Name: FITC 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 학습하세요 FITC-알부민 정맥주사를 이용한 마우스 혈액-뇌 장벽 투과성 평가 방법을 통해 신경퇴행성 질환 연구에서 뇌 항상성과 장벽 손상의 관계를 탐색하는 빠르고 효율적인 실험 기법을 익히세요.

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이 작품 "피코 Neuromed"에 의해 지원 되었고 건강 V.M. 게 "검색 전류"의 이탈리아 정부에 의해 자금

IRCCS Neuromed 동물 관리 검토 위원회에 의해 그리고 동물에 대 한 모든 절차 승인 &#34; Istituto 레 디 Sanità &#34; (허가 번호: 1163/2015-홍보) EU 지시문 2010의 지침에 따라 했다 / 63/EU 동물 실험에 대 한.
 1. 경 정 맥에 주입 FITC 민 솔루션의 준비 참고: 모든 실험 했다 매니페스트 (11 주 된) HD R6/2 마우스에 고 나이에 날 라와 일치 하는 성별 야생-타입 (WT) 제어 littermates.
<ol><li>디졸브 FITC-알 부 민 분말 (재료의 표 참조) 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)에 10 mg/ml에서. 
	참고: 최적의 결과 얻으려면이 준비 되어야 한다 신선한 각 라벨 반응.</li>
</ol> 2. 수술에 동안 사용 장비의 준비 <ol><li>이전 압력가 수술 도구 (재료의 표 참조) 때 려 눕.</li>
	<li>알코올 (70% 에탄올 솔루션) 수술 벤치 청소. 외과 살 균 일회용 수건 드 레이프와 외과 영역 (45 x 45cm)를 준비 하 고 운영 stereomicroscope 설정.</li>
</ol> 3. 경 정 맥에 FITC 알 부 민 주입에 대 한 수술 <ol><li>마 취에 대 한 마우스 몸 무게 기록.</li>
	<li>케 타 민 (100mg/kg)-xylazine (10 mg/kg) 솔루션의 적절 한 복용량의 복 주사 (i.p)와 Anesthetize 마우스.</li>
	Walantus 외. 에서처럼 부드러운 발가락 핀치에 의해 <li>모니터 동물 진정 반사를 철회 11 , 12.</li> <li>보여지는 부정사 위치에 마 취 마우스를 놓고 접착 테이프로 수술 작업 대에 4 개의 다리와 꼬리를 수정.</li>
	<li>마우스 확보 후 신중 하 게 면도 전기 면도기와 함께 목에 적절 한 수술 여백 (재료의 표 참조) 및 povidone-요오드 솔루션 및 70% 에탄올으로 소독.</li>
	<li>면봉와 노출 된 면도 표면 건조.</li>
	<li>부드럽게 면도 피부를 당겨 하 고 1.5 cm 긴 세로 절 개를, 메스는 midclavicular에 의해 흉부에 중간 시작 하 고 바로 목 아래에 확장 라인.</li>
	<li>신중 하 게 외부 경 정 맥 노출 현미경 관찰 (5 배 확대)에서 집게와 떨어져 결합 조직 스트레칭.</li>
	<li>FITC 민 솔루션의 주입에 대 한 30½ G 바늘의 삽입을 촉진 하기 위하여 경 정 맥의 왼쪽 및 오른쪽에 충분 한 공간을 확인 하십시오.</li>
	<li>동물에 정 맥 주입 (오른쪽 경 정 맥) 천천히 (3 분 이상) 100 µ L 10 mL/kg FITC 알 부 민으로 30½ G 바늘을 사용 하 여.</li>
	<li>15 분 후, 잘린 여 마우스를 안락사, 급속 하 게 앞에서 설명한 13, 두개골에서 뇌를 제거 하 고 미리 냉장된 isopentane의 적어도 10 배 뇌 자체의 볼륨에서에서 15 분 담가.</li>
	<li>미리 냉장된 관으로 뇌를 냉동 isopentane 이동한 조직학 단면까지-80 ° C 냉동 고에 저장.</li>
</ol> 4. 조직학 단면의 뇌 주입 FITC 민 <ol><li>포함 복합 최적의 절삭 온도 (10 월)에 뇌를 냉동 (재료의 표 참조) 이전 cryostat 단면에.</li>
	<li>직렬는 cryostat와 20 µ m 두꺼운 부분, 뇌를 잘라 (재료의 표 참조), 현미경 유리 슬라이드에 탑재.</li>
	<li>는 FITC-알 부 민/laminin 공동 얼룩 특정 사용 하 여 수행 안티 laminin 항 체 (재료의 표 참조)으로 설명한 6.
	<ol><li>짧게, 밤에 주 항 체 안티 laminin (pAb 1:1000) 섹션을 품 어와 Cy3에 활용 된 적절 한 이차 항 체 진행.</li>
		<li>Coverslip 슬라이드 4를 포함 하는 설치 매체와 함께 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (흡수 피크 = 360 nm; 방출 피크 = 460 nm (재료의 표 참조).</li>
		<li>슬라이드 어둠 속에서 4 ° C에서 건조 하룻밤 떠나.</li>
		<li>형광 현미경으로 얼룩이 지기 형광 관찰 (재료의 표 참조) 두 FITC를 갖춘 20 배 확대에 (흡수 피크 = 495 nm; 방출 피크 = 525 nm) 및 Cy3 필터 (흡수 피크 = 550 nm; 방출 최대 = 570 nm).
		<ol><li>샘플은 얼룩 직후, 매니큐어를 사용 하 여 모서리에 coverslip 보안을 보고 (4.3.3) 이상으로 현미경 검사.</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 5. 형광 현미경을 설정 하 고 컬러 이미지의 수집 <ol><li>형광 현미경을 다음과 같이 설정 합니다.
	<ol><li>차례 형광 램프에 사용 하기 전에 약 10 분. 현미경, 연결 된 컴퓨터와 디지털 카메라를 켭니다. 이미지 분석 소프트웨어 실행 (재료의 표 참조).</li>
		<li>최적의 신호 수집 및 공간 해상도 대 한 적절 한 목표를 사용 하 고 적절 한 필터를 선택 합니다.</li>
	</ol></li> <li>수집의 컬러 이미지 <ol><li>이미지 분석 소프트웨어에 [라이브] 명령을 선택 (테이블의 자료를 참조) 각 필터에 대 한 최적의 조명 매개 변수를 설정 하 고.</li>
		<li>단일 채널 컬러 이미지를 눈금 막대 추가 [고정] 명령을 선택 (&#39; 편집 &#62; 굽기 규모 &#39;)</li>
		<li>각 이미지에 저장 된 &#39;.tiff &#39; 형식.</li>
		<li>단일 이미지를 선택 하 여 채널 병합 &#39; 파일 &#62; 병합 채널 &#39;에서 그것을 저장 하 고는</li>
		<li>tiff &#39; 형식.</li>
		<li>취득 4 24 비트 컬러의 최소 뇌 조각 (6 섹션 슬라이드 당) 당 (2200 µ m x 3400 µ m)을 사진.</li>
	</ol></li></ol> 6. FITC 민 넘쳐 흐름의 평가 <ol><li>자유롭게 사용할 수 ImageJ 14 , 15를 사용 하 여 각 채널에 대 한 형광 강도 분석.</li>
	<li>FITC-알 부 민 각 이미지 마다 총 CY3 Laminin 형광 강도 의해 총 형광 신호 강도 정상화 하 고 녹색 형광 강도로 혈관 밖에 서 extravasated 알 부 민을 보고.</li>
</ol>

<ol><li>Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Handb Clin Neurol. 133, 39-59 (2016).</li>
<li>Serlin, Y., Shelef, I., Knyazer, B., Friedman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the blood-brain barrier.</a> Semin Cell Dev Biol. 38, 2-6 (2015).</li>
<li>Moretti, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+in+disorders+of+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction in disorders of the developing brain.</a> Front Neurosci. 9, 40(2015).</li>
<li>Zhao, Z., Nelson, A. R., Betsholtz, C., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Dysfunction+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Establishment and Dysfunction of the Blood-Brain Barrier.</a> Cell. 163 (5), 1064-1078 (2015).</li>
<li>Drouin-Ouellet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+and+blood-brain+barrier+impairments+in+Huntington%27s+disease%3A+Potential+implications+for+its+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular and blood-brain barrier impairments in Huntington's disease: Potential implications for its pathophysiology.</a> Ann Neurol. 78 (2), 160-177 (2015).</li>
<li>Di Pardo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+blood-brain+barrier+is+an+early+event+in+R6%2F2+mouse+model+of+Huntington+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Impairment of blood-brain barrier is an early event in R6/2 mouse model of Huntington Disease.</a> Sci Rep. 7, 41316(2017).</li>
<li>Lecler, A., Fournier, L., Diard-Detoeuf, C., Balvay, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (3), 923-925 (2017).</li>
<li>van de Haar, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Patients+with+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Patients with Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (2), 615(2017).</li>
<li>Fernandez-Lopez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+permeability+is+increased+after+acute+adult+stroke+but+not+neonatal+stroke+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier permeability is increased after acute adult stroke but not neonatal stroke in the rat.</a> J Neurosci. 32 (28), 9588-9600 (2012).</li>
<li>Yang, Y., Rosenberg, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+acute+and+chronic+cerebrovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in acute and chronic cerebrovascular disease.</a> Stroke. 42 (11), 3323-3328 (2011).</li>
<li>Walantus, W., Castaneda, D., Elias, L., Kriegstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+utero+intraventricular+injection+and+electroporation+of+E15+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In utero intraventricular injection and electroporation of E15 mouse embryos.</a> J Vis Exp. (6), e239(2007).</li>
<li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+pancreatic+islets+into+the+kidney+capsule+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice.</a> J Vis Exp. (9), e404(2007).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>McCloy, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13 (9), 1400-1412 (2014).</li>
<li>Burgess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+human+Greatwall+results+in+G2+arrest+and+multiple+mitotic+defects+due+to+deregulation+of+the+cyclin+B-Cdc2%2FPP2A+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A balance.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (28), 12564-12569 (2010).</li>
<li>Krueger, M., Hartig, W., Reichenbach, A., Bechmann, I., Michalski, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+after+embolic+stroke+in+rats+occurs+without+ultrastructural+evidence+for+disrupting+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown after embolic stroke in rats occurs without ultrastructural evidence for disrupting tight junctions.</a> PLoS One. 8 (2), e56419(2013).</li>
<li>Hirano, A., Kawanami, T., Llena, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+the+blood-brain+barrier+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of the blood-brain barrier in disease.</a> Microsc Res Tech. 27 (6), 543-556 (1994).</li>
</ol>

저자는 공개 충돌의 관심을가지고

우리는 여기에 설명 하는 기술 두뇌 질병 조건 하에서 BBB 누설을 탐지 하는 데 주로 유용 합니다. BBB 역 기능은 다양 한 신경학 적 장애4의 일반적인 기능으로 관심을 얻고 있다. 우리는 이전 HD6같은 희귀 신경 질환의 마우스 모델에서 BBB 무결성의 초기 혼란을 설명 하기 위해이 방법을 사용.
이 방법은 정확 하 고 신뢰할 수 있는 결과 제공 하는 절차의 효율성과 상대적 단순 활용 걸립니다. 그것은 매우 중요 한 전 임상 연구 도구를 나타냅니다 하 고 속도 직접 sectioned 뇌 조직 내에서 녹색 형광의 간단한 시각화 하 여 BBB 붕괴를 질적 평가에서 제공 하는 데 유용. 그러나, 분석 생화학 및 분자와 결합 하면, 기술은 성공적 혈관 내 피 TJs의 구조적 및 기능적 무결성에 대 한 정량적 인 정보를 제공 하 이며 BBB의 상관 관계의 분석을 허용 와 뇌 항상성 교란 한다입니다....

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author&#39;s names was corrected from:
Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author's names was corrected.

Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

중앙 신경 조직 (CNS) 내의 항상성 적절 한 커뮤니케이션 및 신경 세포의 기능에 대 한 전제 조건입니다. CNS 실질은 단단히 봉쇄 주변에서는 내 피 혈액-뇌 장벽 (BBB), 주변 혈 류와 뇌 간의 인터페이스와이 두 지구1 사이 잡담에 중추적인 역할을 하 여 ,2. Bbb 등급은 복잡 하 고 동적 3 차원 구조는 주로 전문 마이크로-혈관 내 피 세포 (ECs) 세포 접합 단지-단단한 접속점 (TJs)-를 통해 서로 연결 하 고 pericytes에 의해 포위의 구성 신경 엔딩과 사이토 발 프로세스1,2.
생리 적인 조건 하에서 그대로 BBB의 매우 낮은 침투성 그리고 두뇌, 영양소와 다른 분자의 수송의 엄격한 규제를 보장 하 고 CNS에서 발생 하는 변화에서 독특한 보호를 제공 한다는 구성 및 가능성 주변에 대 한 신경 활동에 영향을 줄 수 있는 혈액의 모욕1,2,3.
그러나 BBB 무결성 및 그것의 향상 된 침투성의 많은 신경에 대 한 핵심 기능을 구성 하는 것 오랫동안 알려져 있다 및 신경 장애4 헌팅턴의 질병 (HD)5,6를 포함 하 여 이러한 장애 원인이 현상 여부 질병 과정에서 propagative 이벤트 아직 명확 하지 않습니다. 그러나 BBB 붕괴의 타이밍은 또한 애매 남아,, 우리의 그룹 및 다른 사람에 의해 증거 신흥 방해 BBB 무결성 늦은 이벤트를 질병의 진행, 하지만 오히려 초기 단계6에서,7 을 대표 하지 않는다 , 8, 장기 결과가 있을 수 있습니다.
이 염두에서에 두고, 그것은 성공적으로 대체 하 고 더 많은 타겟 개입의 수를 개발 하 고 질병의 진행 및 뇌 손상 예측에 유용한 전략을 개발 하기 위하여 조 neurodegeneration BBB 붕괴를 공개 하는 것이 중요 이러한 장애의 임상 결과 완화 BBB 장애의 신뢰할 수 있는 이미징, 그러므로, 실험 연구 및 뇌 질환의 임상 관리에 중요 한 중요성의 이다.
이 문서에서 우리는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시-알 부 민 (FITC-알 부 민)을 사용 하 여 HD 마우스 모델에서 BBB 침투성의 평가 대 한 성공적이 고 간단한 절차를 설명 합니다. FITC-민, 일반적으로 뇌 실질에는 장벽을 교차 수 없습니다의 넘쳐 흐름 BBB 누설의 지표로 측정 되었다. 이 기술은 쉽게 적응할 수 있는 쥐 및 다른 병리학 조건 cerebrovasculature 장애9,10특징 이다.

<table><tbody><tr><td>알부민-플루오레신 이소티오시아네이트 콘지우게이트</td><td>SIGMA</td><td>A9771-100MG</td><td></td></tr><tr><td>pAb 안티 라미닌</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB300-144</td><td></td></tr><tr><td>CY3 안티 토끼</td><td>MILLIPORE</td><td>AP132</td><td></td></tr><tr><td>SUPERFROST PLUS</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>커버 슬립 24 x 50 mm</td><td>Thermo Scientific (DIAPATH)</td><td>61050</td><td></td></tr><tr><td>Kilik 최적 절단 온도(OCT) 화합물</td><td>Bio Optica</td><td>05-9801</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD 마운팅 미디어</td><td>VECTOR</td><td>H-1500</td> DAPI <td></td></tr><tr><td>iNSu/Light 인슐린 일회용 주사기</td>가 있는 마운팅 미디어 <td>RAYS 건강 및 안전</td><td>INS1ML26G13</td><td></td></tr><tr><td>30G 1/2 "</td><td>BD Microlance</td><td>304000</td><td>인슐린 일회용 주사기</td></tr><tr><td>메스 핸들</td> 용 바늘 FST91003-12 <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td># 22 일회용 메스 블레이드</td><td>FST</td><td>10022-00</td><td></td></tr><tr><td>파인 아이리스 가위 10.5cm</td><td>FST</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 펜치 #5745 45°C; 0.10 x 0.06mm</td><td>F.S.T.</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>그레이프 겸자 10cm</td><td>F.S.T.</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 집게 # 5 0.1 X 0.06 mm</td><td>FS</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>의료 패치</td><td>Medicalis</td><td>34788</td><td></td></tr><tr><td>멸균 일회용 수건 드레이프</td><td>Dispotech</td><td>TVO50VE</td><td></td></tr><tr><td>입체 현미경</td><td>NIKON</td><td>SMZ 745 T</td><td></td></tr><tr><td>광학 조명기 LED 조명(C-FLED2)</td><td>NIKON</td><td>1003167</td><td>광학 조명기 입체 마이크</td></tr><tr><td>스코프 이클립스 Ni-U 현미경</td><td>Nikon</td><td>932162</td><td>Epifluorescence 현미경</td></tr><tr><td>현미경 디지털 카메라</td><td>Nikon</td><td>DS-Ri2</td><td>현미경 카메라</td></tr><tr><td>Intenslight</td><td>Nikon</td><td>C-HGFI</td><td>현미경 램프</td></tr><tr><td>NIS - 요소 64 비트</td><td>Nikon</td><td>AR 4.40.00</td><td>분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>Gemei</td><td>GM-3007</td><td></td></tr></tbody></table>

fitc 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

혈액-뇌 장벽 (BBB) 무결성의 중단은 다른 신경 및 신경 퇴행 성 질환에 대 한 일반적인 기능입니다. 교란된 BBB 항상성 및 뇌 질환의 병 인 사이 상호 작용 추가 조사 필요, 비록 개발 및 BBB 변경 정확 하 게 감지 하는 신뢰할 수 있는 프로시저의 유효성 검사 중요 한 그리고 유용한 도구를 대표 잠재적으로 질병을 예측에 대 한 진행 및 개발 대상 치료 전략.
여기, 우리는 그런 결함 BBB의 침투성에는 천재에 명확 하 게 감지할 수 있는 헌팅턴 질병의 전 임상 마우스 모델에서 발생 하는 신경 상태에서 BBB 누설을 평가 하기 위한 간단 하 고 효율적인 절차를 제시 질병입니다. 특히,는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시 (FITC)-알 부 민, 장애인은 경우에 BBB를 교차 수 있는 마우스 경 정 맥 혈관 이나 parenchymal 지구에 그것의 배급에 심하게 융합은 다음 형광 현미경 검사 법에 의해 결정 됩니다.
뇌 실질에 녹색 형광 민의 축적 탈 BBB 침투성의 색인 기능 그리고 때 quantitated J 이미지 프로세싱 소프트웨어를 사용 하 여 그린 형광 강도로 보고 됩니다.

적절 한 주입 FITC 민의 BBB는 두뇌 parenchymawhen으로 혈 류에서 녹색 형광 추적 프로그램의 넘쳐 흐름에 경 정 맥 결과6손상. 생리 적인 조건 하에서 생긴된 형광 민의 뇌 혈관의 내부에 제한 된 이며 주변 혈관 주위 지역 및/또는 뇌 실질에 신호 감지 (그림 1A, 현미경에는 탑)입니다. 반대로, BBB 신경 병 적인 상황에서 손상 될 때 FITC 민 보여줍니다 확산 형광 패턴 혈관 주위 공간에 따라 뇌 실질 (그림 1A, 하단에 현미경)에. 공동 관 표시와 함께 얼룩, laminin, FITC 민 축적 (그림 1A) 사이트를 명확 하 게 지역화 하는 데 사용 됩니다. FITC-민 손상 된 BBB에 의해 방출 증가 녹색 형광 강도 이미지 프로세싱 소프...

이 연구에서 우리는 신경 퇴행 성 조건 하에서 혈액-뇌 장벽 장애를 평가 하기 위한 간단 하 고 효율적인 절차를 제시. 우리의 목표를 달성 하기 위해 우리는 높은 분자량 fluorescein isothiocyanate 표시 (FITC) 주입-마우스 경으로 알 부 민 정 맥 및 형광 현미경 검사 법에 의해 뇌 실질에 그것의 누설을 평가.

FITC 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

이 절차의 전반적인 목표는 FITC 표지 알부민의 경정맥 내 주사에 의한 퇴행성 장애의 마우스 모델에서 뇌-혈액 장벽 투과성을 평가하는 것입니다. 이 방법은 뇌 항상성 연구의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 혈액-뇌 장벽 손상과 신경 퇴행 사이의 가능한 연관성을 조사하는 것이 특히 유용할 수 있습니다.이 기술의 가장 큰 장점은 빠르고 쉽게 수행할 수 있으며 더 큰 동물 모델 및 기타 신경 병리학적 설정에도 적용할 수 있다는 것입니다. FITC-알부민의 경정맥내 주사 수술 절차를 시연하는 사람은 Luca Capocci입니다. 살바토레 카스탈도(Salvatore Castaldo)는 뇌의 조직학적 절단을 시연할 것입니다.그리고 Enrico Amico는 현미경 사진 획득 절차를 시연할 것입니다. FITC-알부민 분말을 인산염 완충 식염수에 10밀리리터로 용해시켜 FITC-알부민 용액을 준비하는 것으로 시작합니다. 오토클레이브 수술 기구를 배치합니다.70% 에탄올로 수술 벤치를 청소하고 수술용 멸균 일회용 드레이프를 놓습니다. 그런 다음 작동 실체 현미경을 설정합니다. 적절한 케타민 자일라진 용액을 복강내 주사로 마우스에 마취한 후, 발가락을 부드럽게 꼬집어 금단 반사가 없는지 확인하여 동물 진정을 모니터링합니다.마취된 마우스를 앞면이 위로 향하게 누운 자세로 놓고 접착 테이프로 수술 작업대에 4개의 다리와 꼬리를 고정합니다. 마우스를 고정한 후 목의 적절한 수술 가장자리를 조심스럽게 면도하고 70% 에탄올의 포비돈-요오드 용액으로 소독합니다. 노출된 면도 표면을 면봉으로 말리십시오.다음으로, 쇄골 중간선을 1.5cm 길이로 절개하여 흉부 중간에서 시작하여 목 바로 아래까지 뻗어 현미경 관찰 하에 겸자로 결합 조직을 조심스럽게 펴서 외부 경정맥을 노출시킵니다. FITC-알부민 용액의 주입을 위해 30 및 반 게이지 바늘의 삽입을 용이하게 하기 위해 경정맥의 오른쪽과 왼쪽에 충분한 공간을 확보하십시오. 100 μm의 10 밀리리터 FITC- 알부민을 3 분에 걸쳐 오른쪽 경정맥에 주입합니다.이 단계는 절차 중 가장 중요한 단계입니다. 바늘을 잘못 삽입하면 정맥 벽이 돌이킬 수 없는 손상을 입고 전체 실험을 손상시킬 수 있습니다. 주사 후 15분 후, 참수로 쥐를 안락사시킨 후, 두개골에서 뇌를 빠르게 제거하고 뇌의 10배인 미리 식힌 이소펜탄에 15분 동안 담근다.이소펜탄이 얼어붙은 뇌를 미리 냉각된 튜브

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 플루오레세인나트륨 분자를 사용하여 체외 혈액-뇌 장벽의 투과성을 평가하기 위한 투과성 분석에 대해 설명합니다.

Blood-Brain Barrier 모방 투과성 분석: 추적자 분자에 대한 BBB 모방의 투과성을 평가하기 위한 체외 분석

이 비디오는 EAE 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴를 평가하는 절차를 보여줍니다. 다양한 크기의 형광 염료를 역궤도로 주입하여 뇌의 혈관을 순환합니다. 작은 염료는 틈을 통해 뇌 조직으로 누출되는 반면, 큰 염료는 장벽 손상 정도와 상관관계가 있는 파괴가 심한 경우에만 들어갑니다.

EAE 마우스 모델에서 형광 염료를 사용한 혈액-뇌 장벽 파괴 결정

이 동영상은 유리 FITC 및 FITC 로딩 페리틴과 함께 막 삽입부의 성상세포와 내피 세포를 사용하여 시험관 내 혈액 뇌 장벽(BBB) 모델을 통한 투과를 연구하는 방법을 보여줍니다. FITC-페리틴은 내피 세포의 수용체에 결합하여 막 장벽을 넘어 하부 챔버로 이동한 반면, 자유 FITC는 제한된 투과를 보이며 상부 챔버에 머물렀습니다.

체외 혈액-뇌 장벽 모델을 통한 FITC와 FITC-페리틴의 투과 연구

쥐의 뇌, 미세혈관 내피 세포 및 성상 세포의 공동 배양을 기반으로 혈액 뇌 장벽의 체외 모델을 확립하는 방법을 설명하고 검증합니다. 이 시스템은 형광 분자의 장벽 횡단 투과에 대한 나노 제형의 효과를 연구하는 유효한 도구임이 입증되었습니다.

쥐 뇌 혈관 벽의 맞은 편에 FITC로드 Ferritins의 생체 외 투과 년 : 모델 Nanoformulated 분자의 배달을 공부하기

여기 우리는 마우스 뇌 혈관 침투성 분석 결과 형광 추적기 관류 뇌혈관 장애의 동물 모델에 적용 되는 다음의 복 주사를 사용 하 여 현재. 한 반의 두뇌 양적 침투성을 평가 하 고 추적 프로그램 시각화/immunostaining에 대 한 다른 사용 됩니다. 절차 10 쥐에 대 한 5-6 시간 걸립니다.

Vivo에서 혈액-뇌 장벽 침투성 분석 결과 사용 하 여 마우스에 붙일 추적기 표시

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

여기, 선물이 vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 혈관 단위의 장애를 조사 하는 프로토콜. 우리는 특별히 명과 limitans에서 혈액-뇌 장벽 침투성 및 백혈구 마이그레이션에 관련 된 gelatinase 활동을 확인 하는 방법 주소.

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

마약 중추 신 경계 종양을 대상으로 하는 것은 주요 도전 이다. 여기는 murine 및 인간의 세포를 사용 하 여 혈액 뇌종양 장벽의 생체 모방을 생산 하 고 중추 신 경계 종양 vivo에서 대상의 예측 가능성에 대 한 그들의 관련성을 토론 하는 프로토콜에 설명 합니다.

예측의 Vivo 페이로드 배달 접시에 혈액 종양-배리어를 사용 하 여

이 프로토콜은 설치류 뇌 샘플의 동일한 세트에서 허혈성 뇌 손상의 세 가지 가장 중요한 매개 변수를 측정하는 새로운 기술을 설명합니다. 하나의 뇌 샘플만 사용하는 것은 윤리적 및 경제적 비용 면에서 매우 유리합니다.

설치류 뇌 샘플의 단일 세트에서 뇌졸중 후 뇌 부종, 경색 영역 및 혈액 뇌 장벽 고장 측정

서로 다른 시점의 마우스에 두 개의 형광 염료를 투여하여 혈액뇌장벽(BBB) 파괴로 인한 염료 유출을 시각화하는 방법이 개발되었습니다. 동결 보호제로서 글리세롤을 사용함으로써 동일한 샘플에 대한 면역조직화학이 촉진되었습니다.

경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가

이 프로토콜은 Evan의 청색 염료 기반 평가를 사용하여 성인 제브라피쉬(Danio rerio) 모델에서 혈액뇌장벽(BBB) 무결성을 평가하는 신뢰할 수 있는 방법을 제시하여 신경혈관 파괴의 정성적 및 정량적 분석을 모두 가능하게 합니다.

게이트키퍼 시각화: 성인 제브라피쉬의 혈액-뇌 장벽 투과성에 대한 Evan의 파란색 염료 기반 평가

학습하세요 FITC-알부민 정맥주사를 이용한 마우스 혈액-뇌 장벽 투과성 평가 방법을 통해 신경퇴행성 질환 연구에서 뇌 항상성과 장벽 손상의 관계를 탐색하는 빠르고 효율적인 실험 기법을 익히세요.

FITC 표시 된 알 부 민 신경 질환의 마우스 모델에서의 정 맥 주입에 의해 혈액-뇌 장벽 침투성의 평가

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