공장 실험실에서 측정 하는 표면에 박테리아의 부착

측정 및 식물, 특히 뿌리와 콩나물, 세균성 접착을 위한 쉬운 방법이이 문서에 설명 되어 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 박테리아가 식물 표면에 결합하는 것을 관찰하는 것입니다. 이 방법은 식물 병리학과 식품 안전 모두에서 중요한 질문에 답할 수 있습니다. 특히, 박테리아가 식물 표면에 어떻게 결합하고 어떻게 제거할 수 있는지에 대한 질문에 답할 수 있습니다.

이 기술의 가장 큰 장점은 쉽고 빠르며 저렴하다는 것입니다. 물에서 자란 묘목을 준비하려면 30, 50, 100 또는 150 밀리리터 유리 비커에 소량의 씨앗을 놓습니다. 여기에는 토마토 씨앗이 사용됩니다.

씨앗을 80% 에탄올로 덮고 짧게 휘젓습니다. 그런 다음 씨앗을 1분 동안 담가둡니다. 에탄올을 붓고 씨앗을 50% 상업용 표백제와 0.1% 트리톤 X-100 및 수돗물 용액에 담그십시오.

씨앗이 콩 씨앗처럼 큰 경우 씨앗을 20분 이상 담가둡니다. 표백제 혼합물을 붓고 멸균 물로 씨앗을 세 번 씻고 씻을 때마다 1분 동안 씨앗을 물에 담그십시오. 씨앗과 소량의 물을 멸균 페트리 접시에 붓고 묘목이 1cm에서 10cm 사이의 원하는 크기에 도달 할 때까지 어둠 속에서 씨앗을 부화시킵니다.

모래에서 자란 씨앗이나 묘목을 준비하려면 씨앗과 심기 재료를 살균한 후 텍스트 프로토콜에 따라 씨앗이나 묘목에 박테리아를 접종합니다. 멸균 유리 막대를 사용하여 씨앗을 표면 아래에 놓을 수 있을 만큼 깊은 모래에 얕은 구멍을 만듭니다. 구멍에 씨앗을 넣고 얇은 모래 층으로 덮으십시오.

그런 다음 밀봉 필름을 사용하여 용기 상단을 밀봉하여 수분 손실과 추가 미생물의 침입을 방지합니다. 실험실에서 조명 아래 또는 온실에서 식물의 종류와 다양성에 적합한 온도와 낮 길이로 식물을 재배하십시오. 모래에 묘목을 심습니다.

멸균 유리 막대를 사용하여 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 멸균 스테인리스 스틸 코바늘로 뿌리를 조심스럽게 구멍에 넣고 모래를 사용하여 구멍 측면을 채웁니다. 텍스트 프로토콜에 따라 식물에 박테리아를 배양한 후, 현미경 슬라이드의 물 한 방울 또는 배양 매체에 놓고 직접 관찰하여 현미경 검사를 위한 샘플을 준비합니다.

눈에 보이는 유리 박테리아가 없는 경우, 배양이 수행된 용기에 박테리아 사멸 또는 박테리아 결합이 있었을 수 있습니다. 샘플을 물 또는 배양 매체로 세척하여 액체 바이알에 넣고 바이알을 부드럽게 뒤집습니다. 그런 다음 관찰을 위해 새 액체에 샘플을 현미경 슬라이드에 놓습니다.

s를 장착하려면ample는 일반 커버 슬립을 사용하십시오. 샘플이 두껍고 부풀어 오르면 액체와 샘플을 프레스 웰에 넣고 가장자리 주위에 고무 또는 플라스틱 고리가 있는 커버 슬립을 적용합니다. 슬라이드를 위에 놓고 부드럽게 눌러 커버 슬립을 슬라이드에 밀봉합니다.

슬라이드를 뒤집어 샘플을 검사합니다. 또는 조류 계수 슬라이드와 커버 슬립을 유사한 방식으로 사용하고 20배 이하의 배율로 볼 수 있습니다. 모래에서 자란 식물에서 발견되는 생존 가능한 박테리아의 수를 확인하려면 먼저 용기의 상단과 하단에서 밀봉 재료를 제거하십시오.

멸균 종이 조각 위에 용기를 놓고 용기를 표면에 부드럽게 두드려 모래를 느슨하게 한 다음 용기에서 식물과 함께 모래를 부드럽게 들어 올립니다. 모래 원통과 식물이 종이 위에 자유로워지면 모래를 가운데로 쪼개어 식물 뿌리를 드러냅니다. 원하는 경우 용기 가장자리 근처와 뿌리 근처에서 모래 샘플을 채취하십시오.

이것은 박테리아의 확산, 축적 및 성장을 결정하는 데 유용할 수 있습니다. 뿌리를 집어 올리고 느슨하게 붙어있는 모래와 박테리아를 측정 된 양의 물이나 완충액에 뿌리를 담그고 부드럽게 흔들어 제거합니다. 생성된 현탁액에서 박테리아의 생존 가능한 세포 수를 luria agar와 같은 적절한 배지에 도금하여 측정합니다.

이것은 뿌리와 느슨하게 관련된 박테리아의 수를 나타냅니다. 마지막으로, 초음파 처리로 단단히 결합 된 박테리아를 제거하고 그 수를 결정하십시오. 이 그래프는 두 가지 다른 셀룰로오스에서 돌연변이를 뺀 값이 박테리아가 토마토 뿌리에 군체를 형성하는 능력에 미치는 영향을 보여줍니다.

일부 측정의 표준 편차는 10의 0.9 log base만큼 높았지만 셀룰로오스에서 돌연변이를 뺀 결합의 감소는 분명히 분명합니다. 이 실험에서는 다양한 외다당류를 만들 수 없는 돌연변이에서 야생형 E.Coli 0157:H7의 알팔파 새싹에 대한 결합을 측정했습니다. 두 균주 모두에서 폴리-베타 원 식스 글루쿠론산(PGA)의 생산은 병원성 대장균이 식물 표면에 결합하는 데 가장 큰 기여를 하는 것으로 나타났습니다.

콜란산은 또한 결합에 중요한 역할을 했습니다. 여기에서 식물 표면에 결합할 수 없는 두 가지 박테리아 균주를 PGA를 생성하여 토마토 뿌리에 박테리아 결합을 일으키기에 충분한지 여부를 결정하도록 조작되었습니다. A.tumefaciens A1045의 경우, PGA는 박테리아가 뿌리 표면에 개별적으로 결합하도록 했습니다.

반면에, S.meliloti는 큰 무리로 결합했는데, 이 경우 박테리아 중 일부만 뿌리에 직접 부착되어 있었고 대부분의 박테리아는 다른 박테리아에 부착되어 있었습니다. 이 기법을 마스터하면 초기 설정과 배양 시간을 합쳐 1시간 이내에 완료할 수 있으며, 샘플에 따라 10분에서 1시간 사이의 채점 시간을 갖출 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 박테리아는 거의 모든 표면에 달라붙을 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 박테리아가 식물 표면에 결합하는 것을 관찰하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 박테리아가 식물에서 결합하는 위치를 확인하고 결합된 박테리아의 수를 결정합니다. 인간 병원체를 가지고 이러한 절차를 수행하는 경우 절차가 매우 위험할 수 있으므로 격리 후드에서 작업하고 장갑을 착용하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.