Name: 대량 절연 및 인간의 혈액 우연 Schistosoma Mansoni 의 Intramolluscan 단계의 생체 외에서 재배 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 5 s
Description: 배우세요 Schistosoma mansoni 미라시디아의 대량 분리 및 체외 배양 방법을. 이 기술은 조충증 연구와 기생충 질병 퇴치에 필수적인 도구입니다.

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NIH 그랜트 RO1AI015503에 의해 일부를 투자. Schistosome에 감염 된 쥐 바이 리소스를 통해 배포에 대 한 NIH NIAID 계약 HHSN272201000005I 통해 NIAID Schistosomiasis 리소스 센터 생물 의학 연구소 (락 빌, 메릴랜드)에 의해 제공 되었다.

모든 동물 보호 및 실험 절차 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 위스콘신-매디슨 대학 의정서에 의해 승인 되었다 아니. V005717입니다. 다음 프로토콜 포함 인간 병원 체에 대 한 Biosafety 수준 2 (BSL2) 시설에서 근무 없음이 프로토콜에 묘사 된 schistosome 단계는 인간이 나 다른 포유류를 감염 있습니다. 위험 그룹 2 (RG2) 인간 병원 체를 처리 하는 기관의 정책을 따릅니다.
참고: 우리가 사용 하 여 감염10, 그들의 더 높은 민감도 때문 (6 주 된) 여성 스위스-웹스터 쥐 그로 인하여 더 큰 계란 부담 저조한. 터 커 외. 이 모델 시스템11에 사용 되는 마우스 및 달팽이 감염 프로토콜을 설명 합니다. 테이블의 자료 의 특정 장비, 재료, 시 약 및 동물 소스가 실험 프로토콜을 수행 하는 데 필요한 모든 나열 합니다.
1. 감염 된 간을의 처리
<ol><li>CO2 질 (분당 챔버의 볼륨의 10-30%의 속도)에 의해 감염 된 6-7 주 후, 마우스를 안락사. 호흡 및 심장 박동의 정지에 대 한 마우스를 모니터링 합니다. 참고: 일반적으로, 20 쥐까지 처리할 수 있습니다 주어진된 시간에.</li>
	<li>Biosafety 내각에 안락사 마우스를 옮긴 후 그들의 뒤에 마우스 놓고 그들의 복 부 표면을 70% 에탄올 스프레이 합니다. 1 분 동안 담가 보자.</li>
	<li>꼬집어 낮은 복 부의 피부를 당겨 하 고 메 마른 외과 위 복 부에 가장 가까운 슬쩍된 피부의 기지에서 잘라. Anteriorly 잘라 피부를 당겨 (즉, 머리 쪽으로) 간 공개. Note 간 확대 하 고는 계란 유도 granulomatous 응답 (그림 2A)으로 인해 얼룩 덜 룩 합니다.</li>
	<li>간 제거 하 고 포함 하는 살 균 1.2 %NaCl 솔루션 포함 펜/strep의 200 mL 비 커에 배치.</li>
	<li>1.3-1.4 나머지 마우스 단계 반복 합니다. 참고: 20 쥐 단일 수확 일반적으로 처리 됩니다.</li>
	<li>멸 균 페 트리 접시에는 간을 놓고 소독 집게와 비 간 지방/결합 조직을 제거 합니다.</li>
	<li>펜/strep 살 균 1.2 %NaCl 솔루션의 ~ 200 mL를 포함 하는 메 마른 250 mL 원심 분리기 병 정돈/청소 간 전송.</li>
	<li>적극적으로 포함 하는 간 병을 동요 하 고, 거품/부동 파편 초과 표면 제거 살 균 일회용 피 펫을 사용 하 여. 천천히 용기에 남은 소금물을 부 어 또는 싱크대 포함 1% 표 백제 (소독 제).</li>
	<li>있는 간은을 신선한 염 분 해결책의 ~ 200 mL를 추가 하 고 단계 1.8 세 번 더 반복.</li>
</ol>2. 간 추출 및 miracidial 격리
<ol><li>작은 살 균 스테인리스 믹서 기 컵에는 간을 놓고 1.2 %NaCl 용액 (그림 2B)의 ~ 2 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>호 일와 유출 방지 하기 위해 낮은 및 높은 속도 (20 s 낮은 속도/10의 고속; 반복)를 대체 하 여 1 분 동안 혼합 배양 접시 컵 커버 (그림 2C).</li>
	<li>(20 간 4 병을 사용)에 대 한 균등 하 게 살 균 250 mL 원심 병에 혼합된 간 정지를 배포 합니다.</li>
	<li>~ 200 mL 전체 볼륨/병에 항생제와 살 균 염 분을 추가 합니다. 체중/밸런스 원심 분리 전 병.</li>
	<li>원심 분리기 4 oc. 부드럽게 15 분 290 x g에서 혼합된 간 부 supernatants 어 버리기 전에 표 백제와 함께 용기에.</li>
	<li>2.4-2.5 단계를 한 번 반복 합니다. 철저 하 게 원심 분리에 앞서 간 토사를 resuspend 해야 합니다.</li>
	<li>마지막 염 분 삭제 후 세척 (단계 2.6), 수송과 간 조직, 침전 물, resuspend 알루미늄으로 완전히 덮여 있다 멸 균된 1 L 체적 술병에 정지를 전송 하는 악수에 펜/strep 메 마른 연못 물 200 mL를 추가 호 일 톱 목 (그림 2D)의 3 cm 제외 참고: 1 L 플라스 크 당 두 병 (= 10 간)를 사용 합니다. 연못 물 계란에서 부 화 miracidial를 자극 하는 데 필요한 자연 민물 환경을 시뮬레이션 합니다.</li>
	<li>메 마른 연못 물을 사용 하 여, 목에 취재 호 일 위에 약 3 cm에 플라스 크를 작성. 다음, 지체 없이 (로 miracidia는 곧 부 화 하기 시작), 잔여 거품과 간 조직 파편을 포함 하는 연못 물 ~ 12 mL를 pipetting 신속 하 게 하 여 표면에 부동을 제거 하 고 튜브를 취소는 별도의 삭제. 신선한 메 마른 연못 물 바꿉니다.</li>
	<li>청소 단계 2.8, 3 더 많은 시간, 폐기 관에 miracidia의 존재에 대 한 검사를 반복 합니다. Miracidia 세척 솔루션에 표시 하는 경우 단계를 청소의 반복을 중단.</li>
	<li>마지막 세척 후 천천히 위에 깨끗 한, 마른 따뜻한 물으로 온도 기울기를 만들려고 따뜻한 메 마른 연못 물 (미리 30 oC 예 열) ~ 12 mL를 추가 합니다. 참고:이 가장 천천히 혼합을 피하기 위해 플라스 크 목의 측면을 따라 물 방전에 의해 수행 됩니다.</li>
	<li>플라스 크 오프닝에 작은 배양 접시 덮개를 배치 하 고 수 위 면을 밝히는 포 일 덮개 위에 플라스 크의 위쪽에 밝은 빛을. 참고: 일반적으로 5-10 분 이내 수영 miracidia, 매력, 빛을 집중할 것 이다 연못 물 (그림 3A)의 첫 2-3 cm 내에서 많은 수에서.</li>
</ol>3. Miracidial 수확 및 재배
<ol><li>Miracidia 10 분 후 표면에 축적, 살 균 전송 피펫으로 사용 하 여 제거 ~ 8 mL 연못 물과 살 균 15 mL 원심 분리기 튜브를 전송 합니다. 얼음에 miracidia를 포함 하는 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>다시 8 mL 부피 플라스 크의 내부를 따라 따뜻한 메 마른 연못 물 추가 하 고 다른 10 분 기다립니다.</li>
	<li>매번 새로운 튜브를 사용 하 여, 3.1, 3.2 단계 세 번 더 반복 합니다. 4번째 컬렉션 후 정착 miracidia 수 있도록 10 분 동안 얼음에 최종 관 유지. 튜브의이 세트 구성 첫 수확.</li>
	<li>원심 분리기 튜브 290 x g 4 oC에서 미리 냉각된 냉장된 원심 분리기에서 1 분 동안에 miracidia를 포함 하.</li>
	<li>바로 기생충 펠 릿 (그림 3B)를 방해 하지 않도록 주의 되 고 상쾌한 (~ 7 mL)의 대부분을 제거 합니다.</li>
	<li>수영장 하나에이 첫 번째 추수에서 모든 miracidia 튜브, ~ 1 mL 균 연못 물으로 원래 관의 모든 씻어 그리고 "합동된" 튜브에 추가.</li>
	<li>~ 5 분 동안 얼음에 정착 하는 기생충을 허용 하 고 다시 원심 290 x g 4 oc.에 1 분 동안에 기생충</li>
	<li>조심 스럽게는 상쾌한을 제거 하 고 6-8 mL 살 균 Chernin 소금 솔루션 (CBSS +; 참조 테이블의 재료) 포함 펜/strep 균형 추가.</li>
	<li>부드럽게 miracidia와 약 수 24-잘 문화 접시 (우물 당 1 mL)으로 6-8 ml CBSS + 튜브를 헹 구 고 린스의 1 mL 각 잘 추가 다음 일시 중단 합니다. 26 oC normoxic 조건에서 기생충 알을 품으십시오. 격리 된 miracidia의 농도, 다르지만 ~ 7000/mL 평균 일반적으로 것입니다.</li>
	<li>기생충은 아직도 광원에 집중, 단계 3.1 3.9 늦은 해칭 miracidia 수확 계속 반복 하지만 컬렉션 15-20 분 사이의 시간 간격을 증가. 참고:이 새로운 집합 관의 두 번째 수확을 나타냅니다. 그러나, 일반적으로 miracidial 숫자는 낮은, 때문에 일반적으로 모든 튜브에서 애벌레 잘 CBSS + 2 mL를 포함 하는 단일 문화권에 풀링됩니다.</li>
	<li>수확 후 24 h와 재배, 부드럽게 pipetting으로 그들의 우물에서 sporocysts resuspend.</li>
	<li>우물의 바닥에 침전 하는 기생충 수 있도록 몇 분을 기다립니다. 그들은 정착, 신중 하 게 상쾌한 (~1.5 mL), 애벌레 변환 하는 동안 miracidia에 의해 창 고 ciliated 상피 접시의 대부분을 포함 하는 제거. 이 "변환" 표면에 뜨는 폐기 하거나 애벌레 분 비 제품의 후속 연구에 통합 될 수 있습니다.</li>
	<li>각 잘 고 부드럽게 sporocysts resuspend에 피 펫의 신선한 CBSS + 1.5 mL를 추가 합니다. 추가 세척 또는 다른 매체를 변경 원하는 경우 단계 3.12를 반복 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

S. mansoni, 절연 및 여기에 설명 된 대로 조작의 Miracidia만 달팽이 중간 호스트를 감염 시킬 수 있습니다 그리고 그러므로 애벌레 발달의이 단계 동안 인간의 생물 학적 변하지 않습니다. 그러나, 감염을 피하기 위해 사고 노출/달팽이의 배려는 감염 Biomphalaria 달팽이 종 수 있습니다 존재 또는 유지 하는 지역에서 다른 위치에 miracidial 격리를 수행 하기 위해가지고 한다. BSL2 공간으로, 등록 된 별도 룸이 좋습니다. 또한, 모든 세척 간 및 애벌레 절연 처리에 사용 되는 솔루션 살 균 제 (예를들면, 1% 표 백제) 전에 대우 되어야 한다.
그것은에서 간은의 외과 제거 감염 마우스 및 혼합 균질 전에 그들의 후속 처리 생물 안전 캐비닛 (BSC) 무 균 조건 하에서 수행 됩니다 주목 해야한다. 그러나, (대량 샘플 조작의 용이성) 실용적인 이유로 다른 모든 절차 수행 됩니다 소독된 벤치탑 살 균...

인간의 혈액 마리가 Schistosoma 종, schistosomiasis, 한 약된 230 백만 사람들 전세계1afflicting 소홀히 열 대 질병의 원인이 되는 에이전트입니다. 가장 광범위 한 종, Schistosoma mansoni, 지리적으로 남아메리카, 카리브 제도, 중동, 사하라 사막 이남의 아프리카2에 배포 됩니다. S. mansoni, 다른 schistosomes의 수명 주기는 복잡 하다, 포유류 확실 한 호스트 및 의무 중간 호스트 역할 속 Biomphalaria 의 민물 달팽이.
S. mansoni 남성과 여성의 성인 웜은 쌍 창 자 점 막의 작은 venules에 박 혀 되 embryonated 계란 (ova)의 출시에 따른 포유류 호스트 재현의 후부 mesenteric 정 맥에서 생활 합니다. 계란 다음 혈관 벽을 통해 휴식 점 막 조직을 통해 마이그레이션 하 고 결국 대변으로 무효 처리는 어디 장 루멘을 입력 합니다. Ova는 민물 및 free-swimming 애벌레 (miracidia) 해치를 입력, 그들은 해야 합니다, 짧은 순서로 찾아 감염의 수명 주기를 계속 하기 위해 적당 한 Biomphalaria 달팽이. 이 감염 과정 miracidial 첨부 파일을 달팽이 외부 몸 표면 활성 침투와 유 충의 항목 호스트에 다음을 포함 한다. 항목, 직후는 miracidium 다음 애벌레의 단계로, 기본 또는 어머니 sporocyst의 새로운 외부 표면 (tegument) 될 것 이다 syncytium 형성으로 그것의 외부 ciliated 상피 접시를 발산 하기 시작 합니다. 성별이 없는 재생산을 통해 각 기본 sporocyst 생성 하 고 보조 나 sporocysts 또는 딸 sporocysts, 차례 차례로, 생성 하 고 intramolluscan 결선, cercaria3 의 다 수 출시의 2 세대를 출시 . 달팽이 호스트에서 탈출, 따라 free-swimming cercariae를 연결 하 고 직접 인간 또는 다른 적합 한 포유류 호스트의 피부를 관통 할 수 있다. 그들의 새로운 주인으로 입국, 시 cercariae 기생 schistosomula 단계로 변환 하 고 혈관 시스템을 침공. 그들은, 차례 차례로, 폐 그리고 그들이 어른 벌레로 성숙, 남성과 여성의 쌍을 형성 하 고 그들의 수명 주기를 완료 하는 데 mesenteric 정 맥에 여행 간 정 맥을 마이그레이션합니다.
성공 intramolluscan 또는 "달팽이 단계" 개발 애벌레 schistosomes의 인간의 호스트-전송의 사이클의 지속에 필수적 이다. 중요 한 중요성의 달팽이 호스트와 기본 sporocyst 단계에 그것의 초기 변화에 free-swimming miracidium의 기간 다음 항목이입니다. 호스트와 기생충 간의 생리 및 면역학 호환성에 따라 그것은 애벌레의 개발의이 단계는 초기 성공 또는 실패 결정된4,5,6 감염을 설치 하 . 기본 sporocysts asexually 다음에 인간 infective cercariae 생성, 보조 sporocysts 생산 능력의 후속 개발 추가 모든 기생충의 성장을 제공 하는 관대 한 생리 호스트 환경을 요구 하 고 생식이 필요합니다.
날짜 하려면, 작은 기본 생리, 생화학에 대 한 알려져 있다 및 분자 과정 schistosome-달팽이 상호 작용 제어, 애벌레의 개발 및 재생산, 규제 또는 조절에 관여 하는 특히 분자 및 경로 호스트 면역 응답입니다. 준비에 대 한 액세스 조건 하에서 생체 외에서 문화 실험 조작을 허용 하는이 애벌레 단계의 많은 것 크게 용이 하 게 개발 통로의 발견 및 세포 성장, 감 별 법의 기본 메커니즘 그리고 재생산입니다. 중요 한 기생충 경로 또는 메커니즘, 생체 외에서 실험을 통해 확인 된 다음 사용할 수 애벌레 성장/달팽이 호스트에서 복제를 중단 하거나 달팽이 호스트 면역 메커니즘 인식과의 제거에 관련 된 식별 miracidial 또는 sporocyst 단계.
이 문서 및 비디오 프레 젠 테이 션, free-swimming S. mansoni 의 많은 수를 분리 하는 방법에 대 한 자세한 설명을 제공 후속 실험 대상이 될 수 있습니다 생체 외에서 문화에 대 한 소개에 대 한 miracidia 조작 (프로토콜 워크플로의 도식 개요 그림 1 참조). 비슷한 절차 설명 되어 있지만 이전7,,89, 우리 상세한 프로토콜 관련이 아직도 대답 없는 질문을 해결 하기 위해이 모델을 채용 하고자 하는 연구자에 유용할 느꼈다 intramolluscan 애벌레 발달, 세포질 확산, 그리고 schistosome-달팽이 면역 상호 작용. 또한,이 이렇게 쉽게 방광-아리 스토 S. haematobium, 간 마리가 또는 폐 마리가 같은 다른 의학적으로 중요 한 흡 충 류에서 계란의 격리에 대 한 적응 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Chernin의 균형 잡힌 소금 용액 (CBSS+)</td><td></td><td></td><td>1L의 용액</strong</td></tr><tr><td>>2.8 g 염화나트륨</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td>은 <td>염화칼슘을 제외한 소금을 용해하고, 그리고&nbsp;</td></tr><tr><td>염화칼륨 0.15g&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5405</td><td>설탕 800 mL ddH2O</td></tr><tr><td>0.07 g 인산나트륨, 이염기 무수</td><td>Fisher Scientific</td><td>S374-500</td><td>염화칼슘을 200&nbsp;</td></tr><tr><td>0.45g 마그네슘 황산염 헵타하이드레이트&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1880</td><td>mL ddH2O</td></tr><tr><td>0.53 g 칼슘 클로라이드 디하이드레이트&nbsp;</td><td>Mallinckrodt</td><td>4160</td><td>천천히 소금/설탕 졸에 칼슘 졸른을 첨가하십시오.</td></tr><tr><td>0.05g 중탄산 나트륨&nbsp; &nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233-3</td><td>지속적으로 혼합</td></tr><tr><td>1 g 포도</td>당 <td>MP Biomedicals</td><td>152527</td><td>pH 7.2로 조정하고 필터를 사용하여 살균합니다.</td></tr><tr><td>1 g 트레할로스</td><td>시그마-알드리치</td><td>T0167</td><td>0.22 &마이크로; m 일회용 병탑 필터</td></tr><tr><td>10 mL 100X 페니실린/스트렙토마이신</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td>필터링된 페니실린과 스트렙토마이신 soln&nbsp를 추가합니다. 이전 사용</td></tr><tr><td>Incomplete Bge&nbsp; medium(Ibge)</td><td></td><td></td><td>900 mL 용액의 경우</strong</td></tr><tr><td>>220 mL Schneider' s 초파리 배지 변형</td><td>Lonza</td><td>04-351Q</td><td>믹스 슈나이더 배지 680 mL ddH2O</td></tr><tr><td>4.5 g 락트 알부민 효소 분해물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9010</td><td>락 알부민 가수 분해물 및 갈락토스</td></tr><tr><td>1.3 g 갈락토스</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G0625</td><td>pH 7.2로 조정하고 0.22 &micro를 사용하여 필터 살균; m 사전 멸균된 일회용 병탑 필터</td></tr><tr><td>완전한 Bge 매체 (cBge)</td><td></td><td></td><td>100 mL의 용액</strong</td></tr><tr><td>>90 mL 불완전한 Bge 매체</td><td></td><td></td><td>FBS를 가열비활성화하려면: 해동된 FBS를 incubate&nbsp;</td></tr><tr><td>9 mL 열 inact. 태아 소 혈청 (FBS) (Optima)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S12450</td><td>수조 60°C; C 1시간 동안 부드럽게 &nbsp;</td></tr><tr><td>1 mL 100X 페니실린/스트렙토마이신</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td>매 10분마다 병을 휘젓습니다 15-mL 튜브에 FBS 열 비활성화; 및 -20&deg;C.&nbsp;에 보관하십시오. 매체 + FBS 및 필터를 혼합하여 0.22 &micro를 사용하여 멸균합니다. M 사전 살균&nbsp; 일회용 보틀탑 필터&nbsp; 사용 전에 페니실린과 스트렙토마이신을 추가하십시오</td></tr><tr><td>Pond water (stock solution)</td><td></td><td></td><td>1L의 stock solution</strong</td></tr><tr><td>>12.5 g 칼슘 카보네이</td>트 <td>Fisher Scientific</td><td>C64-500</td><td>모든 염을 ddH2O</td></tr><tr><td>1.25 g 마그네슘 카보네이트 1L</td>에 혼합하십시오. <td>Fisher Scientific</td><td>M27-500</td><td>주의하십시오. 염이 완전히&nbsp;</td></tr><tr><td>1.25 g&nbsp; 나트륨 염화</td>물 <td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td>용해.&nbsp; 세게 흔들어 중단시키세요&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>0.25 g&nbsp; 칼륨 클로라이드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5405</td><td>염을 만들기 전에 솔른&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td><강한>연못 물 (작동 용액)</강한></td><td></td><td></td><td><강한>1.5L 용액</강한</td></tr><tr><td>>0.8 mL 주식 용액 연못 물 (사용 전 쉐이크) in&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td>ddH2O</td></tr><tr><td>1500 mL의 ddH2O</td><td></td><td></td>에 스톡을 혼합하여 <td>고압멸균으로 연못 물을 살균합니다(느린&nbsp; 주기)</td></tr> <tr><td>100X 페니실린/스트렙토마이신 1.5mL;</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td>사용 전 페니실린과 스트렙토마이신을 추가합니다</td></tr><tr><td>Saline (1.2% NaCl)</td><td></td><td></td><td>1.5L of solution</td></tr><tr><td>18 g sodium chloride를 ddH2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td>오토클레이브 식염수</td></tr><tr><td>1.5mL에 추가하여 100X 페니실린/스트렙토마이신 1.5mL</td>를 살균합니다 <td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td>사용 전에 페니실린과 스트렙토마이신을 추가하십시오</td></tr><tr><td><강력한>추가 장비 및 재료:&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-L 마우스 안락사 챔버</td><td></td><td></td><td>승인 IACUC 프로토콜 번호 V001551</td></tr><tr><td>Mice</td><td>Taconic Biosciences</td><td></td><td>Swiss-Webster, 암컷, 6-wk, murine&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>CO2 탱크 및 조절기</td><td></td><td></td><td>병원균이 없는</td></tr><tr><td>24웰 조직 배양 플레이트</td><td>TPP</td><td>92424</td><td></td></tr><tr><td>1-L 부피 플라스크</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>광원(150W)</td><td>Chiu Tech Corp</td><td>모델 F0-150</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기, 냉장, 스윙 버킷</td><td>Eppendorf</td><td>모델 5810R</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 병 (250 mL)</td><td>Nalgene</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15-mL 원심분리 튜브, 멸균</td><td>Corning</td><td>430053</td><td></td></tr><tr><td>멸균 일회용 이송 피펫&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>1371120</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &마이크로; M 사전 멸균된 일회용 병탑 필터&nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>SCGPS05RE</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 블렌더</td><td>Waring Commercial</td><td>Model 51BL31</td><td></td></tr><tr><td>블렌더 컵, 100 mL 용량</td><td>Waring 상업용</td><td></td><td></td></tr><tr><td>반전 복합 현미경</td><td>Nikon Instruments&nbsp;</td><td>이클립스 TE300</td><td></td></tr></tbody></table>

대량 절연 및 인간의 혈액 우연 schistosoma mansoni 의 intramolluscan 단계의 생체 외에서 재배

Mass Isolation and In Vitro Cultivation of Intramolluscan Stages of the Human Blood Fluke Schistosoma Mansoni

인간의 혈액 마리가, Schistosoma 종, 달팽이 중급 및 포유류 최종 호스트, 내 성적, 성적 발달 단계를 각각 포함 하는 복잡 한 수명 주기 있다. 격리 하 고 생체 외에서 문화 조건 하에서 다른 라이프 사이클 단계를 유지 하는 능력은 크게 기생충 성장, 개발 및 호스트 통제 세포, 생화학 및 분자 메커니즘의 조사를 촉진 상호 작용입니다. 전송 schistosomiasis의 성별이 없는 재생산 및 달팽이 호스트; 내에서 여러 개의 애벌레 단계 개발 필요 기본 및 보조 sporocysts 통해 infective miracidium에서 cercarial 막바지에 그것은 인 간에 게 감염입니다. 이 문서에서 우리는 대량 해칭 및 감염 된 마우스, 그리고 생체 외에서 문화에 그들의 연속적인 소개의 간은에서 얻은 달걀에서 Schistosoma mansoni miracidia의 격리에 대 한 단계별 프로토콜 제시. 자세한 프로토콜에 종사 schistosome 연구의이 중요 한 분야를 확대 하는 새로운 연구를 격려 할 것 이다 예상 됩니다.

Miracidia의 대부분은 일반적으로 것 이다 되었습니다 수집 처음 두 "추수"에. CBSS +에서 고립 된 miracidia의 부 화 (그림 4A-C) miracidium sporocyst 변환 프로세스를 트리거합니다. 첫 번째 시간 문화에 다음 전송 우물 CBSS +, miracidia 중지 수영 (그림 4A)의 대다수를 포함 하. 문화에 6 h, miracidia 적극적으로 그들의 ciliated 표 피 판 (그림 4B)를 흘리 고 과정에 있습니다. 이 발산 과정 일치, 애벌레 형성 그들의 외부 syncytial tegumental 덮개 대로 그들은 기본 sporocysts를 변환 합니다. 기생충의 대부분 CBSS + (그림 4C</str...

이 문서에서는 대규모 axenic 분리와 인간의 혈액 요 행 Schistosoma mansoni 의 free-swimming miracidia의 컬렉션에 대 한 프로토콜 및 생체 외에서 문화에 대 한 소개에 대 한 그들의 후속 처리.

대량 절연 및 인간의 혈액 우연 Schistosoma Mansoni 의 Intramolluscan 단계의 생체 외에서 재배

Human blood flukes, Schistosoma spp., have a complex life cycle that involves asexual and sexual developmental phases within a snail intermediate and ...

이 비디오에서는 자유 수영 Schistosoma mansoni miracidia의 대규모 부화 및 격리와 후속 체외 배양 도입에 대한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다. 주혈흡충 만소니(Schistosoma mansoni)는 전 세계적으로 2억 명 이상을 감염시키는 4가지 주요 흡충 종 중 하나로, 주혈흡충증(Schistosomiasis)으로 알려진 방치된 열대성 질병을 유발합니다. 주혈흡충 생활주기는 달팽이가 중간 숙주로, 인간을 포함한 포유류가 최종 숙주로 포함되는 복잡합니다.유충과 성체 주혈흡혈의 체외 배양은 이 기생충 질병의 통제와 제거를 위한 연구를 진전시키는 데 매우 유용한 도구입니다. 이 비디오에서는 마우스 모델을 사용하여 달팽이에 감염된 미라시디움 단계를 포함하는 S.mansoni 난자를 생산하고, 간에서 회수한 난자와 체외 배양에서 부화한 미라시디아를 대량 분리하는 절차를 단계별로 설명합니다. 이 시연에서 저를 도와준 사람은 나탈리 딩귀라르(Nathalie Dinguirard)와 코디 하이네만(Codie Heinemann)입니다.다음은 함께 제공되는 비디오에서 다룰 세 가지 주요 단계를 보여주는 워크플로우 다이어그램입니다. 첫 번째 부분에서는 감염된 간의 처리 과정을 설명합니다. 주혈흡충 만소니 성충에 감염된 쥐를 사용하여 감염된 간을 제거하는 방법과 비간 조직을 제거하고 멸균 식염수로 세척하는 것을 포함하여 조직 혼합을 준비하는 데 사용되는 단계를 설명합니다.두 번째 부분에서는 간에서 난자를 추출하고 miracidia를 분리하는 방법을 보여줍니다. 난자는 기계적 혼합에 의해 간에서 방출된 후 원심분리에 의해 식염수에서 균질화된 간 조직을 반복적으로 세척합니다. 그런 다음 알을 포함하는 펠릿화된 간 조직을 멸균된 인공 연못 물에 다시 현탁시키고 호일로 덮인 부피 플라스크로 조심스럽게 옮깁니다.과도한 거품과 떠다니는 간 파편은 약 12밀의 연못 물을 신속하게 순차적으로 제거하고 플라스크에 추가함으로써 제거됩니다. 마지막 세척 후, 미리 데워진 연못 물을 플라스크에 부드럽게 첨가 한 다음 밝은 광원으로 플라스크 목의 상단 몇 센티미터를 조명하여 miracidia를 끌어 당깁니다. miracidia가 광원에 축적되면 비디오의 세 번째이자 마지막 부분에서 이러한 유충의 수집과 재배를 시연합니다.Miracidia는 플라스크에서 15ml 원심분리 튜브로 이송됩니다. 그런 다음 얼음 위에서 고정시키고 원심

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

Cercarial 변화와 체외에서</em의> 양성 Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosoma mansoni 달걀은 T 도우미 유형 2 (Th2) 면역 반응, 기생충 감염의 특징, 천식과 알레르기 염증의 강력한 stimulators 있습니다. 이 프로토콜은 S.을 활용 CD4 Th2 시토킨 유도된 염증성 계란 주위에 폐 granuloma 형성을 특징으로 폐에 반응, eosinophilia와 대식 세포 대안 활성화를 생성하는 mansoni 계란 분사.

에서 계란을 사용하여<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; 등<em&gt; 생체내에서</em기생충 유도된 폐 염증의&gt; 모델

<em&gt; 체외에서</em공부하기&gt; 공동 감염 모델<em&gt; Plasmodium falciparum</em인간의 기본 단핵구 파생 면역 세포에서&gt; - HIV-1 상호 작용

Heligmosomoides의 polygyrus 밀접 높은 널리 인간의 기생충 감염의 것과 유사 강력한 면역 조절 기능이있는 쥐의 선충이다. 여기에서는 H.의 장기적인 유지 관리 프로토콜을 기술 polygyrus 라이프 사이클.

재배<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus :</em&gt; 면역 선충 기생충과 은닉하는 제품

여기에서는 거대 바이러스의 새로운 아스파르바이러스 관련 계통인 파우스토바이러스의 새로운 유전자형을 특성화하기 위한 바이러스 분리의 최신 발전에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 바이러스, 특히 아메바를 감염시키는 거대 바이러스의 고처리량 격리에 적용할 수 있습니다.

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Isolation And Dendritic Cell-Uptake of Small Extracellular Vesicles from Echinococcus granulosus(Echinococcus granulosus에서 작은 세포외 소포의 분리 및 수지상 세포 흡수)

배우세요 Schistosoma mansoni 미라시디아의 대량 분리 및 체외 배양 방법을. 이 기술은 조충증 연구와 기생충 질병 퇴치에 필수적인 도구입니다.

대량 절연 및 인간의 혈액 우연 Schistosoma Mansoni 의 Intramolluscan 단계의 생체 외에서 재배

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