Name: 샘플 준비 및 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 Exosomes의 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: 배우세요 전자현미경을 이용한 엑소좀 형태 관찰 및 특정 단백질 위치 분석 방법을. 이 기술은 세포 간 소통과 암 진단 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 생물에 의해 지원 되었다 &#38; 의료 기술 개발 프로그램 국가 연구 재단 (NRF)의 &#38;는 정부에 의해 투자 (MSIP &#38; 보건복지부) (No. 2016M3A9B6904244). 우리는 또한 exosome의 정화의 약용 Bioconvergence 연구 센터의 회원을 감사합니다.

1. 블록 준비, 단면, 얼룩이 지 고는 Exosome의 이미징
<ol>
	<li>1.5 h23에 대 한 100000 x g에서 원심 분리에 의해 HCT116 세포의 문화 상쾌한에서 exosomes을 펠 렛. 표면에 뜨는 문화를 제거 하 고 신중 하 게 순화 exosome 펠 릿 1 mL의 0.1 M 나트륨 cacodylate 솔루션 (pH 7.0) 4 ° c.에 1 시간에에서 2.5%도 해결 0.1 M 나트륨 cacodylate, 160 ml 증류수 (DW) 4.28 g cacodylic 산 분해. 0.1 M HCl 최대 200 mL 증류수와 함께 게와 7.4에 pH를 조정 합니다.</li>
	<li>정착 액을 제거 하 고 실 온에서 0.1 M 나트륨 cacodylate 버퍼의 1 mL와 함께 알 약을 씻어. 각 변경 10 분 지속으로 세 번을 반복 합니다.</li>
	<li>후 4 ° c.에 2% 오스뮴 tetroxide 1 h의 1 mL와 함께 샘플을 수정</li>
	<li>정착 액을 제거 하 고 세 번 0.1 M 나트륨 cacodylate와 린스 버퍼 마다 10 분.</li>
	<li>등급된 아세톤 시리즈와 10 분 동안 품 어 (50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%, 각각) 뿌리에.</li>
	<li>아세톤을 제거 하 고 30 분에 대 한 3:1 아세톤: 낮은 점도 포함 혼합물의 솔루션을 품 어. Exosome 펠 렛 튜브입니다.</li>
	<li>매체를 제거 하 고 1:1 아세톤: 낮은 점도 포함 혼합 매체, 추가 다음 30 분 동안 품 어.</li>
	<li>매체를 제거 하 고 1:3 아세톤: 낮은 점도 포함 혼합 매체, 추가 다음 30 분 동안 품 어.</li>
	<li>매체를 제거 하 고 추가 100% 낮은 점도 혼합물을 포함 하 고 하룻밤 실 온에서 품 어.</li>
	<li>65 ° c.에 24 h에 대 한 포함 형과 빵을 사용 하 여 혼합물을 포함 하는 순수한 낮은 점도 샘플 포함</li>
	<li>60 nm 두께 울트라-톰을 통해 섹션을 준비 합니다.</li>
	<li>더블-20 분 동안 2 %uranyl 아세테이트로 얼룩 그리고 10 분 시트르산. 레이놀즈 리드 솔루션에 대 한 총 50 mL 증 류 물 납 질 산 및 나트륨 시트르산의 1.76 g 1.33 g를 추가 합니다.</li>
	<li>전송 전자 현미경 검사 법 80에서 아래의 표에서 관찰 kV.</li>
	<li>"취득"을 클릭 하 고 클릭 "파일" 및 "이름으로 저장" CCD 카메라 시스템 80에서 전자 현미경에 kV. 노출 시간에 대 한 자동 설정을 따릅니다.</li>
</ol>
2. 면역-얼룩 섹션 및 이미징 (그림 1)의
<ol>
	<li>매우 톰을 사용 하 여 60 nm ultrathin 섹션을 잘라 고 니켈 격자에 수집 합니다.</li>
	<li>10 분 무료 알데하이드 그룹을 끄다 0.02 M 글리신의 50 µ L에서에서 격자를 품 어.</li>
	<li>린스에 DW의 100 μ 3 번 각각 1 %BSA 포함 하는 PBS에서 1 시간에 대 한 실 온에서 10 분 품.</li>
	<li>1 시간 (해당 되는 경우 필요한,이 단계 실행 되어야 한다 4 ° C에서 하룻밤.)에 대 한 격자에서 50-100 µ L의 KRS 항 체24 (1: 100 0.1 %BSA 포함 하는 PBS에) 안티를 품 어</li>
	<li>10 분 동안 0.1 %BSA 포함 하는 PBS의 5 별도 방울 (50 µ L)으로 격자를 씻어.</li>
	<li>1 h (안티-토끼 IgG 0.1 %BSA 포함 하는 PBS에 10 nm 금 입자 (1: 100)를 활용)에 대 한 2차 항 체의 방울을 격자를 전송 합니다.</li>
	<li>5 세척 격자 각 10 분 0.1 %BSA 포함 하는 PBS의 방울 (50 µ L)을 구분 합니다.</li>
	<li>더블-얼룩 어두운 조건 하에서 20 분 동안 2 %uranyl 아세테이트와 Reynold의 리드 시트르산 10 분, 각각.</li>
	<li>"취득"을 클릭 하 고 클릭 "파일" 및 "저장" CCD 카메라 시스템 80에서 가장 아래에 kV. 노출 시간에 따라 자동 설정.</li>
</ol>
<img alt="튜브 및 도구의 순차 크로마토그래피 공정; 단백질 정제 실험." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56482/56482fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
그림 1: 샘플 준비 과정 immunostaining. (A) 이중 고정된 exosome 탈수 이며 저 점도 수 지 혼합물 포함으로 침투. (B) 포함 수 지. (C) 다이아몬드 칼으로 초박형 섹션. 면역-골드 라벨에 대 한 (D) 설정. Ultrathin 섹션 격자는 젖은 종이 타월로 배치 parafilm에 액체 방울에 배치 됩니다. 각 섹션은 50-100 µ L 항 체, 방울과 알을 품을 다음 버퍼로 세척. (E) uranyl 아세테이트와 얼룩 더블 고 시트르산. 뚜껑은 알루미늄 호 일 중 금속 얼룩으로 덮여 있다. (F) 솔루션 얼룩 필터 종이 의해 제거 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56482/56482fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
3. 부정적인 얼룩이 지기
<ol>
	<li>글로우 방전 발광 방 전자에 의해 1 분 동안 얇은 formvar/탄소 코팅 필름 200 메쉬 구리 EM 격자.</li>
	<li>2%의 1 mL와 함께 순화 exosomes 수정 Paraformaldehyde (PFA) 5 분. 주의: Paraformaldehyde 가스는 유독 합니다. 모든 작업은 통풍이 증기 두건에서 행해져야 한다.</li>
	<li>5-7 µ L exosome 정지 솔루션에 로드 하 고 1 분 동안 품 어. Exosome의 농도가 너무 높은 경우, 희석 농도를 1/2-1/5.</li>
	<li>주사기로 EM 격자의 표면에 필터링 된 1 %uranyl 아세테이트 (UA) 솔루션 ~ 20 방울과 함께 즉시 얼룩.</li>
	<li>필터 종이 그리드 가장자리에 연락 하 여 격자에 과잉 UA 솔루션을 제거 합니다.</li>
	<li>신속 하 게 물 한 방울과 함께 그리드를 헹 구 십시오. 이 단계는 초과 얼룩 솔루션을 제거 합니다.</li>
	<li>그리드 테이블에, 핀셋으로 눌러 놓고 실 온에서 10 분 동안 건조 문화 접시와 부분적으로 그리드를 커버 합니다.</li>
	<li>80 편으로 미래 관측을 위해 EM 격자 상자에 그리드를 저장 kV.</li>
</ol>
4. 전체 산 Immunostaining에 대 한
<ol>
	<li>글로우 방전 얇은 formvar/탄소 필름 코팅 200 메쉬 구리 EM 격자 30 s.</li>
	<li>2%의 1 mL와 함께 순화 exosomes 수정 Paraformaldehyde (PFA) 5 분. 주의: Paraformaldehyde 가스는 유독 합니다. 모든 작업은 통풍이 증기 두건에서 행해져야 한다.</li>
	<li>5-7 µ L exosome 솔루션에 고정 하 고 품 어 PBS의 100 µ L 5 분 린스에 대 한 3 시간 10 분 동안 각각.</li>
	<li>10 분 무료 알데하이드 그룹을 끄다 0.05 M 글리신의 50 µ L로 격자를 취급 합니다.</li>
	<li>30 분 동안 차단 버퍼 (PBS 포함 하는 1 %BSA)의 한 방울을 격자를 전송.</li>
	<li>1 시간 (필요한 경우,이 단계 실행 되어야 한다 4 ° C에서 하룻밤)에 대 한 반대로 PD L1 항 체 (0.1 %BSA 포함 하는 PBS에서 1: 100) 50-100 µ L로 격자를 품 어.</li>
	<li>10 분 동안 0.1 %BSA 포함 하는 PBS의 5 별도 방울 (50 µ L)과 그리드를 씻어.</li>
	<li>1 시간에 대 한 2차 항 체의 하락을 그리드를 전송 합니다.</li></ol>반대로 마우스 IgG 9-11 nm 금 입자에서 0.1 %BSA 포함 하는 PBS에서 1: 100 희석을 활용.
	<li>10 분 동안 0.1 %BSA 포함 하는 PBS의 5 별도 방울 (50 µ L)과 그리드를 씻어. DW의 두 별도 방울 (50 µ L)으로 그리드를 씻어. 3.8 3.4에서 설명한 대로 2 %uranyl 아세테이트와 부정적인 얼룩를 수행 합니다.</li>
	<li>80 편으로 미래 관측을 위해 EM 격자 상자에 그리드를 저장 kV.</li>

<ol><li>Friend, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+cell+lines+derived+from+a+patient+with+Hodgkin%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Observations on cell lines derived from a patient with Hodgkin's disease.</a> Cancer Res. 38 (8), 2581-2591 (1978).</li>
<li>Dvorak, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+shedding+and+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tumor shedding and coagulation.</a> Science. 212 (4497), 923-924 (1981).</li>
<li>Zaborowski, M. P., Balaj, L., Breakefield, X. O., Lai, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+Composition%2C+Biological+Relevance%2C+and+Methods+of+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: Composition, Biological Relevance, and Methods of Study.</a> Bioscience. 65 (8), 783-797 (2015).</li>
<li>Yanez-Mo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+extracellular+vesicles+and+their+physiological+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27066(2015).</li>
<li>Wu, Y., Deng, W., Klinke, D. J. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes%3A+improved+methods+to+characterize+their+morphology%2C+RNA+content%2C+and+surface+protein+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Exosomes: improved methods to characterize their morphology, RNA content, and surface protein biomarkers.</a> Analyst. 140 (19), 6631-6642 (2015).</li>
<li>Gyorgy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+vesicles%2C+current+state-of-the-art%3A+emerging+role+of+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles.</a> Cell Mol Life Sci. 68 (16), 2667-2688 (2011).</li>
<li>Barile, L., Vassalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes%3A+Therapy+delivery+tools+and+biomarkers+of+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Exosomes: Therapy delivery tools and biomarkers of diseases.</a> Pharmacol Ther. , (2017).</li>
<li>Vlassov, A. V., Magdaleno, S., Setterquist, R., Conrad, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes%3A+current+knowledge+of+their+composition%2C+biological+functions%2C+and+diagnostic+and+therapeutic+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Exosomes: current knowledge of their composition, biological functions, and diagnostic and therapeutic potentials.</a> Biochim Biophys Acta. 1820 (7), 940-948 (2012).</li>
<li>Villarroya-Beltri, C., Baixauli, F., Gutierrez-Vazquez, C., Sanchez-Madrid, F., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+it+out%3A+regulation+of+exosome+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Sorting it out: regulation of exosome loading.</a> Semin Cancer Biol. 28, 3-13 (2014).</li>
<li>Thery, C., Ostrowski, M., Segura, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+vesicles+as+conveyors+of+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Membrane vesicles as conveyors of immune responses.</a> Nat Rev Immunol. 9 (8), 581-593 (2009).</li>
<li>Camussi, G., Deregibus, M. C., Bruno, S., Cantaluppi, V., Biancone, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes%2Fmicrovesicles+as+a+mechanism+of+cell-to-cell+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Exosomes/microvesicles as a mechanism of cell-to-cell communication.</a> Kidney Int. 78 (9), 838-848 (2010).</li>
<li>Zaharie, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-Carried+microRNA-375+Inhibits+Cell+Progression+and+Dissemination+via+Bcl-2+Blocking+in+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointestin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Exosome-Carried microRNA-375 Inhibits Cell Progression and Dissemination via Bcl-2 Blocking in Colon Cancer.</a> J Gastrointestin Liver Dis. 24 (4), 435-443 (2015).</li>
<li>Fuhrmann, G., Neuer, A. L., Herrmann, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+-+a+promising+avenue+for+the+detection+and+treatment+of+infectious+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles - a promising avenue for the detection and treatment of infectious diseases?</a> Eur J Pharm Biopharm. , (2017).</li>
<li>Lotvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions%3A+a+position+statement+from+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: a position statement from the International Society for Extracellular Vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 3, 26913(2014).</li>
<li>Liu, X., Wang, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+particle+electron+microscopy+reconstruction+of+the+exosome+complex+using+the+random+conical+tilt+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Single particle electron microscopy reconstruction of the exosome complex using the random conical tilt method.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Wang, J., Yao, Y., Wu, J., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+analysis+of+exosomes+secreted+from+macrophages+extracted+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Identification and analysis of exosomes secreted from macrophages extracted by different methods.</a> Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6135-6142 (2015).</li>
<li>Thery, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , Chapter 3 Unit 3 22(2006).</li>
<li>Mazzeo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome+secretion+by+eosinophils%3A+A+possible+role+in+asthma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Exosome secretion by eosinophils: A possible role in asthma pathogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 135 (6), 1603-1613 (2015).</li>
<li>Sokolova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+exosomes+derived+from+human+cells+by+nanoparticle+tracking+analysis+and+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf+B+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Characterisation of exosomes derived from human cells by nanoparticle tracking analysis and scanning electron microscopy.</a> Colloids Surf B Biointerfaces. 87 (1), 146-150 (2011).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural-mechanical+characterization+of+nanoparticle+exosomes+in+human+saliva%2C+using+correlative+AFM%2C+FESEM%2C+and+force+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Structural-mechanical characterization of nanoparticle exosomes in human saliva, using correlative AFM, FESEM, and force spectroscopy.</a> ACS Nano. 4 (4), 1921-1926 (2010).</li>
<li>Raposo, G., Stoorvogel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles%3A+exosomes%2C+microvesicles%2C+and+friends%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends.</a> J Cell Biol. 200 (4), 373-383 (2013).</li>
<li>Bosch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+prevents+aggregation+of+exosomes+and+cryodamage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage.</a> Sci Rep. 6, 36162(2016).</li>
<li>Lobb, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> J Extracell Vesicles. 4, 27031(2015).</li>
<li>Kim, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-8+controls+the+secretion+of+inflammatory+lysyl-tRNA+synthetase+in+exosomes+from+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Caspase-8 controls the secretion of inflammatory lysyl-tRNA synthetase in exosomes from cancer cells.</a> J Cell Biol. , (2017).</li>
<li>Conde-Vancells, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+comprehensive+proteome+profiling+of+exosomes+secreted+by+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization and comprehensive proteome profiling of exosomes secreted by hepatocytes.</a> J Proteome Res. 7 (12), 5157-5166 (2008).</li>
<li>Kadiu, I., Narayanasamy, P., Dash, P. K., Zhang, W., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+biologic+characterization+of+exosomes+and+microvesicles+as+facilitators+of+HIV-1+infection+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Biochemical and biologic characterization of exosomes and microvesicles as facilitators of HIV-1 infection in macrophages.</a> J Immunol. 189 (2), 744-754 (2012).</li>
<li>Gong, J., Korner, R., Gaitanos, L., Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+mediate+cell+contact-independent+ephrin-Eph+signaling+during+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Exosomes mediate cell contact-independent ephrin-Eph signaling during axon guidance.</a> J Cell Biol. 214 (1), 35-44 (2016).</li>
<li>Melo, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glypican-1+identifies+cancer+exosomes+and+detects+early+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer.</a> Nature. 523 (7559), 177-182 (2015).</li>
<li>Valadi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-mediated+transfer+of+mRNAs+and+microRNAs+is+a+novel+mechanism+of+genetic+exchange+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells.</a> Nat Cell Biol. 9 (6), 654-659 (2007).</li>
<li>van Niel, G., Heyman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+cell+cytoskeleton+and+intracellular+trafficking.+II.+Intestinal+epithelial+cell+exosomes%3A+perspectives+on+their+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">The epithelial cell cytoskeleton and intracellular trafficking. II. Intestinal epithelial cell exosomes: perspectives on their structure and function.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 283 (2), G251-G255 (2002).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 문서는 자세한 exosome의 구조를 관찰 하 고 그 특정 단백질의 라벨에 대 한 프로토콜을 표시 합니다. 부정적인 얼룩 exosome17이미징에 대 한 최선의 방법으로 간주 되었습니다. 이 기본 기술을 exosomes의 컵 모양의 구조를 보이고 있다. 그러나,이 컵 모양 인 위 건조 과정으로 인해 발생할 수 있는 형태입니다. 곳을 알아내는 가장 결과 exosomes 용액25,26에 완벽 하 게 구형 구조를가지고 나타났습니다. 곳을 알아내는 가장 기술 자연 구조를 조사 하기 위한 매우 강력한 방법 이지만 면역-골드 메서드를 적용 하기 어렵습니다. 종래의 방법 (전체 마운트-부정적인 얼룩이 지기 방법)에서 건조 지적 Raso와 동료는 컵 모양의 형태에 결과. 이 연구에서 셀 준비 (일상적인 EM, 고정, 탈수, 포함, 및 단면)에 대 한 표준 방법 exosome 건조 효과 줄이기 ...

Extracellular 소포 (EVs) 지질 bilayer 소포 세포에 의해 분 비 되며 그들의 크기 범위는 30 300 nm 사이. EVs는 Hodgkin의 질병1환자의 소포에서 증거와 함께 1978 년에 처음 보고 되었다. 이러한 vesicles 40 ~ 120 나노미터 크기에 보고 했다. 1980 년에, 그것은 EVs 응고 시스템 및 혈전 증, 암 환자2혈관 내 혈액 응고의 형성에 관련 된 것으로 알려졌다. 30 년 후, EVs 종양 침공, 면역 탈출 및 신생3홍보 하는 중요 한 요소 되도록 보고 되었습니다. 또한, EVs의 기능 세포의 상호 작용 분야에서 염증, 면역 장애, 신경 질환 및 암4레 귤 레이 터로 공부 되었다. EVs는 특정 생체 단백질, mRNA, 예측에 관한5등 포함, 진단 및 치료에 그들의 잠재적인 응용 프로그램 분석된6,7되었습니다. EVs는 exosomes, prostasomes, oncosomes, dexosomes, 미, promininosomes, argosomes, 및 그들의 세포질 근원 및 생물학 기능3에 따라 exosome 같은 소포를 포함 한 하위의 구성 범주. 또한, 그들의 속에 따라, 이러한 EVs 수 나눌 수 microvesicles (창 고 microvesicles, 100-1000 nm) 및 exosomes (30-300 nm)8,9. 이러한 가운데,는 exosome 면역 응답10, 암11,12, 및 전염병13셀 의사 소통으로 보고 되었습니다.
조기 진단 위한 바이오 마커도 exosomes에 대 한 관심, 고 정화와 exosomes의 분자 이미징 기술을 함께 동반 되어야 합니다. 다양 한 크기와 exosomes, 그들의 기원과 기능14, 따라의 형태학은 전자 현미경과 같은 높은 해상도와 현미경 기법에 의해 구분할 수 있습니다. 대부분 exosomes 부정적인 스테인드 전송 전자 현미경 (TEM)15,,1617에 의해 시각 했다 그리고이 결과 전체 산 소포에 특정 단백질의 immunolabeling에 의해 확인 되었다 18. 여러 연구 그룹 스캐닝 전자 현미경, 원자 힘 현미경19,20및 Cryo 편21,22를 통해 구조를 보고 있다. 그러나, 이러한 기술은 exosome 구조를 공부 하는 데 유용 하는 동안 그들은 충분 하지 않습니다는 exosome 안에 있는 특정 단백질의 위치를 관찰. 따라서, 우리는 특정 단백질의 라벨로 exosomes 이미징에 대 한 프로토콜 도입. 우리 블록 준비, ultrathin 단면화 및 immunostaining에 있는 exosome 단백질의 자세한 위치를 ascertaining에 대 한 적용. 이 부정적인 얼룩이 지 고는 exosome의 전통적으로 사용 되는 전체 산 immunostaining와 비교 되었다.

<table><tbody><tr><td>글루타르알데히드</td><td>EMS</td><td>16200</td><td></td></tr><tr><td>소듐 카코딜레이트&nbsp;</td><td>EMS</td><td>12300</td><td></td></tr><tr><td>오스뮴 테트록사이드 1g 크리스탈</td><td>EMS</td><td>19100</td><td>흄 후드</td></tr><tr><td>아세톤</td>에만 사용 <td>JUNSEI</td><td>1B2031</td><td></td></tr><tr><td>Spurr 매체</td><td>TED PELLA</td><td>18108</td><td></td></tr><tr><td>초소형 라이</td><td>카</td><td>UCT</td><td></td></tr><tr><td>우라닐 아세테이트</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>유해 화학 물질</td></tr><tr><td>납 구연산염</td><td>EMS</td><td>17900</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경</td><td>히타치</td><td>H7600</td><td></td></tr><tr><td>니켈 그리드</td><td>EMS</td><td>G200-Ni</td><td></td></tr><tr><td>구리 그리드</td><td>EMS</td><td>G200-Cu</td><td></td></tr><tr><td>글리신</td><td>SIGMA</td><td>022K5404</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충액 식염수</td><td>SIGMA</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Aurion</td><td>25557</td><td></td></tr><tr><td>1차 항체</td><td></td><td></td><td>정제 수동&nbsp;</td></tr><tr><td>정제된 항인간 CD274 (B7-H1, PD-L1) 항체</td><td>BioLegend</td><td>329710</td><td>전체 마운트 Immumogold</td></tr><tr><td>정제 마우스 IgG2b, &kappa; 아이소타입 Ctrl</td><td>BioLegend</td><td>401202</td><td>전체 마운트 Immumogold (Control)</td></tr><tr><td>2nd 안티 마우스 igG 활용 9-11nm 금 입자</td><td>시그마</td><td>G7652</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경 JEOL</td><td></td><td>JEM2200FS</td><td></td></tr><tr><td>글로우 배출기</td><td>JEOL</td><td>JFC1100E</td><td></td></tr><tr><td>탄소 그리드</td><td>EMS</td><td>121119</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>EMS</td><td>19210</td><td></td></tr><tr><td>Formvar 탄소 코팅 구리 그리드 (200 meh)</td><td>EMS</td><td>FCF200-CU</td><td></td></tr><tr><td>Formvar 탄소 코팅&nbsp; 니켈 그리드 (200 mesh)</td><td>EMS</td><td>FCF200-NI</td><td></td></tr></tbody></table>

샘플 준비 및 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 exosomes의 영상

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Exosomes는 나노 크기의 세포 외 체액 분 비 소포 그리고 그들을 분 비 하는 셀의 특성을 나타내는 것으로 알려져 있습니다. 내용과 secreted vesicles의 형태 셀 행동 또는 생리 적 상태, 예를 들면 세포 성장, 마이그레이션, 분열, 그리고 죽음을 반영합니다. Exosomes의 역할 매우 크기에 따라 달라질 수 있습니다 따라 다르며 exosomes의 크기 30에서 300 nm. Exosome 이미징에 대 한 가장 널리 사용 되는 방법 부정적인 얼룩, Cryo-전송 전자 현미경, 스캐닝 전자 현미경, 원자 힘 현미경을 기반으로 하는 다른 결과 이다. 전형적인 exosome 형태학 부정적인 얼룩 통해 평가 컵 모양 이지만 더 세부 사항은 아직 명확. 구조 연구를 통해 잘 특징이 있는 exosome 의료 및 제약 분야에서 필요한 특히 이다. 따라서, 함수 종속 형태 라벨 exosome의 상세한 구조에서 특정 단백질 등 전자 현미경 기법에 의해 확인 되어야 한다. 자세한 구조를 관찰, ultrathin sectioned 이미지와 exosomes의 부정적인 스테인드 이미지 비교 되었다. 이 프로토콜에서 부정적인 얼룩이 지기, 전체 마운트 immuno 얼룩이, 블록 준비, 얇은 섹션, 그리고 면역-골드 라벨을 포함 하 여 exosomes의 영상에 대 한 전송 전자 현미경 검사 법 하는 것이 좋습니다.

현재, exosomes 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 크기와 모양 범주로 분류 됩니다. 그림 2 는 부정적인 exosome 및 전체 마운트 상태에 면역 이라는 exosome 스테인드. 그림 3 얇은 단면 후 sectioned exosome와 면역 이라는 exosomes를 보여준다. 면역-골드 얼룩 특정 단백질의 항 체를 사용 하 여 긍정적으로 exosome 식별은 exosome 단백질의 종류를 분류 하는 데 사용 됩니다. 이 종이에 프로토콜 플라스틱 sectioned exosome와 전체 마운트 immunostaining 및 immunostaining를 사용합니다.
<img alt="바이러스 입자의 투과 전자 현미경; 바이러스 형태 및 미세 구조에 대한 ...

이 프로토콜 전송 전자 현미경 검사 법이 부정적인 얼룩이 지기, 상세한 구조 및 면역-골드 라벨 exosomes에 특정 단백질의 위치를 확인 하려면 ultrathin 단면에 필요한 다양 한 기법을 설명 합니다.

샘플 준비 및 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 Exosomes의 영상

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

이 절차의 전반적인 목표는 정제된 세포외 소포체의 형태를 관찰하고 전자 현미경을 사용하여 세포외 소포체 내에서 특정 단백질 국소화를 수행하는 것입니다. 이 방법은 세포외 소포체 연구 기간의 주요 질문, 예를 들어 엑소좀 및 그 내부에 위치한 특정 단백질의 분류와 같은 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 엑소좀 내부와 외부에 위치한 특정 단백질의 부분을 관찰하는 데 사용할 수 있다는 것입니다.이 기술의 의미는 암 및 박테리아 감염을 포함한 여러 질병의 진단을 보장하는 것입니다. 이 방법은 엑소좀에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 생물학적 샘플, 미세세포 배양 및 특정 단백질 국소화에도 적용할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 면역금 입자의 비특이적 결합과 같은 오염을 일으키기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.표준 기법을 사용하여 배양에서 엑소좀을 준비합니다. 그런 다음 HCT116 세포의 배양 상등액을 초원심분리하여 배지에서 엑소좀을 펠릿화합니다. 펠릿이 되면 배양 상등액을 조심스럽게 제거합니다.정제된 엑소좀 펠릿을 고정하려면 PH 7.0의 0.1몰 솔듐 카코딜레이트 용액에 2.5%글루타르알데히드 1ml를 추가합니다. 지질 층별 소포를 섭씨 4도에서 1시간 동안 배양합니다. 다음으로, 정착액을 제거하고 펠릿을 0.1 몰 카코딜산 나트륨 완충 용액 1 밀리리터로 실온에서 10 분 동안 헹굽니다.그런 다음 섭씨 4도에서 1시간 동안 1mL의 2% 오스뮴 테트록사이드로 샘플을 접붙입니다. 정착액을 제거하고 엑소좀 펠릿을 0.1몰 카코딜산 나트륨 완충액으로 3회 헹구고 10분마다 완충액을 교체합니다. 그런 다음 일련의 등급이 매겨진 아세톤 농도로 각각 10분 동안 흔들어 샘플을 탈수합니다.다음으로, 세 부분의 아세톤과 한 부분의 저점도 임베딩 혼합물의 용액을 혼합합니다. 아세톤을 이 혼합물로 대체하고 샘플을 30분 동안 배양합니다. 저점도 매립 매체의 비율을 계속 증가시키고 각 단계마다 30분 동안 배양합니다.마지막으로, 엑소좀 펠릿을 저점도 임베딩 혼합물의 100%에 실온에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 임베딩 몰드를 사용하여 샘플을 순수 저점도 임베딩 혼합물에 삽입하고 섭씨 65도에서 24시간 동안 굽습니다. 초박 절편기를 사용하여 60나노미터 두께의 절편을 준비합니다.섹션을 니켈 그리드에 놓고 20분 동안 2% 우라닐 아세테이트로 일부를 이중 염색한 다음 10분 동안 구연산납으로 이중 염색합니다. 다음으로, 염색된 부분을 투과 전자 현미경에 넣고 80k볼트를 사용하여 샘플을 보고 노출 시간에 대한 자동 설정을 따릅니다. 엑소좀 이미지를 보고 현미경 소프트웨어를 사용하여 이미지를 획득하고 저장합니다.먼저 60나노미터 두께의 염색되지 않은 절편을 50마이크로리터의 0.02몰 글리신 방울에 10분 동안 배양하여 유리 알데히드 그룹을 소멸시킵니다. 그런 다음 100마이크로리터의 증류수에 섹션을 각각 10분씩 3회 헹굽니다. 마지막 헹굼 후, 1%BSA가 함유된 PBS의 실온에서 절편을 1시간 동안 배양합니다.그런 다음 50-100마이크로리터의 항-KRS 항체 방울에 그리드를 1시간 동안 배양합니다. 다음으로, 0.1%BSA가 함유된 PBS 한 방울에 각각 10분 동안 그리드를 5회 세척합니다. 그런 다음 그리드를 적절한 2차 항체 한 방울로 옮기고 실온에서 1시간 동안 절편을 배양합니다.이제 그리드를 10분 동안 5회 세척하되 각각 0.1%BSA가 함유된 PBS를 별도로 떨어뜨립니다. 어둠 속에서 20분 동안 2% 우라닐 아세테이트로 섹션을 이중 염색한 다음 10분 동안 레이놀즈 납 시트레이트를 사용합니다. 염색된 부분을 투과 전자 현미경에 놓고 80k볼트를 사용하여 샘플을 보고 앞서 표시된 대로 이미지를 만듭니다.음성 염색을 수행하려면 분리 후 정제된 엑소좀을 2%파라포름알데히드 1ml로 5분 동안 고정합니다. 얇은 폼바/탄소 필름으로 코팅된 200메시의 구리 EM 그리드를 1분 동안 글로우 방전으로 처리한 다음 그리드에 5-7마이크로리터의 엑소좀 현탁액을 로드하고 1분 동안 배양합니다. 엑소좀의 농도가 너무 높으면 농도를 적절한 수준으로 희석합니다.즉시 EM 그리드 표면에 여과된 1% 우라닐 아세테이트 용액 약 20방울로 엑소좀을 염색합니다. 그리드 가장자리를 여과지와 접촉시켜 그리드에서 과도한 우라닐 아세테이트 용액을 제거한 다음 물 한 방울로 그리드를 빠르게 헹굽니다. 핀셋을 사용하여 테이블 위에 그리드를 놓고 배양 접시로 그리드를 부분적으로 덮습니다.그리드를 실온에서 10분 동안 건조시킨 다음 그리드를 이미지화하거나 향후 관찰을 위해 전자 현미경 그리드 상자에 보관합니다. 얇은 formvar/carbon 필름 코팅된 200메쉬 구리 EM 그리드를 30초 동안 글로우 방전으로 처리하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 2% 파라포름알데히드 용액에 고정된 엑소좀을 5-7마이크로리터의 그리드에 넣고 5분 동안 배양합니다.다음으로, PBS 100마이크로리터로 엑소좀을 10분씩 3회씩 헹굽니다. 엑소좀 함유 그리드를 50마이크로리터의 0.5몰 글리신 용액으로 10분 동안 처리하여 유리 알데히드기를 소멸시킵니다. 그런 다음 그리드를 1%BSA가 포함된 PBS 한 방울로 전송하고 30분 동안 차단합니다.이제 50-100마이크로리터의 항-PD-L1 항체로 그리드를 실온에서 1시간 동안 또는 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다. 0.1%BSA가 함유된 PBS 5방울로 그리드를 각각 10분 동안 세척한 다음 그리드를 1시간 동안 2차 항체 한 방울로 옮깁니다. 다음으로, 0.1%BSA가 함유된 PBS 5방울로 그리드를 각각 10분 동안 세척한 다음 증류수 2방울로 그리드를 세척합니다.완료되면 앞서 보여준 것처럼 2% 우라닐 아세테이트로 음성 염색을 수행하고 샘플을 이미지화하거나 향후 관찰을 위해 EM 그리드 상자에 보관합니다. 여기에서 관찰되는 엑소좀 형태는 음성 염색의 산물입니다. 이 엑소좀은 전형적인 컵 모양의 형태를 보여주는데, 이는 건조 과정에서 발생할 수 있는 인공물입니다.엑소좀에서 특정 단백질의 위치와 같은 전체 마운트 면역금 염색을 사용하여 추가 정보를 얻을 수 있습니다. 여기서 흰색 화살표는 PD-L1의 위치를 나타냅니다. 단면화된 이미지에서 소포는 엑소좀의 구조적 특징으로 알려진 내강 구조를 보여주었습니다.이들 역시 엑소좀에서 특정 단백질을 확인하기 위해 면역금으로 염색할 수 있습니다. 일단 숙달되면 면역금 염색 기법은 섬유질 세포에서 간단한 준비 및 절단을 거쳐 적절하게 수행될 경우 수행할 수 있습니다. 이 절차에 따라 이중 면역 염색과 같은 다른 방법을 수행하여 두 개의 서로 다른 단백질의 위치를 동시에 식별할 수 있습니다.각 개발 후,이 기술은 생검에서 질병 진단을 탐색하기 위해 세포 외 소포체 분야에서 사용될 수 있습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 엑소좀 내의 특정 단백질 국소화를 확인하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 클로라이드레이트, 파라포름알데히드 및 오스뮴 테트록사이드와 같은 고정 용액으로 작업하고 있다는 것을 잊지 마십시오.사산화는 매우 위험할 수 있으므로 이 절차를 수행하는 동안 항상 환기 흄 후드 및 라텍스 장갑과 같은 예방 조치를 취해야 합니다.

sample-preparation-imaging-exosomes-transmission-electron

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 문서는 부정적인 얼룩의 전자 현미경을 (EM)을 사용하여 생물 학적 macromolecules의 3 차원 (3D) 재건을하는 표준 방법을 설명합니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 임의의 원뿔 기울기 재건 방법 (RCT)을 사용하여 중간 해상도 Saccharomyces cerevisiae의 exosome의 복합의 3D 구조를 얻는 방법을 설명합니다.

랜덤 코니컬 틸트 메서드를 사용하여 Exosome 단지의 단일 입자의 전자 현미경의 재건

본 논문은 격리, 정화 및 exosomes의 감지,뿐만 아니라 분자의 콘텐츠 분석 기술에 대한 방법을 보여줍니다. 이러한 방법은 세포 배양 매체와 생물 학적 체액 모두에서 exosome 고립에 대한 적응력, 그리고 분자 내용의 분석을 넘어도 기능성 연구에 유용할 수 있습니다.

RNA 함유 Exosomes의 분리 및 특성

이 동영상은 내장된 엑소좀의 얇은 부분을 준비하는 기술에 대해 설명합니다. 이러한 단면은 투과전자현미경(TEM)을 사용하여 추가로 염색 및 이미지화하여 엑소좀의 구조적 특징을 연구할 수 있습니다.

Sectioning, Staining and TEM Imaging of embedded Exosomes: A Protocol to Visualize the Structural Features Using TEM (임베디드 엑소좀의 절편, 염색 및 TEM 이미징: TEM을 사용하여 엑소좀의 구조적 특징을 시각화하는 프로토콜)

이 동영상은 정제된 엑소좀의 음성 염색 절차를 설명합니다. 음성으로 염색된 엑소좀은 투과전자현미경(Transmission Electron Microscopy)을 사용하여 이미지화합니다. 이 기술은 엑소좀의 형태를 시각화하는 데 도움이 됩니다.

Negative staining of Purified Exosomes: A Procedure to Visualize Exosome Morphology Using Transmission Electron Microscopy(정제된 엑소좀의 음성 염색: 투과전자현미경을 이용한 엑소좀 형태 시각화 절차)

이 기사에서는 전혈에서 엑소좀을 분리하고 반자동 기기를 사용한 나노 입자 추적에 의한 추가 분석 방법을 제시합니다. 제시된 기술은 액체 현탁액의 입자를 시각화하고 분석하기 위한 매우 민감한 방법을 제공합니다.

엑소 정량화 및 크기 측정을위한 혁신적인 방법

담즙액은 잠재적으로 중요한 바이오마커를 포함하는 세포 외 소포체/엑소좀의 귀중한 공급원입니다. 이 프로토콜은 miRNA 프로파일링을 포함한 추가 분석을 위해 인간 담즙에서 엑소좀을 분리하는 강력한 방법을 나타냅니다.

격리 및 프로파일 링 마이크로 RNA-포함하는 인간의 담즙에서 엑소 좀을

질병 및 악성 세포에 대 한 엑 소 좀 유래 바이오 마커의 임상 번역은 신속 하 고 정확한 정량 방법의 결여에 의해 방해 된다. 이 보고서는 작은 부피의 혈 청 또는 혈장 샘플에서 특정 엑 소 좀을 정량화 하는 저 배율 어두운 영역 현미경 이미지의 사용을 설명 합니다.

종양 유래 엑 소 솜을 정량화 하는 나노 플라즈마-강화 된 산란 및 저 배율 현미경 이미징 사용

단계별 절차는 액체 견본에서 엑소좀 및 세포외 소포의 표지 자유로운 고정을 위해 기술되고 원자력 현미경 검사법 (AFM)에 의하여 그들의 화상 진찰. AFM 이미지는 용액에서 소포의 크기를 추정하고 다른 생물 물리학적 특성을 특성화하는 데 사용됩니다.

원자력 현미경 검사법에 의한 세포 외 소포의 화상 진찰

여기에서는 3D 바이오리액터를 이용하여 활액 중간엽 줄기세포로부터 다수의 GMP급 엑소좀을 생산하는 프로토콜을 제시합니다.

3D 생물반응기 배양에 의한 활액 중간엽 줄기세포 유래 엑소좀의 대규모 제조

엑소좀은 상당한 임상적 잠재력을 가지고 있지만, in vivo clearance가 쉽고 안정성이 낮아 실제 적용에는 한계가 있습니다. 마이크로니들은 생리적 장벽을 뚫고 건조 상태 보존을 통해 국소 전달을 가능하게 함으로써 엑소좀 투여의 한계를 해결하고 임상적 유용성을 확대하는 솔루션을 제시합니다.

엑소좀의 로딩 및 전달을 위한 Microneedle patches의 제작 및 특성 분석

여기에서는 콜라겐분해효소 I형과 초원심분리를 통한 소화를 조합하여 생쥐 비장 유래 엑소좀을 분리하는 프로토콜을 제시합니다.

Isolation and Characterization of Exosomes Derived from Mouse Spleen Tissues(생쥐 비장 조직에서 유래한 엑소좀의 분리 및 특성 분석)

배우세요 전자현미경을 이용한 엑소좀 형태 관찰 및 특정 단백질 위치 분석 방법을. 이 기술은 세포 간 소통과 암 진단 연구에 활용됩니다.

샘플 준비 및 전송 전자 현미경 검사 법에 의해 Exosomes의 영상

더 많은 동영상 탐색