Name: 쥐의 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템 주변 포도 당 옹 졸 Hypothalamic 인슐린 신호를 공부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-04T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 학습하세요 쥐 뇌하수체에서 CCL5 신호가 인슐린 기능과 포도당 대사에 미치는 영향을 마이크로삼투압 펌프로 Met CCL5를 투여하여 연구하는 방법을. 이 기법은 뇌 신경화학 조작에 유용합니다.

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참고: 모든 프로토콜 및 동물 주제에 사용 되는 방법에 의해 승인 되었습니다 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 타이베이 의학 대학 (번호를 프로토콜: 락-2014-0387)
1. 삼 투 마이크로 펌프 주입 시스템의 준비
참고: 펌프, 인공 뇌 척수 (실제) 버퍼 및 버퍼 0.2 µ m 필터와 필터링을 사용 하 여 무 균 조건 하에서 약물 (메트로-CCL5/RANTES 단백질 해결책 (실제에서 10 ng/mL))를 준비 하 고와 문화 후드 아래 모든 절차를 수행 장갑입니다. 수술 절차는 다음과 같이 실시 하 고 있다.
<ol>
	<li>수술 전에 1 일 삼 투 마이크로 펌프를 준비: 1 mL 주사기와 키트와 함께 제공 하는 무뚝뚝한 머리 바늘 인공 척수 (실제)와 뇌 삼 투 마이크로 펌프를 채우기. 실제 삼 투 마이크로 펌프를 담가 통에 배치 하 고 부드럽게 흔들어 하룻밤. 주의: 실제, 펌프 한다 채워질 그리고 기포 펌프 (그림 1A) 내부 피해 야 한다.</li>
	<li>수술 시작 하기 전에 재조합 메트로-CCL5/RANTES 단백질 해결책 (10 ng/mL, 희석된에 실제) 실험에 사용 될 준비. 펌프에서 실제 제거 하 고 천천히 밖으로 누출 초과 될 때까지 마약 솔루션으로 펌프를 채울. 참고: 15 mL 실제 또는 메트로-CCL5/RANTES 솔루션은 5-8 펌프에 대 한 충분 합니다. 주의: 펌프 내부 거품 없이 약으로 완전히 가득 되도록 절차를 반복 합니다.</li>
	<li>카 테 테 르 튜브를 원하는 길이로 잘라 고 뇌 주입 키트에 무뚝뚝한 끝 뇌 주입 바늘 그들을 연결 합니다. 약물으로 주입 키트 및 튜브를 채우십시오.</li>
	<li>마지막으로 조립 하 고 삼 투 마이크로 펌프를 뇌 주입 키트를 연결. 주의: 없음 거품 튜브 또는 펌프 (그림 1A)에서 형성 한다.</li>
	<li>담가 소독된 50 mL 튜브에 실제 밖으로 건조에서 펌프를 방지 하기 위해 설정 전체 삼 투 펌프-뇌 융합. 삼 투 펌프-두뇌 퓨전 세트 이제 수술을 위해 사용 될 준비가 되어 있습니다. 참고: 삼 투 마이크로 펌프 시스템 장기 약물 주입에 대 한 사용할 수 있습니다. 그러면 쥐의 뇌에 약물 전달의 안전 하 고 편리한 모드.</li>
</ol>
2. intracerebral 심 실 수술-마이크로 삼 투 펌프의 주입
주의: 75% 에탄올과 수술 환경 소독 하 고 멸 균 장갑과 깨끗 한 실험실 코트 연구에 관련 된 사람들은 입고 확인 합니다. 외과 도구 / 악기 압력가 마로 소독 하 고 사용 하기 전에 말린 75% 에탄올 사이 쥐 수술 후 멸 균 되어야 합니다.
<ol>
	<li>마우스 무게와 복 막 내 주입 (IP)를 사용 하 여 케 타 민/Xylazine와 anesthetize (케 타 민 50 mg/kg, Xylazine 10 mg/kg). 주의: 마우스 몸 무게 24 g 보다 낮은 삼 투 펌프 이식 수술에 대 한 권장 하지 않습니다.</li>
	<li>정위 적 장치 (그림 1B)에 마우스 머리 해결을 탑재 합니다.</li>
	<li>수술가 위와 협공 한 켤레를 사용 하 여 두개골을 다루는 외부 피부를 자르면. 요오드를 사용 하 여 주변 해골을 청소.</li>
	<li>삼 투 펌프-두뇌 퓨전 세트 주입 (그림 1C)에 대 한 무딘 머리 협공 목 지역 근처의 한 쌍의 도움으로 피하 피부에서 피부의 가장 바깥쪽 레이어를 구분 합니다.</li>
	<li>참고로 주입 포인트 정위 적 장치를 사용 하 여 뇌 지도 (그림 1D)을 표시 합니다. 이 실험에서 바늘 3rd 심 실 지역에 이식 될 필요가 (Bregma: 0.0 m m 측면, 후부 1.3 m m, 5.7 m m 복 부).</li>
	<li>두개골 (그림 1E)에 표시 된 주변 네일 드릴을 사용 하 여 구멍을 드릴 합니다. 주의: 수 마우스 meninges과 혈관, 뇌의 미세 혈관의 파괴를 피할 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>장소 삼 투 마이크로 펌프 뇌 융합 ( 쥐의 뇌에 약물에 드릴된 구멍으로 포함 하는 실제 (컨트롤로) 또는 약물 (메트로-CCL5/RANTES 단백질 해결책) 뇌 주입 바늘 목 지역 및 삽입 뒤에 피부 아래 설정 그림 1E). 바늘은 meninges를 관통 하 고는 심 실에 들어갈 것 이다. 표면 desensitizing 젤 (그림 1 층)을 사용 하 여 두개골에 자리에 바늘을 해결 하 고 접착제 건조 될 때까지 1-2 분 기다립니다. 다음, 바늘 (그림 1G-H) 위에 투영 부분을 잘라.</li>
	<li>조직 접착제 접착제를 사용 하 여 작업 머리에 상처를 치유. 상처 위에 접착제의 50 µ L을 적용, 피부의 양쪽 모두를 회복 및 30 s (그림 1I) 인감을 피부 수 있도록. 주의: 100% 알코올 패드를 사용 하 여 수술 후 감염을 방지 하기 위해 스와 100 ul 페니실린 상처를 청소. 참고: 마우스 피부 반 흔 조직 형성 되며 외과 접착제의 몇 일만에 치료. 접착제의 주요 장점은 피부 자극 또는 염증을 일으킬 수 있습니다 외과 바늘의 제거입니다.</li>
	<li>깨끗 한 새 장에 마우스 따뜻한 접시에 보관 하는 장소 (37 ° C 까지의 열) 마우스 마 취 효과에서 복구 될 때까지 기다립니다. 주의: 수술 후 생존의 기회를 향상 시키기 위해 마우스의 체온을 유지 하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>1 주일 회복 기간 후 쥐 실험, 구두 포도 당 내성 검사 (OGTT) 인슐린 내성 시험 (ITT) 등 추가 대 한 준비 됩니다.</li>
</ol>
3. 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)
참고: 실제와 메트로CCL5/RANTES (10 ng/mL, 100 µ L)의 주입 후에 7 일 경구 포도 당 내성 검사를 수행 합니다. 충분 한 물 공급으로 OGTT 전에 마우스에 대 한 빠른 6 h을 유지 합니다. 그들은 스트레스를 줄이기 위해 절차 동안 환경에 순응 할 수 있도록 실험을 수행 됩니다 어디 같은 작업 벤치에 동물 유지.
<ol>
	<li>포도 당 솔루션 준비: 실험을 실시 하기 전에 준비 포도 당 솔루션 3.75 g을 용 해 하 여 포도 당 15 mL 증류수 H2o.</li>
	<li>실험 절차 (표 1) 동안 수치를 기록 하는 시간표를 설정 합니다. 참고: 그것은 정확한 실험 기간 동안 녹음 수 있도록 각 혈액 검사 사이의 적절 한 간격으로 시간 테이블을 설정 하는 것이 중요.</li>
	<li>금식 후 각 마우스 무게 하 고 포도 당 주입을 적절 한 금액을 계산.</li></ol>예를 들어 마우스 무게 30 g, 관리 될 수 포도 당 솔루션의 금액 300 µ L을 이어야 한다.
	<li>작업 벤치에서 다음 악기를 준비:<ol>
		<li>Glucometer (배터리 상태 확인, 테스트 하기 전에 작동 하는지 확인 하려면 시작 단추를 누름)</li>
		<li>포도 당 칩</li>
		<li>인슐린 주사기 (인슐린 주사기 0.3 mL)</li>
		<li>면도날</li>
		<li>타이머</li>
	</ol>
	</li>
	<li>일단 벤치 설정, 측정 하 고 혈액 포도 당 수준에 다음과 같은 기록: 깨끗 한 넣고 새로운 포도 glucometer로 칩과 그것을 0으로 시작 버튼을 누릅니다.</li>
	<li>목의 뒤쪽으로는 마우스를 선택 하 고 꼬리를 몇 번 뇌졸중 꼬리 지역에 충분 한 혈액의 흐름을 보장 하기 위해.</li>
	<li>꼬리의 작은 조각을 잘라 하 여 하나의 작은 한 방울의 피를 짜 새 면도날을 사용 하 여 (약 10-20 µ L)으로 포도 당 칩. 혈액은 정확한 측정을 허용 하도록 칩을 작성 해야 합니다. glucometer는 즉시 포도 당 레벨을 표시 합니다. 기계를 보여주는 경우 "오류", 새로운 포도 당 칩 절차를 반복 합니다. 참고: 포도 당 칩의 피 한 방울만 필요합니다. 혈액 샘플 한 번 이상 수집 해야 하는 경우 단순히 압력 혈액 수집을 칩 위에 직접 꼬리의 끝을 잡고 여러 번 마우스의 꼬리를 따라 손가락을 실행 하 여 합니다. 혈액 샘플을 수집 하는 동안 때마다 꼬리 끝을 잘라 필요는 없습니다.</li>
	<li>다음으로 피드 쥐 포도 (0.25 g/mL) 구두 intragastric gavage 기법을 사용 하 여. 관리 하는 포도 당의 양의 수식을 사용 하 여 계산 한다: 10 X 몸 무게 (BW) µ L 포도 당 솔루션 (예를 들어 경우 마우스 무게 30 g, 관리 될 수 포도 당 솔루션의 금액 300 µ L). 구두 포도 당 투여 후 즉시 타이머를 시작 합니다.</li>
	<li>15, 30, 60, 90, 및 120 분에서 포도 당 측정 절차를 반복 합니다.</li>
	<li>모든 포도 당 수준의 판독, 기록 후 면도칼 블레이드를 삭제 하 고 포도 당 생물 컨테이너에서 칩. 다시 쥐 감 금 소에 음식을 넣어 고 동물 방에 그들을 반환 합니다.</li>

4. 인슐린 내성 검사 (ITT)
참고: 인슐린 내성 검사 및 경구 포도 당 내성 검사 한다 예약 최소 7 일 떨어져 동물에 단식 효과 줄이기 위해. 인슐린 내성 검사 (ITT)에 대 한 인간의 인슐린 (0.75 U/Kg) IP 주사를 통해 관리 됩니다.
<ol>
	<li>0.25 U 인슐린 솔루션의 준비: 염 분 해결책에 1:400의 비율을 100U 인간의 인슐린을 희석.</li>
	<li>금식, 후 각 마우스 무게 하 고 그에 따라 인슐린의 주입된 양을 계산: 수 0.25 U 인슐린의 볼륨 (µ L) 주입 IP = 3 X BW (0.75 U 인슐린/Kg 몸 무게). 예: 마우스 무게 28.8 g, 주사: 28.8 X 3 = 86.4 µ L (0.25 U 희석 인슐린) (표 2). 주의: 같은 동물 6 h 다른 일에 금식 후 다른 신체 무게를 할 수 있습니다. 따라서, 그것은 바로 이전과 금식 행위는 OGTT와 ITT 테스트 후 몸 무게를 측정 하는 데 필요한입니다. 마우스 몸 무게는 종, 성별, 금식 기간에 따라 삭제할 수 있습니다. 인슐린의 높은 복용량 인슐린 충격을 일으킬 수와 동물의 죽음으로 이어질 것 이다.</li>
	<li>실험 절차 동안 수치를 기록 하는 표 (표 2)를 설정 합니다. 3.4 단계를 반복 합니다. 3.8 to. 대 한 측정 혈액 포도 당 수준.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

만성 염증 및 CCL5 등의 수용 체-관련된 발산의 메커니즘은 타입-2 당뇨병의 발전에 CCR5 불분명 남아 있습니다. 만성 adipose 조직으로 대 식 세포 침투 하면 염증과 adipokines;의 규칙에 영향을 미치는합니다 반면에, 그것은 또한 β 세포를 유치 하 고 독도 Langerhans 혈액 포도 당에 대 한 응답에서에서 인슐린 분 비를 손상. 뇌의 시상 하 부 식욕, 말 초 혈액 포도 당 대사 및 인슐린 응답 통제에 조직의 주변 조직에서 인슐린 및 adipokine 신호를 조정에 제어 센터로 중요 한 역할을 한다. 많은 연구는 또한 hypothalamic 염증 에너지 항상성 결함이 있는 췌 장의 작은 섬 및 간 기능2,3,,910의 결함이 규제로 연결 다는 것을 나타냅니다. CCL5는 뇌의 시상 하 부11,12; 음식 섭취 량과 신체 온도 조절에 기여 그러나, hypothalamic 및 조직의 인슐린 신호를 CCL5의 상관 관계는 명확 하지 않습니다. CCL5 몸 전체 녹아웃 마우스를 (CCL5-/-) 혈액8높은 혈액 포도 당 수준 높은 인슐린 수치와 인슐린 저항 형에서는이 문제를 해결 하기 위해 생성 되었습니다. 그러나, T2DM 표현 형을 개발 하는 데 오랜 시간이 필요 하 고 역할 및 가능한 장기 보상 효과 인해 hypothalamic 인슐린 신호에 CCL5의 메커니즘을 조사 하기 어렵습니다. 따라서, hypothalamic 신경에 있는 신호 CCL5의 직접적인 조작 최상의 접근 이다. 그러나 있다,, 여러 유형의 hypothalamic 지역에서 신경 되며 꽤 비싸고 셀 특정 녹아웃 쥐를 생성할 수 있습니다. ICV를 활용 하 여 주입 시스템 수 있습니다 따라서 저장 시간 하 고 우회 가능한 주변 염증 성 반응, 뇌에 직접 CCL5 기능을 조작 하는 보다 구체적인 접근을 제공.
삼 투 펌프를 이용 하 여 연구 이미 출판 되었습니다 이전, 좋은 예제와 설치류13삼 투 펌프의 이식에 관련 된 기술의 데모를 제공 하. 그러나, 우리는 우리의 연구에 이러한 프로토콜을 수행 하는 동안 몇 가지도 전에 직면. 첫째, 프로토콜에 사용 되는 장비 중 일부는, 1) 위치, 그리기 및 마우스 뇌, 마우스 체온과 3) 산소-isoflurane 유지 하기 위한 온도 시스템 2)는 바늘 삽입을 도달 전기 시스템을 포함 한 쥐를 마 취를 관리 하기 위한 시스템을 제공 합니다. 둘째, 다른 기사에서 설명한 기술을 복제 있었습니다만 우리의 연구에 대 한 동물의 몸 무게와 특정 나가에 작은 범위 내에서 사용할 수 있기 때문에 곤란 했다. 우리는 큰 쥐가 더 수술 및 이식에 적합 알고입니다. 그러나, 우리의 연구에서 우리를 사용 했다 작고 젊은 쥐 비만 및 인슐린 및 혈액 포도 당 규칙에 노화 효과: 몸 가진 남성 마우스 무게 25 ± 2 세대와 나이만 약 2 개월 된 연구에 선정 됐다. 따라서, 마우스 머리에 상처를 봉합 하 고 수술을 수행 하기가 어렵습니다. 셋째, 염증 반응 염증 성 cytokine이 연구에서 대상 이므로 수술 후 최소화 될 수 있다. 생쥐와 쥐 봉합 사를 제거 하 고 염증 발생 및 chemokine 반응 증가, 수술 후 상처를 쉽게 열 수 있습니다. 따라서, 위치를 도달 하 고 그리고 이차 감염을 방지 하는 쥐의 뇌에 바늘을 삽입 하는 전략은 필요. 따라서, 우리는이 기술은 비용 효과적인, 쉽고 게 덜 해로운 동물, 다음 단락에 설명 된 대로 앞에서 설명한 프로토콜 수정.
첫째, 우리는 단계 2.6에에서 설명 된 대로 수동으로 두개골에 표시 된 대상 주변에 구멍을 드릴 네일 드릴을 사용 합니다. 이 방법은 비용 효과적 이며 마우스 meninges과 혈관의 손상을 방지 하기 위하여 전체 절차를 모니터링할 수 있습니다. 혈액 포도 당 규칙은 급성 뇌졸중, 뇌에서 출혈 등 후 장애인 이다. 급성 고 혈당과 당뇨병 같은 증후군 또한 임상 설정14,15스트로크 후 관찰 되었다. 마찬가지로, 우리 또한 장애인된 포도 당 수준과 인슐린 응답에서에서 발견 출혈과 고름 쥐 두뇌에서. 우리는 더 나은 제어 수동 기반 수술의 결과의 일관성을 보장 하기 위하여 필요한가. 둘째, 우리는 수술, 따라서, 바늘을 피하 하 고 치유의 속도 가속 마우스 머리에 인감 피부 클리닉, 조직 접착제 접착제 (단계 2.8)에서 통용 새로 개발된 된 의료 소재 활용을 했다. 이 수술 절차를 보다 쉽게 수행 하 고 보조 염증의 가능성을 줄여 줍니다. 셋째, 전체 수술 절차를 수행 하는 데 필요한 시간은 비교적 짧은 쥐에 대 한 생존의 기회를 증가 하 고 intraperitoneally 주입 되 고 마 취 약물의 복용량을 낮춘 다. 우리는 높은 생존 율 (95%)을 관찰 하 고이 수정 된 프로토콜에 따라 상대적으로 정확한 결과 얻을.
이 기술의 한계는 약물 전달의 상대적으로 짧은 기간 이다. 비록 삼 투 펌프 놓일 수 있다 마우스 몸 안으로 또는 주변 조직의 인슐린 신호를 조절 하는 뇌에 염증 chemokine 효과에 초점을 맞추고 두뇌, 우리의 연구만을 재개 하지 않고. 주변 조직에 추가 수술 수 다음 염증 chemokine 식 증가 하 고 결과 영향을 미칠 것 이라고 주변 조직에 염증 성 반응을 유도 하 고 가능 하 게. 둘째, 약물의 반감기는 또한 연구 기간을 제한합니다. Chemokine 등 재조합 단백질에는 보통 짧은 하프 라이프, 하지만 그것은 또한 짧은 기간 동안 두뇌에 신호 차단 CCL5의 효과 연구를 우리가 수 시간이 지남에, 그것의 활동을 잃는 있다. 우리의 이전 연구는 또한 장기 효과8모델을 제공 하는 CCL5 녹아웃 마우스를 생성 하기 위한 유전자 조작 방법 설명.
몇 가지 새로운 기술과 뇌에 약물을 전달 하기 위해 다른 방법이 있다. 나노기술 중앙 신경에 약물을 전달 하는 데 사용할 수 있는 강력한 기술입니다. 그러나, 많은 약물은 열에 민감한 고 나노16에 그들을 포장 하려고 할 때 파괴 될 수 있다. 또한, 나노 입자 BBB를 통과할 수 있으며 siRNA 또는 가장 일반적인 약물에 대 한 적합 한 세포에 의해 uptaken 하지만 그것은 ligand 수용 체 바인딩에 대 한 이상적인 방법.CCL5 그것의 수용 체, CCR5, 효과8을 시상 하 부 아크 뉴런에서 바인딩이 필요한 지와 CCL5 길 항 근 메트로CCL5 나노 입자를 통해 뉴런으로 전달 바인딩 및 세포에 CCR5 차단 하는 능력의 손실 될 수 있습니다. 표면입니다.
혈액 포도 당 수준의 마우스 컨트롤 (마우스 실제 관리)에 비해 CCL5 적 메트로CCL5 경구 포도 당 내성 검사에서 관리에 상당히 높았다. 추가 인슐린 관리 (인슐린 내성 검사) 또한 수 없었다 혈액 포도 당 수준을 낮출 메트로CCL5에서 받은 쥐 (그림 4B), 외부와 내 생 적인 인슐린 혈액 포도 당 수치를 줄일 수 없는 제안 때 hypothalamic CCL5 신호 차단. 쥐 시상 하 부에 CCL5 활동 없이 인슐린 저항 되었다. 국세청-1의 증가 serine302 인 산화는 메트로 CCL5 실제 (그림 5A-B)를 받는 통제 쥐에 비해 받는 쥐에서 발견 되었다. 국세청-1의 인 산화 떠들고 302 인슐린 저항6;의 주요 원인인 인슐린 수용 체에서 국세청-1의 물리적 분리를 유도 하기 위해 표시 되었습니다. 인슐린은 PI3K Akt 통로 같은 하류 신호를 활성화할 수 없습니다. Ex vivo 인슐린 자극 연구를 확인 하류 신호 분자 Akt (p AktS473) 하지 마우스 hypothalamic 조직에서 인슐린에 의해 활성화 된 인슐린 주입 메트로-CCL5, 떠들고 302 인 산화가 증가 하는 대신. 전부, 생리 데이터 (OGTT와 ITT) 및 분자 연구는 체계적인 인슐린 저항과 포도 당 물질 대사에 기여 hypothalamic 인슐린 신호 규정, 중재 hypothalamic CCL5 신호를 보여줍니다.
역할 및 비만 관련 된 당뇨병에서 CCL5의 CCR5 메커니즘 불분명 남아 있습니다. Kitade 그 외 여러분 보고 CCR5 부족 비만 유발 염증, 대 식 세포 신규 모집, 및 인슐린 저항17에서 쥐를 보호. 그러나, 케네디 그 외 여러분 에 의해 다른 연구 CCR5 부족 체형과 근육 인슐린 신호18로 서 조직의 포도 당 내성 손상 나타내는 반대 결과 발견. 두 연구는 비만, 전신 만성 염증, 보상 응답을 유도 하 고 지방 다이어트를 적용. 이 연구는 인슐린 신호 규정 CCL5 및 CCR5의 깨끗 하 고 명확한 메커니즘을 제공 하지 않았다. 다른 한편으로, 삼 투 펌프 기술 두뇌 특정 주입 있으며 시간 제한 배달 보상 응답을 피 한다.
결론적으로, 뇌 주입 시스템 삼 투 펌프 "구식" 방법 것 처럼 보이지만, 저렴, 쉽게, 그리고 덜 해로운 약물 전달 방법 제공 및 수 조사에서 신호 ligand-수용 체의 기능에 두뇌입니다.

인슐린에는 다양을 한 조직 두뇌를 포함 하 여 영향을 줍니다. 인슐린 혈액-뇌 장벽 통과, 중앙 신경 시스템 (CNS)를 입력 하 고 음식 섭취 량, 공감 활동, 그리고 주변 인슐린 응답을 조절 하는 시상 하 부에 인슐린 수용 체 (IR)를 바인딩합니다. 주변 adipose 조직에 만성 염증 2 당뇨병 mellitus (T2DM), 입력을 하 제안 되었습니다 하지만 조직의 인슐린 응답 및 포도 당 옹 졸을 중재 하는 시상 하 부에 신호 이러한 염증 성 반응 인슐린에 미치는 영향 불분명 남아 있습니다. 식욕 조절 및 종양 괴 사 인자-알파 (TNFα), 인터 루 킨 (IL)-6, 일리노이-1β, 같은 시상 하 부1 신체 온도 조절에 참여 하는 일부 발산 monocyte chemoattractant 단백질-1 (MCP-1), 및 CCL5 (C C 모티브 ligand 5 ). 또한, 시상 하 부에 염증이 인슐린 저항 T2DM2,3에 이끌어 낸다.
이 발산, chemokine CCL5의 식 레벨의 변경 및 그 수용 체, 중 CCR5, adipose 조직에 연결 되었습니다 인간 동물에 있는 T2DM에 동맥 경화 증 및 포도 당 편협과. CCL5는 또한 신경 내 분 비 기능, 시상 하 부에 음식 섭취 량과 신체 온도의 규정을 포함 하 여 있다. 그것은 따라서 CCL5는 시상 하 부 또는 주변 조직 내 인슐린 신호 활성화에 참여 하는지 여부를 조사 하는 것이 중요입니다.
인슐린 신호 세포 내에서 밀접 하 게 통제 된다. 인슐린 인슐린 수용 체 (IR)의 바인딩 활성화 인슐린 수용 체 기질 (국세청) 단백질, phosphatidylinositol 3-키 (PI3K) 및 단백질 키 니 아 제 B (PKB/AKT) 활성화 및 포도 당 운송업 자-4 (GLUT4) 막 전4 . 국세청 단백질은이 신호 통로 키 레 귤 레이 터: 그들은 긍정적인 반응에 phosphorylated 수 여러 티로신과 떠들고 잔류물 또는 부정적인 인슐린 신호5. 예를 들어 국세청-1에 인 산화 떠들고 302 IR에서 국세청-1의 물리적 분리를 리드 하 고 인슐린 신호 변환, 인슐린 저항6선도 차단 수 있습니다. 시상 하 부에 있는 국세청 단백질의 활동 장애 인슐린 저항과 포도 당 편협 쥐7을 유도 하기 위해 표시 되었습니다.
한 일반적인 방법은 특정 유전자의 기능 연구 대상 유전자는 유 기체의 몸 전체에 걸쳐 분산 식의 조작 이다. 그러나,이 몇 가지 단점이 있을 수 있습니다: 1) 그것은 시간이 지남에 따라 다른 피드백 규제 또는 보상 효과 생성할 수 및 2)이이 방법은 특정 뇌 영역에 대상 단백질의 역할을 보여주는 우리 도움이 되지 않습니다. 또한, 조직 및 세포 관련 유전자 녹아웃 동물 번 식 하는 데 시간이 오래 걸릴 하 고 비용이 많이 드는. 따라서, 우리는 단기 뇌 주입 삼 투 펌프 시스템-길 항 제 약물을 사용 하 여 앞서 언급 한 문제를 극복 하기 위해 뇌에서 대상 단백질의 신호를 방해 하는 상대적으로 신속 하 고 편리한 방법 사용 합니다. 복잡 한 수술 기술 및 계측 시간에 광범위 한 투자를 요구 하는 데 사용 하는 정위 적 주사. 이 프로토콜을 정위 적 주입 및 혈당의 농도 감지 하 여 신호 규정 hypothalamic 인슐린에 CCL5의 역할을 조사, 덜 해로운 빠르고 즉각적인 메서드를 수행 하는 간단 하 고 안전한 방법을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>Vetbond 조직 접착제</td><td>3M</td><td>#1049SB</td><td>마우스 머리의 병변 부위를 밀봉하는 데 사용되는 접착제</td></tr><tr><td>LOCTITE 454 인스턴트 접착제</td><td>Durect Corporation</td><td>#8670</td><td>마우스 두개골에 바늘을 고정하는 데 사용되는 접착제</td></tr><tr><td>Alzet Micro- Osmotic Pump</td><td>Durect Corporation</td><td>#9922</td><td>0.11 &mu; l 시간, 28 일</td></tr><tr><td>뇌 주입 시스템</td><td>Durect Corporation</td> <td># 8851</td><td>1-3 mm, 마우스 뇌</td></tr><tr><td>혈당 측정기</td><td>Roche</td> <td># 06870244001</td><td>혈당 수치를 측정하는 데 사용</td></tr><tr><td>포도당 칩</td><td>Roche</td> <td># 06454011020</td> 혈액 샘플 에반의 블루 시그마<td>를로드하는 데 사용</td></tr> <tr><td></td><td></td><td>#MKBK0523V</td><td>약물 주입을 시연하기 위해 영역</td></tr><tr><td>인슐린 주사기</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>#3232145 C</td><td>복강내 인슐린을 투여하는 데 사용</td></tr><tr><td>MIO NE116 CONTROL UNIT (네일 드릴)</td><td>Mio System</td><td>#E235-015</td><td>마우스의 두개골에 구멍을 뚫기 위해</td></tr><tr><td>CCL5/Met-RANTES Protein</td><td>R& D</td><td>#ADB0111081</td><td>재조합 인간 CCL5, E-coli 유래</td></tr><tr><td>aCSF 공식</td><td>119 mM NaCl 26.2 mM NaHCO3 2.5 mM KCl 1 mM NaH2PO4 1.3 mM MgCl2 10 mM 포도당</td><td></td><td>여과기는 a로 살균합니다 0.22 &무; m 필터 장치 및 4&deg;C. aCSF에 보관은 3-4주 동안 안정적입니다</td></tr><tr><td>Phospho-IRS-1 Serine302 항체</td><td>Cell Signaling</td><td>#12879</td><td>1:1000 dilution</td></tr><tr><td>IRS-1 (D23G12) 항체</td><td>Cell Signaling</td><td>#12879</td><td>1:1000 dilution</td></tr><tr><td>Phospho-Akt Serine 473 antibody</td><td>Cell Signaling</td><td>#9916</td><td>1:2000 dilution</td></tr><tr><td>Akt (pan) (C67E7) 항체</td><td>세포 신호 전달</td><td>#9916</td><td>1:1000 희석</td></tr><tr><td>동물: C57BL/6</td><td>NAR Labs</td><td></td><td>연구에 사용된 야생형 마우스 균주</td></tr></tbody></table>

쥐의 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템 주변 포도 당 옹 졸 hypothalamic 인슐린 신호를 공부

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

인슐린 시상 하 부 및 주변 인슐린 응답에서 체계적인 물질 대사를 통제 한다. 주변 adipose 조직에 염증 반응 타입-2 당뇨병 mellitus (T2DM) 개발 및 시상 하 부의 식욕 조절에 기여 한다. Chemokine CCL5와 C C chemokine 수용 체 타입-5 (CCR5) 레벨 2 형 당뇨병 mellitus (T2DM)에 동맥 경화 증 및 포도 당 옹 졸을 중재 제안 되었습니다. 또한, CCL5 역할을 신경 내 분 비는 시상 하 부에 음식 섭취 량과 신체 온도, 따라서, 규제 hypothalamic 인슐린 신호에 그것의 기능 및 주변 포도 당 물질 대사의 규칙을 조사 하 라는 한다.
삼 투 마이크로 펌프 뇌 주입 시스템은 CCL5 기능을 조작 하 고 두뇌에 미치는 영향을 연구 하는 신속 하 고 정확한 방법. 그것은 또한 유전자 변형 녹아웃 동물을 생성 하는 편리한 대체 접근 방식을 제공 합니다. 이 시스템에서 CCL5 신호는 마이크로 삼 투 펌프를 사용 하 여 그것의 길 항 근, 메트로CCL5의 intracerebroventricular (ICV) 주입에 의해 차단 되었습니다. 주변 포도 당 물질 대사 및 인슐린 응답 구두 포도 당 내성 검사 (OGTT) 인슐린 내성 시험 (ITT)에 의해 발견 되었다. 인슐린 신호 활동 다음 동물에서 파생 된 조직 샘플에서 단백질 오에 의해 분석 되었다.
메트로CCL5 주입, 포도 당 대사와 인슐린의 7-14 일 후 응답 OGTT와 ITT의 결과에서 보듯이 마우스에서 손상 되었다. 국세청-1 serine302 인 산화 증가 했다 고 Akt 활동 쥐 hypothalamic 신경 CCL5 억제 다음에 감소 되었다. 모두, 우리의 데이터 마우스 뇌에서 CCL5를 차단 국세청 1 S302의 인 산화를 증가 하 고 좋습니다 hypothalamic 인슐린 신호, 포도의 장애 뿐 아니라 주변 조직에 인슐린 기능 저하로 이어지는 중단 대사입니다.

삼 투 주입 펌프 제어 또는 CCL5 적 만난CCL5 (뇌에 CCL5 효과 차단)를 포함 하는 어느 실제의 외과 implantations 생쥐에 실시 했다. 수술 후 7, 14 일, 주변 포도 당 포용 력 및 쥐의 인슐린 응답 했다 분석 프로토콜에서 설명 했 듯이 (7 일) 후 OGTT와 ITT (14 일 후)를 사용 하 여. 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)와 쥐의 인슐린 내성 검사 (ITT) 6 시간 금식 후 수행 했다. 쥐 포도와 구두, 그들의 각각 몸 무게에 따라 금액으로 관리 되었다. 혈액 포도 당 수치에 변화는 그림 3과 같이 기록 되었다. 인슐린 감도 테스트 쥐로 복 (IP) 인슐린 주사에 의해 수행 됐다 고 혈당의 변화를 즉시 측정 했다. 다른 주입 약으로 쥐에 있는 인슐린 자극 시 혈당의 변화는 그림 4와 같이, 기록 되었다. 혈액 포도 당 수준은 포도 당 관리 (그림 3B)와 실제 주입 마우스에 비해 CCL5 (메트로CCL5) 적에 게 주입 된 마우스에서 인슐린 주입 (그림 4B) 후 약간 감소 되었다. 이 결과 메트로CCL5 두뇌에서 관리와 생쥐에서 주변 포도 당 대사에 인슐린 기능에 장애를 건의 한다.
다음, 우리는 국세청 1 인 산화 및 hypothalamic 조직 Akt 활성화 수준을 평가 하 여 인슐린 신호의 활성화를 분석. 국세청-1 302에 떠들고 인 산화 했다 upregulated 쥐 적 (메트로CCL5)로 치료 (그림 5B-C) 때 마우스 일반적으로 먹이 했다. 컨트롤 그룹에서 실제 쥐 시상 하 부에 관리 했다 고 인슐린 도전 활성화 하류 신호 분자 Akt (phosphorylated Akt 떠들고 473) (그림 5D, F) 국세청-1 serine302 활성화 (증가 없이 그림 5D -E) 그리고 Akt serine473 인 산화입니다. 반면, Akt 신호 메트로CCL5, 주입 하는 쥐에서 증가 하지 하지만 대신 국세청 1 떠들고 302의 인 산화에 증가 했다. 한편, 시상 하 부 및 장애인된 주변 인슐린 기능에 인슐린 활동 중단 쥐의 뇌에서 CCL5 신호 차단. ITT, OGTT, 그리고 인슐린 도전 ex vivo에서 결과 같은 우리의 전반적인 결과에서 우리는 시상 하 부에 CCL5 인슐린 신호 활성화 및 인슐린 자극 시 주변 포도 당 물질 대사에 기여 하는 결론을 내렸다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56410/56410fig1.jpg"> 
그림 1입니다. 삼 투 펌프 준비 및 이식 수술 마우스에. (A) 뇌 주입 펌프와 키트 준비 마약 솔루션 끼얹는다. 빨간색 화살표는 액체로 가득 카 테 테 르 튜브를 나타냅니다. (B) 수정 고 마운트 정위 적 장치에 마우스 머리. (C) 별도 마이크로 삼 투 펌프-뇌 주입 이식에 대 한 피하 피부에서 피부의 가장 바깥쪽 레이어 설정; 대시 라인 삼 투 펌프 임 플 란 트의 위치를 나타냅니다. (D) 화살표 주입 측면을 나타냅니다. (E) 드릴 구멍 두개골에 표시 된 주변 (F) 장소 삼 투 펌프-뇌 주입 마우스의 뒤쪽으로 설정 하 고 드릴된 구멍 (대시 동그라미)으로 뇌 주입 바늘을 삽입. (G) 조직 접착제 접착제를 사용 하 여 두개골에 바늘을 해결 하 고 (H)와 같이 바늘 (G에서 지적 하는 위)의 상단을 분리. (나) 인감 사용 하 여 상처 조직 접착제 접착제. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56410/56410fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56410/56410fig2.jpg"> 
그림 2. 약 삼 투 펌프를 사용 하 여 심 실 지역에서 관리 될 때 마약 확산 영역의 대표 이미지. 반의 블루 심 실 지역 (A)에 삼 투 펌프 약물 주입 그림 및 측면 및 세 번째 심 (B)에 확산에 사용 하는 대표적인 약물 이다. 눈금 막대 = 0.5 cm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56410/56410fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56410/56410fig3.jpg"> 
그림 3. 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)에 의해 측정 하는 수술 후 마우스의 포도 당 대사. 혈당의 배포 변경 다음 WT 쥐에 포도의 구강 관리 실제 (A)과 길 항 근, MCCL5 주입 (B). 평균 ± SE. (그림8에서 수정)으로 표시 하는 데이터입니다. * p &#60; 양방향 ANOVA에 의해 0.05. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56410/56410fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56410/56410fig4.jpg"> 
그림 4. 쥐 혈액 포도 당-인슐린 내성 검사 (ITT)에서 인슐린 기능. 혈당의 분포 WT 쥐 들어갈 실제 (A), 인슐린 주사를 다음과 같은 변경 및 길 항 근, MCCL5 주입 (B). 평균 ± SE (그림8에서 수정)으로 제시 하는 데이터입니다. p &#60; 0.001, 양방향 ANOVA에 의해. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56410/56410fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56410/56410fig5.jpg"> 
그림 5입니다. 수술 후 쥐에서 인슐린 신호 활동. 실제 또는 CCL5 길 항 근, 메트로CCL5 치료 금지 떠들고 302 인 산화의 형태의 국세청-1 (인슐린 응답 기판-1, pIRS1S302) 쥐 시상 하 부 조직에서 (A) 서 부 럽 (MCCL5) 주입 펌프입니다. (B) 형광체-국세청-1S302 와 정상적인 쥐 시상 하 부에 주입 후의 관련된 수준.(C) 서쪽의 국세청-1 및 Akt 활성화 (인광 체-Akt S473, pAktS473) 또는 실제 또는 메트로CCL5 주입 후 hypothalamic 조직에서 인슐린 자극 없이 S302 인 산화의 더럽혀. (D-E) Pir 1S302, pS6KT421및 pAktS473의 상대 수준. (각 막대 그래프에 "2" 의미: n = 2 모든 quantifications에 대 한). (5-e, 빈 바 왼쪽: 인슐린; 없이 5 D-e, 스트립 바 오른쪽: 인슐린과). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56410/56410fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#</td>
			<td>마우스 ID</td>
			<td>바디</td>
			<td>포도 당</td>
			<td>시작</td>
			<td>0</td>
			<td>15</td>
			<td>30</td>
			<td>60</td>
			<td>90</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>무게</td>
			<td>Μ = 10xBW</td>
			<td>시간</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>501</td>
			<td>25.8 g</td>
			<td>258</td>
			<td>9:00</td>
			<td>9:00</td>
			<td>9:00</td>
			<td>9:15</td>
			<td>9:30</td>
			<td>10:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>502</td>
			<td>25.3 g</td>
			<td>253</td>
			<td>9:07</td>
			<td>9:07</td>
			<td>9:07</td>
			<td>9:22</td>
			<td>9:37</td>
			<td>10:07</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1. 구두 포도 당 내성 검사 (OGTT) 녹화 시간표
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#</td>
			<td>마우스 ID</td>
			<td>바디</td>
			<td>인슐린 0.25 IU</td>
			<td>시작</td>
			<td>0</td>
			<td>15</td>
			<td>30</td>
			<td>60</td>
			<td>90</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>무게</td>
			<td>Μ = 3xBW</td>
			<td>시간</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
			<td>분</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>501</td>
			<td>28.8 g</td>
			<td>86.4</td>
			<td>9:00</td>
			<td>9:00</td>
			<td>9:15</td>
			<td>9:30</td>
			<td>10:00</td>
			<td>10:30</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>502</td>
			<td>25.3 g</td>
			<td>75.9</td>
			<td>9:07</td>
			<td>9:07</td>
			<td>9:22</td>
			<td>9:37</td>
			<td>10:07</td>
			<td>10:37</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 2. 인슐린 포용 력 시험 (ITT) 기록에 대 한 시간표

이 프로토콜은 길 항 근, 메트로CCL5, 마이크로 삼 투 펌프 뇌 주입 시스템을 사용 하 여 쥐의 뇌에 전달 하 여 시상 하 부에 chemokine (C C 모티브) ligand 5 (CCL5)의 역할을 연구 합니다. 이 일시적인 억제 CCL5 활동의 중단 hypothalamic 인슐린 신호, 포도 당 옹 졸 및 주변 조직의 인슐린 감도.

쥐의 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템 주변 포도 당 옹 졸 Hypothalamic 인슐린 신호를 공부

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

이 실험의 전반적인 목표는 대뇌간 심실 전달 시스템인 미삼투압 펌프를 통해 길항제인 Met-C-C-L-5를 투여하여 C-C-L-5 신호를 조작하여 말초계의 인슐린 기능과 포도당 대사에서 시상하부 C-C-L-5 신호의 역할을 조사하는 것입니다. 이 약은 뇌의 체당 대사 및 인슐린 반응성을 조절하는 케모카인 C-C-L-5와 같은 생화학 생리학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 측정의 주요 장점은 실험자가 설치류에서 유전자 조작을 할 때 일반적으로 일어나는 보상 효과나 장애 발생 없이 일정 기간 동안 뇌의 특정 신호를 쉽게 조작할 수 있다는 것입니다.미삼투압 펌프를 삽입하고 혈중 인슐린과 포도당 수치를 정확하게 측정하려면 기술과 정밀도가 필요하므로 이 절차를 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 수술 하루 전, 1밀리리터 주사기와 뭉툭한 바늘을 사용하여 인공 뇌척수액(A-C-S-F)을 펌프에 채워 뇌 미세삼투압 펌프를 준비합니다. 그런 다음 펌프를 A-C-S-F에 담그고 셰이커에 올려 밤새 부드럽게 흔듭니다.다음 날, 펌프에서 ACSF를 제거하고 초과분이 누출될 때까지 ACSF에 희석된 미리 준비된 약물 용액을 완전히 채웁니다. 그런 다음 수술용 가위를 사용하여 카테터 튜브를 원하는 길이로 자릅니다. 끝이 뭉툭한 뇌 주입 바늘을 사용하여 튜브를 뇌 주입 키트에 부착합니다.그런 다음 주입 키트의 튜브에 약물 용액을 채웁니다. 키트를 조립한 후 미삼투압 펌프에 부착합니다. 마지막으로, 펌프가 마르는 것을 방지하기 위해 멸균된 50ml 튜브에 A-C-S-F의 삼투압 펌프 뇌 주입 설정을 담그십시오.수술을 시작하려면 마취된 마우스의 머리를 정위 장치에 장착하고 고정합니다. 수술용 가위와 집게를 사용하여 두개골을 덮고 있는 바깥쪽 피부를 잘라냅니다. 그런 다음 요오드를 사용하여 주변 두개골을 청소합니다.다음으로, 목 부위 근처에 뭉툭한 머리 가위를 사용하여 삼투압 펌프 뇌 융합 세트 이식을 위해 피하 피부에서 가장 바깥쪽 피부층을 분리합니다. 정위 장치를 사용하여 뇌 지도를 참조하여 주입 지점을 표시합니다. 손톱 드릴을 사용하여 두개골에 표시된 부위 주위에 구멍을 뚫고 쥐의 수막과 혈관이 부러지지 않도록 주의하십시오.그런 다음 관심 약물이 포함된 미삼투압 펌프 뇌 융합 세트 또는 대조군으로 A-C-S-F를 목 부위 뒤의 피부 아래에 놓습니다. 약물을 뇌에 주입하려면 뚫린 구멍에 뇌 주입 바늘을 삽입하십시오. 표면 탈감작 젤을 사용하여 바늘을 두개골에 고정하고 접착제가 마를 때까지 기다립니다.바늘 위의 돌출 부분을 잘라냅니다. 포도당 내성 검사를 시작하기 전에 포도당 3.75g과 증류수 15ml를 용해시켜 포도당 용액을 준비합니다. 실험 중 판독 값을 기록하기 위해 각 혈액 검사 사이에 적절한 간격으로 시간표를 설정하십시오.다음으로, 단식 후 각 마우스의 무게를 측정하여 주사에 적합한 포도당량을 계산합니다. 그런 다음 작업대에서 타이머, 포도당 칩, 혈당계, 인슐린 주사기 및 면도날을 준비합니다. 혈당 수치를 측정하려면 먼저 새 포도당 칩을 혈당계에 삽입하고 시작 버튼을 눌러 0을 설정합니다.그런 다음 목 뒤에서 마우스를 잡고 꼬리를 쓰다듬어 충분한 혈류를 확보합니다. 새 면도날을 사용하여 꼬리의 작은 조각을 잘라낸 다음 포도당 칩에 혈액 한 방울을 짜냅니다. 위내 세척 기술을 사용하여 마우스에 포도당을 공급하고 즉시 타이머를 시작합니다.다른 시점에서 포도당을 측정합니다. 인슐린 내성 검사를 시작하려면 인간 인슐린 용액 0.25 단위를 준비하십시오. 그런 다음 금식 후 각 마우스의 무게를 측정하여 주사에 적합한 인슐린 양을 계산합니다.다음으로, 실험 중 판독값을 기록할 시간표를 설정합니다. 마지막으로, 인슐린 주사 후 이전과 같이 혈당 수치를 측정합니다. 포도당 대사는 생쥐에게 포도당을 경구 투여한 후 수술 후 경구 포도당 내성 검사로 측정했습니다.A-C-S-F 주입 또는 C-C-L-5 길항제를 주입한 마우스의 혈당 수치 변화가 기록되어 여기에 표시됩니다. 인슐린 감수성 검사도 실시하여 C-C-L-5 길항제를 주입한 마우스의 혈당 수치는 대조군 마우스에 비해 약간 감소했을 뿐이며, 이는 C-C-L-5로 처리한 마우스에서 말초 포도당 대사에 대한 인슐린 기능의 손상을 시사합니다. 인슐린 신호 활성화를 분석하기 위해 인슐린 수용체 기질 단백질 또는 I-R-S-1 인산화를 시상하부에서 평가했습니다.C-C-L-5 길항제로 처리된 마우스에서 정상적으로 먹이를 먹었을 때 I-R-S-1 인산화는 대조군에 비해 상향 조절되었습니다. 인슐린 신호 활성화를 추가로 분석하기 위해 인슐린 다운스트림 신호 분자인 인산화세린 4-7-3 Akt의 수준도 평가했습니다. 그 후, 인슐린 챌린지 A-K-T 신호는 대조군 A-C-S-F 투여군의 마우스에서는 증가하였으나 C-C-L-5 길항제 투여군의 마우스에서는 증가하지 않았다.일단 마스터가 미세 삼투압 펌프를 삽입하면 제대로 수행하면 30분 밖에 걸리지 않습니다. 이 절차를 시도하는 동안 마우스 머리가 약간 올라가고 척추가 정위 장치에서 똑바로 서 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 기술은 연구자에게 내분비학에서 설치류의 뇌에서 약물, 케모카인 또는 단백질 기능의 효과를 탐구할 수 있는 방법을 제공합니다.이 절차에 따라 C-C-L-5 및 수용체 C-C-L-5가 음식 소화 및 대사 회로에 어떻게 참여하는지와 같은 추가 질문에 답하기 위해 바이러스의 뇌내 전달 또는 크리스퍼 9로 유전자 발현을 조작하는 것과 같은 추가 측정을 수행할 수 있습니다.

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마우스 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템을 사용하여 말초 포도당 불내성에 대한 시상하부 인슐린 신호 연구

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의식 억제 마우스에 인슈린 과다 - euglycemic 클램프

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이 비디오는 실험실 마우스에서 경구 포도당 내성 검사를 수행하는 방법을 소개합니다.

구강 포도당 내성 검사(OGTT): 마우스의 포도당 대사 측정

이 비디오에서는 미세삼투압 펌프 뇌 주입 시스템을 조립한 후 쥐의 두개골에 외과적으로 이식하는 방법을 보여줍니다. 이 시스템은 잠재적인 약물의 지속적인 전달을 가능하게 하고 뇌와 뇌 조직에 미치는 영향에 대한 연구를 용이하게 합니다.

마우스 모델의 연속 약물 주입 시스템: 지속적인 약물 전달을 위해 마우스 뇌에 미세삼투압 펌프 주입 시스템을 이식하는 수술 절차

이 비디오는 쥐의 뇌에 지속적으로 약물을 주입하는 것이 혈당 수치에 미치는 영향을 보여줍니다. 포도당 대사는 공복 한 쥐의 꼬리에서 혈액을 채취하고 경구 포도당 투여 전후의 포도당 수치를 측정하여 평가합니다. 인슐린 내성은 특정 간격으로 포도당 수치를 기록하여 마우스에 인슐린을 주입하여 평가합니다.

말초 포도당 수치에 대한 마우스 뇌에 대한 지속적인 약물 주입의 효과 평가

인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

현재 문서 생성 및 다이어트 유발 된 인슐린 저항 및 비만 모델 높은 지방 다이어트를 먹이 쥐의 대사 특성에 설명합니다. 그것은 더 상세한 프로토콜 경구 포도 당 내성 검사 및 포도 당 물질 대사에서 vivo에서의 전신 변경 모니터링 인슐린 내성 검사 수행을 갖추고 있습니다.

높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

여기에서는 환자를 위해 설계된 상업용 연속 포도당 모니터를 마우스에 이식하고 결과를 분석하기 위한 스크립트를 제공하는 간단한 방법을 설명합니다.

자유롭게 움직이는 마우스의 간단한 연속 포도당 모니터링

이 기사에서는 생쥐의 뇌척수액(CSF)에서 포도당 농도를 증가시키기 위한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 접근법은 높은 CSF 포도당이 생쥐의 신경변성, 인지 및 말초 포도당 대사에 미치는 영향을 연구하는 데 유용할 수 있습니다.

마우스 뇌척수액의 포도당 농도 증가를 위한 삼투압 미니펌프 이식

고혈당 클램프는 더 높은 혈당 농도를 유지하면서 인슐린 방출을 측정하는 데 사용됩니다. 저혈당 클램프는 역조절 반응에 의해 유도된 포도당 생성을 측정하기 위한 것입니다. 두 방법 모두 동일한 수술 절차를 사용합니다. 여기에서는 전신 포도당 대사를 평가하기 위한 클램프 기술을 제시합니다.

의식이 있는 쥐의 고혈당 클램프 및 저혈당 클램프

여기에서는 가능한 교란 요인을 감소시키면서 내분비 췌장 기능을 평가하기 위한 추가 기술로 온전한 췌장이 있는 마우스 맥관 구조를 통한 관류를 통해 포도당 자극 인슐린 분비(GSIS)를 수행하는 방법에 대한 세부 정보를 제공합니다.

온전한 췌장을 가진 마우스 맥관 구조를 통한 관류를 통한 포도당 자극 인슐린 분비

학습하세요 쥐 뇌하수체에서 CCL5 신호가 인슐린 기능과 포도당 대사에 미치는 영향을 마이크로삼투압 펌프로 Met CCL5를 투여하여 연구하는 방법을. 이 기법은 뇌 신경화학 조작에 유용합니다.

쥐의 뇌에 지속적인 약물 주입 시스템 주변 포도 당 옹 졸 Hypothalamic 인슐린 신호를 공부

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