Name: 합성 및 올리고 peptoids의 질량 분석 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: 배우세요 올리고 펩토이드의 수동 합성 및 질량 분석을 이용한 단량체 서열 분석 방법. 이 기술은 초보자도 표준 분석 화학 실험실에서 특수 단량체 잔기를 가진 펩토이드를 합성하고 특성화할 수 있게 합니다.

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저자는 마이클 코놀리 씨과 박사 로널드 Zuckermann (The 분자 주조, 로렌스 버클리 국립 연구소) peptoid 합성에서 기술 지원에 감사 하 고 싶습니다. 우리 인정 국립 과학 재단 (체-1301505)에서 지원 합니다. 모든 질량 분석 실험 대학 태평양에서 화학 질량 분석 시설에서 실시 했다.

1입니다. Peptoid의 합성
참고: 합성 수 지 수 지 붓기 고 보호 그룹을 제거 하 여 활성화로 시작 합니다. 이것은 성장 하는 단위체 추가 사이클을 반복을 통해 수 지에 peptoid 체인 옵니다. 수 지에 결합 하는 첫 번째 단량체 C 맨끝 잔류물 이다. peptoid은 N-말단에 C-말단에서 늘어난다. 일단 원하는 peptoid 시퀀스, 달성 수 지 떨어져 죽 습와 peptoid 제품을 정화.
<ol><li>시 약의 준비 참고: 액체 시 약은 micropipette를 사용 하 여 측정 하 고 고체 시 약 분석 균형을 사용 하 여 측정 됩니다.<ol>
<li>N, N의 6.2 mL를 섞어 '-diisopropylcarbodiimide (DIC)와 N, N-dimethylformamide DIC/DMF 솔루션의 0.8 M 준비 (DMF)의 43.8 mL.</li>
		<li>0.8 M BMA/DMF 솔루션을 준비 하는 DMF의 50.0 mL에 BMA의 5.56 g을 분해.</li>
		<li>2 mL piperidine (Pip)와 8 mL 20 %Pip / DMF 솔루션을 달성 하기 위하여 DMF의 혼합.</li>
		<li>1.9 mL Npe의 1.0을 달성 하기 위하여 DMF의 13.1 mL에 녹 M Npe/DMF.</li>
		<li>1.3 mL Nme의 13.7 mL 1.0을 달성 하기 위하여 DMF에 녹 M Nme/DMF.</li>
		<li>1.0을 달성 하기 위하여 DMF의 2 mL에 내의 0.32 mL를 해산 M 내/DMF. 주의: 합성에 사용 되는 화학 물질의 대부분은 위험한. Trifluoroacetic 산 (TFA), DIC, 핍, 그리고 BMA는 호흡기, 눈, 및 피부에 유해. DMF와 dichloromethane (DCM) 발암 물질 의심 됩니다. 모든 반응 증기 두건에서 수행 해야 하 고 적절 한 개인 보호 장비를 사용 해야 합니다. 합성에 사용 되는 모든 화학 물질의 물질 안전 데이터 시트 (MSDS)를 확인 하시기 바랍니다.</li>
	</ol></li>
	<li>수 지 활성화
	<ol>
<li>링크 아 미드 수 지 (수 지, 0.047 mmol, 로드 0.56 mmol/g)의 84 mg에 밖으로 측정 하 고 10 mL 폴 리 프로필 렌 고체 상 반응 배를 추가. 그릇에 플런저를 삽입 합니다.</li>
		<li>반응 배를 DMF의 2 개 mL를 추가 하 고 혈관 압력 캡 모자. 통에 그릇을 놓고 뚜껑을 제거 하 고 반응 배의 플런저를 밀어 여 폐기물 컨테이너 약 12도 및 30 분 용액에 대 한 진동/분 385의 움직임의 각도에서 실내 온도에서 용기를 선동.</li>
		<li>선박 20 %Pip / DMF 용액 2 mL를 추가 하 고 그릇 뚜껑. 2 분, 쉐이 커에 선동 및 폐기물 컨테이너에 대 한 해결책을 드레인.</li>
		<li>선박 20 %Pip / DMF 용액 2 mL를 추가, 선박, 모자 및 모자를 12 분 제거에 대 한 실 온에서 교 반 및 폐기물 컨테이너 솔루션 드레인.</li>
		<li>DMF, 선박, 상한의 1 mL을 추가 하 여 수 지를 세척 하 고 배 교 반 1 분에 대 한 뚜껑 제거 및 드레인 솔루션 플런저를 밀어. 4 추가 시간에 대 한 DMF와 수 지를 세척.</li>
	</ol></li>
	<li>단량체 추가 및 N 맨끝 acetylation 참고: 두 개의 반응 단계, bromoacetylation 및 변위 각 단위체 추가 주기 포함 한다.<ol>
<li>양식 Nme-수 지를 첫 번째 단량체 추가 사이클을 실시 합니다.</li>
		<li>Bromoacetylation 반응을 수행 합니다. 0.8 M BMA/DMF 솔루션 및 1 mL 비 커에서 0.8 M DIC/DMF 솔루션의 1 mL를 혼합. 수 지를 포함 하는 반응 용기에 혼합물을 전송 하 고 그릇 뚜껑. 셰이 커에 배를 배치 및 모자를 20 분 제거에 대 한 실 온에서 교 반 및 폐기물 컨테이너에 대 한 해결책 드레인.</li>
		<li>DMF의 1 mL을 추가, 상한 그릇, 1 분 동안 교 반 및 플런저를 밀어 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. DCM의 1 mL를 추가 하 고, 1 분, 배 교 반 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. 한번 더, DCM와 수 지를 세척 하 고 두 번 DMF로 씻어.</li>
		<li>변위 반응을 수행 합니다. 추가 1.0 M Nme/DMF 용액 1 mL, 그릇 뚜껑, 선동 60 분 제거에 대 한 실 온에서 용기 뚜껑 하 고 플런저를 밀어 솔루션을 배수.</li>
		<li>1 mL DMF 추가 하 고 1 분 동안 배를 교 반 하 고, 플런저를 밀어 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. 1 ml DCM, 1 분 동안 agitating 그리고 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. DCM 한번 더, DMF 두 번 세척 뒤 씻는 다.</li>
		<li>1.3.2에 1.3.5 Nae-(Npe-Nme)4를 단계에서 단위체 추가 사이클을 반복-수 지. 변위 반응 (1.3.4)의 단계를 반복 하는 경우 peptoid 순서에 따라 특정 아민 솔루션을 사용 합니다. 참고: peptoid 체인은 늘어난다 C-말단에서 N-말단에 수 지에 바인딩된 C 맨끝 잔류물 함께.</li>
		<li>N 맨끝 acetylation Ac-Nae-(Npe-Nme)4를 수행-수 지.</li>
		<li>믹스 92 µ L의 아세트산 무수 물, N, N-diisopropylethylamine (DIPEA), 그리고 2 mL 비 커에 DMF의 acetylation의 약 2 mL 칵테일의 43.5 µ L.</li>
		<li>수 지를 포함 하는 선박 acetylation 칵테일의 2 개 mL를 추가 하 고 선박, 모자 60 분 뚜껑을 제거 하 고 플런저를 밀어 솔루션 드레인 실내 온도에 그것을 선동.</li>
		<li>DMF의 1 mL를 추가 하 고, 1 분, 배를 agitating 플런저를 밀어 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. DCM의 1 mL를 추가 하 고, 1 분, 배 교 반 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. 반복 세척 DCM과 수 지 한 번 더 다음 씻어 DMF 두 번 더.</li>
		<li>DCM의 1 mL를 추가 하 고, 1 분, 배를 agitating 플런저를 밀어 솔루션을 배출 하 여 수 지를 세척. DCM으로 세척 두 번 반복 합니다. 뚜껑을 제거 하 고 10 분 동안 반응 용기에 건조 하자 수 지.</li>
	</ol></li>
	<li>절단, 정화
	<ol>
<li>TFA, triisopropylsilane (팁)의 100 µ L 및 HPLC 급 H2O 비 커에 100 µ L 분열의 4 mL 칵테일의 3.8 mL를 혼합.</li>
		<li>4 mL의 갓 만든 분열 칵테일 수 지를 포함 하는 선박을 추가 하 고 선박, 모자 2 h에 대 한 실 온에서 교 반.</li>
		<li>뚜껑을 제거 하 고 50ml 폴 리 프로필 렌 원심 분리기 관으로 filtrate 솔루션을 수집 합니다. 선박 TFA의 1 mL을 추가 하 고, 모자 1 분 같은 원심 분리기 튜브에 수집 filtrate 솔루션에 대 한 선동.</li>
		<li>약 1 mL 점성 솔루션은 남아 때까지 질소 가스의 흐름에 부드럽게 불어 TFA를 증발.</li>
		<li>나머지 솔루션 diethyl 에테르의 15 mL를 추가 하 고 원심 분리기 튜브 캡 하룻밤 2 h-20 ° C 냉동 고에서 품 어. 원유 peptoid 흰색 고체 침전 물.</li>
		<li>작은 10 분 제거에 대 한 4,427 x g에서 원심 분리기를 사용 하 여 고체 원심 분리기 튜브의 모자 하 고 가만히 따르다 diethyl 에테르 비 커에 신중 하 게 고체를 잃지 않고. 주의: Diethyl 에테르는 가연성 유기 용 매 이다. Diethyl 에테르 안전 원심 분리기를 사용 하십시오.</li>
		<li>세척 포함 하는 고체, 고체는 원심 분리기에 얼음 처럼 차가운 diethyl 에테르 10 mL을 추가 하 여 튜브 튜브, 상한 고는 원심 분리기에 넣습니다. 10 분 제거는 원심 분리기는 원심 분리기에서 튜브와 가만히 따르다 diethyl 에테르 비 커에 신중 하 게 고체를 잃지 않고 4,427 x g에서 원심 분리를 수행 합니다.</li>
		<li>부드럽게 부는 질소 가스의 흐름에 의해 고체를 건조.</li>
		<li>HPLC 급 H2O 말린된 고체 해산의 10 mL를 추가 합니다. 0.45 μ m의 기 공 크기와 나일론 주사기 필터를 통해 솔루션을 전달 하 고 미리가 중된 50 mL 폴 리 프로필 렌 원심 분리기 튜브에는 filtrate 수집.</li>
		<li>셸 배치 하 고 회전 하는 원심 분리기 튜브를 포함 하는 12 온스, 더블 스택 확장 된 폴리스 티 렌 컵 1/3에서에서 peptoid 솔루션 액체 질소로 가득 하 여 솔루션을 고정 합니다. 단단한 peptoid를 하룻밤 냉동된 솔루션을 lyophilize.</li>
		<li>단단한 peptoid HPLC 급 H2O의 10 mL에 용 해 하 여 동결은 한번 더 반복, 액체 질소에서 냉동 고 lyophilizing 하룻밤 껍질. 결과 peptoid 질량 분석에 의해 시퀀스 분석에 대 한 충분히 순수입니다.</li>
	</ol></li>
</ol>2. MS 측정 및 시퀀스 분석
참고: MS/MS 실험 분무 이온화 (ESI) 소스에 결합 한 트리플 4 극 자 질량 분석기에서 수행 됩니다. 데이터 수집 장비와 함께 데이터 수집 소프트웨어를 사용 하 여 제어 됩니다. 일반 절차 포함 1) 전체 스캔 질량 분석 실험을 수행 하 고 실험 2) 수행 CID MS/MS 질량 스펙트럼을 기록, 및 MS/MS 스펙트럼을 기록 하 고 3) 이론적으로 MS/MS 스펙트럼 데이터 비교 조각화 체계는 peptoid의 구조적 기능에 따라 예측.
<ol><li>샘플 솔루션의 준비
	<ol>
<li>3-5 mL 유리 유리병에 1.0-2.0 mg 단단한 peptoid 밖으로 무게. 해산 된 peptoid 이기와 물 (= / H2O, 1:1, v/v)의 1 mL를 혼합 용 매를 추가 합니다. 이 약 10-3 M의 농도와 재고 샘플 솔루션을 제공합니다.</li>
		<li>1.5 mL 원심 분리기 관으로 재고 솔루션의 20 µ L를 전송 하 고 = / h 조2O를 약 10-5 M의 희석된 샘플 솔루션의 1 mL를 혼합 용 매를 추가.</li>
		<li>Peptoid MS와 작업 솔루션으로 만들기 위해 튜브 3 분 전송 솔루션의 윗부분의 약 700 µ L 다른 1.5 mL 원심 분리기에 대 한 4,427 x g에서 원심 분리를 수행 하 여 희석된 샘플 솔루션에서 모든 가능한 불용 성 입자 제거 약 10-5 M의 농도.</li>
		<li>질량 분석 측정 중 관찰 된 신호 강도에 따라 MS 작업 솔루션의 농도 조정 합니다.</li>
		<li>0.20 μ m 주사기 필터를 통해 샘플 솔루션을 전달 하 고 솔루션을 만들고 MS peptoid 작업 약 10-5의 1.5 mL 원심 분리기 튜브에는 filtrate 수집 하는 것입니다 희석된 샘플 솔루션에서 모든 가능한 불용 성 입자를 제거 하는 다른 방법 M.</li>
	</ol></li>
	<li>질량 스펙트럼을 기록
	<ol>
<li>분무 이온화 (ESI) 소스를 통해 = / H2O (1:1, v/v)의 혼합된 용 매를 실행 하 고 표준 긍정적인 이온에 악기, 100-1500의 질량 대 전 비 (m/z) 범위 스캔 전체 질량 분석 모드를 설정 합니다. 참고: 전형적인 작동 매개 변수: ESI 바늘 전압, 5 kV 모 세관 전압, 40 V 건조 가스 (질소 가스) 온도, 200 ° c.</li>
		<li>500 µ L 또는 1 mL 주사기로 peptoid MS 작업 솔루션 (약 10-5 M)의 약 300 µ L을 추가 하 고 모 세관 폴 리 에테르 에테르 케 톤 (PEEK) 튜브를 사용 하 여 ESI 입구에 주사기를 연결. 주사기 펌프에 주사기를 놓고에서 ESI에 샘플 솔루션에 10 µ L/min 흐름 속도 설정 합니다.</li>
		<li>켜고 ESI 과정을 활성화 ESI 바늘 전압 검출기를 켭니다. 프로필 모드와 100-1500의 m/z 범위에 표시를 설정 합니다. 프로 파일 창에 표시 된 질량 스펙트럼 프로필 보기 M/z 1265 (1,264.6의 m/z로 표시)에서 피크 peptoid 이온 또는 protonated peptoid에 해당 합니다.</li>
		<li>2 분 동안 MS 스펙트럼을 기록 합니다. "방법 창"에서 "실행된 시간입니다."로 2 분 사용 기록 창을 열고 적절 한 파일 이름을 입력 하 고 스펙트럼을 기록 하기 시작. 참고: 결과 질량 스펙트럼은 그림 3에 표시 됩니다.</li>
		<li>1265의 m/z에서 피크의 강도 최적화 합니다. 1150-1350 m/z 범위 설정 하 고 프로 파일 창에 표시 하는 mV에 피크 강도 보면서 모 세관 전압을 조정 합니다. 예를 들어 50 V 모 세관 전압 증가 또는 높은 피크 강도의 변화를 볼. 최적의 피크 강도 150-200 mV. 참고:은 크게 특정 이온의 풍부로 변경할 수 있습니다 모 세관 전압 조정. 모 세관 전압을 증가 peptoid 이온의 강도 향상 시킬 수 있습니다. 그러나, 모 세관 고전압 수 있습니다 또한 이온 소스에 peptoid 이온의 분리를 유발 하 고 관찰 된 강도 감소. 1265, m/z에서 피크의 강도 향상 시킬 수 있습니다 건조 가스의 온도 조정 하지만 모 세관 전압을 조정 하는 것 보다 덜 효과적 이다. M/z 1265에서 피크 최적의 강도 도달 하지 않습니다, 경우 샘플 농도 (또는 MS 작업 솔루션의 농도 두 번 하는 등)를 조정 합니다.</li>
		<li>악기 MS/MS 모드로 전환 합니다. M/z 1265에 선구자 이온을 설정 하 고 MS/MS 질량 범위에서 100-1, 400의 m/z. "방법 창"에서 "1 분기 첫 미사"로 m/z 1265를 사용 하 고 "1 분기 마지막 질량"을 비워 둡니다. "3 분기 첫 미사"와 m/z 1400 m/z 100을 사용 하 여 "3 분기 마지막 미사"로 참고: MS/MS 모드, 선구자 이온으로 peptoid 이온을 분리 하는 질량 필터 첫번째 4 중 극 단위 (1 분기) 기능에에서 두번째 4 중 극 단위 (2 분기)는 충돌 세포, 그리고 세 번째 4 중 극 (Q3) 단위 기능 질량 분석기입니다.</li>
		<li>세트 40 eV에서 충돌 에너지와 충돌 가스 (아르곤,이 경우에서) 1.5 mTorr에서 압력.</li>
		<li>프로 파일 창에 표시 되는 질량 스펙트럼 프로필 보기 1265의 m/z에서 피크 peptoid 이온에 해당 하며 m/z 값 봉우리 peptoid 이온에서 파편을 나타냅니다.</li>
		<li>조각화 스펙트럼의 디스플레이 최적화 하려면 충돌 에너지를 조정 합니다. 예를 들어 45 eV에 충돌 에너지를 증가 하 고 스펙트럼 프로 파일의 변화를 볼. 참고: 일반적으로, 충돌 에너지를 증가 것입니다 강화 조각 이온의 풍부 하 고 peptoid 이온의 풍부를 감소. 충돌 가스 압력 또한 조각 이온의 풍부를 강화할 것 이다. 주의: 2 mTorr 넘어 충돌 가스 압력을 증가 하지 않습니다.</li>
		<li>2 분 동안 MS/MS 스펙트럼을 기록 합니다. "방법 창"에서 "실행된 시간입니다."로 2 분 사용 기록 창을 열고 적절 한 파일 이름을 입력 하 고 스펙트럼을 기록 하기 시작.</li>
		<li>1-2 회 녹화를 반복 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>Peptoid 시퀀스 분석 참고: CID 조건 peptoid 이온 것 조각 라는 B-이온, N 맨끝 파편의 일련과 Y 이온 라는 C 터미널 조각의 시리즈 생산 peptoid 등뼈를 따라 아 미드 유대에서<ol>
<li>왼쪽 및 오른쪽 면에 C-말단에 N-말단을 배치 하 여 acetylated peptoid의 화학 구조 그리고 그림 2a와 같이 조각화 구조를 생성 하기 위해 각 아 미드 유대에 파선을 그립니다. 양성자는 전 하 운반자를 나타내기 위해 점선 동그라미를 그립니다. 구조의 왼쪽에서 starting, B1, B2, B8N 맨끝 파편을 나타내는 파선에 레이블을 배치 합니다. 오른쪽에서 starting Y1, Y2Y8C 터미널 조각을 나타내는 파선에 레이블을 배치 합니다. 참고: 화학 드로잉 소프트웨어는 peptoid 구조를 그리는 데 활용할 수 있습니다.</li>
		<li>왼쪽에서 4번째 아 미드 유대에 조각화를 상상 하 고 N 맨끝 파편의 그림 2b에서 같이 적절 한 공식적인 유료 C 터미널 조각 구조를 그립니다. N 맨끝 파편에 B4 의 라벨을 놓고 C 터미널 조각에 Y5 의 레이블을 배치 합니다. 580의 값을 산출 하는 구조에 있는 요소의 명목상 대 중을 요약 하 여 B4 의 m/z 값을 계산 하 고 N 맨끝 파편에 m/z 580을 놓습니다. Y5 의 m/z 값을 계산 하 고 C 터미널 조각에 m/z 685 장소.</li>
		<li>모든 8 개의 B 이온 및 모든 8 Y 이온, m/z 값을 계산 하 고 표 1과 같이 테이블에서 그들을 조립. 참고: 파편의 m/z 값 계산할 수 있습니다 소프트웨어를 그리기 화학 물질을 사용 하 여.</li>
		<li>악기와 함께 데이터 검토 소프트웨어를 사용 하 여 peptoid의 기록 된 MS/MS 스펙트럼을 엽니다. 3% "이온 레이블 표시"를 라벨 환경 설정 및 레이블 임계값을 설정 합니다. 이 봉우리에 표시 하는 m/z 값으로 MS/MS 스펙트럼을 생성 합니다.</li>
		<li>MS/MS에서 CSV 텍스트 파일로 스펙트럼 데이터 형식과 데이터 처리 소프트웨어를 사용 하 여 스펙트럼을 재구성을 내보냅니다. 봉우리에 m/z 값을 배치 합니다. 결과 MS/MS 스펙트럼은 그림 4에 표시 됩니다. 참고: 일부 질량 분석기는 갖추고 데이터 처리 소프트웨어 MS/MS 스펙트럼을 생성. 이 경우에, MS/MS 스펙트럼 데이터를 내보낼 필요는 없습니다.</li>
		<li>해당 B-및 Y-이온을 식별 하기 위해 표 1 에 표시 된 것 MS/MS 스펙트럼에는 m/z 값을 할당 합니다. M/z 580에서 피크 B4로 식별 되는 예를 들어-이온 및 685 m/z는 Y5식별-이온. 그림 4와 같이 해당 B와 Y 기호는 스펙트럼에 봉우리를 레이블을 지정 합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Sun, J., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoid+Polymers%3A+A+Highly+Designable+Bioinspired+Material%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Peptoid Polymers: A Highly Designable Bioinspired Material.</a> ACS Nano. 7 (6), 4715-4732 (2013).</li>
<li>Fowler, S. A., Blackwell, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-function+relationships+in+peptoids%3A+Recent+advances+toward+deciphering+the+structural+requirements+for+biological+function%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Structure-function relationships in peptoids: Recent advances toward deciphering the structural requirements for biological function.</a> Org. Biomol. Chem. 7 (8), 1508-1524 (2009).</li>
<li>Chongsiriwatana, N. P., Patch, J. A., Czyzewski, A. M., Dohm, M. T., Ivankin, A., Gidalevitz, D., Zuckermann, R. N., Barron, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoids+that+mimic+the+structure%2C+function%2C+and+mechanism+of+helical+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Peptoids that mimic the structure, function, and mechanism of helical antimicrobial peptides.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105 (8), 2794-2799 (2008).</li>
<li>Kruijtzer, J. A., Nijenhuis, W. A., Wanders, N., Gispen, W. H., Liskamp, R. M., Adan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoid-Peptide+Hybrids+as+Potent+Novel+Melanocortin+Receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Peptoid-Peptide Hybrids as Potent Novel Melanocortin Receptor.</a> J. Med. Chem. 48 (13), 4224-4230 (2005).</li>
<li>Liu, B., Alluri, P. G., Yu, P., Kodadek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+Transactivation+Domain+Mimic+with+Activity+in+Living+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">A Potent Transactivation Domain Mimic with Activity in Living Cells.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (23), 8254-8255 (2005).</li>
<li>Patch, J. A., Barron, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helical+Peptoid+Mimics+of+Magainin-2+Amide%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Helical Peptoid Mimics of Magainin-2 Amide.</a> J. Am. Chem. Soc. 125 (40), 12092-12093 (2003).</li>
<li>Ham, H. O., Park, S. H., Kurutz, J. W., Szleifer, I. G., Messersmith, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifouling+Glycocalyx-Mimetic+Peptoids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Antifouling Glycocalyx-Mimetic Peptoids.</a> J. Am. Chem. Soc. 135 (35), 13015-13022 (2013).</li>
<li>Olivier, G. K., Cho, A., Sanii, B., Connolly, M. D., Tran, H., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-Mimetic+Peptoid+Nanosheets+for+Molecular+Recognition%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Antibody-Mimetic Peptoid Nanosheets for Molecular Recognition.</a> ACS Nano. 7 (10), 9276-9286 (2013).</li>
<li>Olsen, C. A., Ziegler, H. L., Nielsen, H. M., Frimodt-Moeller, N., Jaroszewski, J. W., Franzyk, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial%2C+Hemolytic%2C+and+Cytotoxic+Activities+of+%CE%B2-Peptoid-Peptide+Hybrid+Oligomers%3A+Improved+Properties+Compared+to+Natural+AMPs%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial, Hemolytic, and Cytotoxic Activities of β-Peptoid-Peptide Hybrid Oligomers: Improved Properties Compared to Natural AMPs.</a> ChemBioChem. 11 (10), 1356-1360 (2010).</li>
<li>Lutz, J. -F., Ouchi, M., Liu, D. R., Sawamoto, M. <a target="_blank" href="http://science.sciencemag.org/content/341/6146/1238149.full">Sequence-Controlled Polymers.</a> Science. 341 (6146), Washington, DC. 628(2013).</li>
<li>Altuntas, E., Schubert, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Polymeromics%22%3A+Mass+spectrometry+based+strategies+in+polymer+science+toward+complete+sequencing+approaches%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">"Polymeromics": Mass spectrometry based strategies in polymer science toward complete sequencing approaches: A review.</a> Anal. Chim. Acta. 808, 56-69 (2014).</li>
<li>Paulick, M. G., Hart, K. M., Brinner, K. M., Tjandra, M., Charych, D. H., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavable+Hydrophilic+Linker+for+One-Bead-One-Compound+Sequencing+of+Oligomer+Libraries+by+Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comb.+Chem%22%5BJournal%5D)">Cleavable Hydrophilic Linker for One-Bead-One-Compound Sequencing of Oligomer Libraries by Tandem Mass Spectrometry.</a> J. Comb. Chem. 8 (3), 417-426 (2006).</li>
<li>Thakkar, A., Cohen, A. S., Connolly, M. D., Zuckermann, R. N., Pei, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+Sequencing+of+Peptoids+and+Peptide-Peptoid+Hybrids+by+Partial+Edman+Degradation+and+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comb.+Chem%22%5BJournal%5D)">High-Throughput Sequencing of Peptoids and Peptide-Peptoid Hybrids by Partial Edman Degradation and Mass Spectrometry.</a> J. Comb. Chem. 11 (2), 294-302 (2009).</li>
<li>Sarma, B. K., Kodadek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submonomer+Synthesis+of+A+Hybrid+Peptoid-Azapeptoid+Library%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Comb+Sci%22%5BJournal%5D)">Submonomer Synthesis of A Hybrid Peptoid-Azapeptoid Library.</a> ACS Comb Sci. 14 (10), 558-564 (2012).</li>
<li>Li, X., Guo, L., Casiano-Maldonado, M., Zhang, D., Wesdemiotis, C. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma200542p">Top-Down Multidimensional Mass Spectrometry Methods for Synthetic Polymer Analysis.</a> Macromolecules. 44 (12), 4555-4564 (2011).</li>
<li>Figliozzi, G. M., Goldsmith, R., Ng, S. C., Banville, S. C., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+N-substituted+glycine+peptoid+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Synthesis of N-substituted glycine peptoid libraries.</a> Methods Enzymol. 267, 437-447 (1996).</li>
<li>Zuckermann, R. N., Kerr, J. M., Kent, S. B. H., Moos, W. H. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja00052a076">Efficient method for the preparation of peptoids [oligo(N-substituted glycines)] by submonomer solid-phase synthesis.</a> J. Am. Chem. Soc. 114 (26), 10646-10647 (1992).</li>
<li>Utku, Y., Rohatgi, A., Yoo, B., Kirshenbaum, K., Zuckermann, R. N., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ed100202f">Rapid Multistep Synthesis of a Bioactive Peptidomimetic Oligomer for the Undergraduate Laboratory.</a> J. Chem. Educ. 87 (6), 637-639 (2010).</li>
<li>Tran, H., Gael, S. L., Connolly, M. D., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid-phase+submonomer+synthesis+of+peptoid+Polymers+and+their+self-assembly+into+highly-ordered+nanosheets%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Visualized+Exp%22%5BJournal%5D)">Solid-phase submonomer synthesis of peptoid Polymers and their self-assembly into highly-ordered nanosheets.</a> J. Visualized Exp. (57), e3373(2011).</li>
<li>Bolt, H. L., Cobb, S. L., Denny, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Efficient+Method+for+the+Synthesis+of+Peptoids+with+Mixed+Lysine-type%2FArginine-type+Monomers+and+Evaluation+of+Their+Anti-leishmanial+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Efficient Method for the Synthesis of Peptoids with Mixed Lysine-type/Arginine-type Monomers and Evaluation of Their Anti-leishmanial Activity.</a> J Vis Exp. (117), (2016).</li>
<li>Morishetti, K. K., Russell, S. C., Zhao, X., Robinson, D. B., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1387380611003071">Tandem mass spectrometry studies of protonated and alkali metalated peptoids: Enhanced sequence coverage by metal cation addition.</a> Int. J. Mass Spectrom. 308 (1), 98-108 (2011).</li>
<li>Bogdanov, B., Zhao, X., Robinson, D. B., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+Capture+Dissociation+Studies+of+the+Fragmentation+Patterns+of+Doubly+Protonated+and+Mixed+Protonated-Sodiated+Peptoids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Electron Capture Dissociation Studies of the Fragmentation Patterns of Doubly Protonated and Mixed Protonated-Sodiated Peptoids.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25 (7), 1202-1216 (2014).</li>
<li>Ren, J., Tian, Y., Hossain, E., Connolly, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragmentation+Patterns+and+Mechanisms+of+Singly+and+Doubly+Protonated+Peptoids+Studied+by+Collision+Induced+Dissociation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Fragmentation Patterns and Mechanisms of Singly and Doubly Protonated Peptoids Studied by Collision Induced Dissociation.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27 (4), 646-661 (2016).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

Nonamer peptoid, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, 제시 하는 프로토콜을 사용 하 여 합성 되어 있다. 합성 장치는 주사기 모양의 폴 리 프로필 렌 고체 상 반응 배 및 기계 통 포함 됩니다. 반응 선박 상업적으로 사용할 수 있으며 저렴 한 비용. 기계적인 통은 화학 실험실에서 일반적인 기구 이다. 주사기 같은 반응 배를 사용 하 여, 솔루션으로 그려진 고 플런저를 수동으로 이동 하 여 배를 밀어. 이 기술은 추가 및 수 지 분열 반응 한 단 하나 반응 용기에서 발생 하는 단위체를 수 수 하 고 분열에 대 한 다른 혈관으로 수 지 바인딩된 중간 제품을 전송 하는 단계를 제거 합니다. 이 기술은 또한 반응 용기에서 솔루션을 제거 하는 진공 적 출 장치에 대 한 필요성을 제거 합니다. 진공 추출 다른 연구원19,20에 의해 입증 되었습니다 수동 peptoid 종합에 주로...

Peptoids는 펩 티 드의 구조를 흉내 낸 등뼈 구조와 시퀀스 제어 고분자의 클래스. Peptoids 수 수 합성 다양 한 아민에서 높은 가변 속성1,2전시 peptoids를 가능 하 게. Peptoids 생물 연구, 치료 대리인으로 간주 하 고 ligands 단백질3,4,,56으로 설계에 대 한 분자 모형으로 사용 되었습니다. Peptoids 다양 한 생물학적 활성 화합물, 안티 파울 링 및 항 체 모방 재료, 항균 성 대리인 및 효소 억제제7,,89등으로 개발 되었습니다. 매우 정렬 하 고 조정할 수 있는 자연과 peptoids 분자 정보 저장10의 유형으로의 생각 또한 있다. 이러한 다양 한 응용 프로그램의 시퀀스를 특성화 하기 위해 효율적인 분석 방법의 개발 및 peptoids의 구조에 대 한 호출 합니다. 탠덤 질량 분석 기반 기술을 포함 peptoids11,12,13, 시퀀스 제어 고분자의 시퀀스 속성을 분석 하기 위한 방법의 선택으로 약속으로 나타났습니다. , 1415. 그러나, peptoid 이온 조각화 패턴에서 결과 상호 연결 하는 체계적인 연구 질량 분석 연구 및 peptoids의 구조적 정보는 매우 제한 된.
Peptoids은 단단한 단계 메서드를 사용 하 여 쉽게 합성 수 있습니다. 잘 개발 된 방법은 2 단계 단위체 또한 사이클16,17의 반복을 포함 한다. 각 추가 주기에서 수 지 바인딩된 아민 haloacetic 산 (일반적으로 bromoacetic 산, BMA)에 의해 acetylated 그리고 이것은 1 차 아민으로 변위 반응 옵니다. Peptoids는 표준 화학 실험실16,,1819, 에서 우수한 수익률 수동으로 합성 수 자동된 합성 프로토콜 peptoid 합성에 정기적으로 적용 된, 있지만 20.
우리의 실험실 수동 peptoid 합성의 방법을 채택 있으며 기존의 방법에서 사용 하는 기구를 간소화 합니다. 우리는 이전 MS/MS 기술을21,,2223을 사용 하 여 peptoids의 일련의 분열 패턴을 공부 했다. 우리의 결과 peptoids 생산 특성 fragmentations 그들은 충돌 유도 된 분리 (CID)21,23 하 대상이 됩니다 또는 전자 붙 잡음 분리 (ECD)22 실험 할 때 표시 됩니다. 이 문서에서는, 어떻게 올리고 peptoids 표준 화학 실험실에서 종합 될 수, 트리플-사중 극 자 질량 분석기를 사용 하 여 CID 실험을 수행 하는 방법 및 스펙트럼 데이터를 분석 하는 방법을 보여 줍니다. 합성 하 여 특징 peptoid는 N 맨끝 acetylation와 C 터미널 amidation, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2nonamer. peptoid의 구조는 그림 1에 표시 됩니다.

<table><tbody><tr><td>ESI-삼중계 쿼드러폴 질량분석기, Varian 320L</td><td>애질런트 테크놀로지스 주식회사</td><td></td><td>질량분석기는 Varian, Inc.에서 인수했습니다.</td></tr><tr><td>Varian MS 워크스테이션, 버전 6.9.2, 데이터 수집 및 데이터 검토 소프트웨어</td><td>바리안 주식회사</td><td></td><td>이 소프트웨어는 Varian 320L 패키지의 일부입니다</td></tr><tr><td>버렐 사이언티픽 손목 액션 셰이커, 모델 75 DD</td><td>피셔 사이언티브 인터내셔널 주식회사</td><td>14-400-126</td><td></td></tr><tr><td>허름 원심분리기, 모델 Z 206 A</td><td>허름 노동기술자 GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고체 상 반응 용기, 10 mL</td><td>토르빅</td><td>SF-1000</td><td></td></tr><tr><td>반응 용기용 압력 캡</td><td>토르빅</td><td>PC-SF</td><td></td></tr><tr><td>주사기 필터, 공극 크기 0.2 & mu; m</td><td>피셔 사이언티픽 주식회사</td><td>03-391-3B</td><td></td></tr><tr><td>주사기 필터, 공극 크기 0.45 & mu; m</td><td>피셔 사이언티픽 주식회사</td><td>03-391-3A</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 원심분리기 튜지, 50 mL</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>490001-626</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 원심분리기 튜지, 15 mL</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>490001-620</td><td></td></tr><tr><td>ChemBioDraw, Ultra, 버전 12.0</td><td>케임브리지소프트 코퍼레이션</td><td></td><td>현재 케임브리지소프트는 퍼킨엘머 주식회사의 일부입니다.</td></tr><tr><td>스티로폼 컵, 12온스</td><td>커먼 슈퍼마켓</td><td></td><td></td></tr><tr><td>링크 아마이드 수지</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>10619</td><td></td></tr><tr><td>피페리딘</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>02351</td><td>매우 독성이 강해</td></tr><tr><td>N, N'-디이소프로필카보디이미드</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>00110</td><td>매우 독성이 강해</td></tr><tr><td>브로모아세트산</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>26843</td><td>매우 독성이 강해</td></tr><tr><td>2-페닐에틸아민</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>EM8.07334.0250</td><td></td></tr><tr><td>2-메티옥시에틸아민</td><td>시그마-올드리치 주식회사.</td><td>241067</td><td></td></tr><tr><td>N-복-에틸렌디아민</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>AAAL19947-06</td><td></td></tr><tr><td>무수물 무수물 아세트</td><td>시그마-올드리치 주식회사.</td><td>252845</td><td></td></tr><tr><td>N, N-디메틸포름아마이드</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>BDH1117-4LG</td><td>사용 전 추가 증류</td></tr><tr><td>N, N-디이소프로필레틸아민</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>00141</td><td></td></tr><tr><td>트리이소프로필실란</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>01966</td><td></td></tr><tr><td>트리플루오로아세트산</td><td>켐-임펙스 인터내셔널, 주식회사</td><td>00289</td><td>매우 독성이 강해</td></tr><tr><td>밀리포어 MILLI-Q 학술용 정수 시스템</td><td>밀리포어 코퍼레이션</td><td>ZMQP60001</td><td>HPLC 등급 물 생성을 위해</td></tr><tr><td>HPLC 등급 수돗물</td><td></td><td></td><td>밀리포어 제작 MILLI-Q&reg; 학술 정수 시스템</td></tr><tr><td>메탄올</td><td>파름코-아퍼</td><td>339USP/NF</td><td>HPLC 등급</td></tr><tr><td>아세토니트릴</td><td>피셔 사이언티픽 인터내셔널, Inc.</td><td>A998-4</td><td>HPLC 등급</td></tr><tr><td>디에틸 에테르</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>BDH1121-19L</td><td>사용 전 추가 증류</td></tr><tr><td>디클로로메탄</td><td>VWR 인터내셔널 LLC.</td><td>BDH1113-19L</td><td>사용 전 추가 증류</td></tr><tr><td>질소 가스</td><td>프레즈노 산소/반스 서플라이</td><td>NIT 50-C-F</td><td>초고순도, 99.9995%</td></tr><tr><td>아르곤 가스</td><td>프레즈노 산소/반스 서플라이</td><td>ARG 50-C-F</td><td>초고순도, 99.9995%</td></tr></tbody></table>

합성 및 올리고 peptoids의 질량 분석 분석

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Peptoids N-alkylated 글리신 단위의 구성 된 시퀀스 제어 펩 티 드를 흉내 낸 올리고 있습니다. 많은 잠재적인 응용 프로그램, peptoids 분자 정보 스토리지의 유형으로의 생각 되었다. 질량 분석 분석 시퀀싱 peptoids에 대 한 선택의 방법을 고려 하고있다. Peptoids 반복 2 단계 반응 사이클을 사용 하 여 단단한 단계 화학을 통해 합성 될 수 있다. 여기 우리는 수동으로 올리고 peptoids을 합성 하 고 탠덤 질량 분석 (MS/MS) 기술을 사용 하 여 peptoids의 시퀀스를 분석 하는 방법을 제시. 샘플 peptoid nonamer는 N-(2-aminoethyl) 글리신 (내) N-말단에 뿐만 아니라 N-(2-methyloxyethyl) 글리신 (Nme) 및 N-(2-phenylethyl) 글리신 (Npe), 교류의 구성 이다. peptoid의 시퀀스 수식이입니다 Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, Ac는 아 세 틸 그룹. 합성은 상업적으로 사용할 수 있는 고체 상 반응 용기에 일어난다. 링크 아 미드 수 지는 C-말단에 아 미드 그룹 peptoid를 고체 지원으로 사용 됩니다. 결과 peptoid 제품 분무 이온화 소스에 결합 된 트리플-사중 극 자 질량 분석기를 사용 하 여 시퀀스 분석을 복종 된다. MS/MS 측정 된 peptoid의 분리에서 유래 파편 이온의 스펙트럼을 생성 합니다. 조각 이온 들의 질량 대 전 비 (m/z)의 값에 따라 밖으로 정렬 됩니다. 조각 이온의 m/z 값 peptoid 조각화의 계획에 따라 이론적으로 예측 된 조각 이온의 명목상 대 중에 대 한 비교 됩니다. 분석 된 peptoid의 조각화 패턴을 생성합니다. 조각화 패턴 중립 peptoid의 단위체 시퀀스에 상관 된다. 이와 관련, MS 분석은 peptoids의 시퀀스 정보를 읽습니다.

N 맨끝 acetylation, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2와 9-메 르 peptoid의 구조는 그림 1에 표시 됩니다. peptoid 단단한 단계 접근 방식을 통해 fritted 폴 리 프로필 렌 반응 용기에 수동으로 합성 했다. 링크 아 미드 수 지 (0.047 mmol, 로드 0.56 mmol/g 84 mg) amidated C terminus와 peptoid를 고체 지원으로 사용 됩니다. Peptoid 체인의 단위체 또한 여러 사이클에 의해 만들어집니다. 각 단위체 추가 주기는 두 반응 단계, bromoacetylation 및 변위를 포함 한다. bromoacetylation 0.8 M BMA 솔루션 및 0.8 M DIC 솔루션을 추가 하 여 이루어집니다 그리고 반응 20 분 소요. 변위 acetylation 제품 1.0 M 아민 솔루션을 추가 하 여 이루어집니...

프로토콜은 질량 분석에 의해 올리고 peptoids 시퀀스 분석 다음의 수동 합성에 설명 되어 있습니다.

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

이 절차의 궁극적인 목표는 올리고-펩토이드를 수동으로 합성하는 방법과 질량분석법을 이용해 그 단량체 서열을 분석하는 방법을 시연하는 것입니다. 이 방법은 초보자들이 펩토이드 분야의 핵심 질문들, 예를 들어 펩토이드 제조 방법과 단량체 서열의 특성화 방법에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 특수 단량체 잔기를 가진 펩토이드를 표준 분석 화학 실험실에서 합성하고 분석할 수 있다는 점입니다.이 방법은 올리고 펩토이드에 초점을 맞추고 있지만, 펩타이드나 올리고 뉴클레오타이드 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다. 일반적으로 이 기술에 익숙하지 않은 사람들은 시각적 시연 없이는 최적의 질량분석법 조건을 달성하기 어렵기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법을 처음 생각한 것은 덩어리의 구조적 특징을 병렬 질량분석법으로 특성화하고자 했을 때였습니다.먼저 84밀리그램의 Rink 아마이드 수지를 저울질하여 10밀리리터 폴리프로필렌 고상 반응 용기에 넣습니다. 그 다음 플런저를 용기에 삽입하세요. 그 다음, 반응 용기에 2밀리리터의 TMF를 추가하고 압력 캡으로 용기를 덮습니다.상온에서 셰이커 위에서 약 12도의 움직임 각도와 분당 385회 진동으로 30분 동안 저어줍니다. 캡을 제거한 후, 반응 용기의 플런저를 밀어 용액을 폐기물에 배수합니다. DMF에 20% 피페리딘 2밀리리터를 넣고 용기를 덮으세요.용기를 2분간 저은 후 용액을 폐기통에 빼냅니다. 과정을 반복하여 20%Pep DMF 용액 2밀리리터를 혈관에 추가하고 캡을 씌우세요. 셰이커에서 12분간 저은 후 용액을 폐기통에 빼세요.수지를 세척한 후, 비커 내에서 0.8몰 브로모아세트산 1밀리리터와 DMF에 0.8몰 DIC를 혼합하여 브로모 아세틸화 반응을 수행합니다. 혼합물을 반응 용기로 옮기고 용기를 덮습니다. 셰이커 위의 용기를 실온에서 20분간 저어줍니다.교반 후에는 용액을 폐기물에 배수하세요. 수지를 세척한 후, DMF에 1밀리리터 1몰 2 메톡시에틸아민을 삽입하여 변위 반응을 수행합니다. 용기를 뚜껑을 닫은 후 실온에서 60분간 저어줍니다.그 후 용액을 폐기통에 배수하세요. 단량체 첨가 사이클이 완료되면 비커에 아세트 무수물 92마이크로리터, DIPEA 43.5마이크로리터, DMF 2밀리리터를 섞어 아세틸화 칵테일을 만듭니다. 아세틸화 칵테일을 수지가 담긴 용기에 추가하세요.용기를 뚜껑을 닫은 후 실온에서 60분간 저어줍니다. 완

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

빠른 방법은 세포외 기질에서 다당류의 구조에 대한 통찰력을 얻을 수 설명되어 있습니다. 방법은 glycosylhydrolases의 특이성과 물질의 미세한을 분석 수 있도록 질량 분석계의 감도 활용합니다. 이 기술은 조직 자체에서 직접 사용할 수 적용할 수 있습니다.

세포외 다당류의 OLIgo 질량 프로파일 (OLIMP)

안정 동위 원소 표준 및 안티 펩타이드 항체 (SISCAPA) 각각의 단백질에 대한 surrogates으로 펩티드의 양적 측정을 제공하기 위해 안정 동위 원소 희석 질량 분석법 (MRM - MS)과 펩티드의 커플 선호도 농축하여 캡처합니다. 여기서 우리는 부분적으로 자동화된 형식으로 자기 입자를 사용하여 프로토콜을 설명합니다.

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기본 장비 및 상용 시약과 관련된 단순하고 일반적인 수동 peptoid 합성 방법은 peptoids 쉽게 대부분의 실험실에서 합성 수있게 설명되어 있습니다. amphiphilic peptoid의 36mer의 합성, 정제 및 특성은 물론 높은 주문한 nanosheets로의 자기 조립과 같이 설명되어 있습니다.

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