버튼을 눌러 스캐너 설정 인터페이스를 엽니다.본 실험과 같이 좁은 영역을 스캔하려면, Scan Size 및 Display 옵션을 클릭하고 Hi

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

이 비디오는 돼지 모델의 척수에 레이저 도플러 바늘 프로브를 배치하는 방법을 보여줍니다. 이는 척수에 공급되는 혈액을 지속적으로 정량화하는 데 도움이 되며, 이는 척수 손상에 대한 중요한 평가입니다.

레이저 도플러 바늘 프로브 삽입: 돼지 모델에서 척수 내 혈류의 실시간 정량화를 위한 기술

뇌 관류 모니터링은 허혈성 뇌졸중 모델의 정확성을 향상시키기 위해 입증되었습니다. 기술적 인 문제는 종종 뇌 혈관 연구에 대해이 필수적 도구의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 최적화 된 시스템은 쥐의 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 동안 단일 또는 다중 사이트 hemodynamic 모니터링을 얻기 위해 표시됩니다.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

Contrast Enhanced Ultrasound imaging은 실험용 쥐 척수 손상 모델에서 척수 혈류를 정량화하기 위한 신뢰할 수 있는 생체 내 도구입니다. 이 논문에는 흉추 척수 손상의 타박상 모델과 관련하여 이 기술을 적용하기 위한 포괄적인 프로토콜이 포함되어 있습니다.

실험 척수 부상에서 척수 혈액 흐름의 평가를위한 향상된 초음파 이미징 대비

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

이 문서는 동맥 혈압감소 시 혈류를 자동으로 조절하는 대뇌 순환의 능력을 평가하기 위해 레이저 도플러 유동측정의 사용을 보여줍니다.

레이저 도플러 흐름 측정을 사용하여 쥐에 대뇌 혈액 흐름 자동 조절의 평가

척수 미세 순환은 척수 손상에 중추적 인 역할을합니다. 대부분의 방법은 미세 순환 표적 치료의 발달을 위해 필수적인 척수 미세 순환의 실시간 평가를 허용하지 않습니다. 여기에서, 우리는 허혈 / 재퍼퓨전의 큰 동물 모델에서 레이저 도플러 - 흐름 바늘 프로브를 사용하여 프로토콜을 제안한다.

허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

혈액-척수 장벽(BSCB)의 파괴는 마이크로버블의 정맥 투여와 저강도 집속 초음파(LIFU)의 적용으로 성공적으로 달성할 수 있습니다. 이 프로토콜은 장비 설정, 미세 기포 주입, 표적 위치 파악 및 BSCB 파괴 시각화를 포함하여 설치류 모델에서 LIFU를 사용하여 BSCB를 개방하는 방법을 자세히 설명합니다.

쥐 모델에서 저강도 집속 초음파를 사용한 혈액-척수 장벽 파괴

생체 내에서 뇌의 혈류 조절을 연구하기 위해 전통적인 약리학적 방법은 침습적이며 종종 두개골, 경막 및 연수막을 손상시킵니다. 이 연구에서 우리는 나노인젝터 유도 시스터내 마그나(ICM) 주입과 레이저 스페클 대비 이미징을 결합하여 두개골과 연극의 무결성을 보존하는 최소 침습 기술을 개발했습니다.

Paired Cisterna Magna Nanoinjection 및 Laser Speckle Contrast Imaging Assay를 통해 In Vivo에서 대뇌 혈류 조절 연구

마우스에서 오른쪽 신장 절제 후 일측 신장 허혈-재관류 시 신장 미세혈관 혈류 변화를 모니터링하기 위해 레이저 스펙클 대조 영상 시스템을 사용하였습니다.

쥐의 신장 허혈-재관류 손상 중 레이저 반점 조영 영상으로 모니터링되는 미세혈관 관류

이 문서에서는 인 자기 (MEG)와 편도체의 활동을 기록하는 방법에 대해 설명합니다. 또한이 문서 인식없이 추적 공포, 에어컨, 편도체를 활성화하는 작업을 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 인식을 조작하는 마스킹 이전 버전을 사용하여 추적 에어컨 패러다임을 설계 1) : 그것은 3 개의 주제를 다룰 것이다. 자기 뇌파를 사용하여 작업하는 동안 2) 기록 두뇌 활동. 3) 피질 하 구조에서 신호를 복구 할 소스 이미지를 사용하여.

원본 이미지를 사용하여 인 자기와 편도체의 활동을 감지하는 방법

배우세요 레이저 도플러 이미징과 모니터링을 사용하여 쥐 척수의 국소 혈류와 산소 포화도를 측정하는 방법을. 이 기법은 척수 손상 후 미세순환 변화를 연구하는 데 효과적입니다.

레이저 도플러 이미징 및 모니터링을 사용 하 여 쥐에서 척수 미세 분석 하

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