Name: Suprachoroidal 세포 Autograft 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 재생 치료: 예비 Vivo에서 보고서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: 배우세요 지방유래 줄기세포와 혈소판을 이용한 황반변성 재생치료법. 이 수술기법은 망막세포 사멸을 늦추고 시력을 개선하여 저시력 환자의 회복을 돕습니다.

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저자 아무 승인 있다.

연구 프로토콜 낮은 비전 아카데미의 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 고 모든 과목 헬싱키 선언에 따라 서 면된 동의 서명 했다. 이 연구는 러프와 셰필드 대학에서 윤리적인 승인을 받고 있다.
참고: 드라이 연령 관련 황 반 변성 환자를 받을 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해의 포함 및 제외 기준 표 1에 설명 되어 있습니다.
1. 건조 연령 관련 황 반 변성 환자 들의 진단
<ol><li>공초점 레이저 스캐닝 레이저 ophthalmoscope, SD-10 월, 그리고 내 진단을 확인 합니다.</li>
	<li>각 그룹의 BCVA까지 고 거리 근처에 대 한 평가. 측정 포인트 (Pts) 근처 비전 (근접)에 대 한 VA. BCVA 시간 0 (T0), 90 (t 90), 측정 및 180 일 (T180) 비해 초기 치료 당뇨병 성 망막 증 연구 logMAR에 4 미터 (EDTRS) 차트.</li>
	<li>기록 전기 scotopic, mesopic photopic 세포 활동, 또는 임상 전기 생리학의 비전 (ISCEV)11국제 사회에 의해 2009 년에 설정 된 표준 규격에 따라 플래시에.</li>
</ol>2입니다. anesthetization
참고: LRRT 동안 마 취에서 황금 표준 국 소 마 취, 마 취 및 진정의 하위-장부의 침투에 의해 강화 됩니다. 특정 경우에 전신 마 취가 좋습니다.
<ol><li>각 막을 conjunctival 마 취 국 소 로컬 마 취약을 적용 하 여 얻은 lidocaine 4%와 1 %ropivacaine 수술 전에 dropwise 15-20 분 합니다.</li>
	<li>하위 conjunctival에 직접 침투 하 여 마 취 주사와 subtenon의 공간.</li>
	<li>복 부 지역, 지방 조직, 추출 전에 하위 conjunctival 및 하위-장부의 공간, 12 m m는 limbus에서 지역 침투를 사용 합니다. Carbocaine 또는 marcain 1200 IU 피 네 프 린 혼합 지역 마 취 제를 채택 한다.</li>
	<li>반복 된 작은 boli 통해 마약 진통제로 펜타닐을 사용 하 여 제대로 실행 될 수 있는 마 취를 통해 자가 진정을 제공 합니다. 복용량은 일반적으로 bolus 당 midazolam의 1 mg와 펜타닐의 0.025 mg 이다.</li>
</ol>3. Limoli 망막 복원 기술 준비
참고:이 기술을 나타냅니다는 궤도 헌 지방 subscleral 공간1,6,,712이주 Pelaez의 개입의 변종을. 수술로 이식할된 세포 주변 조직, 맥락 막, 및 망막18,,1920,21,22 科 및 angiotrophic 속성을 가진 많은 GFs를 생산할 수 있는 ,23,,2425. LRRT에서 이식할된 헌 셀 및 맥락 막 사이의 거리 깊은 sclerectomy에 의하여 감소 되 고 줄기와 맥락 막 사이의 접촉 영역 확장 안 흐름9, paracrine 헌 세포 분 비를 촉진 하 10,14.
<ol><li>맥락 막 그리고 sclera, Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)15,,1617를 호출 하는 프로시저 간의 세포 이식으로 수술 하기 전에 각각의 눈의 적절 한 소독을 수행 합니다.</li>
	<li>콜맨 외 및 복 부 지방에서 sovrachoroidal 공간15,,1617SVF에서 로렌스의 기술은 (그림 1)에 의해 얻은 줄기 이식</li>
	<li>혈소판과 침투 많은 작은 꽃 자루는 다음 단계를 통해 얻은 PRP 젤에서 파생.</li>
	<li>혈액6,12 원심 및 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)을 수집 합니다. 혈소판 degranulation 자극 많은 작은 꽃 자루6,12에 GF 릴리스를 발생합니다.</li>
</ol>4. 기술 사양 및 전략
참고: 지방 조직 수집 이며 로렌스와 콜맨 기술17(테이블의 자료)에 따르면, 환자의 복 부 피하 층에서 정화.
<ol><li>수동으로 수확 10 mL 3 m m 무딘 정을 사용 하 여 각 환자의 복 부 피하 층에서 살 찐 티슈의 로렌스와 콜맨 기술17 (그림 2A/2B)에 따라 잠금 주사기에 연결.</li>
	<li>20 ° c에서 (그림 2C) 1500 x g에 5 분 동안 원심 분리 하 여 혈액, 지방, 기름, 그리고 액체에서 살 찐 티슈의 순수한 SVF를 구분 합니다. SVF 줄기17의 매우 풍부 하다.</li>
	<li>PRP 준비를 위한 별도 튜브 22 G 바늘와 인간의 말 초 혈액의 8 mL를 수집 합니다.</li>
	<li>20 ° c에서 (그림 2D) 1500 x g에 5 분에 대 한 수집 된 혈액 원심 LRRT, 자가 지방 이식, ADSC 확산, 증가 안 관류, 호의의 더 나은 생존 및 지방7만 분 비는 그 요인의 행동의 더 포괄적인 변조에 뒤이어 변화 결과에 11,17.</li>
	<li>궤도 지방에서 얻은 이식 고이 포켓의 잔류 볼륨 SVF는 로렌스에 따르면 얻은 PRP에서 줄기의 혼합물으로 포화 suprachoroidal 포켓 (자세한 내용은 4 단계에서 특정 4.4 및 4.5)을 구축 하 고 콜맨 기술17.</li>
</ol>5. Suprachoroidal LRRT (Limoli 망막 복원 기술)에 의해 Autograft: 수술 및 기술 세부 사항
<ol><li>6-0 비단 봉합 사, 열 등 한 일시적인 limbus 근처와 sclera 앵커.</li>
	<li>5.5"Westcott Tenetomy 곡선된가 위를 사용 하 여 열 등 한 일시적인 limbus에서 11 m m 부근의 subtenonian 공간을 엽니다.</li>
	<li>Limoli-바 실 conjunctival 견인 scleral 외과 분야를 만들기 위하여이 공간에 삽입 합니다.</li>
	<li>5 mm 초승달 칼 각도 경사를 사용 하 여 미리 잘라 플랩에는 limbus에서 8 m m에서 sclera에 측면. 플랩 경첩은 항상 방사형 및 외과 의사의 왼쪽에.</li>
	<li>Limbus에서 8 m m에서 열 등 한 일시적인 사분면에서 초승달 모양의 칼, 각도 경사를 사용 하 여 방사형 경첩에 의해 측면에 약 5 mm의 깊은 scleral 도어를 엽니다. 맥락 막의 슬레이트 색상을 보려면 적절 한 깊이에서 sclerectomy을 실시 합니다.</li>
	<li>후속 suprachoroidal autograft에 혈액 순환을 촉진 하기 위하여는 플랩의 원심 부분에 약간 operculum를 제거 함으로써 간격을 만듭니다.</li>
	<li>안과 집게와 궤도 지방에서에서 추출 열 등 한 비스듬한 근육 위에 간격. 추출 된 지방 그것의 주입 후 살아남을 수 있도록 충분히 나가도록는 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>부드럽게 안 침대와 문 근 위 가장자리에 안 6/0 polyglactin 섬유와 봉합에 헌 지방 플랩을 놓습니다.</li>
	<li>피하기 위해 압축 또는 그것의 영양 혈관에 지방 작은 꽃 자루에 scleral 플랩 봉합</li>
	<li>PRP 젤 (혈액 소재의 원심 분리, 구성 요소, 및 혈소판 degranulation26분리 하 여 얻은)의 1 mL와 함께 지방 작은 꽃 자루의 기질에 침투 30 G 각도 (30 °) 정 맥을 사용 하 여.</li>
	<li>결 막의 양쪽을 봉합에 대 한 준비. 그런 다음, conjunctival 견인 제거.</li>
	<li>6/0 polyglactin 섬유를 사용 하 여 결 막 봉합</li>
	<li>폐관, 플랩, 맥락 막, 및 안 autograft 사이의 subscleral 공간에 자가 지방 이식 작은 유연한 플라스틱 튜브를 삽입 하는 공간을 남겨 주세요.</li>
	<li>자가 지방 이식, 맥락 막, scleral 플랩 사이의 잔여 공간 0.5 포화 cc SVF (줄기의 리치)의 이전 scleral 포켓에 삽입 작은 유연한 플라스틱 튜브에 의해 단계 3.2에서에서 준비.</li>
	<li>잔여 공간을 포화 후 봉합을 닫습니다.</li>
	<li>수술 후 3 일간 500 mg azithromycin 항생제 치료의 관리. 또한, 항생제 및 스테로이드 조합으로, 페니 등 디, 약 15-20 일 동안 눈 드롭 치료를 제공 합니다. 참고:는 autograft SVF, 그리고 PRP에서 줄기 지방 세포로 이루어진 지금 되었습니다 취득 했다26. 깊은 sclerectomy paracrine 안 흐름으로 헌 세포의 분 비를 자극 하 여 이식할된 헌 세포와 맥락 막 사이의 거리를 줄일 수 있습니다. 같은 목적을 위해 줄기와 맥락 막 사이의 접촉의 영역을 확장 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

발표 ARVO 2015 년 5 월 3-7-덴버, CO-미국.

이 연구의 주된 목적은 adipocytes, SVF, PRP에 줄기의 suprachoroidal 이식 버지니아 및 건조 AMD 영향을 눈에 망막 감도 시간이 지나면서 개선 수 여부를 평가 했다. 또 다른 주요 목적은 여러 전 임상 연구 GF에 기초를 둔 치료 여러 가지 질병에 환자 치료에 도움이 될 수 있는 제안 이후 최근 문학에 따라 이러한 세포의 가능한 치료 효과 입증 했다.
실제로, 일부 연구 자가 인간 유도 만능 줄기 세포 (iPSC) AMD18, 에 대 한 조직 대체 요법에 망막 안료 상피 (RPE) 재생 목적으로 이식에 대 한 셀룰러 소스 대표 수 19. 이러한 셀 시트는 전형적인 RPE 마커를 표현할 수 있는 전시 단층 편광 GF 분 비, 보여주는 phagocytotic 능력 뿐 아니라 네이티브 RPE18,</s...

세포 치료, 여러 만성 질환을 치료 하는 부상된 지역에 있는 줄기/뿌리 세포의 조직 또는 지방 주입의 구성 된 지난 10 년간1에 세심 한 관심을 받고 있다. 1990 년대 이후, 성장 인자 (GFs)가 그들의 잠재적으로 치료 역할 망막 위축2에 대 한 연구 되었습니다. 사실, 많은 인간 세포 GFs, 차단 또는 apoptosis, 즉, 셀3의 프로그램 된 죽음을 늦출 수 있는 특정 단백질을 생산할 수 있다.
그것은 건조 연령 관련 황 반 변성 (AMD)은 어디 점진적이 고 돌이킬 수 없는 세포 죽음 관련 포토 리셉터 레이어 및, 따라서, 중앙 시각 기능4의 손실에 부상 위축 한 망막 질환으로 알려져 있습니다. AMD는 선진국 및 모든 황 반 유년까지 효과적인 치료 부족의 80%에 대 한 계정에 55 세 이상의 사람에서 실명의 주요 원인입니다.
몇 가지 연구는 다양 한 소스에서 헌 GFs 얻어질 수 있다 나타났습니다. 이 구성 하는 다른 세포 유형, 궤도, 혈소판 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)에서 파생 된 지방과 지방 유래 줄기 세포 (줄기)의 지방 조직5 stromal 혈관 분수 (SVF)에 포함 된에서 파생 된 지방 기질 세포를 포함 하 여 ,,67. 현재 GF 세트 망막 neuroenhancement, 및 Filatov, Meduri, Pelaez, 연구 및 Limoli는 자가 지방 이식 (후미) 효과적인8,,910은 설명 했다.
또한, 건조 AMD의 영향을 받는 눈11게시물 suprachoroidal 헌 이식, 기록 이전 연구 electroretinogram (에) 데이터에 상당한 개선을 보여주었다. Suprachoroidal 공간에서 수술로 이식할된 조직을 망막 세포, 그들의 apoptosis6,,712연기의 paracrine 분 비 변조. 외부 핵 층 두께 고려 하면 기니 피그의 망막의 조직학 검사 GFs 망막에 영양 영향을 미칠 수 있습니다 나타났습니다. 따라서, GFs의 직접 또는 간접 사용 잠재적으로 분자 inducers 억제제6,,712사이의 균형된 관계를 통해 치료 혜택을 가져올 수 있다.
이 방법의 목적은 시력 (BCVA) 및 microperimetry (내) 응답 건조 AMD 영향을 눈에 수정 adipocytes, 줄기 SVF와 PRP의 suprachoroidal 이식 가장 향상 시킬 수 있는지를 평가 하는. 이 연구 autograft는 인용된 문학6,7,,1213에 따르면 그것의 GF 생산 기초의 치료 효과 입증 하는 것을 목표로.

<table><tbody><tr><td>뭉툭한 캐뉼러, 3mm.&nbsp;</td><td>멘토, 캘리포니아주 산타바바라.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luer-LokTM 주사기.&nbsp;</td><td>BD Biosciences, 프랭클린 레이크, 뉴저지.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>재생-BCT 튜브.&nbsp;</td><td>리젠킷; RegenLab, 르 몽 쉬르 로잔, CH.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>&nbsp; RegenPRP 센트리. RegenLab, 르 몽 쉬르 로잔, CH.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 인치 (0.9 mm x 25 mm).&nbsp;</td><td>BD Biosciences, 프랭클린 레이크, 뉴저지.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS 통계 버전 19.0</td><td>IBM Corp., Armonk, NY, USA.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 스캐닝 레이저 검안경&nbsp;</td><td>Nidek Inc, 캘리포니아 프리몬트</td><td>Nidek F10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cirrus 5000 스펙트럼 도메인-광학 간섭 단층 촬영</td><td>Carl Zeiss Meditec AG, 예나, 독일</td><td>&nbsp; SD-10월&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Maia 100809 미세층계&nbsp;</td><td>CenterVue S.p.A., 파도바, 이탈리아</td><td></td><td></td></tr><tr><td>안구 전기생리학 전기 의료 시스템,</td> <td>C.S.O., S.r.l., 스칸디치, 이탈리아</td><td></td><td>&nbsp; ERG를 위한 레티맥스&nbsp;</td></tr></tbody></table>

suprachoroidal 세포 autograft 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 재생 치료: 예비 vivo에서 보고서

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

이 연구 목적으로 검사 suprachoroidal 이식 autologous 세포의 최고의 교정된 시력 (BCVA)을 향상 시킬 수 있습니다 및 눈에 영향을 microperimetry (내)에 대 한 응답을 통해 시간이 지남에 연령 관련 황 반 변성 (AMD) 건조 여부는 생산 및 주변 조직에 성장 인자 (GFs)의 분 비. 환자는 각 연구 그룹에 무작위로 지정 되었다. 모든 환자는 건식 AMD와 BCVA 해상도 (logMAR)의 최소 각도의 1 대 이상의 진단 했다. 11 환자에서 11 눈을 포함 하는 그룹 A에 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해 실시 됐다. 기술은은 adipocytes, stromal 혈관 분수, 및 suprachoroidal 공간에서 혈소판이 풍부한 혈장에서 혈소판에서 얻은 지방 유래 줄기 세포를 이식 하 여 수행 되었다. 반대로, 그룹 B, 14 환자의 14 눈을 포함 하 여 컨트롤 그룹으로 사용 되었다. 각 환자에 대 한 진단 검사 confocal 레이저 ophthalmoscope 및 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)에 의해 확인 했습니다. 그룹 A, BCVA 향상 0.581 0.504 0.376 logMAR를 90 일에서 180 일에서 (+32.20%) postoperatively. 또한, 내 테스트 12.59 db 11.44 dB에서 180 일에서 증가. 맥락 막 뒤에 투입 하는 다른 세포 유형 상수 GF 분 비 안 흐름에서을 확인 할 수 있었다. 따라서, 결과 이식할된 그룹에서 시각 예민 (VA) 증가 수 나타냅니다 이상 6 개월 후 제어 그룹에서에서.

여기에 제시 된 절차를 사용 하 여, 환자의 건조 AMD 영향, BCVA 해상도 (logMAR)의 최소 각도의 1 대 이상 두 그룹 연구에 등록 했다. 그룹 A, 그룹 B, 14 환자의 14 눈을 포함 한 반면 11 환자, 받은 suprachoroidal 헌 이식 Limoli 망막 복원 기술 (LRRT)에 의해의 11 눈을 포함 하 여, 컨트롤 그룹으로 사용 되었다.
스튜던트 t-검정 및 치 평방 테스트 비교, 각각, 두 연구 그룹 (표 2) 사이 평균 연령 및 성별 분포에 사용 되었다. 통계 분석 및 데이터 시각화 LRRT 수술 전후를 수행 했다.
전처리 및 후 처리 차이 있 중요 한 여부 확인 Wilcoxon-맨-휘트니 부...

이 연구의 목표는 stromal 혈관 분수에 포함 된 지방 유래 줄기 세포와 혈소판 Limoli 망막 복원 기술에 의해 혈소판이 풍부한 혈장에서 파생 된 suprachoroidal 이식 시력을 향상 시킬 수 있는지를 평가 하 고 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 영향을 눈에 망막 감도 응답.

Suprachoroidal 세포 Autograft 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 재생 치료: 예비 Vivo에서 보고서

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

이 외과적 개입의 전반적인 목표는 저시력 환자의 시력 성능과 재활을 개선하기 위해 망막 세포 사멸을 늦추는 망막 신경 강화를 도입하는 것입니다. 이 방법은 건성 AMD 또는 신경 시신경 위축증과 같은 망막 위축성 변성으로 인한 저시력 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 보조 확대 장치로 자연 환경과 시력 모두에서 시력을 향상시킬 것입니다.이러한 망막 수복은 밑에 있는 콜로이드와 함께 혈관 척추경 지방 증가를 촉진합니다.그리고 척추경의 혈관화를 강화하여 척추경의 건강과 생존을 향상시킵니다. 이 치료법은 또한 성장 인자의 참여를 통해 모든 망막 요소에 재생 시동을 제공하기 때문에 작동합니다.이 기술은 망막 변성 interry를 늦추기 위해 개발되었지만 치료가 필요한 성인 조직이나 장기 시스템에도 적용할 수 있습니다. 먼저 22게이지 바늘을 사용하여 8ml의 말초 혈액을 수집하여 혈소판이 풍부한 혈장을 수집합니다. 분리기 젤이 있는 구연산나트륨 진공관을 사용하면 세포 성분과 혈장 사이의 분리를 촉진할 수 있습니다.혈액 튜브를 1500g, 섭씨 20도에서 5분 동안 원심분리합니다. 혈액은 세 개의 층으로 분리됩니다. 혈소판이 부족한 혈장으로 구성된 최상층을 흡인하고 폐기합니다.그런 다음 혈소판이 풍부한 혈장으로 구성된 중간층을 수집하고 저장합니다. 지방 조직을 적출하기 위해 Limoli 망막 수복을 위해 황반 변성 환자를 마취합니다. 복부 피하층에서 지방 조직을 채취합니다.잠금 주사기에 연결된 3mm 뭉툭한 캐뉼라를 사용하여 약 10ml의 조직을 수집합니다. Lawrence and Coleman 기법을 사용합니다. 그런 다음 섭씨 1500도와 20도에서 5분 동안 샘플을 회전시켜 지방 조직의 기질 혈관 분획을 분리합니다.혈액층 바로 위에 위치한 기질 혈관 분획에는 지방 유래 줄기 세포가 매우 풍부합니다. 자가이식에는 1밀리리터 이상이 필요하지 않습니다. 마지막으로, 0.5-0.6 밀리리터의 기질 혈관 분획, 0.2-0.3 밀리리터의 혈소판이 풍부한 혈장, 0.1 밀리리터의 히알루론산을 전달 튜브에 로드하여 자가이식편을 구성합니다.두 개의 주사기와 3방향 마개를 사용하여 혼합합니다. 공막하 공간으로의 자가이식편 주입을 용이하게 하기 위해 캐뉼라의 튜브를 5mm 각도로 기울입니다. 수술을 시작하기 전에 환자가 앉은 자세로 치료를 받는 눈을 표시하여 작업 영역을 구분하고 눈의 생리적 순환 비틀림 효과를 피하십시오.먼저 하측두변부 근처에 6-0 실크 봉합사로 공막을 고정하여 수복 수술을 시작합니다. 공막 고정은 중요한 단계입니다. 바늘은 쪼리에 너무 깊거나 너무 피상적으로 들어가서는 안 됩니다.눈에 구멍을 뚫으면 공기가 빠집니다. 실이 oketa이면 눈이 고정되지 않습니다. 얼마나 스트레스입니까!다음으로, 5.5인치 Westcott 건절개술 곡선 가위를 사용하여 하측두변부에서 11mm 떨어진 결막하 및 건부 아래 공간을 엽니다. 그 안에 Limoli 기저 결막 견인기를 삽입하여 공막 수술 영역을 만듭니다. 이제 5mm 초승달 모양의 칼을 사용하여 비스듬히 만들고 가장자리에서 8mm 떨어진 공막의 아래쪽 측두 사분면 내에 플랩을 미리 자릅니다.플랩 힌지를 방사형으로 만들고 외과 의사의 왼쪽에 오게 합니다. 다음으로, 비스듬한 비스듬한 초승달 모양의 칼을 사용하여 약 5mm 너비의 깊은 공막 문을 열고 가장자리에서 8mm 떨어진 하부 측두 사분면에 방사형 경첩이 있습니다. 안구 표면에 접선으로 매우 천천히 자릅니다.맥락막 공간을 관통하지 마십시오. 이상적인 깊이는 밑에 있는 맥락막의 푸르스름한 색이 나타나고 회백색의 공막 흔적이 덜 보일 때 달성됩니다. 이 단계에서 맥락막은 얇은 얼음 덩어리와 같습니다.경피절제술이 충분히 깊지 않으면 이식된 세포에서 생성된 그람 인자가 원하는 대로 침투하지 못합니다. 경화절개술이 너무 깊으면 맥락막 천공의 위험이 있어 출혈 또는 대량 천공으로 이어지고 망막 손상이 뒤따릅니다. 이제 안와 지방을 모으십시오.피판의 원위부에 있는 약간의 수술을 제거하여 틈을 만들어 후속 맥락상상 자가이식편에서 혈액 순환을 촉진합니다. 그런 다음 안과 겸자를 사용하여 하부 경사근 위의 틈에서 안와 지방을 추출합니다. 척추경에서 작은 출혈이 있는지 확인하십시오.이는 자가이식편의 생존에 중요한 양호한 혈관형성을 나타냅니다. 안와 지방 수술은 또 다른 중요한 단계입니다. 우리는 출혈이나 근육 절단을 방지하기 위해 가위 없이 안와 공간을 엽니다.그런 다음 공막에 고정하기 전에 지방 꽃자루를 분리합니다. 다음으로, 맥락막층에 자가 지방 척추경을 부드럽게 놓고 맥락막 6-0 폴리글락틴 섬유를 사용하여 문의 근위 가장자리를 따라 봉합합니다. 다음으로, 공막 피판을 봉합하여 지방 척추 또는 영양 혈관에 압박이 가해지지 않도록 합니다.이제 지방 척추경의 기질로 30게이지 각진 캐뉼라를 사용하여 혈소판이 풍부한 혈장 젤 1ml를 침투시킵니다. 다음으로, 견인기를 제거하여 봉합을 위해 결막의 측면을 준비합니다. 그런 다음 7-0 폴리글락틴 섬유를 사용하여 결막을 봉합하되 닫지 마십시오.공막 주머니에 작고 유연한 튜브를 삽입할 수 있는 충분한 공간을 남겨 두십시오. 이제 튜브를 공막 주머니에 삽입하고 공막 아래 공간에 자가이식편을 주입합니다. 마지막으로, 혈소판이 풍부한 혈장, 항생제 및 스테로이드로 구성된 결막하 하이브리드를 주입합니다.다음 3일 동안은 전신 항생제 요법을 제공하고, 다음 15-20일 동안은 항생제와 스테로이드가 모두 함유된 안약을 제공합니다. 건조하고 노화와 관련된 황반변성 환자는 두 그룹으로 나뉘었습니다. 각각은 BAM 로그 척도에서 최소 1의 가장 정확한 시력 점수를 받았습니다.대조군의 환자들은 항산화 보충제와 필요한 경우 시력 재활을 기반으로 한 치료를 받은 반면, 실험군은 LRRT를 받았습니다. 결과 진단은 컨포칼 스캐닝 레이저 검안경과 스펙트럼 영역 광간섭 단층촬영을 사용하여 수행되었습니다. 90일 후에는 치료군의 BAM 로그 점수가 개선되었고, 180일 후에는 더욱 개선되었다.또한, LRRT 치료를 받은 환자의 미세주변 검사 점수는 평균 11.44데시벨에서 평균 12.59데시벨로 증가했습니다. 전반적으로, 이러한 결과는 맥락막 뒤에 이식된 다양한 세포 유형이 맥락막 흐름으로 지속적인 성장 인자 분비를 보장할 수 있음을 시사합니다. 그 결과, 이식된 그룹의 시력이 대조군보다 더 많이 증가했습니다.이 비디오를 시청한 후에는 성장 인자와 잔류 망막 세포 간의 상호 작용을 촉진하는 수술을 사용하여 세포 사멸에 대한 잠재적인 치료법에 대해 잘 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행되면 한쪽 눈당 13분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 공막 고정 중과 깊은 경화절개술을 하는 동안 조심스럽게 밟는 것이 중요합니다.그렇지 않으면 이 기술은 비교적 간단하고 안전합니다. 개발 후, 이 기술은 신경-망막 위축성 변성을 멈추거나 늦추고 시각적 성능을 향상시킬 수 있는 가능성을 탐구하기 위해 망막 복원 분야의 연구자들에게 길을 열었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

세포 이식은 광수용체 손실을 특징으로 하는 망막 변성의 치료를 위한 전략을 나타낸다. 여기에서 우리는 이식 가능한 광수용체의 농축 및 성인 마우스로그들의 감하 이식을 위한 방법을 기술합니다.

성인 마우스 망막으로 MACS 정제 광수용체 전구체 세포의 감하 이식

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

망막 색소 상피 (RPE) 대체 전략 및 유전자 기반 치료는 여러 망막 퇴행성 조건이 고려된다. 임상 번역, 큰 눈 동물 모델은 환자에 적용 할 수있는 수술 기법을 연구해야합니다. 여기에서 우리는 다양하고 비용 효율적인 RPE 이식에 맞 망막 수술 토끼 모델을 제시한다.

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Subretinal 주입은 나이 관련 황 반 변성에 대 한 줄기 세포 대체 요법의 전 임상 연구에 널리 적용 되었다. 이 시각화 된 문서에서는, 우리 쥐 눈 세포를 제공 하는 트랜스 scleral 접근을 통해 덜 위험 하 고, 재현 고 정확 하 게 수정 subretinal 주입 기술을 설명 합니다.

쥐의 눈으로 인간 망막 안료 상피 세포의 트랜스 scleral Subretinal 이식에 대 한 세련 된 프로토콜의 개발

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

이 프로토콜의 목표는 노인 또는 병에 걸리는 인간 Bruch의 막에 망막 안료 상피 (RPE) 세포의 경작을 설명. 이 메서드는 손상 된 세포 외 매트릭스에 RPE 세포 행동 공부에 적합.

세 인간 Bruch 막의 Ex Vivo 모델에서 망막 안료 상피 세포의 배양

망막 조직을 인간의 양수 막과 동물 모델에 이식의 준비 위에 경작 인간의 pluripotent 줄기 세포에서 파생 된 망막 색소 상피 세포의 구성 하는 방법을 설명 합니다.

인간 배아 줄기 세포에서 파생 된 이식 적합 한 망막 색소 상피 조직 공학

여기서, 다양한 포유류(마우스, 쥐, 토끼, 돼지 및 소)로부터 일차 홍채 및 망막 색소 상피 세포를 분리하고 변형시키는 프로토콜이 제시된다. 이 방법은 전 생체 분석 및 인간에게 양도 할 수있는 생체 내 연구를위한 다양한 셋업에서 안구 유전자 치료 접근 방식을 연구하는 데 이상적입니다.

비 바이러스 유전자 치료를 위한 포유류 1차 안료 상피 세포의 격리, 배양 및 유전 공학

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

이 프로토콜은 망막 변성이 있거나 없는 마우스 수용자에서 수술 합병증 발생률이 낮은 망막하 세포 이식편을 안전하고 정확하게 전달하기 위한 동공 시야 유도 경공막 접근법을 제시합니다.

망막 변성 마우스 모델에서 망막하 이식편의 Transpupillary-Guided Trans-Scleral Transplantation

동결 보존 후 hESC 유래 광수용체 전구 세포의 제조 및 rd10 마우스에서 이러한 세포의 망막하 전달에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

rd10 마우스에서 인간 배아 줄기 세포 유래 광수용체 전구체의 망막하 전달

배우세요 지방유래 줄기세포와 혈소판을 이용한 황반변성 재생치료법. 이 수술기법은 망막세포 사멸을 늦추고 시력을 개선하여 저시력 환자의 회복을 돕습니다.

Suprachoroidal 세포 Autograft 건조 연령 관련 황 반 변성에 의해 재생 치료: 예비 Vivo에서 보고서

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