Name: Methylene 청색 색소를 주입 하 여 요로 분기점 방해 결함 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: 배우세요 메틸렌 블루 염료 주입을 통해 생쥐 배아의 요로 분기점 폐쇄 결함을 평가하는 방법을. 이 기술은 요로 구조를 시각화하고 선천성 발달 이상을 연구하는 데 활용됩니다.

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나는이 원고를 제출 하 여 지원 박사 앨런 O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) 감사 합니다. 나 또한이 원고 편집에 대 한 박사 마이클 홀 (CDBL/NCI/NIH) 및 Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH)을 감사 합니다. 감사 해요 라 Thang (SAIC)에 그의 뛰어난 마우스 축산에 대 한. 이 작품은 암 연구에 대 한 건강, 국립 암 연구소 및 센터의 국가 학회에 의해 지원 되었다.

쥐 (Wnt5a flox / flox 마우스 (Wnt5a tm1.1Tpy) 및 Dll1Cre 선, UVJO 마우스 모델) 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 NIH 지침에 따라 관리 7 NCI 프레드릭 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 프로토콜 아래에서 공부 하는 고.
 1. 메 틸 렌 블루 염색 솔루션의 준비 <ol><li>측정 0.1 g 메 틸 렌 블루 가루.</li>
	<li>10 mL 정상적인 염 분 또는 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 1에서 메 틸 렌 블루를 vortexing에 의해 완전히 분해.</li>
	<li>주입 동안 막힘 제거 주사기 필터 (막 기 공 크기 0.45µm) 10 mg/mL 메 틸 렌 블루 솔루션 필터.</li>
	<li>어셈블 메 마른 두 피 정 맥 세트 (27GX3/4 &#8243;) 3 mL 일회용 주사기와 채우기 3 mL을 주사기 메 틸 렌 블루 솔루션 필터링. 
	참고: 수압 및 후속 염료 흐름을 방지 하려면 배치 메 틸 렌 블루 솔루션으로 채워진 주사기 위에 바늘 팁.</li>
</ol> 2. 출생 전 태아의 해 부 <ol><li>깨끗 한가 위와 집게를 70% 에탄올과 해 부.</li>
	E18.5 또는 E19.5, perinatal 배아를 수집 <li>임신 마우스를 안락사 먼저 CO 2 흡입을 사용 하 고 다음 수행 NIH 지침에 따라 자 궁 경부 전위. 
	그러나 참고: 임신 여성 마우스 일반적으로 출산 E18.5에서 시작,, 더 큰 신장은 조작 하기 쉽습니다. 따라서, 신장 E19.5 가까이에 출생에는에이 분석을 수행 하기 쉽습니다. 그러나, 양측 요로 방해 된 출산 후 새끼. 실험 쥐의 특성에 따라 적절 한 컬렉션 요일/시간 수 경험적으로 결정 합니다.</li>
	<li>복 부 복 부 표면에 70% 에탄올을 스프레이 하 고 해가 위와 집게를 사용 하 여 ventrally 복 부 구멍.</li>
	<li>전체 자 궁 고 해 부가 위 자 궁 뿔의 끝을 절단 하 여 몸에서 분리.</li>
	<li>1 x PBS 가진 전체 자 궁 페 트리 접시에 린스.</li>
	<li>Segmentally가 위 해 부와 자 궁을 잘라내어 집게 노른자위 낭에서 태아를 폭로 해 부와 placental decidua 제거.</li>
	<li>노른자위 sac를 먼저 제거 하 고 해방 perinatal 배아를 집게 해 부와 양수 막 제거.</li>
	<li>배아가 위 해 부와 목을 벨. 멸 균 거 즈 패드와 함께 과잉 혈액을 닦아. 태아 그것의 복 부 표면 위로 핀 해 현미경 이미징에 대 한 디지털 카메라를 갖춘. 필요한 경우 유전형 꼬리를 수집. 
	참고: 한 번에 주사 한 배아를 수행.</li>
	<li>신중 하 게 피부를 찢 어 여 집게로 태아의 복 부 구멍을 엽니다. 다음, 조심 스럽게 제거 초과 장기와 조직 간, 위, 소장 등 집게와 그들을 절단 또는 신장, ureters, 방광 dorsally는 노출에 그들을 밖으로 당기 ( 그림 1A). 필요한 경우 멸 균 거 즈 패드와 함께 해 부 배아에서 과잉 혈액을 흡수. 
	참고: 초과 혈액 신장 골반 염료 주입에 대 한 식별과 방해.</li>
</ol> 3. 신장 골반 및 염료 흐름 모니터링 Methylene 청색 염료의 주입 <ol><li>바늘에 액체 정역학 압력에 의해 바늘 팁에서 메 틸 렌 블루 솔루션을 추방 하 여 튜브 제거 거품. 시작 흐름, 바늘 팁의 수준 이상의 염료 솔루션이 포함 된 주사기를 들어올린 다음 낮은 흐름을 막으려고 주사기.</li>
	<li>신장 골반 근 ureter, 한 번 배치 그것을 방해 하지 않도록 주의 복용 근처에 바늘을 삽입 합니다. 수행의 요로 방해를 결정 하기 위해 신장에 염료 주입. 
	참고: 수행의 요로 장애를 결정 하는 같은 방법에 따라 어떤 비정상적인 신장 7에 주입을 첫 번째 염색.</li>
	<li>15 µ L-60 µ L 염료 솔루션 흐름의 액체 정역학 압력을 제공 하는 약 20 cm를 주사기를 들어올립니다. 유량 주사기 태아 위에이 높이 발생 약 3 µ L/s 됩니다.</li>
	<li>모니터링 신장 골반에서 다음 ureter의 길이에 처음 시작 하는 염료의 파란색 그리고 마지막으로 방광 루멘에서. 
	참고: 그것은 걸립니다 약 5 s ureter을 방광에 올바르게 삽입 하는 경우 방광 루멘 내에서 등장 하는 약한 염료 색깔을 보고. 차단 된 사이트에 대해 15에서 축적 하는 염료를 허용 염료 색깔 방광 루멘에 표시 하는 경우 s.</li>
	<li>중지 염료 흐름으로 주사기를 놓고 바늘을 제거 하는 신장에서.</li>
	<li>신장, ureter, 방광 염료 솔루션 추적의 걸릴 이미지는 stereomicroscope에 연결 하는 카메라를 사용 하 여 및 프로그램 이미징.</li>
	<li>실험실 노트북에는 신장, hydroureter, 및 염료 솔루션의 최종 위치 hydronephrosis의 기록을 만들기.</li>
	<li>수행 주입 contralateral 신장에 설명 된 대로 섹션 3.1) 3.5) 염료 흐름 약 20 수 총에서 s. 
	참고: 방광 루멘 ureter을 방광 루멘에 올바르게 삽입 하는 경우 강한 파란 색깔에 의해 표시 된 염료 해결책으로 가득 합니다. 요로 분기점 방해의 평가, 후에 ureters, 방광 고쳐질 수 있다 단면에 대 한.</li>
</ol>

<ol><li>Rasouly, H. M., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+urinary+tract+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Lower urinary tract development and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).</li>
<li>Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Box+Genes+in+the+Kidney+and+Urinary+Tract%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract.</a> Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).</li>
<li>Bohnenpoll, T., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ureter+growth+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Ureter growth and differentiation.</a> Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).</li>
<li>Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic%2C+environmental%2C+and+epigenetic+factors+involved+in+CAKUT%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).</li>
<li>Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+canonical+Smad+signaling+in+ureteral+and+bladder+mesenchyme+causes+ureteropelvic+junction+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).</li>
<li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Id2+haploinsufficiency+in+mice+leads+to+congenital+hydronephrosis+resembling+that+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans.</a> Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).</li>
<li>Yun, K., Perantoni, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydronephrosis+in+the+Wnt5a-ablated+kidney+is+caused+by+an+abnormal+ureter-bladder+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection.</a> Differentiation. 94, 1-7 (2017).</li>
<li>Uetani, N., Bouchard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumbing+in+the+embryo%3A+developmental+defects+of+the+urinary+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Genet%22%5BJournal%5D)">Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts.</a> Clin Genet. 75, 307-317 (2009).</li>
<li>Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+urinary+tract+defects+in+mice%3A+methods+to+detect+the+presence+of+vesicoureteric+reflux+and+urinary+tract+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction.</a> Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).</li>
<li>Weiss, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephric+duct+insertion+requires+EphA4%2FEphA7+signaling+from+the+pericloacal+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme.</a> Development. 141, 3420-3430 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 상관이 있다.

마우스 신장 E16.5 기능 시작 되며 염료 주입 테스트가 시간 포인트에서 이론적으로 가능 하다. 그러나, 신장이 너무 작아 염료 솔루션 주입 및 이후이 고기 때문에 비정상적인 소변 전송 쌓아 소변의 보조 효과 hydronephrosis 및 hydroureter 같은 고기 명확 하 게 관찰 하지는. UPJO 또는 UVJO, 같은 장애물에서이 고기 발포 신장, ureters, E18.5에서 분명 하다. E19.5 또는 신생아 강아지에 태아의 큰 신장은 E18.5에서 배아의 보다 조작 하기가 또는 더 젊은. 그러나, 양측 요로 방해 된 출산 후 새끼. 따라서, CAKUT 고기 perinatal 배아 또는 새끼 실험 마우스 특성에 따라 적절 하 게 선택 하 여 유효성을 검사 하는 실험을 수행 합니다.
염료 주입을 잠재적인 결함을 검사를 수행 하기 전에 그대로 비뇨 기 시스템을 유지 하기 위해 신중 하 게 해 부. 이것은 본질적으로 비정상적인 hydronephrotic 신장, urete...

비뇨 기 시스템은 신장, ureters 및 일반적인 방광과 요도의 한 쌍의 구성 됩니다. 비뇨 기 시스템의 주요 기능은 혈액의 물과 전해질 균형을 관리 하 여 신체의 항상성 유지 하는 것입니다. 신장 혈액 제어 전해질 농도 산 성-기본 균형을 필터링 하 고 초과 물과 용액 및 대사 산물 등 폐기물을 배설 하는 소변 생산. 소변은 신장 신장 골반에서 ureter 그것 저장 되 고 궁극적으로 요도1통해 제거 단방향 방식으로 bladderin 통해 다음 수송 된다.
ureters는 직선 튜브 nephric 덕트에서 발생. 마우스에서 배아 일 10.5 (E10.5)에서 nephric 덕트에서 신진, 후 ureter 스토킹 elongates 및 E12.5 및 E16.5 라는 마우스 사이 침투성은 urothelium 다층 구조로 차별화. Ureter 줄기 주변 중간 엽 세포 또한 내부 stromal 세포, 중간 두께 평활 근 세포, 그리고 외부 adventitial 섬유 아 세포로 구성 된 3 개의 층으로 구분 됩니다. 신장 골반에서 시작 ureteral 연동 파도 ureter 소변2,3, E16.5 마우스1부터 생산 되는 수송 방광 벽의 평활 근 층을 통해 전파 됩니다.
신장 및 요로 (CAKUT)의 선천적인 이상이 가장 빈번한 유전 질병, 인간 태아1,4의 약 1%에 중 고 고기 hydronephrosis 및 hydroureter 등의 다양 한 구성. 고 신장 ureter 소변의 비정상적인 축적 hydronephrotic 신장 및 hydroureter 형성에 결과. Hydronephrosis 또는 hydroureter 형성의 한 원인은 요로 방해 이다. Ureteropelvic 접속점 방해 (UPJO) 인접 ureter hydronephrosis 및 인접 hydroureter angulation 또는 영구 접는5, 축소의 결과로 신장 골반 사이 방해 때문에 탈 선 소변 흐름에 의해 발생 6. 또한, 방광 벽 또는 생식 관의 원심 ureter 소성 삽입 ureterovesical 접속점 방해 (UVJO) 이라고 합니다. UVJO 또한 hydronephrosis와 hydromegaureter 형성7,8을 유도할 수 있다. 추가 ureterovesical 접합 (UVJ) 결함은 vesicoureteric 환류 (VUR). VUR는 UVJ에서 신장으로 방광에서 역행 소변 흐름에 의해 특징입니다. UVJO에 비해 perinatal 배아 VUR로 표시 되지 않습니다 분명히 팽창된 hydronephrotic 신장 이나 심한 hydroureter 표현 형9.
실험실 마우스에서 소변 신장 골반9에 메 틸 렌 블루 등 염료의 주입에 의해 시험 될 수 있다. Injectedmethylene 블루 솔루션 통해 ureter, 방광으로 신장 골반에서 소변 궤적을 추적 한다. Hydronephrosis 염료는 신장에서의 확장에 의해 인식 될 수 있다. UPJO 발포 신장 골반5근 위 ureter에서 염료 흐름의 막힘으로 감지할 수 있습니다. 어떤 팽창 확대 직경으로 표시 ureter의 hydroureter의 예를 보여 줍니다. 마지막으로, 염료 축적 방광 벽에 또는 생식 관의 사이트에서 UVJO 발포 hydronephrotic 신장으로 나타내고 크기 hydromegaureter7,10. VUR를 검출 하기 위하여 염료 솔루션은 방광에 주입 하 고 후속 역행 흐름 신장9에서 모니터링 됩니다.
여기, 주 태아의 신장 골반에 methylene 청색 염료 주입에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 프로토콜 통해 ureter, 방광으로 신장 골반에서 소변 흐름의 추적을 허용 하 고 UPJO 또는 UVJO와 같은 잠재적인 요로 분기점 장애물을 확인 합니다.

<table><tbody><tr><td>메틸렌 블루</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML</td><td>Fisherscientific</td><td>50-983-204</td><td></td></tr><tr><td>3 mL 일회용 주사기와 BD Luer-Lok 팁</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Acrodisc 주사기 필터 Supor Membrane</td><td>Pall corporation</td><td>4614</td><td></td></tr><tr><td>Exel 두피 정맥 (나비) 세트; 27G x 3/4 " 12"&nbsp;</td><td>EXELINT</td><td>26709</td><td></td></tr><tr><td>섬세한 수술 가위</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 해부 겸자</td><td>Roboz 수술 기구 Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>듀몬트 핀셋; 패턴 #5</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>BD 프리시전글라이드 니들 30 G x 1/2"</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

methylene 청색 색소를 주입 하 여 요로 분기점 방해 결함 평가

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

요로 분기점 방해 결함은 선천적인 변형을 유도 hydronephrosis 및 hydroureter. Murine 요로 분기점 방해 결함 비뇨 기 시스템 내에서 메 틸 렌 블루 염색 흐름을 추적 하 여 평가 될 수 있다. Methylene 청색 염료 perinatal 배아 신장의 신장 골반에 주입 하 고 염료 흐름은 액체 정역학 압력을 적용 한 후 신장 ureter 통해 및 방광 루멘에의 신장 골반에서 모니터링 합니다. 염료 축적 정상적인 perinatal 요로, 방광 루멘에 분명 있을 것입니다 하지만 요로 문제 발생 하는 경우 신장 골반 사이 비정상적인 ureter의 강요 될 것 이다. 이 방법은 요로 분기점 장애물 확인 및 hydronephrosis 및 hydroureter의 시각화를 촉진 한다. 이 원고는 요로 분기점 장애물을 확인 하 신 골반에 methylene 청색 염료 주입에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.

신장과 더 낮은 오 줌 시스템 등 간, 대 장 등 대부분의 다른 내부 장기에 있습니다. 제거한 후에 이러한 다른 내부 장기, 신장, ureters과 단일 방광의 쌍 표시 (그림 1A)는. 성공 해 부에 신장 골반에 주입 하는 염료 ureter 통해 방광으로 신장에서 흐름 것입니다. 신장 골반 ureter는 신장에서의 깔때기 모양의 동 공이 확장 되어 근 위 부분 이다. 따라서, 염료 주입 포인트 검은 화살표 (그림 1B-1 C) 표시는 신장과 연결 표시 인접 ureter 근처입니다. 후 한 신장에 메 틸 렌 블루 염색 솔루션 주입, 염료 ureter 통해 및 방광 요로 장애물이 존재 하지 않는 경우 ureter, 방광 루멘에서 보이는 블루 색상의 결과로 (그림 1B에 신장 골반에서 흐르는 </str...

Methylene 청색 염료 주입 신장 골반으로 마우스 배아 요로 개발 하는 동안 요로 분기점 방해 결함의 평가 촉진 한다. 여기, 신장 골반에 methylene 청색 염료 주입에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.

Methylene 청색 색소를 주입 하 여 요로 분기점 방해 결함 평가

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

본 절차의 전반적인 목표는 신장에 메틸렌 염료를 주입하여 요로 접합부의 폐쇄 여부를 판단하는 것입니다. 이 방법은 요관-방광 연결과 같이 신장 및 하부 요로 발달 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 요로 구조를 시각화하는 간단한 방법을 제공하여 요로 발달 분석이 가능한 최악의 경우의 질량 발달 상태를 확인할 수 있다는 점입니다.실험을 시작하려면 메틸렌 블루 분말 0.1 g을 측정합니다. 메틸렌 블루를 1x 인산염 완충 식염수(PBS) 10 mL에 녹인 후 혼합물을 볼텍싱합니다. 그다음 주사기 필터로 10 mg/mL 메틸렌 블루 용액을 여과하여 주입 시 막힘 현상을 방지합니다.그런 다음 3mL 일회용 주사기와 함께 멸균된 두피 정맥 세트를 조립하고, 주사기에 여과된 메틸렌 블루 용액 3mL를 채웁니다. 해부 가위와 포셉을 70% 에탄올로 세척합니다. E18.5 또는 E19.5의 주생기 배아를 수집하려면 먼저 이산화탄소 흡입법을 사용하여 임신한 생쥐를 안락사시킵니다.그다음 NIH 가이드라인에 따라 경추 탈구를 실시합니다. 이어서 동물의 복부 배면 표면에 70% ethanol을 분무합니다. 그런 다음 멸균 해부 가위와 핀셋을 사용하여 복강을 배면으로 절개하여 엽니다.자궁 전체를 들어 올려 자궁각 끝부분에서 체벽으로부터 분리합니다. 그다음 페트리 접시에서 1x PBS로 자궁 전체를 헹굽니다. 해부 가위로 자궁을 분절하여 절단하고, 해부용 핀셋으로 태반 탈락막을 제거하여 배아와 난황낭을 노출시킵니다.먼저 난황낭을 제거한 다음, 해부용 핀셋으로 양막을 제거하여 주생기 배아를 분리합니다. 해부용 가위로 배아의 머리를 절단합니다. 이미징을 위해 디지털 카메라가 장착된 해부 현미경 위에서 배아의 복측이 위로 향하도록 핀으로 고정합니다.유전자형 분석을 위해 꼬리를 수집합니다. 포셉을 사용하여 배아의 복강을 열기 위해 피부를 조심스럽게 찢습니다. 그런 다음 포셉으로 간, 위, 장과 같은 불필요한 장기와 조직을 절단하거나 끌어내어 제거함으로써 배측에 위치한 신장, 요관 및 방광을 노출시킵니다.멸균 거즈 패드로 해부된 배아에서 과잉 혈액을 흡수한 다음 염료 주입을 계속합니다. 정수압을 이용하여 바늘 끝에서 메틸렌 블루 용액을 배출함으로써 바늘과 튜빙 내의 기포를 제거합니다. 흐름을 시작하려면 염료 용액이 담긴 시린지를 바늘 끝 높이보다 높게 들어 올립니다.그 다음 주사기를 내려 흐름을 멈춥니다. 이어서 바늘을 근위 요관 근처의 신우에 삽입하며, 한 번 배치한 후에는 움직이지 않도록 주의합니다. 신장에 염료 주입을 실시하여 요로 폐쇄 여부를 결정합니다.신우에 바늘 하나를 삽입하여 이 테스트의 성공 여부를 확인한 후, 신장을 통과하거나 혈관 쪽으로 향하지 않도록 주의하며 요관 방향으로 신우에 바늘을 삽입해야 합니다. 정수압을 제공하기 위해 주사기를 약 20cm 들어 올리고 15~16µL의 염료 용액을 흘려보냅니다. 그런 다음 신우에서 시작하여 요관의 길이를 따라, 최종적으로 방광강에 나타나는 염료의 푸른색을 관찰합니다.주사기를 내려 염료의 흐름을 중단시키고 신장에서 바늘을 제거합니다. 신장의 수신증, 요관 확장증 및 염료 용액의 최종 위치를 실험 노트에 기록합니다. 마지막으로 반대편 신장에 주입을 수행하고 염료가 총 20초 동안 흐르도록 합니다.입체 현미경에 연결된 카메라와 영상 프로그램을 사용하여 염색액으로 추적된 신장, 요관 및 방광의 이미지를 촬영합니다. 한쪽 신장에 주입한 후 메틸렌 블루 염색액이 신우에서 요관을 통해 방광으로 흐르게 되면, 요관과 방광 내강에서 가시적인 파란색이 나타납니다. 양쪽 신장에 염색액을 주입하고 약 20초가 지나면 흐름 시간이 더 길어짐에 따라 방광 내강에 더 진한 파란색이 나타나며, 이는 두 번째 비뇨기계의 비뇨관 접합부 폐쇄가 없음을 나타냅니다.비정상적으로 확장된 수뇨관에 조영제를 주입할 때, 조영액의 최종 위치가 불분명할 수 있습니다. 또한 비정상적인 수뇨관이 중간에 손상되었을 경우, 방광강 내에 조영제가 없더라도 요관방광이행부 폐쇄(UVJO) 여부를 확인할 수 없습니다. 이 절차를 수행할 때는 온전한 비뇨기계를 얻기 위해 조영제 낭의 주변 배아를 계산하는 것이 중요하다는 점을 기억해야 합니다.그리고 염료 흐름이 차단되지 않도록 기포를 제거합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

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생물학

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이 프로토콜은 털과 피부에 의한 소변 흡수를 방지하기 위해 시아노아크릴레이트로 피부를 방수하는 가이드를 제공합니다. 여기에는 접착제를 피부에 바르고, 방광 카테터를 이식하고, 깨어 있는 쥐에서 방광 측정 및 외부 요도 괄약근 전기 조영 기록을 위한 전극에 대한 지침이 포함되어 있습니다.

정확도 향상을 위한 마우스 요역동학 기술 최적화 

본 프로토콜은 편측 요관 폐색의 단계적이고 재현 가능한 모델을 설명합니다.

가역적 일방적 요관 폐색의 미성숙한 쥐 모델(An Immature Murine Model of Reversible Unilateral Ureteral Obstruction)

접근 시냅스에 전기 생리학의 응용 프로그램 시냅스 돌연변이를 분석에 유용 시냅스 활동의 같지는 조치를 제공합니다. 이 문서 신경근육학 분기점 (NMJ)의 노출하는 데 사용되는 절개 방법을...

해부 및 C. 엘레간스 신경근육학 융티온에서 레코딩

배우세요 메틸렌 블루 염료 주입을 통해 생쥐 배아의 요로 분기점 폐쇄 결함을 평가하는 방법을. 이 기술은 요로 구조를 시각화하고 선천성 발달 이상을 연구하는 데 활용됩니다.

Methylene 청색 색소를 주입 하 여 요로 분기점 방해 결함 평가

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