Name: Pentylenetetrazole 유도 점화 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 배우세요 펜틸렌테트라졸(PTZ) 화학적 점화법을 이용한 마우스 간질 모델 구축 방법을. 129 SV 마우스에서 발작 유도 및 행동 변화 분석을 통해 신경정신 발달 장애 메커니즘을 연구할 수 있습니다.

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이 작품 일부 JSP KAKENHI 보조금 번호 24700349, 24659093, 25293239, JP18H02536, 및 17 K 07086, 25110737 및 23110525, 아메드 보조금 번호 JP18ek0109311, 그리고 SENSHIN 의료 연구 재단 및 일본 문 부 과학성 KAKENHI 그랜트 숫자에 의해 지원 되었다 간 질 연구 재단입니다.

모든 실험 절차는 동물 관리 및 사용 위원회의는 도쿄 메트로 폴 리 탄 의료 과학에 의해 승인 되었다. 생 후 8-16 주 된 생쥐는 것이 좋습니다. 어떤 타고 난된 긴장 실험에 대 한 허용 됩니다. C57BL/6 마우스는 반면 BALB/c와 스위스 알 비 노 마우스는 더 민감한 PTZ PTZ, 더 강한. C57BL/6이이 연구에 사용 되었다. PTZ 취약점 또한 마우스의 연령에 따라 달라 집니다. 젊은 쥐에 비해, 더 오래 된 마우스는 더 PTZ35내 화물. 이 방법을 사용 하는 동물의 수 다를 수 있습니다, 하지만 적어도 6 10 동물은 각 조건에 대 한 필요.
1입니다. PTZ의 준비
<ol><li>2 mg/mL PTZ 살 균 0.9% (w/v) NaCl 디졸브. PTZ 사용 당일 준비.</li>
</ol>2입니다. PTZ의 주입
<ol><li>오전 9 시와 오후 12 시 (정오) 사이 모든 실험을 수행 합니다.</li>
	<li>동물의 몸 무게를 측정 합니다.</li>
	<li>습관 들 임에 대 한 관찰 실에서 동물을 놓습니다.</li>
	<li>습관 들 임 기간 동안 (3 분), 동물 및 이전 결정된 주입 량의 체중에 따라 주입에 대 한 PTZ 솔루션의 볼륨을 계산 합니다. 참고: 예를 들어 35 mg/kg PTZ 사용 PTZ의 0.875 mg은 됩니다 마우스 무게 25 g (35 mg/kg x 0.025 k g = 0.875 mg). 따라서 437.5 μ 2 mg/mL PTZ 솔루션의 주입 한다 (0.875 mg/2 mg/mL = 0.4375 mL). PTZ의 주입 복용량 마우스 유전자 변형에 따라 다릅니다. 야생-타입 C57BL/6 마우스, PTZ/kg 몸 무게 30-35 mg의 복용량 첫 재판에 대 한는 것이 좋습니다. PTZ 감도는 마우스 사용 스트레인36,37에 따라 달라 집니다. 사출 복용량 실험의 목적에 따라 다릅니다.</li>
	<li>동물의 복 부의 왼쪽 또는 오른쪽 사분면으로 27 게이지 주사 바늘에 연결 된 1 mL 주사기 intraperitoneally PTZ를 주입할 수 있습니다. 중간에 주입 하지 마십시오.<ol>
<li>동일한 위치에서 반복된 주사를 하지 마십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PTZ 관리 (그림 1A), 후 30 분에 대 한 동물 행동을 관찰 하 고 분류 아래와 같이 비정상적인 동작을 점수. 특히 이르면 발작 심각도 점수 3 이상, 가능 하면 24 시간, 또는 적어도 추가 6-10 h 후 주입에 대 한 관찰 아래 동물 유지.<ol>
<li>어떤 가벼운 발작 또는 30 분 관찰 기간을 넘어 동물에서 행동 변화 note. 이 장시간 관찰 기간 만성 부당한 발작 간 질에서의 세대에 PTZ의 subconvulsive 복용량의 특히 중요 하 고 완벽 한 효과 해결 수 있습니다.</li>
		<li>또한, 측정 발작 기간 변경으로 각 관찰의 발작 기간 발작 심각도에 관계. 또한, 대기 시간 PTZ 주입 후 첫 번째 발작을 수집 하는 또 다른 중요 한 측정 이다. 발작 빈도, 기간, 및 대기 시간을 모니터링 하는 것이 어떤 후 발작 분자 연구에 대 한 중요 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>주사 PTZ 매일 (그림 1A). 주사의 수는 실험의 목표에 따라 달라 집니다. 대표적인 예는 다음과 같습니다.<ol>
<li>일단 동물 경험 5 (토 닉 clonic 발작)의 점수와 함께 발작을 완전히 탈된 동물 생성 하려면 추가 세 행정부 내에서 사출 완료. 이 경우에 발작 점수 3 연속 행정에 대 한 증가 하지 않는 경우 주입 복용량을 증가. 각 동물 다른 번호와 PTZ 주사의 복용량을 받을 수 있습니다.</li>
		<li>PTZ, 항 간 질 약물의 평가 유전자 변형된 생쥐의 표현 형의 연구를 평가 하기 위해 모든 조건에 수 및 PTZ 주입의 복용량을 수정. 모든 동물에 게 PTZ 주사;의 같은 번호 8 ~ 12 주사의 총 것이 좋습니다. 동물 죽으면, 발작 점수 6으로 표시 한다.</li>
		<li>높은 발작을 유지 하는 데 필요한 주입 량 결정 (4 또는 5) 간 질 발작 발생 하는 histopathological 변화 연구 10 이상의 주사에 대 한 점수. 이 경우에, 총 주입 수 30 25에서 다양 해야 합니다. 발작 점수에 도달 하면 5 주입 복용량을 감소. 발작 점수 3 이하로 감소, 주입 복용량을 늘리십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 발작 점수
<ol><li>동물 행동을 관찰 하 고 점수를 기록 합니다.<ol>
<li>분류 하 고 다음과 같이38,39 (그림 1B) 간 질 행동 점수: 0: 정상 동작, 아니 이상. 1: immobilization, 배꼽에 누워. 2: 머리를 끄 덕, 얼굴, forelimb, 또는 hindlimb myoclonus. 3: 연속 전신 myoclonus, myoclonic 속 물, 꼬리 stiffly 개최. 4: 양육, 토 닉 발작, 그것의 측면에 아래로 떨어지고. 5: 다시, 서두르고 그리고 점프 야생에 아래로 떨어지는 토 닉 clonic 발작. 6: 죽음.</li>
	</ol>
</li>
	<li>라신 점수40, 실험 조건에 따라에 따라 행동 기준을 변경 합니다.</li>
</ol>4. 발작 후 분석
<ol><li>Immunohistopathological 분석<ol>
<li>관류 고정<ol>
<li>준비<ol>
<li>0.1 M 인산 버퍼 (pH 7.4)에 4% (w/v) paraformaldehyde (PFA)을 용 해. 1 M NaOH (약 1 µ L 50 mL PFA 솔루션에 대 한 1 M NaOH의)의 한 방울의 추가 함께 약 70 ° C에 솔루션을 열.</li>
				<li>준비 얼음 4 %PFA 및 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS).</li>
				<li>연동 펌프, 튜브와 바늘을 설정 합니다. 잔류물을 취소 튜브를 통해 물 약 20 mL를 실행 합니다. 다음, 얼음 처럼 차가운 PBS에 튜브의 오픈 엔드를 놓습니다.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Transcardial 관류와 고정된 뇌의 준비<ol>
<li>깊이 50 %isoflurane/50% 에탄올 작은 항아리에 마우스 anesthetize.</li>
				<li>그들의 앞 발과 hindlimbs의 끝을 고정 하 여 부정사 위치에 마우스를 유지.</li>
				<li>복 부의 복 부 중간을 절단 하 고 횡 경 막 노출.</li>
				<li>격 막 늑 골 여백 잘라. 그런 다음 갈비뼈와 신체의 측면 양쪽을 잘라. 잠금 집게로 칼 프로세스를 꼬 집 고 evert 흉 곽. 바늘으로 고정 하거나 그것을 꼬 집는 집게와 칼 프로세스의 위치를 유지 합니다. 마음을 노출 합니다.</li>
				<li>좌 심 실에 바늘을 삽입 하 고가 위를 사용 하 여 오른쪽 아 트리 움에서 잘라 만들. 그것은 실내 벽을 관통할 수로 마음에 너무 멀리 바늘을 밀어를 하지 알고 있어야 합니다.</li>
				<li>혈액 (약 15 ~ 20 mL/min)를 바늘을 통해 얼음 처럼 차가운 PBS의 꾸준한 흐름을 시작 합니다.</li>
				<li>시체에서 피를 삭제 하는 경우 거품의 추가 없이 4 %paraformaldehyde 솔루션 (약 60 mL) 튜브를 이동 합니다. 그런 다음에 관류를 중지 합니다.</li>
				<li>뒷 목과 척추를 잘라내어 머리 피부와가 위를 해 부와 두개골의 등 쪽 부분을 벗기다.</li>
				<li>눈 궤도 사이 premaxillary 뼈를 잘라내어 두개골의 등 부분을 완전히 제거.</li>
				<li>후부 측면에서 뇌와 jugal 뼈 사이의 격차를 만들고 뇌 아래 삼차 신경 및 광학 chiasm 잘라. 조심 스럽게 뇌를 제거 하 고 4%를 포함 하는 유리병에 PFA. 후에 12-16 h 4 ° C에서 뇌 수정.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>뇌 슬라이스 준비<ol>
<li>20% 자당/PBS 전송 고정된 두뇌 두뇌 cryoprotection 수 있도록 솔루션에 싱크 될 때까지.</li>
			<li>필요한 슬라이스 방향 및 두뇌의 필요한 부분에 따라 고정된 뇌를 잘라.</li>
			<li>cryomicrotome을 설정 합니다. 위치에서 블레이드를 설정 하 고 톰 단계 온도-20 ° c.에 유지</li>
			<li>무대에서 미리 잘라 두뇌를 놓고 코트 20% 자당/PBS와 뇌. 자당/PBS 솔루션 것입니다 점차적으로, 두뇌 완전히 냉동된 20% 자당/PBS에 포함 된 때까지 무대에서 뇌를 덮고 고정.</li>
			<li>조직을 통해 블레이드를 슬라이딩 하 여 두뇌 (30 µ m 두께)를 슬라이스. PBS에는 분할 영역을 전송 하 고 4 ° c.에서 그들을 유지합니다</li>
		</ol>
</li>
		<li>형광 immunohistochemistry<ol>
<li>0.1%에 필요한 분할 영역을 씻어 트리톤 X-100/PBS (PBST) 실 온 (RT)에서 3 시간 10 분.</li>
			<li>2% 염소 혈 청 또는 5% 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 실시간에 1-2 h와 PBST에 그들을 배양 하 여 슬라이스를 차단</li>
			<li>1 ~ 7 시청률 4 ° c.에 대 한 2% 염소 혈 청 또는 5 %BSA PBST에 1 차적인 항 체의 적당 한 농도와 항 체 솔루션에서 분할 영역을 품 어</li>
			<li>실시간에서 3 시간 10 분 동안 PBST에서 슬라이스를 씻어</li>
			<li>1-2 h RT, 빛 보호에 대 한 PBST에 이차 항 체의 적당 한 농도로 이차 항 체 솔루션에서 분할 영역을 품 어.</li>
			<li>유리 슬라이드에 슬라이스를 탑재 하 고 장착 매체와 커버 유리 커버.</li>
			<li>형광 현미경 검사 법으로 슬라이스를 관찰 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>3-챔버 테스트<ol>
<li>준비<ol>
<li>적어도 2 2-6 개월 129/Sv 쥐 "낯선 마우스." 수 주제 쥐로 같은 섹스의 준비 분석 하기 전에 장에 모든 쥐를 길 들. 각 훈련 세션에 대 한 감 금 소에 마우스를 놓고 15 분 동안 마우스를 두고.</li>
			<li>주제 마우스 각 habituation 단계 하기 전에 70% 에탄올으로 표면을 닦아 하 여 전체 장치 및 두 감 금 소를 청소.</li>
			<li>3-챔버 장치의 두 측 실에서 빈 연습장을 놓고 약 실 사이 문을 엽니다.</li>
			<li>제목 마우스 길 들, 센터 챔버에 제목 마우스를 배치 하 고 마우스를 마우스 두 감 금 소, 조사는 플러스 추가 5 분 주제 동물 감 금 소의 두려운 수 있습니다을 하지 않습니다 때까지 기구를 통해 자유롭게 이동 허용 20 분 동안 감 금 소를 조사 하 고이 분석을 위해 사용해 서는 안됩니다. 이러한 동물 감 금 소를 방지 하 고 거의 감 금 소에 가까이 서.</li>
			<li>동물 센터 챔버로 이동, 후 문을 닫고 5 분 센터 상공에서 자유롭게 이동 하는 마우스를 하자. 이 기간 동안에 감 금 소를 길 들을 넣어 129/Sv 쥐 중 하나.</li>
		</ol>
</li>
		<li>사회 분석<ol>
<li>주제 마우스의 습관 들 임 기간 직후이 분석을 실시 합니다.</li>
			<li>129/Sv 마우스 포함 된 케이지, 불리는 "낯선 1 케이지", 측 실 중 하나에 놓고 빈 새 장, 불리는 "개체 케이지", 다른 쪽 챔버에 배치 합니다.</li>
			<li>문을 열고 주제 마우스의 동작을 모니터링 합니다.</li>
			<li>제목 10 분 동안 자유롭게 이동 하 고 마우스를 다음 행동 매개 변수를 기록 수 있습니다. 낯선 사람 1 케이지 고 약 실 중의 코너에 남아 있는 마우스에 표시 된 대로 제목 마우스 낯선 1 장에 마우스의 경우 동물 분석을 위해 사용할 수 없습니다 한다. 각 챔버, 낯선 1 챔버, 개체 챔버, 및 센터 챔버에는) 시간을 보냈다. b) 시간 각 케이지, 낯선 1 장과 개체 케이지를 조사 하 고 보냈다. (마우스는 마우스 감지 하는 경우는 케이지를 조사 하거나 toughing 마우스 또는 케이지로 분류 된다) c) (선택 사항) 각 챔버에 입구의 수 d) 총 거리 여행 (옵션)</li>
			<li>마우스 센터 챔버로 이동, 후 문을 닫습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>사회 참신 분석<ol>
<li>사회 분석 후 즉시이 분석을 실시 합니다.</li>
			<li>70% 에탄올 모두 연습장을 닦아냅니다.</li>
			<li>감 금 소, "낯선 2 감 금 소"와 장소 낯선 2 케이지는 실 중 하나에 중 하나에서 다른 129/Sv 마우스를 놓습니다. 장에 다른, "낯선 1 케이지", 나 낯선 1 마우스를 배치 하 고 다른 약 실에 낯선 1 케이지를 놓습니다.</li>
			<li>문을 열고 주제 마우스의 동작을 모니터링 합니다.</li>
			<li>10 분 동안 자유롭게 이동 주제 마우스를 허용 하 고 사회 분석에 대 한 설명 같은 행동 매개 변수를 측정. 참고: 낯선 1과 낯선 2 마우스 무작위로 선택 되어야 한다. 낯선 사람 1 챔버 개체 챔버로 낯선 1 챔버 및 낯선 사람 2 챔버 무작위로 결정 되어야 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>상황별 두려움 차별<ol>
<li>컨디셔닝<ol>
<li>각 컨디셔닝 재판 하기 전에 70% 에탄올으로 표면을 닦아 하 여 실험적인 기구를 청소.</li>
			<li>특정 조건 조절 장치에 마우스를 장소 (기구 모양, 벽 색상, 바닥 재, 냄새, 조명, 및 배경 잡음 볼륨 수 미리 결정 한다). 예를 들어 여기 사용 컨디셔닝 장치 분명 플 렉 시 유리 벽, 금속 표 층, 에탄올 냄새, 100 lux 밝기 및 65 dB 배경 백색 잡음 평방 기구가 했다.</li>
			<li>2 0.1 mA 전기 충격의 난수 타이밍 발 충격에 의해 마우스 조건 s x 3 5 분에 걸쳐 시간.</li>
			<li>홈 케이지를 조절 후 마우스를 반환 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>메모리 평가<ol>
<li>각 평가 하기 전에 70% 에탄올으로 표면을 닦아 하 여 실험적인 기구를 청소.</li>
			<li>다음 날 다음 컨디셔닝 마우스 충격 조건으로 동일한 장치에 놓고 5 분에 걸쳐 냉동 시간을 측정 합니다.</li>
			<li>나중에 같은 날 마우스 소설 장치에 놓고 평가 5 분 동안 동결 시간을 측정 합니다. 화이트 플 렉 시 유리 벽, 접시 바닥, 냄새, 30 lux 밝기 및 70 dB 백색 잡음과 삼각형 기구는 여기 사용 되었다.</li>
			<li>동일한 조건과 새로운 조건 간의 동결 시간을 비교 합니다. 일반 메모리 능력을 가진 쥐 소설 조건에 보다 같은 조건에서 더 많은 고정 됩니다. 냉동은 2 이상에 대 한 동물의 정의 부동 s.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.

여기, 선물이 간 질의 약리 동물 모델 설립에 대 한 광범위 하 게 액세스할 수 있는 프로토콜. PTZ 중재 화학 점화 오랜 역사를가지고 하 고 간41의 histopathology 및 세포 병리학의 연구에 대 한 일반적으로 인정 된 모델 이다. 간 질의 화학 점화 모델은 Suzdak와 젠 슨, 199542이전 평가 되었습니다. 약리학 발작 유도, PTZ와 특히 심한 발작을 되살리기 위한 간단 하 고 간단한 방법입니다. 주입 량의 변화는 발작과 상관. 따라서, 여러 실험을 통해 PTZ 복용량을 변경 하 고 결과 동작을 검사 하 여 적절 한 복용량을 식별 매우 쉽습니다.
많은 연구자는 녹아웃 또는 간 질 모델 쥐에 노크를 만들고 자발적인 발작43,44하는 쥐를 생산에 성공 하려고 했습니다. 그러...

간 질은 재발 성 발작을 특징으로하 고 사람들의 약 1%는 만성 신경 장애. Epileptogenesis 및 발작 간 질 환자에서 생성의 기본 메커니즘 임상 연구에서 완전히 분명히 될 수 없습니다. 따라서, 적절 한 동물 모델이 간 질1의 연구에 대 한 필요 합니다.
간 질의 생리학을 조사 하 고 항 간 질 약2,3식별 하 간 질의 동물 모델의 다양 한 사용 되었습니다. 이러한 모델 중 약리 발작 유도 간4의 병 리의 조사에 대 한 동물 모델을 생성 하는 데 사용 하는 일반적인 방법입니다. 이 메서드는 저렴 하 고 간단. 전극-중재 점화는 일반적으로 사용 되는 방법 이기도 하지만이 절차의 비용은 높다, 하며 방법은 반복적인 발작5유도 수술 및 전기 기술.
타이밍 및 발작의 수 쉽게 제어 됩니다 때문에 약물 유도 유리 이기도 합니다. 유전 마우스 모델 자발적인 발작 하는 간 질 연구에도 사용 됩니다. 그러나, 발작이 유전자 모델에서 발생 하는 시기와 빈도 예측 하는 것은 불가능 한6수 있습니다. 모니터링 시스템은 유전자 변형된 쥐6간 동작을 관찰 합니다.
Kainic 산, pilocarpine 및 pentylenetetrazole (PTZ) 발작 유발 약7로 널리 사용 됩니다. Kainic 산 글루타민 산 염 수용 체에 대 한 길 항 제 이며 pilocarpine 활성화 해 수용 체. PTZ는 감마 aminobutyric 산 (GABA)-수용 체 길 항 제8. PTZ 신경 활동 증가에 지도 억제 시 냅 스의 기능을 억제 합니다. 이 규정은 동물9에 일반화 된 발작을 발생합니다. Kainic 산 및 pilocarpine의 단일 주사 급성 발작, 특히 상태 epilepticus (SE)10,11 일으킬 수 및 만성 자연과 재발 성 발작12 촉진 kainic 산 또는 pilocarpine-중재 SE , 13. electroencephalographic (뇌 파) 녹음 및 동작 분석 자발적인 재발 성 발작 후 단일 주사12,13달 관찰 하는 표시. PTZ의 경련 복용량의 단일 주입은 또한 급성 발작을 유도합니다. 그러나, PTZ의 단일 주사 후 만성 자발적인 발작은 홍보 어렵다. PTZ의 만성 관리는 반복적인 발작14를 유도 해야 합니다. 어느 방법에 반복적인 발작의 세대는 더 비슷한 인간의 간 질의 급성 발작의 세대 보다 병 리를 유발 수 있습니다. PTZ, 경우 각 주입 끝 발작, 그리고 발작 심각도 stepwise 방식 각 주입으로 더 심각한 됩니다. 마지막으로, 단일 낮은 복용량 PTZ 주사 심한 토 닉 clonic 발작을 유도합니다. 이 단계에서는 각 주사 심한 발작 끝. 또한, 발작 대기 시간 및 기간도 주사의 과정을 통해 변경합니다. 대기 시간 토 닉 발작을 자주15점화의 후반 단계에서 짧은 됩니다. 또한, 발작 악화 장기간된 발작 기간16동반 된다. 발작 증상을 조절 하는 분자 메커니즘을 조사 하 고, 대기 시간 및 기간 유용 항 간 질 약17,,1819심사 합니다.
발작의 PTZ, 단일 조직 행정에 의해 일반적으로 유도 된다 그리고 회복은 매우 빠르고, 30 분4,5이내. 따라서, 발작의 수는 더 PTZ 점화 모델에서 제어. 그러나, 뇌 파 모니터링 표시 하고있다 일반화 된 스파이크 PTZ 중재 발작20후 12 h까지 볼 수 있습니다. 따라서, 동물 선호 점화 메커니즘의 더 정확한 분석을 위해 또는 토 닉 myoclonic 나포21 후 24 h에 대 한 관찰 아래 있어야 합니다.
PTZ 주입 전후 ethosuximide, valproate, 페, vigabatrin, 및 retigabine3, 같은 항 간 질 약물의 관리 완화 발작 심각도3,22의 악화 23. 마찬가지로, 녹아웃 쥐 부족 유전자 매트릭스 metalloproteinase-924, 같은 발작 격화에 FGF 2225 와 neuritin26, 참여 여러 PTZ 주사 후 감소 발작 심각도 전시에 표시 되었습니다. 또한, 관찰 histopathological 변경 하 후 간 질 발작이이 방법으로 가능 하다. 측 두 엽 간 질 환자에 있는 전형적인 조직학 변화 뇌, 신경 세포, astrogliosis30, 비정상적인과 립 신경 마이그레이션29,27,28돋 아 이끼 낀 섬유 등 해 마31,32, 그리고 hippocampal sclerosis33에 죽음. 유사한 변화는 간 질환 모델 동물에서 관찰 된다. 사용할 수 있는 방법 중에서 PTZ 중재 화학 점화 간 질의 동물 모델을 생산 하는 좋은, 재현할 수 및 저렴 한 방법입니다. Pilocarpine 중재 SE 모델에서 발작 제어 어려운 이며 많은 생쥐 죽 또는 남동34를 개발 하지. 반면, 사망률과 발작 심각도 PTZ 모델에 더 제어할 수 있습니다. 또한, PTZ는 kainic 산, 보다 저렴 하 고 마우스 뇌 수술에서 약국에 대 한 필요 하지 않습니다.

<table><tbody><tr><td>Pentylenetetrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>MANAC</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>마우스</td><td>CLEA Japan</td><td></td><td>C57Bl/6NJcl, 산후 8주, 남성</td></tr><tr><td>주사기(1mL)</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>바늘(27G x 3/4")(0.40 x 19mm)</td><td>Terumo</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>체중계</td><td>Mettler</td><td>PE2000</td><td>이 제품은 단종된 제품입니다. A&의 FXi-12-JA가 있는 FX-2000i와 거의 동일합니다. D사.</td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>nacalai tesque</td><td>31511-05</td><td></td></tr><tr><td>Peristatic 펌프</td><td></td><td>ATTO SJ1211</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>nacalai tesque</td><td>30404-45</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Yamato</td><td>REM-700</td><td>이 제품은 단종된 제품입니다. REM-710</td></tr><tr><td>마이크로톰 블레이드</td><td>Feather</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>항 시냅토포린 항체</td><td>시냅스 시스템</td><td>102 002</td><td></td></tr><tr><td>안티 ZnT3 항체</td><td>시냅스 시스템</td><td>197 002</td><td></td></tr><tr><td>안티 더블 코르틴</td><td>산타 크루즈</td><td>sc-8066</td><td>이 제품은 단종된 제품입니다. 동급품(sc-271390)은 테스트하지 않았습니다.</td></tr><tr><td>문맥상 공포 판별 테스트 장치</td><td>오하라</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3실 테스트 장치</td><td>무로마치</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pentylenetetrazole 유도 점화 마우스 모델

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole (PTZ)은 GABA A 수용 체 길 항 제 이다. 동물에 PTZ의 복 주사 화학 점화, 간 질 모델의 개발에 대 한 사용 되었습니다 subconvulsive 복용량의 순차 주사 하는 반면 높은 복용량에, 심한 급성 발작을 유도 합니다. PTZ의 단일 낮은 복용량 주입 경련 없이 가벼운 발작을 유도합니다. 그러나, PTZ의 반복적인 낮은 복용량 주입 저하 연상 경련 발작 임계값. 마지막으로, PTZ의 지속적인 낮은 복용량 관리 심한 토 닉 clonic 발작을 유도합니다. 이 메서드는 간단 하 고 광범위 하 게 조사 간 질, 반복적인 발작을 포함 하는 만성 질환으로 정의 되는의 이상에 적용. 프로토콜을 점화 하는이 화학 물질 동물에서 반복적인 발작을 발생 합니다. 이 방법으로 취약점 PTZ 중재 발작 또는 간 질 발작의 악화의 정도를 추정 되었다. 이러한 장점을 항 간 질 약물과 간 질 관련 유전자 검사에 대 한이 메서드를 사용 하 여 끌고있다. 또한,이 방법은 간 질 환자의 뇌에서 관찰 하는 조직학 변화 화학 점화 동물의 두뇌에도 표시 하기 때문에 간 질 발작 후 신경 손상 조사에 사용 되었습니다. 따라서,이 프로토콜은 편리 하 게 간 질 동물 모델을 생산 하는 데 유용.

PTZ의 반복적인 주입 발작 심각도에 증가 유도합니다. 6 C57BL/6 마우스, PTZ로 치료 했다 그리고 또 다른 6 마우스 컨트롤 그룹으로 식 염 수로 치료 했다. PTZ 복용량 35 mg/kg 이었고 10 주사 관리 되었다. 발작 점수 점차적으로 증가 PTZ 주사, 반면 발작 또는 비정상적인 동작 식 염 수 주사 (그림 2)에 의해 갖는 했다. ANOVA Bonferroni 테스트 다음 PTZ 치료 그룹과 염 분 처리 그룹 간에 상당한 차이 보였다.
반복적인 발작 탈 axonal 지점 형성 (이끼 낀 섬유 돋 아)와 해 마에 있는 립 세포의 비정상적인 마이그레이션 촉진. 마우스는 25 주사 (복용량은 24 밀리 그램/kg과 심한 발작으로 인 한 죽음을 유도 하지 않고 마우스에 심한 발작을 유지 하기 위해...

이 프로토콜 pentylenetetrazole와 화학 점화 하는 방법에 설명 하 고 간 질의 마우스 모델을 제공 한다. 이 프로토콜은 또한 쥐에 있는 간 질 발작 후 발작 유도 및 병 인 취약점을 조사 하 사용할 수 있습니다.

Pentylenetetrazole 유도 점화 마우스 모델

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

이 방법은 간질의 심층 분석에 도움이 될 수 있습니다. 발작은 신경 정신 발달 장애에 관여할 수 있는 뇌의 조직학적 변화를 유도합니다. 이 기술의 주요 장점은 PTZ의 자기 대화 용량이 다른 현재 방법보다 제어 가능한 발작을 더 잘 유도할 수 있다는 것입니다.PTZ(PTZ 밀리리터당 2mg)를 멸균된 0.9% 염화나트륨(sodium chloride)에 용해시켜 주사 준비를 시작합니다. 동물의 무게를 잰 다음 3분 동안 관찰실에 두십시오. 다음으로, 27 게이지 바늘에 부착된 1ml 주사기로 PTZ를 복부의 왼쪽 또는 오른쪽 사분면에 복강간에 주입합니다.마지막으로, PTZ 주입 후 동물의 이상 행동을 관찰합니다. 낯선 마우스가 될 대상 마우스와 같은 성별의 2개월에서 6개월 된 129 SV 마우스를 최소 두 마리 확보합니다. 각 낯선 쥐는 별도로 보관해야 합니다.각 훈련 세션마다 15분 동안 습관화할 수 있도록 마우스를 케이지에 두십시오. 70% 에탄올로 표면을 닦아 두 케이지의 전체 장치를 청소합니다. 그런 다음 3 챔버 장치의 두 측면 챔버에 빈 케이지를 놓고 챔버 사이의 문을 엽니 다.피험자 마우스가 익숙해지도록 하려면, 피험자 마우스를 중앙 챔버에 놓고 마우스가 두 케이지를 모두 조사할 때까지 장치 전체에서 마우스가 자유롭게 움직일 수 있도록 하고 추가로 5분을 더한다. 동물이 중앙 방으로 이동한 후 문을 닫고 쥐가 중앙 방에서 5분 동안 자유롭게 움직이도록 합니다. 이 기간 동안 129 SV 마우스 중 하나를 케이지에 넣어 케이지에 익숙해집니다.대상 마우스의 습관화 기간이 끝나자마자, 129 SV 마우스가 들어있는 케이지(낯선 사람 1 케이지)를 옆 방 중 하나에 놓고, 오브젝트 케이지라고 불리는 빈 케이지를 다른 쪽 방에 놓는다. 문을 열고 대상 마우스의 행동을 모니터링하십시오. 피험자 마우스가 10분 동안 자유롭게 움직이도록 하고 4개의 행동 매개변수를 기록합니다.첫 번째는 각 방, 낯선 사람 1 방, 물체 방 및 중앙 방에서 보낸 시간입니다. 두 번째는 각 케이지, Stranger One 케이지 및 오브젝트 케이지를 조사하는 데 소요된 시간입니다. 세 번째는 각 방으로 들어가는 입구의 수이고 네 번째는 이동 한 총 거리입니다.마우스가 중앙 챔버로 이동한 후 도어를 닫습니다. 케이지를 닦은 후, 또 다른 129 SV 마우스를 Stranger Two 케이지라고 불리는 케이지 중 하나에 배치하고 Stranger Two 케이지를 챔버 중 하나에 배치하여 사회적 참신함 분석을 시작합니다. Stranger One Mouse를 Stranger One 케이지라고 하는 다른 케이지에 넣고 Stranger One 케이지를 다른 방에 놓습니다.마지막으로 문을 열고 대상 마우스의 동작을 모니터링합니다. 피험자 쥐가 10분 동안 자유롭게 움직이도록 하고 사회성 분석을 위해 설명된 것과 동일한 행동 매개변수를 측정합니다. 특정 조건의 컨디셔닝 장치에 마우스를 배치하는 것으로 시작합니다.예를 들어, 투명한 플렉시 유리 벽, 금속 격자 바닥, 에탄올 냄새, 100lux 밝기 및 65 데시벨 배경 백색 소음이있는 정사각형 장치. 0.1밀리암페어 전기 충격의 의사 무작위 타이밍으로 5분 동안 3회 2초 동안 발 충격으로 마우스를 컨디셔닝합니다. 그런 다음 컨디셔닝 후 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다.컨디셔닝 다음 날, 마우스를 쇼크 상태와 동일한 장치에 넣고 5분 동안 동결 시간을 측정하여 기억력 평가를 수행합니다. 같은 날 늦게, 마우스를 새로운 장치에 넣고 5분 동안 평가하는 동안 동결 시간을 측정합니다. 마지막으로 동일한 조건과 새로운 조건 사이의 동결 시간을 비교합니다.연구 결과, PTZ 주사군은 발작 점수가 점진적으로 증가한 반면, 식염수 주사군은 발작이나 비정상적인 행동이 유발되지 않았다. 또한, 반복적인 발작은 비정상적인 축삭 분지 형성 또는 이끼 낀 섬유 발아 및 해마의 과립 세포의 비정상적인 이동을 촉진했습니다. PTZ를 투여한 쥐는 정상적인 사회성을 보였다.생쥐는 물체 방보다 낯선 사람 1 방에서 더 많은 시간을 보냈고, 물체 우리보다 낯선 사람 1 우리를 더 많이 조사했다. PTZ를 투여한 마우스는 비정상적인 사회적 새로움을 보였는데, 이는 사회적 기억 장애가 있음을 나타냅니다. PTZ를 투여한 쥐는 또한 상황별 공포 테스트에서 기억력 장애를 보였다.이 절차에 따라 Morris 물 미로 또는 기타 기억력 테스트와 같은 다른 방법을 수행하여 간질 발작의 영향을 받는 기억 능력 손상에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 간질 분야의 연구자들이 모델 동물을 사용하여 발작으로 인한 신경 정신 발달 장애의 메커니즘으로 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse 모델

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Pentylenetetrazole 유도 점화 마우스 모델

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