Name: 마다 가스 카 르 독성, 병 인, 및 약물 효능을 조사 하기 위해 대체 비 포유류 동물 모델로 서 치찰음의 바퀴벌레 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: 배우세요 마다가스카르 히싱 바퀴벌레를 이용한 세균 독성 및 약물 효능 평가 방법을. Gromphadorhina 속 곤충 모델로 병원체-숙주 상호작용과 미생물 병원성을 연구할 수 있습니다.

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J. Chua, N.A. 피셔, D. DeShazer 및 오전 프리 원고에 설명 된 절차를 설계 되었습니다. J. Chua, N.A. 피셔, 사 우 스 다코타 Falcinelli와 D. DeShazer는 실험을 수행. J. Chua 원고를 썼다.
저자는 조슈아 J. W. 부드러운 양 가죽, 노라 디도 일, 니콜라스 R. 카터 및 우수한 기술 지원에 대 한 스티븐 A. Tobery와 데이비드 P. Fetterer와 스티븐 제이 컨 통계 분석에 대 한 감사합니다.
작품으로는 방위 위협 감소 기관 제안 #CBCALL12-THRB1-1-0270 A.M.F 및 #CBS를 지원 했다. D.D. 하 MEDBIO.02.10.RD.034
의견, 해석, 결론, 및 권장 사항 그 저자의 이며 반드시 미국 육군에 의해 승인 되지 않습니다.
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1. 치찰음 바퀴벌레 식민지를 유지 하기 위한 준비
<ol><li>감 금 소에 살고 치찰음 바퀴벌레에 대 한 준비. 감 금 소에서 등산과 탈출에서 치찰음 바퀴벌레를 방지 하기 위해 감 금 소의 위쪽 내부 벽의 둘레에 석유 젤리, 폭, 약 20 ~ 30 m m의 얇은 레이어를 적용 됩니다. 참고: 치찰음의 바퀴벌레 다양 한 있는 대형 바닥 공간, 충분 한 높이의 뚜껑 컨테이너에에서 보관 수 있습니다. 마우스 케이지를 사용 하 여 (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 감 금 소에 대 한 37 ° C에 대 한 운명, 석유 젤리는 적용 되지 않습니다.</li>
	<li>자연스럽 게 수 줍 어 곤충에 대 한 숨어있는 장소를 제공 하기 안에 거꾸로 배치 판지 계란 판지 포함. 폴리스 티 렌 거품의 플라스틱의 섭취를 방지 하기 위해 만든 한 골 판지 계란 판지를 대체 하지 않습니다.</li>
	<li>쉽게 정리 하 고 새로 부 화 nymphs의 가시성을 높이기에 침구를 제공 하지 않습니다.</li>
	<li>건조 한 개밥 ~ 20%의 조 단백질의 구성 포함 된 얻을. 덜 갈기 음식 프로세서 또는 믹서 기 개밥 및 4 ° c.에 저장</li>
	<li>여러 가지 얕은 요리 및 수족관 돌 또는 음식과 물에 대 한 스폰지를 얻을. 참고: 접시는 추천.</li>
</ol>2. 치찰음의 바퀴벌레 관리 및 번 식
<ol><li>Outbred 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레 (~ 5 cm)는 상업적인 종 축에서 얻을. 이 프로토콜에서 사용 하는 종 Gromphadorhina laevigata입니다. 수령 즉시 치찰음 바퀴벌레를 포함 하는 배송 상자를 풀으십시오.</li>
	<li>동물 처리에 개인 보호 장비의 사용에 대 한 적절 한 제도적 지침을 따릅니다. 참고: 치찰음의 바퀴벌레의 tarsal 발톱 날카로운로 바퀴벌레를 처리 하기 위한 두꺼운 일회용 장갑을 사용 합니다.</li>
	<li>최대 75 큰 치찰음 바퀴벌레를 전송 (> 3 cm) 큰 감 금 소 당. 새롭게 부 화 하 고 작은 nymphs 전송 (< 3 cm) 별도 감 금 소에. 참고: 유지 75 보다 훨씬 더 큰 치찰음의 바퀴벌레 마우스 케이지 당 식민지의 건강 악화으로 이어질 수 및 또한 죽음 귀 착될 수 있었다.</li>
	<li>부드럽게 컬러로, 하얀은 새로 molted 바퀴벌레를 처리 하 고 그것을 당기고 피하십시오. 또는, 어둡게 하 고 처리 하기 전에 강화 외 골격을 하실 수 있습니다. 참고: 그것는 진드기, Gromphadorholaelaps schaeferi 를 종종 종 축에서 수령 시 치찰음 바퀴벌레를 제거할 필요가 없습니다. 도움이 진드기 쉿 하는 바퀴벌레를 청결 한 유지 하 고 인 간에 게 무해 하다.</li>
	<li>치찰음 바퀴벌레 먹이 지상 건조 한 개밥 얕은 접시에 일주일에 한 두 번. 쉿 하는 바퀴벌레는 충분 한 음식을 사용 하 여 다음 수 유까지 되도록 충분 한 개밥을 제공 합니다. 우기와 썩 되는 어떤 음식을 삭제 합니다.</li>
	<li>개 음식 뿐만 아니라 컷-업 과일, 야채, 사과, 감자, 또는 얕은 접시에 상 추 등을 제공 합니다. 폐기 썩 또는 썩은 음식.</li>
	<li>얕은 접시에 일주일에 한 두 번 식용 수를 제공 하지만 장에 흘림을 방지 하기 위해 접시 연극 하지 마십시오. 작은 님프에 대 한 상륙 패드를 제공 하기 위해 접시에 작은 수족관 돌 또는 스폰지를 놓습니다. 역삼 투 물를 사용 하 여 사용 가능한 경우.</li>
	<li>온도 21 ° C에서 30 ° c.에 배열에서 어둠 속에서 바퀴벌레 치찰음 유지 계속 큰 치찰음 바퀴벌레 번 식와 임신 ~ 2 개월 (~ 21 ° C) 낮은 온도에서 실험에 대 한 운명. 반면, 성장을 촉진 하 더 높은 온도 (28 ° C ~ 30 ° C)에서 님프를 유지. 참고: 캐비닛 실내 온도 (21 ° C)는 어둠 속에 감 금 소를 유지.</li>
	<li>치찰음의 바퀴벌레는 인큐베이터에 보관 하는 경우 물 별도 팬을 포함 하 여 습도 제공 합니다.</li>
	<li>정기적으로 또는 전송 하 여 치찰음 바퀴벌레 깨끗 한 케이지를 2 ~ 3 주마다 건조 배설물 밖으로 떠 서 여 감 금 소를 청소. 감 금 소의 바닥 건조 유지. 과잉의 물을 축적 하는 감 금 소의 바닥에 배설물과 혼합 수 있다면 즉시 케이지 청소.</li>
</ol>3. 바퀴벌레 실험에 대 한 준비
<ol><li>적절 한 수 장에 치찰음 바퀴벌레의 전송 37 ° C 습도 인큐베이터 새 환경 순응 실험에 앞서 1 ~ 3 주. 주입에 대 한 컨트롤 그룹을 포함 합니다. 이 새 환경 순응 기간 실험 동안 온도 충격을 피하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>석유 젤리 케이지 때문에 높은 온도 녹아 젤리 37 ° C에 대 한 운명에 적용 되지 않습니다.</li>
	<li>확인 치찰음 바퀴벌레 1 ~ 2 일 마다 음식과 물을 대체 하 고 감 금 소를 청소.</li>
	<li>분명 일회용 플라스틱 음식 용기 실험 동안 쉿 하는 바퀴벌레를 그룹화 하는 데 뚜껑을 얻을. 환기, 뚜껑 또는 못을 가진 컨테이너의 측면에 구멍을 펀치와 망치. 참고: 스냅인을 통해 사용 나사 뚜껑 컨테이너 컨테이너 biosafety 수준 3 설정에서 모자. 필요한 경우 테이프, 스냅 캡 용기를 강화 수 있습니다.</li>
	<li>주입의 하루에 6 ~ 12 acclimatized 치찰음 바퀴벌레 섹스에 의해 동등 하 게 분배 되도록 하는 컨테이너, 당 그룹으로 고 신체 질량.</li>
	<li>개별 치찰음 바퀴벌레의 섹스를 확인 합니다. 남성과 여성에 그 부족에 뿔의 굴지에 의해 섹스를 확인 합니다.</li>
	<li>개별 치찰음 바퀴벌레 무게. 촉진 하기 위해 균형에 치찰음 바퀴벌레의 무게, tared 된 두 무게 보트 내에서 묶습니다. 참고: 실험 간의 일관성을 위해 4-8 g의 무게로 치찰음의 바퀴벌레를 사용 합니다. 그러나, 감염 후 생존에 차이가 작은 (1.5 ~ 2 g), 대형 (6-8 g) 치찰음 바퀴벌레 사이 발견 되었습니다. 약물 연구를 사용 하 여 치찰음 바퀴벌레 ~ 5 g의 무게와 몸 당 보다 일관성 있는 약물 농도 대량.</li>
	<li>물 접시 대신 높은 물 콘텐츠 과일 또는 야채, 사과 또는 감자의 조각 등을 포함 합니다. 썩은 음식을 삭제 합니다. 컨테이너를 건조 유지에 추가 물을 제공 하지 않습니다.</li>
	<li>주사까지 37 ° C에 치찰음의 바퀴벌레를 반환 합니다.</li>
</ol>4. 세균성 문화 및 준비
참고: 세균성 종이이 프로토콜에 사용 되는 B. mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis. B. mallei 와 B. pseudomallei 모든 조작 클래스 II에서 수행 해야 합니다 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛 biosafety 수준 (BSL)에 3 실험실. 조작을 수행 B. thailandensis 비슷한 생물 안전 캐비닛 BSL2 또는 BSL3 실험실에 위치. BSL3 작업에 대 한 기관 표준 운영 절차를 따릅니다. 박테리아를 처리할 때 개인 보호 장비의 사용에 대 한 제도적 지침을 따릅니다.
<ol><li>최소 3 일 전에 감염 Burkholderia 의 마스터 플레이트를 준비 합니다. Luria Bertani (레 녹 스) (파운드)를 사용 하 여 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis agar 및 사용 파운드 agar 4% 글리세롤 B. mallei에 대 한 보충. 저장-80 ° c.에 25% 글리세롤 재고에서 행진 박테리아 참고: 항상 냉동된 글리세롤 주식;에서 직접 마스터 플레이트를 행진 직렬 통과 하는 박테리아의 피할 에서 플레이트에 플레이트가 감소 된 독성을 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>10 ~ 20 mL 파운드 국물 마스터 플레이트에서 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis 의 여러 식민지와 예방 마찬가지로 파운드 국물 B. mallei에 대 한 4% 글리세롤과 보충 접종.</li>
	<li>~ 18 h 37 ° C에서 175 ~ 250 rpm 국물 문화를 흔들어.</li>
	<li>10 분 동안 5000 x g에서 문화 2 ~ 3 mL 원심</li>
	<li>삭제는 상쾌한 고 버퍼링 멸 균 인산 염 (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 m m KCl, 10mm 나2포4, 1.8 m m KH2포4, pH 7.4)에 세균 펠 릿 resuspend.</li>
	<li>0.5, 600에서 흡 광도 측정에의 한 광학 밀도 (OD)를 달성 하기 위해 PBS 가진 박테리아를 희석 한 분 광 광도 계에 nm.</li>
	<li>순차적으로 희석 박테리아 0.5의 시작 마약에서 ten-fold에 PBS. 이러한 정지를 사용 하 여 감염에 대 한.</li>
	<li>식민지는 inoculum 단위의 (CFU) 직렬 희석에 의해 형성 하 고 agar 미디어에 100 µ L aliquots의 도금을 결정 합니다. 24 ~ 48 h에 대 한 37 ° C에서 접시를 품 어.</li>
</ol>5. 약 준비
<ol><li>체 당 주어진 약물의 적절 한 금액을 결정 질량. 쉿 하는 바퀴벌레에 게 주어진 CLQ 복용량은 50 mg/kg, 포유류에 대 한 표준 복용량에 근거 했다/일.</li>
	<li>Resuspend 또는 차량에 대 한 관심의 약물을 희석. 예를 들어 12 mg/mL의 농도에서 CLQ PBS에 희석. 이 농도의 치찰음의 바퀴벌레 25 µ L에서 주입 볼륨 ~ 6 g을 약 300 µ g를 제공 합니다.</li>
	<li>필요한 경우, 0.22 μ m 주사기 필터를 통해 그것을 전달 하 여 약물 솔루션을 소독.</li>
	<li>사용 될 때까지 4 ° C에서 약 솔루션을 저장 합니다. 적어도 21 ° c (실내 온도) 주사 전에 약물 솔루션 따뜻한.</li>
</ol>6입니다. 인젝터의 조립
<ol><li>반복적인 피 펫에 조정 나사를 회전 하 여 원하는 볼륨 (25 µ L)에 대 한 포인터를 설정 합니다.</li>
	<li>푸 셔를 바깥쪽으로 당겨 하 고 반복적인 피 펫의 릴리스 바를 안쪽으로 밀어. 반복적인 피 펫 이제 로드 주사기를 수용할 준비가 되어 있습니다. 참고: 보정 볼륨 균형에 배출 하는 물의 양을 측정 하 여 반복적인 피 펫으로 나옵니다.</li>
	<li>박테리아 또는 약물을 포함 하는 서 스 펜 션에 1 mL 주사기를 채우십시오.</li>
	<li>살 균 26에 주사기를 연결 또는 27 G x ½ 인치 (또는 더 짧은) 바늘.</li>
	<li>상단에 기포를 플 로트 하 여 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 거품 및 일부 정지 추방 주사기를 누릅니다.</li>
	<li>향하도록 바늘 경사와 반복적인 피 펫의 주사기 클립에 주사기를 스냅 합니다.</li>
	<li>릴리스 바 바깥쪽으로 당겨 고 빈 주사 주사기 플런저는 미는 사람에 대 한 때까지 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 수행을 단단히 디스펜서 버튼을 눌러</li>
	<li>액체 주사기에서 배출 되는 보장 하기 위해 추가 빈 주사 1 또는 2 수행 합니다. 반복적인 피 펫은 주사에 대 한 준비.</li>
</ol>7. 바퀴벌레 주사
<ol><li>클래스 II 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛에 BSL2에서에서 모든 바퀴벌레 주사를 수행 하거나 권장 BSL3 설정을 사용 하 여 기관 개인 보호 장비.</li>
	<li>깨끗 한 작업 표면은 안전 캐비닛에 쉿 하는 바퀴벌레와 접촉 하 여 올 수 있습니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제를 사용 하 여 잔여 표 백제를 제거. 건조 공기를 표면을 수 있습니다.</li>
	<li>한 손으로, 그것의 측면에 의해 치찰음의 바퀴벌레를 잡습니다. 되도록 주입 중 반동 수 치찰음 바퀴벌레를 고정 하 고 구부려 치찰음 바퀴벌레 약간 그래서 복 부 terga 사이 피부 막 노출 됩니다.</li>
	<li>다른 한편으로는, 되도록 바늘 0 °에 30 ° 각도로 쉿 하는 바퀴벌레의 dorso 복 부 중간에서 반복적인 피 펫 붙. 찔린 피부 막 후부 끝에서 3rd, 4번째또는 5번째 tergum에 인접 한 합니다. 참고: 항목 표시 각도에서 치찰음 바퀴벌레에 바늘의 바늘 않습니다 하지 통과 하 고 쉿 하는 바퀴벌레를 종료할 보장 합니다. 사출 사이트 꺼낸된 소재 hemolymph 채워진 복 부 구멍 안에 포함 된 보장 합니다. 쉿 하는 바퀴벌레를 들고 사업 라이브 박테리아 또는 약물 주입 하기 전에 물으로 주입 연습.</li>
	<li>디스 펜스 버튼 볼륨을 주입을 단단히 밀어. 부드럽게 항목에 대 한 사용으로 같은 각도로 바늘을 철회 한다.</li>
	<li>주입 하지 아직 치찰음 바퀴벌레에서 그것을 구별 하는 별도 용기에 주입된 치찰음 바퀴벌레를 놓습니다. 주사 사이트에서 분출 할 수 있습니다 어떤 hemolymph를 닦아내십시오.</li>
	<li>계속 같은 주사기와 바늘을 사용 하 여 그룹 내에서 다른 치찰음 바퀴벌레를 주입 합니다. 주입 주사기 플런저 마지막 주입에 불완전 한 주입을 방지 하기 위해 배럴의 바닥에 도달 하기 전에 중지 합니다.</li>
	<li>여러 주사 약, 박테리아와 같은 단일 치찰음 바퀴벌레에 대 한 쉿 하는 바퀴벌레의 등 쪽 측에 tergum의 다른 측면에서 주사. 또는, 다른 terga (3 5일을rd )에 주입 하 여 여러 주사를 수행 합니다.</li>
	<li>컨테이너의 뚜껑은 단단히 고정 되어 있는지 확인 합니다. 필요한 경우 테이프, 뚜껑을 강화.</li>
	<li>치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기에서 품 어.</li>
</ol>8입니다. 녹화 치찰음의 바퀴벌레 병 적 상태와 사망률
<ol><li>개인 보호 장비를 권장 클래스 III 또는 클래스 II 생물 안전 캐비닛 기관에서 모든 치찰음 바퀴벌레 검사를 수행 합니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제와 함께 안전 캐비닛에 표면 청소. 작업 영역 공기를 건조 하실 수 있습니다.</li>
	<li>점수 표 (표 1) 사망률을 사용 하 여 1 ~ 2 주 동안 매일 치찰음 바퀴벌레 번 점수.</li>
	<li>컨테이너에서 죽은 쉿 하는 바퀴벌레를 제거 하 고 생존자의 수를 기록.</li>
	<li>컨테이너의 하단에 과도 일 분 축적 하는 경우 깨끗 한 컨테이너에 바퀴벌레 치찰음 라이브 남은 전송. 또는, 일회용 종이 수건을 사용 하 여 과도 일 분을 닦아.</li>
	<li>썩은 음식 매일 반환 치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기를 교체 합니다.</li>
	<li>연구의 끝에, 나머지 생존자 biohazard 가방에 놓고 안락사에-80 ℃에서 동결 합니다.</li>
	<li>통계적으로 분석 데이터14 l D50 를 결정 하 고 생존을 위한 카 플 란-마이어와 로그-순위 분석. 모든 곤충 실험과 마찬가지로 일부 사망자의 제어 그룹에서 발생할 수 있습니다. 이 죽음은 곤충 15의 자연 사망률 때문 이라고. 컨트롤 그룹에서 죽음에 대 한 계정 하는 방법에 더 자세한 내용은, 참조15참조.</li>
</ol>

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<li>Eklund, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://iai.asm.org/content/85/1/e00586-16.abstract">The orange spotted cockroach (Blaptica dubia, Serville 1839) is a permissive experimental host for Francisella tularensis.</a> PeerJ Preprints. 4, e1524v1522(2016).</li>
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저자는 공개 없다.

최적의 실험 조건 일관 된 시간 약속 하지만 최소한의 요구 하는 건강 한 치찰음 바퀴벌레 식민지로 시작 합니다. 치찰음의 바퀴벌레 시간의 비교적 긴 기간에 대 한 갈 수 있지만 (~ 주) 음식과 물 없이 매주 또는 격주 케이지 유지 보수를 제공 해야 합니다. 음식과 물 공급을 확인 하 고 보장 그는 케이지 건조 포함 됩니다. 건조 생활 상태를 유지 하는 특히 중요 한 새 환경 순응 및 높은 온도;에서 부 화 우리는 더 치찰음 바퀴벌레 죽을 찾 및 컨테이너 매일 청소 안 했다 하는 때 더 높은 온도에서 빠른 속도로.
일관 된 주입 또는 쉿 하는 바퀴벌레의 접종에 열쇠 버튼을 누르면 디스펜서 반복적인 피 펫에 확고 하 게 이다. 이 기술을 연습, 반복적인 피 펫에 주사기의 로딩 및 수행 빈 주사는 것이 좋습니다. 기술에 새로운 연산자에 대 한 절차의 가장 시간이 많이 걸리는 단계 보유 또는 주입 동안 쉿 하는 바퀴벌레를 immobilizing. 따라서, 우리 또한 좋습니다 누른 더 ...

세균 병 인 타고 난 호스트 방어를 공부 하 고 대체 비 포유류 동물 모델으로 곤충의 사용 최근 몇 년 동안에 추진력을 얻고 있다. 물류, 이것은 그들의 상대적으로 저렴 한 비용 및 획득, 처리, 및 포유류에 비해 곤충에 대 한 배려에 용이성 때문. 또한 연구에 있는 곤충의 사용 규제 정책이 있다 그것은 범위에 따라 또는 제한이 어떤 동물에 의해 규정 된 설정 위원회 또는 정부 기관에 사용. 대리 동물 모델으로 곤충 특히 독성 요인, 호스트 병원 체 상호 작용 및 항균 약물 효능 평가 대 한 종합 심사 연구 의무가 있습니다. 그들의 사용은 그로 인하여 일부 동물 실험 1,2의 행위에 내재 된 윤리적 딜레마를 극복 하는 연구에 사용 하는 포유류의 수를 줄일 수 있습니다.
곤충 곤충과 포유류 1,3의 타고 난 면역 체계 사이 공용성의 높은 학위 때문에 대리 호스트 될 수 있습니다. Plasmatocytes 곤충 및 포유류 세포 phagocytose 미생물 4. neutrophil에 곤충 대응 hemocyte 5,6입니다. 곤충과 포유류 세포에서 세포내 산화 파열 경로 비슷합니다; 둘 다에서 반응성 산소 종 orthologous p47phox 와 p67phox 단백질 5에 의해 생산 됩니다. 곤충 및 수용 체 통행세 같이 수용 체 통행세와 포유류에서 Interleukin-1 신호 계곡 하류는 또한 비슷해; 둘 다 defensins 7등 항균 성 펩 티 드의 생산 귀 착될. 따라서, 곤충 연구 metazoans에 의해 공유 되는 일반적인 타고 난 면역 메커니즘을 활용할 수 있습니다.
치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르 라는 곤충 존재, 일반적으로 만기에 5 ~ 8 cm를 도달 하는 가장 큰 바퀴벌레 종 중 하나입니다. 마다가스카르의 섬에만 기본 이며 그것은-쉿 소리 쉿 하는 바퀴벌레 spiracles 8라는 호흡 구멍을 통해 공기를 추방 하는 때 생산 되는 소리가 특징 이다. 독특한 엘리베이터 치찰음의 바퀴벌레 구애와 침략 9 간의 사회적 커뮤니케이션의 한 형태로 제공 하 고 남성은 그것의 서식 지에서 방해 하는 때 들릴 수 있다. 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레는 미국 바퀴벌레 및 다른 도시 해충 종에 비해 느린 이동입니다. 그것은 쉽게에 대 한 관심과 사육; 임신 치찰음의 바퀴벌레는 한 번에 20 ~ 30 자손을 생산할 수 있다. 치찰음의 바퀴벌레, 요정, 라는 도달 성적인 성숙에 5 개월 아기 후 6 molts를 진행 하 고 야생에서와 포로 8에서 5 년까지 살 수.
우리 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 세포내 병원 체 감염 및 B. thailandensis 10,11. 에 대 한 대리 호스트 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르 활용 치찰음의 바퀴벌레에이 균의 독성은 Burkholderia, 시리아 햄스터에 대 한 벤치 마크 동물 모델에서 그들의 독성에 비교 되었다. 우리는 50% 치 사 량 (LD50) B. pseudomallei 의 B. mallei 두 모델 11에서 유사 했다 발견. 흥미롭게도, B. thailandensis, 설치류 모델에서 avirulent는 치찰음 바퀴벌레 11치명적인입니다. B. thailandensis 감염에 관하여이 차이 밑줄, 치찰음 바퀴벌레 모델의 유틸리티 B. thailandensis 돌연변이 약하게 설치류 모델에서 보다 치찰음 바퀴벌레에 더 쉽게 해결할 수 있습니다. 또한, B. thailandensis 로 자주 사용으로 B. pseudomallei 와 B. mallei 10,12,13, 그것에 약하게 돌연변이 식별에 대 한 모델 유기 체 수 있습니다. 악성의 친척에 비슷한 대상으로 이어질.
시리아 햄스터에 비해 치찰음 바퀴벌레에 B. thailandensis 의 독성에 차이, 돌연변이 유형 6 분 비 시스템-1 (T6SS-1), 그와 같은 중요 한 독성 요인에도 불구 하 고는 B. mallei 에 약하게 되 고 B. pseudomallei, 있다 마찬가지로 B. thailandensis 11약하게. 쉿 하는 바퀴벌레 모델 개별 T6SS 돌연변이 (T6SS-T6SS-6 2) B. pseudomallei에 시리아 햄스터에 독성에 아무런 베어링을가지고, 치찰음 바퀴벌레 11악성 유지에 더 유효성이 검사 됩니다. 따라서, 쉿 하는 바퀴벌레 세 Burkholderia 종에 대 한 실행 가능한 대리 동물 모델 이다. 우리는 최근 Burkholderia 감염 10 과 그 독성에 대 한 안티 말라리아 약물 클로로퀸 (CLQ)의 효능을 검사 하는 서로게이트 동물 모델으로 쉿 하는 바퀴벌레를 활용.
여기, 우리가 설명 양육 그리고 배려는 마다가스카르의 치찰음의 바퀴벌레와 3 Burkholderia 종 가진이 곤충을 감염 하는 방법에 정보를 제공. 또한, 우리는 쉿 하는 바퀴벌레는 공부 독성 및 약물 효능 Burkholderia 감염에는 그것은 가능성이 될 수 있습니다 또한 비슷한 연구에서 다른 세균성 병원 체에 대 한 대리 호스트 실행 가능한 대리 모델을 보여 줍니다.

<table><tbody><tr><td>마다가스카르 쉿쉿하는 바퀴벌레 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Carolina Biological Supply Co, 벌링턴, 노스캐롤라이나&nbsp;</td><td></td><td></td>143668</tr><tr><td>Kibbles n Bits, 모든 맛</td><td>Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA</td><td>UPC #079100519378</td><td></td></tr><tr><td>Snap on 일회용 플라스틱 용기 또는 이에 상응하는</td><td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td><td>UPC #FG7F71RETCHIL</td><td></td></tr><tr><td>일회용 플라스틱 용기 또는 이에 상응하는 Rubbermaid,</td><td>Huntersville, NC</td><td>UPC #FG7J0000TCHIL</td><td></td></tr><tr><td>Tridak STEPPER 시리즈 반복 파이펫</td><td>Dymax Corporation www.dymax.com</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>주사기 (1 mL)&nbsp;</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Needle (26 or 27G x 1/2)</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>305109, 305111</td><td></td></tr><tr><td>Chloroquine</td><td>diphosphate Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>C6628</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Difco Luria- Bertani (Lennox)</td><td>Becton 디킨슨, 스파크스, MD</td><td>240230</td><td></td></tr><tr><td>한천&nbsp;</td><td>시그마-알드리치, 세인트루이스, MO</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마-알드리치, 세인트루이스, MO</td><td>G6279</td><td></td></tr></tbody></table>

마다 가스 카 르 독성, 병 인, 및 약물 효능을 조사 하기 위해 대체 비 포유류 동물 모델로 서 치찰음의 바퀴벌레

The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

타고 난 면제의 여러 측면은 포유류와 곤충 사이 보존 됩니다. 곤충, 치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르의 독성, 호스트 병원 체 상호 작용, 타고 난 면역 반응 및 약물 효능 연구에 대 한 대체 동물 모델로 활용할 수 있습니다. 양육에 대 한 세부 정보, 관리 및 쉿 하는 바퀴벌레의 번 식 제공 됩니다. 우리는 또한 그것 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis세포내 병원 체과 같은 박테리아로 감염 될 수 있는 어떻게 보여 줍니다. 쉿 하는 바퀴벌레의 사용은 저렴 하 고 포유류 연구를 사용 하 여 처리 하는 규제 문제를 극복. 또한, 쉿 하는 바퀴벌레 모델을 사용 하 여 찾은 결과 재현할 수 있으며 포유류 모델을 사용 하 여 얻은 비슷합니다. 따라서, 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 동물 연구를 할 때 탐구 해야 하는 매력적인 대리 호스트를 나타냅니다.

이 섹션에서는 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 했다 또는 감염 된 B. mallei, B. pseudomallei B. thailandensis; 때 가져온 결과 결과이 곤충 독성, 약물 독성, 그리고 세균 감염에 대 한 약물 효능을 공부에서 Burkholderia 의 다른 종족에 대 한 온순한 동물 모델 임을 보여준다. 더 쉿 바퀴벌레 감쇠 돌연변이 (Δhcp1) 보다 그룹 wildtype B. pseudomallei K96243, 부모의 B. mallei 에 감염 된 감염 된 그룹에서 살아남은 SR1, 또는 B. thailandensis DW503 ( 그림 1)입니다. 반대로, 악성 돌연변이 (Δhcp2 또는 Δhcp3) 감염 wildtype B. pseudomallei<...

우리는 세균 독성, 병 인, 약물 독성, 약물 효능, 그리고 타고 난 면역 반응 연구를 수행 하는 대체 비 포유류 동물 모델으로 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르를 활용 하는 프로토콜 제시.

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

이 연구의 전반적인 목표는 Gromphadorhina 속의 곤충인 Madagascar Hissing Cockroach라는 새로운 대리 동물 모델에서 박테리아 감염의 영향을 평가하는 것입니다. 마다가스카르 쉿쉿하는 바퀴벌레를 대체 동물 모델로 사용하는 것은 미생물학의 질문에 답하는 데 매우 도움이 될 수 있습니다. 여기에는 숙주-병원체 상호 작용 및 미생물 발병에 대한 연구가 포함됩니다.특히, 다른 동물에 공통적인 독성 인자를 식별하는 데 매우 도움이 될 수 있습니다. 또한 마다가스카르 쉿쉿하는 바퀴벌레와 같은 모델은 감염 치료에 효과적인 약물을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 다양한 병원체에서 약독화 돌연변이를 찾기 위한 대규모 스크리닝 연구는 이 동물 모델을 사용하여 쉽게 수행할 수 있습니다.쉿쉿하는 바퀴벌레는 또한 구하기 쉽고, 다루고, 돌보기가 쉬우며 사용과 관련된 비용이 저렴합니다. 이 방법은 Burkholderia 발병기전에 대한 통찰력을 제공했지만 잠재적으로 다른 박테리아 병원체 연구에 적용될 수도 있습니다. 쉿쉿 소리를 내는 바퀴벌레의 사용은 포유류의 온도에서 갤러리아 왁스웜 모델을 사용하여 기술적, 물류적 어려움에 직면했을 때 처음 등장했습니다.쉭쉭대는 바퀴벌레가 많이 있는 자연 센터에서 자원봉사를 한 전직 인턴이 우리에게 그것들을 시도해보라고 제안했습니다. 우리는 해냈고 그들은 아름답게 일했습니다. 이 방법의 시각적 시연은 바퀴벌레가 한 손으로는 움직이지 못하게 하고 다른 손에는 접종물을 주입하기 어렵기 때문에 매우 중요합니다.절차를 시연하는 것은 실험실의 학생 인턴인 Joshua Roan입니다. 기술자인 Jared Crumpler는 쉿쉿하는 바퀴벌레를 움직이지 못하게 하고 주입하는 대체 방법도 시연할 것입니다. 텍스트 프로토콜에 따라 쉿쉿하는 바퀴벌레를 사육한 후, 온도 충격을 피하기 위해 적응 실험 1-3주 전에 케이지에서 적절한 수의 쉿쉿하는 바퀴벌레를 섭씨 37도의 가습 인큐베이터로 옮깁니다.쉿쉿하는 바퀴벌레를 1-2일에 한 번씩 확인하여 수분 함량이 높은 음식을 교체하고 케이지를 청소하십시오. 주사 당일에는 6-12마리의 순응적인 쉿쉿하는 바퀴벌레를 용기당 그룹으로 나누어 성별과 체질량에 따라 균등하게 분포되도록 합니다. 기관에서 권장하는 개인 보호 장비를 사용하여 BSL2 또는 BSL3 환경에서 클래스 II 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛에서 주사를 포함한 모든 Burkho

the-madagascar-hissing-cockroach-as-an-alternative-non-mammalian

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

큰 왁스 나방의 애벌레의 구강 내부 haemocolic...

곤충<em&gt; 갤러리아 mellonella</em&gt; 세균 Pathogenesis를 조사 할 수있는 강력한 감염 모델로

면역 능력이 있는 설치류에서 폐 감염을 확립하는 방법이 설명되어 있습니다. 숙련되면 이 방법을 빠르고 쉽게 수행하여 S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae 및 A. baumannii의 많은 분리물에서 안정적인 감염을 유도할 수 있습니다.

면역 적격 설치류에서 강력한 폐렴 모델에 대해 항균 효능을 평가하기<i&gt; S. 폐렴</i&gt;<i&gt; H. 인플루엔자</i&gt;<i&gt; K. 폐렴</i&gt;<em&gt; P. 녹농균</em&gt; 또는<em&gt;를했다. baumannii가</em

여기, 선물이 미생물 상호 작용을 공부 하는 다양 한 호스트 모델로 선 충 류 꼬마 선 충 .

선 충 꼬마 선 충-모델을 다양 한 비보에 호스트-미생물 상호작용 연구

이 원고는의 리에 이중 가닥 RNA의 구강 섭취를 통해 독일 바퀴벌레는 midgut에 유전자 발현의 고갈 보여 줍니다.

RNA 방해의 실용적인 사용: Liposome 캐리어 바퀴벌레에 대 한 이중 가닥 RNA의 구두 납품

이 종이 다른 발달 단계에서 phenotypic 출력의 범위에 노출의 영향을 공부 하 고의 목표를 가진 오염 물질을 속 초파리 에서 종 노출 및 이상 한 세대에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

이 프로토콜은 부화 전에 계란 케이스(oothecae)를 살균하는 표면을 통해 그노토바이오틱 미국바퀴벌레(페리플라네나 아메리카나)를설치하고 유지하는 데 사용됩니다. 이 뇨토바이오틱 곤충은 수직으로 전염된 Blattabacterium 내시빅바이오엔트를 함유하고 있지만 도끼 내장이 있습니다.

그노토바이오틱 아메리칸 바퀴벌레설립 및 유지보수(페리플라나 아메리카나)

여기에서, 우리는 키메라 HIV (EcoHIV)를 사용하여 활성 HIV 감염의 새로운 쥐 모형을 설치하는 프로토콜을 제시합니다, 두뇌에 있는 HIV-1 바이러스 성 저수지의 우리의 이해를 강화하고 HIV 관련 신경 인지 장애 및 관련 comorbidities를 공부하는 시스템을 제공하는 것을 위해 중요합니다 (즉, 약물 남용).

에코HIV 뇌 감염의 쥐 모델

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

본 프로토콜은 P. americana에서 RNAi 조작 기술에 대한 단계별 지침을 설명합니다.

미국 바퀴벌레에 있는 RNA 간섭의 신청

이 프로토콜은 플라나리아 Schmidtea 지중해를 곰팡이 감염 시 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 모델 시스템으로 활용하는 최적화되고 상세한 가이드를 제공합니다. 이 방법은 인간 곰팡이 병원체인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)로 플라나리아를 감염시키는 이전 절차를 기반으로 하며, 재현성과 실험적 일관성을 높이기 위한 상세한 지침을 제공합니다.

지중해에서 칸디다 알비칸스 감염을 최적화하여 균류 발병기전과 숙주 방어 연구를 위한 프로토콜

배우세요 마다가스카르 히싱 바퀴벌레를 이용한 세균 독성 및 약물 효능 평가 방법을. Gromphadorhina 속 곤충 모델로 병원체-숙주 상호작용과 미생물 병원성을 연구할 수 있습니다.

마다 가스 카 르 독성, 병 인, 및 약물 효능을 조사 하기 위해 대체 비 포유류 동물 모델로 서 치찰음의 바퀴벌레

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