Name: 쥐에 있는 부분 시 신경 Transection: 망막 신경 절 세포의 2 차 변성을 평가 하기 위해 새로운 수술 방식으로 설립 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 12 s
Description: 학습하세요 쥐의 부분 시신경 절단 수술법으로 망막 신경절 세포의 2차 변성 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 혁신적 기법은 녹내장 신경퇴행성 질환 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 베이징 자연 과학 재단 (7152038), 중앙 남쪽 대학 (2016zzts162)의 중앙 대학 및 과학 연구 재단의 Aier 눈 병원 그룹 (부여 번호에 대 한 근본적인 연구 자금에 의해 지원 되었다 AF156D11)입니다. 마지막으로, 년 동안 귀중 한 지원 판 연 Yiping 쑤 감사합니다.

관련 된 동물 주제 기관 동물에 의해 승인 절차 관심과 사용 위원회 (IACUC) 수도 의과대학의. 모든 수술 기구 및 솔루션 미생물 감염을 제한 하는 수술 전에 소독 했다.
 참고: 수술 프로토콜 포함 5 개 부품, 즉 마 취, 수술 방법, 시 신경 평가, 마지막으로, 및 복구. 시 신경의 부분 양적 transection 지원, 새로운, 저렴 한 비용 수술 악기 설계 되었다. 모든 절차는 윤리적인 규칙 및 수술 방법에 따라 실시 했다.
 1. 수술 기법 <ol><li>무 균 기술을 사용 하 여 실험을 실시, 동물 사용에 대 한 프로토콜 특정 기관 이어야 합니다.</li>
	<li>Sterilize 악기 및 자료 (솔루션, 시험 물질, 추적기, 바늘, 등) 감염 및 동물 복지에 불리 한 영향 뿐만 아니라 연구에 잠재적인 부정적인 영향을 방지 하기 위해 생활 조직에 접촉으로 오는 .</li>
</ol> 2. 마 취 <ol><li>수의학 isoflurane 기화 기 시스템을 사용 하 여 Anesthetize SD 쥐. 1 L/min의 속도로 의학 급료 산소를 사용 하 여 증발 isoflurane 가스. 연결 된 마 취 상자에 동물 하 고 느린 호흡과 동물 진정까지 4.5%의 농도에서 isoflurane 실행.</li>
	<li>가스 마스크 첨부 파일에 가스 흐름을 전환 하 고 작업 테이블에는 동물을 놓습니다. 2%와 모니터 마 취 isoflurane 농도를 낮춥니다. 큰 동물 (&#62; 300 g) isoflurane의 높은 농도 필요할 수 있습니다. 적절 하 게 조정 isoflurane 복용량과, 수술 중 마 취를 모니터링 합니다. 끊임없이 깊이 호흡의 속도 평가 하 고 깊은 고통의 부재를 보장 하기 위해 발가락 핀치 평가 5 분 마다 수행.</li>
	<li>수술 완료는 isoflurane 끄고 작업 테이블에서 제거 하기 전에 몇 분 동안 호흡 산소는 동물 허용. 수술 담요로 동물을 취재 하거나 수술 하는 동안 규제 난방 담요를 사용 하 여 체온을 유지.</li>
</ol> 3. 수술 보조 악기 (SSAI)를 자체 설계 <ol><li>는 SSAI 만든 스테인리스 스틸 및 주로 사용은 휴대용 극 (100 m m, 길이, 직경, 9 m m)와 홈된 헤드 ( 그림 1). 홈 붙이 머리의 홈이 있는 표면을 각각 수직 깊이, 폭, 및 200 µ m, 500 µ m 및 1000 µ m의 길이와 반원형 이다. 두 부분 사이 50 m m의 길이와 공동 섹션이입니다. 홈 붙이 머리 &#39; s 가장자리는 넓은 300 µ m. 
	참고: 홈된 표면 transection 복 부 시 신경을 안정화 수 있습니다. 지 시 신경 시 신경의 복 부 측; 내 낳는 때 홈의 외부에 노출 되 한편, 홈된 가장자리에 노출 등 시 신경 수직 절단을 수행 하면 transected 될 수 있습니다. 홈 붙이 표면에서 누워 복 부 시 신경 홈이 있는 머리에 의해 보호 됩니다 &#39; s 지.</li>
	<li>RGCs 해당 양적 transected 시 신경 축 삭 (등 쪽), 하 주 상해를 구현 하는 보조 하면서 부상 RGCs 해당 직접 손상 없이 untransected 시 신경 축 삭 (복 부 측) 하에서 수행 것.</li>
</ol> 4. 외과 접근 <ol><li>장소 머리는 외과 의사를 직면 하 고 있는 수술 테이블에 위쪽으로 쥐의 오른쪽. 수술 시야의 중심에 바로 궤도 조정 합니다. 다음, 여러 번 측면 법 75% 에탄올에 0.5% 액체 적용 오른쪽 궤도 피부의 외부 음향 구멍을 따라 절 개 지역 청소. 아이리스가 위를 사용 하 여 외부 음향 구멍을 측면 법 사이 모피 제거.</li>
	<li>는 0.5 1 cm의 길이 가진 외부 음향 구멍을 측면 법 따라 아이리스가 위를 사용 하 여 피부 절 개를 확인 합니다. 다음, 근 막과 위쪽 삼각형 쐐기를 만들려고 이빨된 집게를 0.12 m m 풀을 꼬집어. 절 개 영역으로 욕실이 봄이 위 낮은 블레이드를 삽입 하 고 같은 전단 방향으로 근 막 오픈 컷.</li>
	<li>욕실이 함께 근 막 컷이 위 봄 하 고 궤도 정 맥 노출. 사용 날카로운 톱니 집게 클램프 궤도 정 맥의 측면 및 둔 절 개의 양쪽 열. 후속 작업을 촉진 하기 위하여 배치 되는 궤도 근육 표면의 수술 방향 궤도 정 맥 놓고 수술을 피하기 위해 궤도 정 맥 출혈 관련.</li>
	<li>아이리스가 위로 잘라 오른쪽 측면 법 동안 궤도 근육의 무딘 해 부에 대 한 시야를 완전히 노출 하 절 개 라인 따라 떨어져 따라 습을 사용 하 여</li>
	<li>클램프 subfascial 궤도 근육의 폴더와 무딘 계속 피부와 근 막 절 개의 방향에 수직으로 구분 합니다. 점차 궤도 지방이 많은 직물의 외관까지 궤도 깊이 도달 하는 측면에 따라 별도.</li>
	<li>궤도 지방 조직에의 노출, 외과 의사의 오른쪽 측면에 세로로 직면에서 쥐 머리 방향 변경. 한편, 지역 지속적으로 촉촉한를 사용 하 여 수술 또는 면봉 포함 하는 메 마른 PBS 유지. 이 이렇게 촉 촉 하 고 부드러운 조직을 유지 하면서 수술 분야의 명확한 비전을 보장.</li>
</ol> 5. 시 신경에 액세스 <ol><li>궤도 adipose 조직 궤도 구멍에서 시 신경 주위 궤도 근육 콘 취재를 잘라. 이렇게 하면 적절 한 수술 방법의 더 나은 노출. 피하기 위해 제한 된 지방 조직의 유지 절제는 출혈 지속.</li>
	<li>지방 조직, 측면 곧바로 노출 컷. 바깥쪽, 측면 곧바로 클램프 그리고 욕실이 봄이 위로 잘라. 지방 조직 측면 곧바로 아래 경우, 0.12 m m를 사용 하 여 시 신경 overlying 지방 올려 이빨 집게와 욕실이 봄이 위로 잘라. 
	참고:이 시간에, 광학 신경 주위 조직 칼 집 표시 되어야 합니다.</li>
	<li>계속 분리 시 신경의 총 노출까지 궤도 깊이에 시 신경의 방향 따라 조직 칼 집. 깨끗 한 조직 제거에서 발생 하는 깨끗 한 적은 양의 혈액을 수술 면봉을 사용 하 여 영역을 유지. 
	참고: 이제, 시 신경 표시 되어야 합니다.</li>
	<li>액세스, 안과 동맥 손상 없이 신경을 둘러싸는 meningeal 칼 집을 제거 합니다. 부드럽게 운영 현미경 고배율에서 경질의 혈관 패턴 검사를 칼 집 회전.
	<ol><li>혈관, 없는 영역을 식별 하 고 경질에 경도 컷 수행. 13 찢 어 칼 집 26 G 바늘 팁 또는 사파이어 외과 프로브 knifepoint 시 신경의 방향에 평행한 신중 하 게, 측면 인하와 함께 맥 관 구조에 손상을 피하. 
		참고: 신경을 다루는 유일한 남은 거미 집 모양의 membra 해야 합니다.네브라스카, 매우 얇고 투명.</li>
	</ol></li> <li>5.2 단계, 시 신경의 방향에 평행한 부드럽게 26 G 바늘 팁 또는 사파이어 외과 프로브의 knifepoint와 거미 집 모양의 막 버리고 비슷합니다. 13</li> <li>결과 홈된 머리 가장자리 보다 약간 높은 되 고 지 시 신경에 부드럽게 하 고 신중 하 게,에 악기 홈 안에 시 신경을 하다. 이 시점에서 26 G 바늘 팁 홈된 머리 플랫폼의 가장자리 또는 knifepoint 사파이어 외과 프로브 부분 시 신경 transection 완료를 위에 지 시 신경 transect.</li>
</ol> 6. 닫는 및 복구 후자를 시 신경의 <ol><li>이동 악기는 수직으로 좀 더 깊이 방향. 그런 다음, 부드럽게 악기의 홈이 있는 머리를 제거 합니다. 눈 근육 이나 다른 조직 추가 손상을 방지 하려면 스크래치 하지 마세요. 부분 시 신경 transection의 그 루터 기를 관찰할 수 있다.</li>
	<li>측면 곧바로, 근 막 및 그들의 원래 위치로 눈의 다른 주변 조직 교체합니다. 그런 다음 순서로 근육 및 궤도의 피부 층 봉합. 출혈이 지속 되 면, 부드럽게 의료 면봉으로 상처를 닫기 전에 시간 동안 이것을 유지. 감염을 방지 하기 위해 상처에 항생제 연 고를 적용.</li>
	<li>차례 isoflurane 소스 끄고 몇 분 동안 호흡 산소를 동물 허용. 쥐 소생 과정 온수 매트와 열 절연 제를 준비 하거나 건조 패딩 케이지 표면을 커버 합니다. 복구 프로세스 동안 쥐 기도 patency 되도록 담요와 동물 커버.</li>
	<li>수술 후 개별적으로 집 동물입니다. 제도 동물 보호 기관에 의해 제공 된 지침에 따라 수술 후 진통제를 관리 합니다. 수술 후 동물을 주의 깊게 모니터링.</li>
</ol>

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</ol>

모든 저자 들은 관심의 모든 갈등을 선언 합니다.

운영 절차
모델 건설 과정 고 시의 가치 있는 몇 가지 포인트가 있다. 4.2 단계에서 수술 운동 subfascial 근육 위에 맥 관 구조를 손상 되지 않도록 신중 하 게 수행 되어야 한다. 특히 때 피하 근 막 외부 측면 법에서 절단, 날카로운 톱니 집게 사용 해야 합니다을 위쪽으로 피하 근 막 근 막 표면에 수직으로; 근 막 욕실이 함께 모델 실패 과도 한 출혈이 발생할 수 있습니다 외부 법에서 궤도 혈관 손상을 방지 하려면 봄이 위 잘라 되어야 합니다. 4.3 단계는 잠재적으로 직접 혈관에서 제거 출혈 방지의 이점이 있다. 분리 단계 4.5, 따기 날카로운 톱니 모양의 겸 하지만 욕실이 없는 이유에서 궤도 근육에서 봄이 위 지속적인 출혈과 출혈을 방지 하는. 근육 피부 근 막 절 개;을 수직 방향으로 양쪽에 퉁 명 스럽게 분리 한편, 바깥쪽과 주변 궤도의 깊은 근육이 뻗어 있다. 이 절차는 큰 수술 창을 제공 하 고 오버레이 시 신경 조직에 대 한 한 시 빨리 벗어나게 액세스 허용 궤도 구멍의 깊은 부분을 발표할 예정 이다. 위의 절차에서 출혈이 발생 하는 경우 압력 적용 해야 살 균을 사용 하 여 수술 또는 면봉. 작은 출혈이 절차에 의해 몇 초 후 중지 됩니다. 4.6 단계의 목적은 쉽게 궤도 깊이에 시 신경의 방향 따라 시 신경이 노출 궤도 근육 콘에 뚱 뚱 하 고 별도 일부 근육을 제거 하는 후속 작업을 촉진 하기 위하여.
현재 프로토콜의 가장 중요 한 부품은 단계 5.1-5.6입니다. 그것은 시 신경 머리 주위 맥 관 구조를 손상 하지 해야 합니다. 시 신경이 부분적으로 눈의 1 mm 이내 신경 관통 하 고 내부 망막에 혈액을 공급 하는 안과 동맥에 손상을 피하기 위해 눈의 뒷면에서 최소 1.5-2.0 mm로 transected 한다. 측면 곧바로 절단의 목적 측면 곧바로 넓은 고 시 신경의 보기를 분명히 차단 시 신경의 더 나은 노출을 달성 하는 것입니다. 한편, 안과 동맥 meningeal 칼 집 (그림 5)와 관련 된 제거를 피하기 위해, 그것은 분리 하 고 시 신경 주위 dura 해리 meningeal 칼 집의 혈관 패턴을 검사 하는 데 필요한 집게를 사용 하 여 부드럽게 회전 하는 칼 집. 또한, 혈관이 없는 영역 식별 되어야 합니다, meningeal 칼 집에 경도 컷을 수 있도록. 그것은 또한 안과 동맥에 밀접 하 게 연관 된 경질의 부분을 피하기 위해 눈의 뒷면에서 작은 작업 거리를 유지 하는 데 필요한. 망막은 일반적으로 투명 하 고 혈관을 명확 하 게 구분 될 수 있습니다. 손상 된 망막 혈액 공급의 경우 망막 퇴 화, 유백색 백색의 부드러운 모습을 선도. 시간이 지남에 따라 눈과 렌즈의 유리 챔버를 뿐만 아니라, 줄된 눈 크기와 흐린 일반적으로 될 수 있습니다. 본이 연구에서는 수술 전 및 수술 후 이미지는 저 위의 단계를 적용 한 후 모델에 저 혈액 공급 손상 확인.
또한,이 모델의 몇 가지 단계에서 특별 한 주의가 필요 합니다. 노출 시 신경 날카로운 곡선-톱니 모양의 포 셉 또는 다른 수술 도구를 사용 하 여 때 외과 의사 피해 야 한다 과도 한 힘으로 시 신경, 안구 또는 안과 동맥 손상 될 수 있습니다 기본 상해 및 망막 국 소 빈 혈 결과. 또한, 눈 주변 혈관 해야 하지 손상 될, 지속적인 출혈을 방지 하는 모델링의 실패에 발생할 수 있습니다. 이 실험에 사용 된 SSAI 섬세 한 사용을 필요 합니다. 시 신경 악기 그루브 내 놓으면 시 신경 및 홈이 있는 표면을 단단히 좋은 일관성 및 각 동물 모델의 반복성을 보장 하기 위해 장착 해야 합니다. 초기 항목 인하 후 연습, 전체 수술 눈, 당 15-20 분 이내 완료 수 있습니다.
왕 외. 19 시 신경 양적 절단기를 사용 하 여 부분 시 신경 transection의 유사한 동물 모델을 발표 했다. 수술 절차 포함: 1) 절단 떨어져 외부 법, 중단 하 고 고정 종을 우수한; 2) 시 신경 탐험과 절단기;를 사용 하 여 시 신경의 우량한 부분을 transecting 그리고 3) 결 막과 피부를 봉합. 수술은 비교적 간단, 작업 중 다음과 같은 문제가 발생 했다. 비록 측면 법 절 개는 작업에 대 한 특정 공간 노출 수, 끊임없이 retrobulbar 시 신경 칼 집, 특히 때 외과 의사 이상 retrobulbar 노출 노출 하려면 안구 스트레칭 하는 피할 필요가 있었다 시 신경 칼 집 칼 집 격리; 더 촉진 하기 위하여 안구 스트레칭 위한 힘이 이었다, 안구 및 시 신경의 직접 견인 부상을 일으킬 것입니다. 시 신경 칼 집와 함께 잘라 수 있습니다 혈관에 특별 한 주의 지불 했다 그리고 혈관에 손상을 실패 모델 설립으로 이어질 가능성이 높습니다. 이 문서에서 설명 하는 보조 부상 모델의 주요 절차는: 새로운 요원 접근 안구의 측면 궤도 벽에서 직접 액세스 궤도 근육 콘으로 둘러싸인 retrobulbar 시 신경 주 상해를 피하는 안구, 시 신경, 아래쪽 또는 안구의 비 강 측면 사이드 쪽으로 당길 때 이 새로운 수술 방법을 모델링, 동안 외과 수술의 공간을 증가 하 고 밀접 하 게 관련 된 시 신경의 partial transection 전에 안과 동맥 meningeal 칼 집의 쉽게 격리 수 있습니다. 부분 시 신경 transection 자체 디자인된 한 외과 악기가 고, 비용 효과적이 고 재사용, 모델링의 전반적인 비용 감소와 함께 수행 되었다. 쥐의 궤도 구조는 법 및 아무 뼈 구조에 가장 가까운 궤도와 다른 포유동물의 다른 이지만 근육으로 덮여. 외과 접근은 궤도 뼈와과 파괴의 필요 없이 안구의 후부 부분을 도달할 수 있습니다. 통해 엄격한 수술 소독 하 고 수술 후 항생제 예방 치료, 감염, 염증 및 부 종 크게 감소 되었다.
자체 디자인된 외과 보조 기구
부분 시 신경 transection의 쥐 모델 자체 디자인된 외과 조수로 악기, 누구의 주요 특징은 다음과 같습니다를 사용 하 여 설립 되었다. 그것은 또한 다른 동물 사이에서 transection 일관성을 보장 하는 홈된 가장자리에 노출 시 신경의 부분 양적 transection에 지원할 수 있습니다. 우리는 테스트 하 고 SSAI 모델 설립의 반복성을 확인. 변이의 최대 계수는 1.85%, 평균 0.67% ±0. 44%. 20 이러한 결과 나타냅니다 만족 재현성 및 유엔 부분 시 신경 transection 모델을 설정 하는 SSAI를 사용할 수 있습니다.iformity입니다.
홈된 표면의 너비와 홈의 내부 표면의 세미 원의 디자인 수 시 신경에 영향을 더 고정 홈된 화면을 확인 하 고 시 신경 또한 감소 하는 실험적인 오류 및 불리 한 반응 더 긴밀 하 게 연결. 홈된 지 커터의 선명도에 홈에 시 신경 손상 하지 것입니다 작업 중 홈에 시 신경의 더 나은 보호를 허용 한다. 홈된 가장자리의 또 다른 장점은 시 신경 transection 동안 호감 부상 방지입니다.
그것은 깊고 좁은 공간에서 작동 하는 데 적합 합니다. 비록 새로운 요원 접근 확장 되었습니다 통로가 남아 깊은, 그리고 휴대용 극 및 공동 섹션 후속 작업을 수행 시 신경 칼 집에서 쉽게 홈된 머리를 사용할 수 있습니다. 작업에 대 한 악기를 사용 하는 경우 다양 한 커터 transection, 예: 26 G 바늘 팁에 대 한 사용할 수 있습니다. 사파이어 외과 프로브 칼도 타 박상을 방지 하 고가 위로 인 한 부상 호감을 선택할 수 있습니다. 그루브 표면 완료 시 신경 절단의 다양 한 각도에 다른 수직 깊이에 만들 수 있습니다.
왕의 절단기에 비해 외 는 SSAI 더 간단한 구조를 하고있다. 또한, 가공 단계 및 동물 모델의 반복성이 향상 된 일관성, SSAI를 사용 하 여 더 편리 하다. 마지막으로, 도구는 SSAI와 절단에 대 한 적용의 범위 넓은 이기도합니다. 끝으로, SSAI 신경의 양적 하 고 균일 한 절 개를 시키는 쥐 시 신경 transection를 평가 하기 위한 모델을 설정 하기 위한 효과적인 악기 역할을 수 있습니다.
쥐 부분 시 신경 Transection 모델의 특징
부분 시 신경 transection 모델 RGCs에 2 차 변성을 평가 하기 위해 유용 합니다. 이 모델의 잠재적인 장점 기본 2 차 변성에서 정확 하 게 분리 하는 기능은 제자리에, 모두는 시 신경 및 망막에서. 중앙과 복 부 시 신경 등 시 신경 (그림 6)의 partial transection (약 1/3 ~ 1/2) 후 보조 부상에 더 취약 했다. 망막에서 RGCs의 기본 및 보조 상해의 지역 위치에 해당 하는 망막 RGCs partial transection 후 시 신경의 지형에 근거 한다. 쥐의 전체 망막 등 (등)와 복 부 (열 등 한) 부분으로 나누어져 있습니다, 보조 및 기본 상해 있다면 두 부분에 존재. 그러나, RGCs 망막 및 시 신경 축 삭의 관계에 따라, 복 부 망막에 RGC 죽음 한다 주로 인할 보조 부상 (그림 3). 12 , 22 , 23 이 모델 포함의 장점: 간단 하 고 조작이 쉬운 악기 표준 절차; 눈에 영향을 주지 않습니다 좋은 재현성 및 안정성 이 기술은 짧은 방해 RNAs (siRNAs), 플라스 미드, 적용 하 여이 공간 절약형 요원 접근에서 RGCs transfect에 사용 될 수 및 부분 시 신경에 바이러스 성 벡터는 그 루터 기. 또한, 시 약 선택적 치료 또는 RGCs의 라벨에 대 한 부분 시 신경 등 걸에 배치 될 수 있습니다.
RGCs의 전체, 기본 및 보조 부상 후 망막 두 부상 종류 사이에서 명확한 경계와이 동물 모델에 부분 시 신경 transection 공존. 시 신경 축 삭 망막에 RGC 위치 협회 더 정확한 구별을 위해 추가 조사를 요구, 비록 공간 절약형 요원 이렇게 모델의 응용 프로그램 범위를 확장 하 고 탐구 하는 연구자 수는 새로운 방식으로 RGCs에 보조 부상의 메커니즘.

2 차 변성 외상 성 부상, 그리고 다음 급성과 만성 신경 퇴행 성 질환 후에 중앙 신경 조직 (CNS)에 일반적으로 발생합니다. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 주 병 적인 이벤트의 초기 결과 신경 그리고 glial 세포의 죽음은 불린다 기본 변성, 신경 및 또는 부분적 으로만 영향을 받지 않습니다 기본 glial 세포의 죽음에는 2 차 변성 손상입니다. RGCs의 2 차 변성 녹 내장에서 발생을 또한 믿어진다. 6 Yoles 외. 7 2 차 부상 RGCs의 시 신경 손상 모델에서 발생 하는 것을 확인 했다. 그들은 뉴런 누구의 axons 급성 피해는 결국 퇴행 성 환경으로 인해 타락 한 후 부상 되지 않았습니다 이러한 axons을 둘러싼 부상으로 생산 했다. 이 이차 변성 가해진 손상의 심각도 관련 된 진보적인 패션에 신경을 영향을 줍니다. 지금까지 녹 내장에서 RGC 손상 기본 메커니즘 불분명, 특히 부족 한 임상 치료에서 보조 부상에 관련 된 유지. 8 , 9 , 10 그러므로 필요는 녹 내장의 개발 하는 동안 RGCs의 보조 변성의 기본 메커니즘을 탐구입니다. 11 의 크기, 분포, 및 메커니즘 RGCs의 보조 변성의 양적 평가 수 보조 부상의 동물 모델 설립 과학자 공부 RGCs의 보조 부상 증가 주목을 끌고 있습니다.
이 문제를 명확 하 게 쥐 퐁 모델 Levkovitch-Verbin 그 외 여러분 에 의해 설립 되었다 12 axonal 상해 평가를 유도 변성 고 RGCs의 죽음. 이 모델 2 차 변성의 메커니즘을 탐구 하 고 잠재적인 신경 에이전트를 식별에 대 한 좋은 도구를 구성 하는 것 여겨진다. 보조 부상의이 모델을 생성 하는 데 사용 하는 악기는 완료 시 신경의 양적 transection 다이얼 노브를 통해 절단의 깊이 설정 하 여 양적 transect를 규모와 다이아몬드 칼입니다. 수술 경로 안구 위쪽 또는 일시적인 결 막에서 접근합니다. 수술 과정에서 망막 및 시 신경 수도 영향을 받을 차례로 주 부상을 일으킬 수 있습니다 집게의 힘에 의해. 더 중요 한 것은, 노출된 시 신경의 제한 된 공간 때문에 그것은 절 개 전에 meningeal 덮개 분리 어렵다. 따라서, 그것은 부분 시 신경 transection, 망막 허 혈 및 모델의 실패 귀착되는 동안 안과 혈관을 손상 수 있습니다. 또한, 다이아몬드 칼은 비용이 많이 드는, 그리고 각 사용 감소 팁 선명도. 이 영향을 미칠 수 깊이. 을 모델링의 효과
이 연구에서 설명 RGCs의 보조 변성의 모델 안구의 측면 궤도 벽에서 새로운 요원 접근 방식을 통해 얻은 것입니다. 소설 요원 이렇게 궤도 근육 콘, 아래쪽 또는 안구의 비 강 측면 사이드 쪽으로 당길 때 안구 및 시 신경 주 상해를 피하에 의해 둘러 쌓여 retrobulbar 시 신경에 직접 액세스 합니다. 이 또한 모델 설립, 동안 외과 수술의 공간을 증가 하 고 부분적으로 시 신경 transecting 전에 meningeal 칼 집 격리 수 있습니다. 그것은 실수로 참여와 안과 혈관의 부상 이어질 수 있는 모델의 실패를 통지 해야 합니다. 또한, 모델 transfected 세포, 마약과 transected 부분적으로 시 신경의 그 루터 기에 시 약의 후속 평가 수 있습니다. 자체 디자인된 수술 악기 저렴 하 고 사용된 여러 번 모델링의 비용을 줄일 수 있습니다. 이 방법에 의해 설립 RGCs의 보조 부상 모델 좋은 재현성 및 안정성을 보였다.

<table><tbody><tr><td>동물 마취 인공호흡기 시스템</td><td>MIDMARK</td><td>Matrx VMR</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co.</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>외과 현미경</td><td>Leica AG, Heerbrugg, 스위스</td><td>M620 F20</td><td></td></tr><tr><td>토브라마이신 눈 연고</td><td>Alcon</td><td>H20110312</td><td></td></tr><tr><td>Fluorogold</td><td>Biotium</td><td>80014</td><td></td></tr><tr><td>홍채 가위</td><td>66vision Co.</td><td>54026</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위</td><td>66vision Co.</td><td>54137B</td><td></td></tr><tr><td>날카로운 톱니 모양의 집게/0.12mm 이빨 모양의 집게;</td><td>(주)66vision</td><td>53329A</td><td></td></tr><tr><td>날카로운 곡선 겸자</td><td>66vision Co.</td><td>53324A</td><td></td></tr><tr><td>사파이어 수술용 프로브</td><td>66vision Co.</td><td>50205TA</td><td></td></tr><tr><td>26G 바늘 팁</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co.</td><td></td><td></td>3151474</tr><tr><td>10 &mu; l 해밀턴 주사기</td><td>Hamilton Co.</td><td>80030</td><td></td></tr><tr><td>5-0 비흡수성 봉합</td>사 <td>Johnson & 존슨 인터내셔널 (주)</td><td>W580</td><td></td></tr><tr><td>클로르헥시딘</td><td>시그마-알드리치 282227</td><td></td><td></td></tr><tr><td>입체택시 장치</td><td>RWD Life Science Co.</td><td>68026</td><td></td></tr><tr><td>망막 이미징 시스템</td><td>OptoProbe Ltd.</td><td>OPTO-RIS</td><td></td></tr><tr><td>RetCamII 광시야 이미징 시스템</td><td>Clarity Medical Systems, Inc.</td><td>RetCamII</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td>DM6000</td><td></td></tr></tbody></table> 시리즈

쥐에 있는 부분 시 신경 transection: 망막 신경 절 세포의 2 차 변성을 평가 하기 위해 새로운 수술 방식으로 설립 모델

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

이전 연구에 망막 신경 절 세포 (RGCs)의 2 차 변성 녹 내장에서 일반적으로 발생 하는 것으로 나타났습니다. 부분 시 신경 transection 유용 하 고 재현할 수 모델을 간주 됩니다. 2 차 변성, 예를 들면 완전 한 시 신경 transection와 시 신경 호감 모델 평가 대 한 일반적으로 사용 되 다른 시 신경 상해 모델에 비해, 부분 시 신경 transection 모델은 우수한 기본 구분 제자리에서 2 차 변성. 따라서, 그것은 2 차 변성을 평가 하기 위한 훌륭한 도구 역할을 합니다. 이 연구는 직접 안구의 궤도 측면 벽을 통해 retrobulbar 시 신경의 영역에 액세스 하 여 부분 시 신경 transection의 소설 작용 접근법을 설명 합니다. 또한, 선물이 transection 지원 하기 위해 새롭게 설계 된, 저렴 한 비용 수술 악기. 기본 및 보조 부상 분야의 경계를 구별에 대표적인 결과 같이, 새로운 접근 및 악기 하면 높은 효율과 안정성 모델의 외과 수술에 대 한 충분 한 공간을 제공 하 여. 이 차례로 쉽게 transection 전에 시 신경에서 meningeal 칼 집 및 안과 혈관을 분리 있습니다. 추가적인 혜택은 공간 절약형 요원 이렇게 뒤에 메커니즘의 탐사를 허용 하는 부분적으로 transected 시 신경의 그 루터 기에 약물, 운반대, 또는 선택적 RGC 추적기를 관리 하는 수 사관의 능력을 향상 새로운 방식에서, RGCs에 보조 부상.

SSAI (그림 2A)를사용 하 여 새로운 수술 방식으로 보조 부상 모델의 설립에 관한 성공 확인, RGCs 했다 retrogradely 모델 설립 후 즉시 표시 됩니다. 이 절차의 목적은 신경 추적 염료 (3 %fluorophore (예, Fluorogold) 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수에) 우량한 colliculus (그림 2B)에 주입 하 여 retrogradely 레이블 RGCs 것 이었다. 이 접근의 약간 변이 가진 가능한 RGCs 재현할 수 라벨 생성 합니다. 14 , 15 , 16 , 17 , 18 염료 RGCs 망막에 의해 retrogradely 촬영 될 것 이다 하 고와 오른쪽 눈에 안 transected 축 삭 라이브 RGCs에 대 한 마커를 창설 한다. 한편, RGCs는 오른쪽 눈에 축 삭 하지 추적 염료 (그림 2C)로 분류 될 수 transected 부분적으로 시 신경에 해당 하는. 제어 눈으로 작업, 망막의 시 신경을 따라 RGCs 없이 왼쪽된 눈은 모두 표시 형광 골드 염료와 우량한 colliculus (그림 2D)에서 역행으로.
7 일 부분 시 신경 transection RGCs, 역행 라벨링 한 후는 망막 수확, 고정, 평평 하 게 되었고 탑재. 레이블이 RGCs 망막의 정의 된 영역에서 형광 현미경 아래 몇 군데 있었다. 형광 표시 RGCs 부분 시 신경 transection 없이의 결과 그림 3에 표시 됩니다. 광학 신경의 untransected 부분에 해당 하는 오른쪽 망막 RGCs 형광 금, 표시 했다 레이블 및 레이블 RGCs의 명확한 경계 수만 (그림 3A, 그림 3B), 시각 시연 시 신경의 부분 트랜잭션. 제어 눈, 왼쪽된 눈 망막을 보여주었다 형광 (그림 3C, 그림 3D)의 모든 RGCs로.
평가 여부 시 신경 머리와는 entoretina에 혈액을 공급 하는 안과 동맥 맥 관 구조 손상 되었고 오른쪽 눈 안구 내부 작업 중에 영향을 했다 몇 군데 수술 전후. 이미지 고 전에 오른쪽 눈 (눈 수술) 수술 후 1 시간에 혈액 공급을 보여주었다. 동맥에 있는 혈액은 적절 한. 정 맥의 아무 방해 관찰 되었다. 이러한 연구 결과 표시 (그림 4A, 그림 4B)작업 중 혈액 공급 시스템에 아무 손상도 없었다. 따라서, 2 차 변성 모델 RGCs의 성공적으로 설립 되었다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig1.jpg"> 
그림 1 : 자체 디자인된 외과 조수로 악기, SSAI의 사진. (A) 휴대용 극 및 홈이 있는 머리를 포함 하 여 2 개 주요 부품으로 외과 악기의 파노라마 전망. 그들 사이 50 m m의 길이와 공동 섹션이입니다. 휴대용 극의 길이 100 m m, 그리고 휴대용 극의 직경은 9 mm. SSAI 홈의 (B) A 기능. 홈 붙이 머리의 홈이 있는 표면을 transection 위해 안정 되 고, 누워 시 신경 수 세미 원형 이다. 홈이 있는 표면 200 µ m의 수직 깊이 500 µ m의 너비와 1000 µ m의 길이 이다. 홈 붙이 머리의 가장자리의 폭은 300 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig2.jpg"> 
그림 2 : 자체 디자인된 외과 조수로 악기 (SSAI)와 함께 오른쪽 시 신경의 partial transection 후 망막에 라벨 및 retrogradely는 fluorophore와 우량한 colliculus 라벨 RGC의 회로도. (A) 부분 오른쪽 시 신경이 transection 자체 디자인된 수술 보조 장비 (SSAI) 쥐에서의 수술 보기. (B) 모델링, 후 RGCs 했다 표시 retrogradely 뇌의 우량한 colliculus 신경 추적 염료 (노란색, 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수에 3 %fluorophore) 주입 하 여. RGCs axons 우량한 colliculus에 거주, 이후 추적 염료 RGCs에 의해 retrogradely 촬영은 하 고 라이브 셀에 대 한 마커를 창설 한다. 그림에서 가로 섹션 시 신경의 단면을 나타냅니다. OD, 운영된 눈; 운영 체제, 작업 없이 제어 눈입니다. (C), 시 신경의 untransected 부분에 해당만 RGCs fluorophore와 분류 했다. 구분 되지 않은 복 부 시 신경 및 망막;에 해당 RGCs 블루 대표 레드는 부분적으로 transected 지 시 신경 및 망막에 해당 RGCs 반영합니다. (D)는 망막 수술 없이 왼쪽된 눈 (제어 눈)의 RGCs 했다 모든 분류 염료에 의해. 등 쪽과 복 부 시 신경 모두 뿐만 아니라 염료에 의해 표시 되었다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig3.jpg"> 
그림 3 : 전체 망막 epifluorescence 현미경 fluorophore 표시 RGCs 부분 시 신경 transection 설정한 후 7 일의 모델 및 우량한 colliculus의 라벨 역행. 망막에 RGC 영역 스테인드 Fluorogold의 해당 도식은 또한 제공 됩니다. (A) (C) fluorophore와 각각 라벨링 후 RGCs 오른쪽 (요원)의 망막에 왼쪽 (제어) 눈의 도식 다이어그램을 나타냅니다. 노란색 형광 골드 염료와 함께 표시 하는 영역을 나타냅니다. 망막 등, 복 부 및 중앙 부분으로 나누어져 있습니다. (B) 와 (D) 형광 현미경; 얻은 전체 망막 epifluorescence 현미경 대표 노란은 RGCs fluorophore 표시 영역을 나타냅니다. B에 나와 수술 눈 (오른쪽 눈) 레이블이 없는 지역 RGCs에 해당 하는 망막의 등 쪽에 주로 transected 부분적으로 시 신경의 영역을 나타냅니다. 형광 골드 염료에 의해 표시 된 지역 RGCs transected 하지 이며 주로 망막의 중앙과 복 부 측면에 집중 되어 시 신경에 해당 지역입니다. boundary 레이블 및 레이블 RGCs 영역 사이 분명 하다. RGC 시체의 기본 변성 등 망막에 제한 됩니다 그리고 중앙과 복 부 망막에 RGC 시체의 모든 손실 보조 변성에 기 인할 수 있습니다. (D) 전체 망막 RGCs fluorophore와 라벨링 후 왼쪽된 눈의 photomicrograph. 수술 없이 왼쪽된 컨트롤 눈의 RGCs fluorophore에 의해 얼룩이 완전히 했다. 스케일 바 = 500 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig4.jpg"> 
그림 4 : 수술 전 및 수술 후 이미지 오른쪽 눈의 저의 저 카메라에 의해 획득. (A) 쥐, 오른쪽 눈 수술 전에 저의 이미지는 저, 동맥 작성, 그리고 정 맥 반환 또는 방해의 좋은 혈액 공급을 보여주는 좋은 망막 혈액 공급 시스템을 나타냅니다. (B) 이미지의 오른쪽 눈 수술 후 1 시간의 저. 저의 수술 전 이미지와 비교 하면, 상당한 변경 망막 혈액 공급, 안구의 혈액 공급 시스템 모델링의 과정에서 영향을 받지 했다 나타내는에서 관찰 되었다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig5.jpg"> 
그림 5 : 사진 retrobulbar 시 신경 그리고 안과 동맥의 외과 접근 방식을 통해 캡처한 meningeal 칼 집에 있는. 시 신경의 표적으로 길이 완전히 제거 후 안과 동맥 (화살촉) 시 신경의 meningeal 칼 집과 부수적인 되었고 노출, 시 신경에 병렬. 스케일 바 = 500 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56272/56272fig6.jpg"> 
그림 6 : 시 신경에 기본 및 보조 변성 위치의 회로도. 시 신경의 부분 절 개 자체 디자인된 외과 조수로 악기 (화살표)를 사용 하 여 달성 되었다. 직접 손상 된 사이트 (회색에서 가로 섹션에서 시 신경의 지 느 러 미 절단 사이트)에서 축 삭 받아야 간접적으로 손상 된 사이트 (노란색에서 가로 섹션에서 시 신경의 중앙과 복 부 지역)에 그 기본 변성 2 차 변성을 받 다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56272/56272fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

망막 신경 절 세포 (RGCs)의 2 차 변성 녹 내장에서 일반적으로 발생합니다. 이 연구 부분 시 신경 transection 위한 혁신적인 수술 접근 방법을 설명합니다. 이 공간 절약 요원 접근의 사용 모델의 응용 범위를 확장 하며 보조 부상 메커니즘의 탐사 RGCs에 새로운 방식으로

쥐에 있는 부분 시 신경 Transection: 망막 신경 절 세포의 2 차 변성을 평가 하기 위해 새로운 수술 방식으로 설립 모델

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

망막 신경절 세포의 2차 퇴행은 주로 녹내장에서 발생합니다. 본 논문은 부분 시신경 절단이라는 혁신적인 수술 접근 모델을 설명합니다. 이 공간 효율적인 수술 접근법은 연구자가 부분 절단된 시신경 단면에 약물, 운반체 또는 RGC 선택적 추적자를 투여하는 능력을 향상시키며, 연구자들이 새로운 방식으로 RGC의 2차 손상 기전을 연구할 수 있게 합니다.녹내장은 만성 신경퇴행성 질환으로, 점진적인 신경 병리학적 변화가 오랜 기간 지속됩니다. 안압 상승은 녹내장의 명확한 원인 중 하나이며, 안압을 낮추는 것이 녹내장 치료를 위한 유일하게 확인된 효과적인 치료법임이 입증되었습니다. 그러나 일부 환자의 경우 안압이 조절된 후에도 상태가 더욱 악화될 수 있습니다.따라서 녹내장에서는 RGC의 2차 퇴행이 일어나는 것으로 생각됩니다. 하지만 1차 또는 2차 퇴행과 구체적으로 관련된 메커니즘은 여전히 명확하지 않습니다. RGC의 2차 퇴행 메커니즘은 신경 외상 및 CES 신경퇴행성 질환의 치료 방향을 제시할 것입니다.시신경의 부분 정량적 절단을 돕기 위해, 새롭게 설계된 저비용 수술 기구를 제시합니다. 이 기구는 수동 폴(pole)과 홈이 파인 헤드라는 두 부분으로 구성됩니다. 홈이 파인 헤드는 수직 깊이가 200 micrometers인 반원형이며, 홈이 파인 표면을 통해 복측 시신경을 그 안에 안착시켜 절단을 위해 안정화할 수 있습니다.시신경을 기구의 홈에 놓습니다. 기구의 홈이 파인 표면을 통해 시신경을 고정하여 절단할 수 있습니다. 그런 다음 적절한 바늘 끝이나 칼날 끝을 사용하여 시신경을 수직으로 절단합니다.기구에 의해 복측 부분이 보호되므로 시신경의 배측 부분만 절단된다는 점에 유의하십시오. 뇌수막 초와 연결된 안동맥이 절단되지 않도록 주의하면서 시신경 주변의 경막을 분리하고 해리합니다. 1차 손상은 정량적으로 절단된 시신경 축삭의 배측에 해당하는 RGC에서 발생하며, 2차 손상은 직접적인 손상 없이 절단되지 않은 시신경 축삭의 중앙 및 복측에 해당하는 RGC에서 수행됩니다.수의용 isoflurane 기화기 시스템을 사용하여 쥐를 마취시켰습니다. 수술 중 마취 상태를 모니터링하며 isoflurane 투여량을 적절히 조절하였습니다. 호흡의 깊이와 속도를 지속적으로 평가하고, 5분마다 발가락 꼬집기 평가를 수행하여 심부 통증이 없는지 확인하였습니다.쥐의 오른쪽 면이 위로 향하게 하여 수술대 위에 놓고 머리가 수술 방향을 향하게 합니다. 오른쪽 안구가 수술 시야의 중심에 오도록 조정합니다. 그런 다음 0.5% chlorhexidine과 75% ethanol을 사용하여 오른쪽 안와 피부의 외안각에서 외이도까지 절개 부위를 여러 번 세척합니다.아이리스 가위(iris scissors)를 사용하여 외안각에서 외이도까지의 털을 제거합니다. 아이리스 가위를 이용해 외안각에서 외이도 방향으로 0.5에서 1cm 길이의 피부 절개를 실시합니다. 그런 다음 0.12mm 치상 핀셋(toothed forceps)으로 근막을 집어 위로 당겨 삼각형 쐐기 모양을 만듭니다.Vannas 스프링 가위의 아래쪽 날을 절개 부위에 삽입하고, 피부 가위와 동일한 전단 방향으로 근막을 절개합니다. 특히 외안각의 피하 근막을 절개할 때는 톱니 모양의 정밀 핀셋을 사용하여 표면의 피하 근막을 수직으로 위쪽으로 당긴 후 Vannas 스프링 가위로 근막을 절개하여, 외안각의 안와정맥이 손상되어 과다 출혈로 인해 모델이 실패하는 것을 방지하십시오. 아이리스 가위로 근막을 절개하여 안와정맥을 노출시킵니다.둔성 박리를 사용하여 절개창의 양측을 엽니다. 이 절차의 장점은 혈관을 직접 절단할 때 발생할 수 있는 출혈을 방지할 수 있다는 것입니다. 그런 다음 아이리스 가위(iris scissors)를 사용하여 절개선을 따라 외안각을 절개함으로써 수술 접근 경로를 완전히 확보하고, 이후 진행될 안와 근육의 둔성 박리를 위한 시야를 충분히 확보합니다.근막하 안와 근육의 폴더를 계속해서 클램프로 고정하고, 피부 및 근막 절개 방향으로 수직으로 둔성 박리를 진행합니다. 그 다음, 안와 지방 조직이 나타날 때까지 측면을 따라 점진적으로 분리하여 안와 깊이까지 도달합니다. 이 과정은 안와강의 더 깊은 부분을 개방하여 더 넓은 수술 시야를 확보하고, 시신경 상단에 위치한 조직들에 방해 없이 접근할 수 있게 해줍니다.위의 절차 중 출혈이 발생하면 멸균 외과용 면봉이나 면봉을 사용하여 압박하십시오. 안와 내 지방 조직을 노출시킨 후, 쥐 머리의 방향을 외과의 정면에서 외과의 오른쪽으로 돌립니다. 시신경 주변의 안와근 원추를 덮고 있는 안와 지방 조직을 절제하십시오.이 과정을 통해 적절한 외과적 접근법을 확보하고 노출시킬 수 있습니다. 지속적인 출혈을 방지하기 위해 절제하는 지방 조직의 양을 적절한 범위 내로 유지하십시오. 지방 조직을 절개하면 외측직근이 노출됩니다.외직근을 바깥쪽으로 고정한 후, Vannas 스프링 가위로 절단합니다. 이 과정의 목적은 시신경을 더 잘 노출시키기 위함인데, 외직근은 폭이 훨씬 넓어 시신경의 시야를 분명하게 가리기 때문입니다. 외직근 아래에 여전히 지방 조직이 남아 있다면, 0.12 millimeter 톱니 포셉을 사용하여 시신경을 덮고 있는 지방을 들어 올린 후 Vannas 스프링 가위로 절단합니다.그러면 시신경 주위의 조직초가 보입니다. 시신경이 완전히 노출될 때까지 안와 깊은 곳에서 시신경 방향을 따라 조직초를 계속 분리하십시오. 조직 제거 과정에서 발생하는 소량의 혈액은 수술용 면봉을 사용하여 닦아내어 해당 부위를 깨끗하게 유지하십시오.이제 시신경이 보여야 합니다. 신경에 접근하기 위해 안동맥을 손상시키지 않도록 신경을 둘러싸고 있는 뇌경질막 초를 제거하십시오. 수술용 현미경의 고배율로 경질막의 혈관 패턴을 관찰하며 초를 부드럽게 회전시키십시오.혈관이 없는 부위를 찾아 경막을 따라 세로로 절개합니다. 측면 절개로 인해 혈관이 손상되는 것을 방지하기 위해, 바늘 끝이나 칼끝을 이용하여 시신경 방향과 평행하게 초를 찢어냅니다. 이렇게 하면 신경을 덮고 있는 조직으로는 지주막만 남게 됩니다.이 막은 매우 얇고 투명합니다. 이전 단계와 마찬가지로, 바늘 끝이나 칼끝을 사용하여 시신경 방향과 평행하게 지주막을 조심스럽게 찢어냅니다. 시신경을 기구의 홈 안에 부드럽고 주의 깊게 놓아, 시신경 배측이 홈 헤드의 가장자리보다 약간 높게 위치하도록 합니다.그 후, 니들 팁이나 나이프 끝을 사용하여 그루브 헤드의 플랫폼 가장자리 윗부분에서 배측 시신경을 횡단시켜 부분 시신경 횡단술을 완료합니다. 시신경을 분리하기 위해 기구를 시신경의 수직 방향으로 약간 더 깊게 이동시킵니다. 그런 다음 기구의 그루브 헤드를 조심스럽게 꺼냅니다.추가적인 손상을 방지하기 위해 안근이나 다른 조직을 긁지 않도록 주의하십시오. 그러면 부분적으로 절단된 시신경의 단면을 관찰할 수 있습니다. 외측직근, 근막 및 안구 주변의 다른 조직들을 원래 위치로 되돌려 놓으십시오.그 다음 안와(orbital)의 근육층과 피부층을 순서대로 봉합합니다. 봉합 후 감염을 방지하기 위해 상처 부위에 항생제 연고를 도포합니다. 쥐의 회복 과정 동안 가열 패드로 단열 처리를 하거나 케이지 내에 마른 패드를 깔아줍니다.보온을 위해 담요를 덮어줍니다. 회복 과정 동안 쥐의 기도가 확보되었는지 확인하십시오. 동물들은 수술 후 개별적으로 사육되었으며 세심하게 관찰되었습니다.자체 설계한 수술 보조 기구를 이용한 새로운 수술적 접근법을 통해 2차 손상 모델 구축의 성공 여부를 검증하기 위해, 모델 구축 직후 RGC를 역행성으로 표지하였습니다. 이 절차의 목적은 상구(superior colliculus)에 신경 추적 염료를 주입하여 RGC를 역행성으로 표지하는 것이었습니다. 염료는 망막의 RGC에 의해 역행성으로 흡수되어, 우안에서 축삭이 절단되지 않은 살아있는 RGC의 마커를 제공하게 됩니다.우안에서 부분적으로 절단된 시신경 축삭에 해당하는 RGC들은 Fluoro-Gold로 표지되지 않은 반면, 대조군인 수술을 하지 않은 좌안의 경우, 망막 내 시신경을 따라 분포한 RGC들이 상구로부터 역행성 방식으로 형광 골드 염료로 모두 표지되었습니다. 부분적 시신경 절단 여부에 따른 형광 표지된 RGC의 결과가 나타났습니다. 우안 망막에서 시신경의 절단되지 않은 부분에 해당하는 RGC들만 형광 골드로 표지되었으며, 표지되지 않은 RGC와 표지된 RGC 사이의 명확한 경계가 시각화되어 시신경의 부분적 절단이 입증되었습니다.대조군 안구로서, 왼쪽 눈 망막의 모든 RGCs를 fluorescent gold로 표지하였습니다. 이 이미지들은 수술 전후의 오른쪽 눈 혈류 공급 상태를 보여줍니다. 수술 후에도 동맥에는 여전히 혈액이 공급되었으며, 정맥의 폐쇄는 관찰되지 않았습니다.이는 수술 중 혈액 공급 체계에 손상이 없었음을 나타냅니다. RGC의 이차 퇴행 모델이 성공적으로 구축되었습니다. 잠재적 시신경 절단 모델은 이차 퇴행의 메커니즘을 연구하고 이차 퇴행에 대항하는 신경 보호 약물을 스크리닝하는 데 유용한 동물 모델입니다.이 모델의 핵심은 시신경과 망막 모두에서 일차성 퇴행과 이차성 퇴행을 위치별로 정확하게 구분할 수 있다는 점입니다. 저희가 설계한 기구의 주요 장점은 재현성이 더 높고 조작이 더 쉽다는 것입니다. 숙련되면 초기 진입 절개를 마친 후 각 눈당 전체 수술 과정의 모든 단계를 10분에서 15분 내에 완료할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

시신경의 절개면은 성인 CNS 손상의 널리 사용되는 모델입니다. 망막 신경절 세포의 90 퍼센트 (RGCs)은 누구의 axons 완전히 axotomy 후 14 일 이내에 죽는 (axotomy) 그었 있습니​​다. 이 모델은 실험 조작을 쉽게받을 수있는 고도 재현할 수 있습니다.

시신경의 절개 : 중추 신경계에서 신경 세포의 Apoptosis 성인의 모델

시신경의 절개면은 성인 CNS 손상의 널리 사용되는 모델입니다. 이 모델은 전 세계적으로 망막을 대상에 직접 망막 신경절 세포의 부상의 연결 인구를 대상으로 실험 조작의 번호를 수행하는 데 이상적입니다.

포유류의 CNS에서 시신경의 절개 후 실험에 대한 노는 방법

이 프로토콜은 망막 신경절 retrogradely 세포, 및 이후 망막 신경절 세포 생존과 apoptosis를 분석하기 위해서는 시신경의 호감 부상을하기 위해 레이블을하는 방법을 보여줍니다. 그것은 녹내장을 포함하여 시신경 신경 장해의 종류에 대한 실험 질병 모델입니다.

망막 신경절 세포의 생존을 공부 시신경의 호감 상해 Murine 모델

쥐의 시신경에 직접 주입하는 것은 재생 연구에 유용합니다. 우리는 두개골을 열지 않는 쥐의 시신경에 직접 주입하는 최소 침습적 기술을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 수술 합병증을 최소화하고 회복 속도가 빨라집니다.

쥐 시신경에 주입을위한 최소 침습 기술

이 프로토콜의 목적은 화학적 랫트 후부 시신경에 허혈 손상을 유도하는 것이다. 이 모델은 후방 허혈성 시신경 병증의 병태 생리에 대한 연구 및이를위한 치료 적 접근 방법과 다른 광섬유에 중요한 신경 병증,뿐만 아니라 다른 CNS 허혈성 질환이다.

광 화학적으로 유도 된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델

녹내장은 망막 신경절 세포의 손상이 특징입니다. 동물 모델에서 녹내장을 유도하면 이 질병에 대한 연구에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기에서는 생체 내 쥐 모델에서 망막 신경절 세포의 소실을 유도하고 분석을 위한 전체 마운트 망막의 준비를 보여주는 절차를 간략하게 설명합니다.

녹내장 유도 절차<em&gt; 생체</em&gt; 쥐 모델 및 전체 마운트 망막 준비

다음 보고서는 적절한 염료, 콘택트렌즈 및 레이저 매개변수를 사용하여 비동맥 전방 허혈성 시신경병증(rNAION)의 설치류 모델을 복제하는 방법을 설명합니다. 또한 in vivo에서 rNAION 병변을 평가하기 위한 적절한 단계를 밝힙니다.

Nonarteritic 전방 허혈성 시신경 병증의 설치류 모델 (rNAION)

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

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이 논문은 표준 안과 수술 기법을 사용하여 토끼 모델에서 시신경 압착을 수행하기 위한 자세한 지침을 제시합니다.

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이 프로토콜은 주사를 위해 쥐의 시신경에 접근하기 위해 경결막 접근법을 사용하는 독특한 기술을 설명합니다.

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학습하세요 쥐의 부분 시신경 절단 수술법으로 망막 신경절 세포의 2차 변성 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 혁신적 기법은 녹내장 신경퇴행성 질환 연구에 활용됩니다.

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