Name: (ECME) 추출 Monocytes 그리고 기본 유 방 암 세포는 세포 외 기질 간의 통신을 분석-기반 3 차원 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: 배우세요 3차원 공배양 시스템을 이용한 유방암 세포와 단핵구 간 직접 및 간접 소통 분석 방법을. 이 기법은 종양 염증 미세환경과 면역 세포 활성화 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 Fondo de Apoyo Investigación, 병원 Infantil 드 멕시코 페데리코 고메스 (프로젝트 번호 그-2014-053) 라와 CONACyT FONSEC SSA/IMSS/ISSSTE 프로젝트 번호 233061 Ezequiel M. 푸 엔 테 스-Pananá에 의해 지원 되었다. 프란 산체스 나 프로그램이 드 Doctorado en Ciencias Biomédicas, 대학 나시오날 Autónoma 드 멕시코 (UNAM)과 수신된 친목 231663 CONACYT에서에서 박사 학생입니다. E-S 나, 사회 보장 (IMSS)의 멕시코 연구소에서 제공 하는 금융 지원 인정.

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</ol>

저자는 그들이 하지 않아도 어떤 상충 선언 합니다.

3D 공간 구조에서 상피 세포 성장 그리고 ECM 단백질의 상호 작용은 조직 항상성에 대 한. Monolayers (2D)에서 성장 하는 세포에 많은 암 연구 기반으로 되어, 비록 그들은 종양 형성 및 진행의 여러 측면을 이해 하는 데 중요 한 되어, monolayers ECM에 대 한 셀에 부과 하는 특징을 정리 하지 않습니다. 인스턴스: 확산, 접착 종속 세포 생존, 꼭대기 basolateral 극성, 개장 하는 ECM, 세포 분화, 등 제한 중요 한 것은, 뿐만 아니라 종양 세포와 ECM 사이 상호 작용은 암의 진행을 위한 필수 하지만 종양 및 비 종양 세포, 면역 세포 등 사이 통신 설립. 제공 하는 ECM에 의해 염증 반응을 이러한 상호 작용에 의해 추진 하 고이 염증 성 조건 만드는 방법 여기에 제공 된 프로토콜 환경 내에서 암 세포와 면역 세포 사이 상호 작용의 이해를 촉진 한 긍정적인 루프 monocytes의 chemoattraction과 암 세포의 더 많은 침략을 육성.
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종양 생물학은 이전에 생각 보다 훨씬 더 복잡 한. 종양 세포는 억제 되지 않는 확산 셀;의 단순한 대량 보다 더 많은 보여주는 증거를 장착 오히려, 다른 종양 약 세포 높은 조직과 종양1내에서 계층 구조를 표시 하는 다른 기능을 수행 같다. 종양 세포는 또한 비 변형 세포와의 친밀 한 커뮤니케이션에서: 대 식 세포, 섬유 아 세포, 림프 톨, adipocytes, 내 피 세포, 다른 셀 들 모두에 몰입 하는 비 계 단백질 및 다 당 류는 ECM을 구성 하는. 수많은 직접 및 간접적인 상호 작용 변환 및 비 변형 세포 사이 및 질병 결과2,3에 강력한 영향을 미치는 ECM으로 설정 됩니다. BrC의 특정 한 경우에 그것은 특히 Tam, 고려는 Tam 발견 되었습니다는 종양의 진화에 중요 한 역할을 증가 하는 전이의 위험과 질병 재발4의 BrC 셀의 통신을 해 부하는 것이 중요 ,5.
내부 종양 상호 작용 및 그들의 가능한 결과 분석, 새로운 3D 생체 외에서 방법을 개발 되었으며, 훨씬 더 복잡 한 microenvironment를 제공 하는 ECM 추출 물의 사용에 따라 종양 생물학, 비교에서의 현실에 가까운 기존의 단층 세포 배양 세포 성장 플라스틱에 첨부. 피터슨와 Bissell6 아의 첫 번째 모델을 제공 하 고 악성 유 방 상피 세포 laminin 풍부한 지하실 멤브레인에 교양 아 인간을 차별 하는 3D organotypic 구조를 설명 하는 첫번째 이었다 그들의 악성에서 유 방 상피 세포입니다. 10 년 뒤, 모델 Debnath, Muthuswamy에 의해 개발 및 브루 게7,,89 선의 acini의 악성 변환 하는 동안 손상 하는 생물 학적 경로 명료 하 게 하는 귀중 한 도구 제공 등 통제 확산, 장애인된 셀 분극의 증거 및 anoikis, 셀 저항 결과로 acini 루멘으로 꽉 접합 단백질의 delocalization 인해 큰 acini 형성으로 프로그램 된 세포 죽음의 종류를 발생 앵커리지-종속 셀 때 그들은 주변 ECM에서 분리. Sameni, Jedeszko, 및 슬론의 모델은 밀접 하 게 침입, 종양 암10,,1112의 또 다른 중요 한 특성에 관련 된 세포에 의해 이미징 분해 활동에 집중 했다. 섞인 다른 형광 침묵 단백질 기질 단백질 행렬에 의존 하는이 모델 (DQ 젤라틴, DQ-콜라겐, 그리고 DQ 콜라겐 IV), 어떤 형광 신호에는 콜라겐의 분해 저하의 지표. 3D 모델 변형 비 둘 다의 줄기 세포 속성과 셀의 집계, spheroids 라고 하는 종양 세포를 공부 하는 데도 사용, ECM 같은 단백질 세포 분화, 비대칭의 메커니즘에 대 한 질문 또는 정지에 경작 될 수 있습니다. 세포 분열, 세포 준수, 및 세포 운동 성13,14. 침공 분석 실험 종양의 본질적인 공격 성과 침략 과정15중 chemoattractants로 봉사 하는 분자의 식별의 테스트 수 있습니다. 전반적으로, 3D 모델의 체 외에서 세포 배양 정상 및 종양 조직 morphogenesis 더 밀접 하 게 반영 하는 저렴 한 다양화를 나타냅니다.
우리 인간의 상업 BrC 셀 라인 알려진된 공격적 잠재력 (luminal 및 트리플-네거티브 형식) 및 기본을 사용 하 여 상기 모델7,,1011에 따라 3D 셀 공동 문화 시스템 설계 셀 explanted BrC 환자에서. 우리가 먼저 적극적인 비 (MCF-7) 또는 공격적 (MDA-MB-231) BrC 셀 U937 monocytes 기질 추출 (ECME)와 공동 경작 했다 모델 개발-직접 셀 상호 작용을 허용 하는 3D 시스템을 기반으로. 이러한 공동 문화 어떻게이 두 세포 계보 간 통신 암 공격적인 행동에 관련 된 유전자의 세트의 녹음 방송에 영향을 결정 하기 위해 사용 되었다. 2 cyclooxygenase (COX-2) 대 본의 상당한 증가 하는 제품 중 하나는, 스타 글란 딘 E2 (PGE2), 암 진행에서 염증의 역할을 강조 하는 발견의 생산 증가와 동시에 관찰 되었다. MMP의 증가 전사 또한 적극적인 MDA-MB-231 셀 U937 monocytes DQ 콜라겐 IV 포함 된 문화에 함께 공동 경작 했다 때 큰 콜라겐 베이스와 상관 하는 관찰 되었다. 메모의, 우리의 공동 문화는 세포 세포 상호 작용 메커니즘 콜라겐 저하에 필요한 가정을 지원 하지 않았다. 그것은 오히려 두 세포 계보 간 통신 분 비 분자에 의해 중재 했다 제안 했다. 또한, 이러한 공동 문화 분석 실험에서 수확 supernatants 선의 acini MCF 10A 세포 변형 비13에 의해 형성 된 무질서 수용 성 요소 포함. 그것은 발견 하는 적극적인 고 기본 BrC 세포 분 비 상승 monocyte 혈 분자 MCP-1 GM-CSF와 RANTES의 수준. 따라서, 우리는 세포 세포 세포 상호 작용을 방지 하기 위해 셀 문화 삽입에서 분리 되었다 3D 문화 설명. 이러한 문화는 BrC 세포, monocytes 사이 간접 통신을 해결 하기 위해 사용 되었다. 이 분석 실험, 비 공격적이 고 적극적인 상업 BrC 셀 라인 및 기본 BrC 셀, 인간 monocytes의 세 가지 유형: 상업 U937 및 THP-1 셀, 그리고 기본 monocytes (PMs) (모두 건강 한 기증자의 주변 혈액에서 분리 monocytes는 활성화 되지 않은 상태에서 사용 했다) 사용 되었다. 염증 성 cytokines 일리노이-1β 및 IL-8의 증가 농도 공동 문화에 농축 될 관찰 되었다. 마찬가지로, MMP-1, MMP-2, 및 MMP 10 BrC 셀 monocyte 공동 문화, 그리고 이렇게 강화 이전 결과14에 증가 또한 했다 발견 했다. 이 원고에서 기본 BrC 세포 격리 및 3D 문화에서 테스트 포인트 워크플로 대표적인 결과 함께 제공 됩니다. 이 작품 구성 종양 생물학의 특정 측면이 3D 셀 시스템 생체 외에서 제공 하는 중대 한 잠재력의 좋은 예.

<table><tbody><tr><td>U937</td><td>아메리칸 타입 컬처 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>CRL-1593.2</td><td>단핵세포주/조직구성 림프종&nbsp;</td></tr><tr><td>THP-1</td><td>아메리칸 타입 컬처 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>TIB-202</td><td>단핵세포주/급성 단핵구 백혈병&nbsp;</td></tr><tr><td>MCF-10A</td><td>아메리칸 타입 컬처 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>CRL-10317</td><td>비형질전환 유방 세포주</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>미국형 배양 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>HTB-22</td><td>유방암 세포주</td></tr><tr><td>T47D</td><td>미국형 배양 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>HTB-133</td><td>유방암 세포주</td></tr><tr><td>HS578T</td><td>아메리칸 타입 배양 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>HTB-126</td><td>유방암 세포주</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>미국형 배양 컬렉션 ATCC&nbsp;</td><td>HTB-26</td><td>유방암 세포주</td></tr><tr><td>RPMI 1640 중간</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 고포도당&nbsp;</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11964-092</td><td>4.5 g/L 포도</td></tr>당 <tr><td>DMEM/F12</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>11039-021</td><td></td></tr><tr><td>항생제/항진균제</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>15240-062</td><td>100 U/mL 페니실린, 100 &마이크로; g/mL 스트렙토마이신 및 0.25 &마이크로; g/mL Fungizone</td></tr><tr><td>태아 소 세럼</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>말 세럼&nbsp;</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>16050114</td><td></td></tr><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA 1X</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>25300-062</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X (인산염 완충 식염수</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>표피 성장 인자(EGF)</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15 (1.00mg)</td><td></td></tr><tr><td>인슐린</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>I1882-100MG</td><td></td></tr><tr><td>하이드로코르티손</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>H088-5G</td><td></td></tr><tr><td>콜레라 독소 Vibrio cholerae</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>C8052-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Corning Inc</td><td>356237</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 쥐 육종, 세포외 기질 추출물, -20°C에서 보관; 4&deg에서 사용할 때까지 C; C</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>페프로테크</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>MCP-1</td><td>페프로테크</td><td>300-04</td><td></td></tr><tr><td>란테스</td><td>페프로테크</td><td>300-06</td><td></td></tr><tr><td>IL-8</td><td>페프로테크</td><td>200-08</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&베타;</td><td>PeproTech</td><td>200-01B</td><td></td></tr><tr><td>크리스탈-바이올렛</td><td>Hycel M&eacute; xico</td><td>541</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>트랜스웰 투과성 지지체(인서트)</td><td>Corning Inc</td><td>3422</td><td>6.5mm 직경, 8 &마이크로; M 기공 크기/24웰 플레이트&nbsp;</td></tr><tr><td>Transwell 투과성 지지체(인서트)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>140620</td><td>6.5 mm 직경, 0.4 &마이크로; M 기공 크기/24웰 플레이트&nbsp;</td></tr><tr><td>단핵구 분리 키트 II 인간&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-153</td><td></td></tr><tr><td>LS 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>인간 사이토카인/케모카인 마그네틱 비드 패널 키트 96 웰 플레이트 분석</td><td>EMD Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td></td></tr><tr><td>Magpix with xPonent 소프트웨어 (레이저 기반 형광 분석 테스트 기기)</td><td>Luminex Corporation</td><td>40-072</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Tek 챔버 슬라이드 커버 포함 (8 글쎄요)</td> <td>Nalge Nunc International</td><td>177402</td><td></td></tr><tr><td>유리 바닥 마이크로웰 35mm 페트리&nbsp; 접시</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr></tbody></table>

(ecme) 추출 monocytes 그리고 기본 유 방 암 세포는 세포 외 기질 간의 통신을 분석-기반 3 차원 시스템

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System

세포 외 기질 (ECM)에 포함 된 정상 및 종양 약 상피 세포 속속들이 조 혈 및 비 조 혈 세포, 따라서 크게 영향을 미치는 정상 조직의 항상성 및 질병 결과와 통신 합니다. 유방암, 종양 관련 된 대 식 세포 (Tam) 역할을 중요 한 질병의 진행과 전이, 재발; 따라서 질병을 제어 하는 것이 중요이 monocyte chemoattraction 종양 microenvironment 및 종양 세포와 그들의 상호 작용의 메커니즘을 이해. 여기, 우리는 인간 유방암 (BrC) 세포 및 인간 monocytes의 3 차원 (3D) 공동 문화 시스템에 대 한 자세한 설명을 제공합니다. BrC 셀 생산 활성화에 규제의 높은 기초 수준, 정상적인 T 세포 표현 (RANTES) 분 비, monocyte chemoattractant 단백질-1 (MCP-1), 그리고 granulocyte macrophage 식민지 자극 인자 (G-CSF), monocytes, 공동 문화에 프로 염증 성 cytokines 인터 루 킨 (IL)-1 베타 (IL 1β) 및 IL-8 매트릭스 metalloproteinases (MMP)-1, MMP-2, 및 MMP-10 풍성 하 게 했다. 이 종양 기질 microenvironment 승진 anoikis MCF 10A 3D acini 같은 구조, monocytes의 chemoattraction 그리고 적극적인 BrC 셀의 침공에 저항. 여기에 제시 된 프로토콜 내 종양 커뮤니케이션을 공부 하는 저렴 한 대안을 제공 하 고 3D 셀 시스템 생체 외에서 심문 종양 관련 종양 생물학의 특정 기능을 제공 하는 중대 한 잠재력의 예 침략입니다.

BrC 셀 3D 문화에서의 형태소 분석:
낮은 높은 밀도에서 3D 문화에서 성장 하는 기본 BrC 셀의 형태는 5 일 동안 연구 했다. 첫 번째 48 h 동안 세포는 ECME를 준수 하 고 낮은 밀도 유지. 이 시간이 시점에서 그것은 명확 하 게 감상할 수 있습니다 세포는 길쭉한 스핀 들-모양, 명백한 셀 연락처를 표시 하지 않고 두 개 이상의 긴 세포질 예측와 일부 제시. 5 일 후 문화, 세포는 그들의 초기 형태를 유지 하면서 확산. 또한, 그들은 특정 구조 조직 없이 그물을 닮은 구조를 형성 하 고 아무 접촉 금지와 위로 쌓여 나타납니다. MCF 10A 세포 변형 비 비교는 구형 구조 선의 acini 닮은 형성 되었다. 이러한 세포 동종 크기 (약 50 µ m)의 둥근 잘 구분 및 조직 구조의 특성 형태를 표시합니다. 반대로, ...

여기, 우리는 기본 유 방 암 세포 뿐만 monocytes 그리고 콜라겐 저하, 면역 세포 모집, 셀 결과 함께 그들의 직접/간접적인 상호 작용 연구로 형태를 분석 하는 3 차원 문화 방법 설명 침공, 그리고 암 관련 된 염증의 승진.

(ECME) 추출 Monocytes 그리고 기본 유 방 암 세포는 세포 외 기질 간의 통신을 분석-기반 3 차원 시스템

Embedded in the extracellular matrix (ECM), normal and neoplastic epithelial cells intimately communicate with hematopoietic and non-hematopoietic cells, ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 3차원 공동 배양 시스템에서 원발성 유방암 세포와 단핵구 간의 직간접적인 통신을 연구하는 것입니다. 이 방법은 면역 세포가 어떻게 재등급화되고 활성화되는지, 이러한 세포가 종양 염증성 미세환경을 유지하는 데 어떻게 도움이 되는지, 이러한 미세환경이 종양 세포 침입을 어떻게 촉진하는지와 같은 유방암 분야의 염증성 미세환경에서 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 종양 내 커뮤니케이션을 연구할 수 있는 저렴한 대안을 제공하고 종양 생물학의 특정 특징을 조사하기 위한 체외 3D 세포 시스템의 잠재력을 보여준다는 것입니다.특히 종양 공격성과 관련된 증상이 있습니다. 우선, 10 % FBS와 1 % 항생제 항진균제로 보충 된 10 밀리리터의 RPMI1640 배지에서 여섯 번째 U937 및 THP1 단핵구를 두 번 배양하십시오. 또한 보충된 DMEMF12 배지에서 신선한 PM을 배양하십시오.세포를 섭씨 37도의 가습된 5% 이산화탄소 환경에서 배양합니다. 플레이트 4 시간 10에서 5 번째 단핵구를 해당 배지의 웰 당 1 밀리리터로 만듭니다. 각 웰에 삽입물을 배치하고 해당 배지의 다섯 번째 BrC 세포 현탁액에 4 곱하기 10의 900 마이크로 리터를 추가합니다.배양액을 섭씨 37도의 가습된 5% 이산화탄소 환경에서 5일 동안 배양하고 상층액을 회수합니다. 후속 분석이 수행되는 경우 트립신화(trypsinization)를 통해 세포를 회수합니다. 각 배지와 함께 개별 세포 배양의 대조군을 포함합니다.세포 배양 전에 BrC 세포 및 단핵구를 시판되는 쿠메린(cumerine) 및 로다민(rhodamine)으로 라벨링하려면 관심 세포의 2배인 10에서 6번째 BrC 세포의 단층을 준비하고 표준 배지를 형광 염료의 충분히 예열된 작업 용액으로 교체합니다. 섭씨 37도의 가습된 5% 이산화탄소 환경에서 30분 동안 세포를 배양합니다. 그런 다음 염료 용액을 흡인하고 충분한 XPBS를 사용하여 세포를 부드럽게 헹굽니다.PBS를 흡입하고 표준 매체를 추가합니다. 세포를 트립신화하려면 플라스크에 05% 트립신 2밀리리터와 0.48밀리몰 EDTA를 넣고 섭씨 37도에서 5-10분 동안 세포를 배양합니다. 트립신화를 중지하기 위해 200마이크로리터의 FBS를 추가하고 보충제 없이 해당 배지 7ml를 추가합니다.피펫팅으로 세포를 다시 현탁시킨 다음 10마이크로리터의 세포를 N

analyzing-communication-between-monocytes-primary-breast-cancer-cells

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 그들의 microenvironment에서 유방 종양 세포와 다른 세포 간의 상호 작용의 실시간 라이브 세포 이미징을위한 3D coculture 모델을 개발했습니다 그 침략적 표현형에 충격 진행. 이 모델들은 invasiveness에 연루 paracrine 유발 proteolytic, 케모카인 / 시토킨 및 키나제 경로를 타겟으로하는 의약품에 대한 잠복기 화면으로 사용할 수 있습니다.

종양의 4D 라이브 세포 이미징을위한 MAME 모델 : Microenvironment 상호 작용 영향을 미치는 악성 진행

간단한 방법은 관련 상피 세포에서 조직 섬유아 세포의 효과를 분석하는 설명되어 있습니다. 이 방법과 3 차원 조직 배양의 결합 차원에서 고립 후 세포의 분석을 용이하게하실 수 있습니다. 기술은 종양 세포에서 종양 - 관련 기질의 효과를 체계적으로 연구를 허용, 악성 잠재력을 변화의 세포에 적용됩니다.

세 가지 차원 혼합 셀 회전 타원체 공동 문화에서 Mammary 상피 세포의 분리

이 비디오는 세포외 기질 추출물(ECME) 기반 환경에서 유방암 세포와 단핵구의 상호 작용을 연구하기 위한 3D 공동 배양에 대해 설명합니다. 이 방법은 콜라겐 분해, 면역 세포 동원 및 세포 침입과 같은 특정 기능을 연구하는 데 도움이 됩니다.

직접 상호작용을 통한 3D 공동 배양: 암세포와 단핵구의 상호작용을 연구하기 위한 공동 배양

표준 배양 방법에 세포 생리 학적 환경 꺼내하고 접시의 플라스틱 표면에 성장합니다. 일차 인간 골수 세포의 거동을 연구하기 위해, 우리는 세포가 조직의 미세 환경을 네이티브 recapitulating 조건에서 재배되는 3-D 배양 시스템을 만들었다.

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

이 문서는 유방암 세포의 침입을 정량화하는 3 차원 (3D) 분석의 사용에 대한 자세한 방법을 제공합니다. 특히, 우리는 세포가 침입 할 때 발생하는 멤브레인 무결성의 손실을 검사하는 등의 분석을 설정하는 데 필요한 절차, 정량화 및 데이터 분석뿐만 아니라 방법에 대해 설명합니다.

3 차원 (3D) 모델을 사용하여 유방암 세포 침윤의 정량화

우리는 산소와 영양분을 전달하기 위해 관류 생물 반응기 시스템을 사용하여 배양할 수 있는 3D 유방암 대리모를 생성하는 방법을 시연합니다. 성장 후, 대리모는 관심 매개변수의 평가를 위해 고정되고 파라핀으로 처리됩니다. 이러한 매개 변수 중 하나 인 세포 밀도의 평가가 설명됩니다.

준비 및 분석<em&gt; 체외</em&gt; 3 차원 유방 암 서로 게이트

종양 미세환경(TME)을 모방하기 위해 투과성 미다공성 멤브레인 삽입물을 조정했습니다. 이 모델은 혼합 세포 배양으로 구성되며, 형광 태깅 또는 세포 분류를 사용하지 않고 고도로 농축된 개별 세포 집단을 간단하게 생성할 수 있으며, 정상 또는 스트레스 조건에서 TME 내 세포 간 통신을 연구할 수 있습니다.

종양 미세 환경의 모방 : 세포 간 통신을 농축 세포 인구를 생성 및 조사를위한 간단한 방법

여기, 우리는 전체, 그대로 마우스의 격리에 대 한 프로토콜 세포 외 기질 (ECM) 식과 ductal 형태를 조사 하는 유 방 땀 샘을 제시. 마우스 #4 복 부 동맥은 8 10 주 오래 된 여성 미 쥐, 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정, 단면화 및 immunohistochemistry ECM 단백질에 대 한 사용 하 여 스테인드에서 추출 되었다.

세포 외 기질 식 및 선 형태 분석을 그대로, 전체 마우스 유 방 땀 샘의 절연

여기에 제시된 방법의 목적은 미세 환경 마이크로어레이(MEMA)가 배양된 세포의 표현형에 대한 수천 개의 간단한 조합 미세 환경의 영향을 심문하기 위해 제조되고 사용될 수 있는 방법을 보여주는 것입니다.

마이크로어레이를 사용하여 암 세포 표현형에 대한 미세 환경적 영향을 심문

이 프로토콜은 선반 재료가 없는 1차 인간 유방 조직을 사용하여 유방암을 연구하기 위한 체외 미생물 시스템의 건설을 설명합니다.

미생물 시스템을 사용하여 인간 유방 조직에서 유방암 모델링

배우세요 3차원 공배양 시스템을 이용한 유방암 세포와 단핵구 간 직접 및 간접 소통 분석 방법을. 이 기법은 종양 염증 미세환경과 면역 세포 활성화 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

(ECME) 추출 Monocytes 그리고 기본 유 방 암 세포는 세포 외 기질 간의 통신을 분석-기반 3 차원 시스템

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