Name: Vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 MRI-호환 Osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: 학습하세요 생쥐 대퇴골 골절 치유 과정에서 MRI를 활용한 실시간 골성형 평가 방법을. 외부 고정기를 적용한 표준화된 모델로 뼈 재생을 장기간 모니터링하여 골 치유 역학에 대한 귀중한 데이터를 제공합니다.

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우리는 우수한 기술 지원에 대 한 Sevil Essig, 스테파니 치유력이, 레나 피셔, 카 차 Prystaz,이 본 Hägele, 및 앤 Subgang 감사합니다. 우리는 또한 독일 연구 재단 (CRC1149, INST40/499-1)와 AO 외상 기초 독일이이 연구 자금에 대 한 감사 합니다.

모든 동물 실험 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 국제 규정을 준수 하 고 (제 1250, Regierungspräsidium 튀빙겐, 독일) 지역 규제 당국에 의해 승인 했다. 모든 마우스 10 h 어두운 circadian 리듬 물과 음식을 제공 광고 libitum 14 h 빛에 감 금 소 당 2 ~ 5 동물의 그룹에서 유지 되었다.
 1. 수술 재료 및 쥐의 치료 전 준비 <ol><li>Sterilize 모든 수술 재료. 120-135 ° C의 압력가 마로 소독 온도 사용 하 여 살 균 시간 20-30 분.</li>
	<li>구매 C57BL/6 마우스 또는 몸 무게의 19-35 g 사이 다른 스트레인에서 쥐. 적절 한 동물 보호 및 조사에 의해 승인 되는 국가 지침 서에 따라 실험 프로토콜에 따라 &#39; s 기관 동물 관리 및 사용 위원회. 절차를 시작 하기 전에 7 일 순응 기간의 최소 허용.</li>
	<li>3 수술 날까지 수술 전에 1 일 식 수를 통해 모든 마우스 진통 제공.</li>
</ol> 2. 수술 절차 및 응용 프로그램의 외부 Fixator <ol><li>장소 5-7 %isoflurane 및 60 mL/min 산소 튜브로 마우스 탑재. 자세 반사의 손실, 후에 마 취 유도 관에서 마우스를 제거 하 고 제공 하는 1-3 %isoflurane 및 60 mL/min의 산소 흡입 마스크를 통해 마 취를 유지 합니다.
	마 취 중의 <ol><li>모니터 호흡 패턴 및 뒷 다리 발 반사 호흡 속도 약 100 사이클/분 하 고 뒷 발 반사 이다 결 석. 
		&#8203; 참고: 필요로 하는 가스의 양을 나이, 성별, 체중, 및 마우스의 변형에 따라 달라 집니다.</li>
	</ol></li> <li>수술 전에 주입 마우스 항생제의 단일 투여와 피하 (clindamycin, 45 mg/kg). 또한, 생리 유체 균형의 유지 보수, 500 µ L 염 분의 피하 유체 디포 마우스 주입 (0.9 %NaCl).</li>
	<li>막 방지 하기 위해 건조, 마우스 눈 눈 연 고를 적용 됩니다. 마 취 동안 37 ° C에서 난방 접시에 마우스를 배치 하 고 생리 유지 하기 위해 수술 신체 온도.</li>
	<li>오른쪽 뒷 다리에서 모피를 제거 하 고 알코올 기반의 소독 제와 수술 영역을 문질러. 오른쪽 뒷 발 unsterile 지역을 피하기 위해 멸 균 장갑의 작은 부분을 커버. 오른쪽 뒷 다리를 세 번 치료. 외과 영역 제외한 전체 마우스 살 균 드 레이프 장소.</li>
	메스와 오른쪽 대 퇴 골의 앞쪽 측에 따라서 경도 <li>절 개 피부 약 1 cm. 별도 퉁 명 스럽게 엠 팔 뚝 femoris와 m. vastus lateralis 마이크로 시저 및 집게. 뼈의 anterolateral 부분에 무료로 액세스할 수 있도록 마이크로 시저와 대 퇴 골 trochanter에 힘 원점 쪽을 잘라. 좌 골 신경 유지 됩니다 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>외부 fixator (3 N/mm, 그림 1 A의 축 강성) 대 퇴 골에 평행 하 게 배치합니다. 수동으로 0.45 m m 드릴 비트와 함께 피 질을 통해 시추공 훈련과 시추공에 핀을 장착 하는 세라믹을 배치. 가장 말 초 핀 뒤 가장 근 위 핀과 2 개의 핀 사이 시작 합니다.
	<ol><li>는 긴장, 압축, 또는 전단 응력에는 fixator 장착 절차 동안 그렇지 않으면 달성된 뼈 격차는 fixator의 이완으로 인해 충분 한 되지 것입니다 있는지 확인 하십시오.</li>
	</ol></li> <li>절단 절차 동안 탈수를 피하기 위해 무 균 NaCl의 작은 양의 뼈 축이다.</li>
	<li>만들 0.4 m m 질 리 와이어 톱을 사용 하 여 두 내부 핀 사이 전체 뼈를 통해 서 0.4 m m 뼈. 
	참고: 필요에 따라, 진동 마이크로 보고 사용할 수 있습니다는 뼈를 만드는 데. 뼈 지역에서 본에서 어떤 금속 칩을 피하기 위해 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>두 골절된 외피가 사이 뼈 칩을 제거 하는 살 균 NaCl의 2 mL와 함께 신중 하 게 뼈 간격 플러시.</li>
	<li>Resorbable 봉합으로 연속 봉합 사를 사용 하 여 근육을 적응 (재료의 표 참조). 다음 중단된 비 resorbable 봉합 (재료의 표 참조)를 사용 하 여 피부를 적응. 상처 물고를 방지 하려면 배치 하지 마십시오 봉합 상처의 두개골 부분에. 
	참고: 피부 접착제를 사용 하지 마십시오 또는 클립 마우스 일반적으로 상처 발생에서 그것을 제거 하는 때문에, 더 피부를 손상.</li>
	<li>살 균 제와 수술 영역을 청소 하 고 마우스의 케이지. 모니터 마우스 그리고 공급 충분 한 열 (예: 적외선 빛) 때까지 완전히 깨어. 물, 음식 섭취 량과 몸 무게를 수술 후 모니터링 동물 통증과 고통을 하지 있는지 확인 합니다. 3 수술 날까지 식 수를 통해 모든 마우스 진통 제공. 
	참고: 마우스 최대 4 개의 동물의 그룹에서 지 내게 될 수 있습니다.</li>
	<li>모니터 마우스 &#39; 수술 후 1 ~ 5 일에 s 활동. 그 시간 과정, 마우스는 운영된 다리에 체중을 부담 한다. 그렇지 않으면, 마우스 추가 분석에서 제외 해야 합니다.</li>
</ol> 3. Mri 검사 절차 및 이미지 분석 <ol><li>이전 절차, 스캔 MRI에 2.1, 2.3, 단계에서 프로토콜에 따라 마우스를 anaesthetize 하 고 계속 호흡 속도 약 100 사이클/분의 오른쪽 뒷 다리에 외부 fixator를 삽입 합니다 주문 품 장착 장치 ( 그림 1 B, C)에 신중 하 게 마우스.
	<ol><li>이후이 골절 치유를 방해할 수 있습니다 절곡 또는이 단계는 fixator의 압축을 피하기 위해 있는지 확인 합니다. 
		참고: MRI 검사는 동물 보호와 실험 프로토콜에 따라 수술 후 3 일 지휘 될 수 있다.</li>
	</ol></li> <li>MRI 장치 도입에 대 한 온도 제어 요람에 마우스를 놓습니다. 4 소자 헤드 코일에 단단하게 장착 장치를 연결.</li>
	<li>11.7 토니에서 전용된 높은 필드 작은 동물 MRI 시스템을 사용 하 여 취득 MRI 데이터 
	&#8203; 참고:는 MRI 데이터 수집 형상을 직교 나사에 대 퇴 골 뼈에 맞춰집니다.
	양성자 밀도 지방 억제 멀티 슬라이스 TSE 시퀀스 (PD-TSE)을 적용 하 여 <ol><li>취득 데이터 수집 매개 변수를 사용 하 여: 에코/반복 시간 테 5.8 ms/TR = 2500 ms, 해상도 Δr = 52 × 52 × 350 µm³, 보기의 필드 (FOV) = = 20 × 20 m m ², 그리고 대역폭 Δω = 150 KHz.</li>
		<li>참고: 22 조각 총 수집 시간은 36 분</li>
	</ol></li> <li>이미지 분석 소프트웨어와 함께 수집 된 데이터를 엽니다. 0.35 m m 3 x 0.05 x 0.05로 복 크기를 입력 합니다. (뼈, 연골, 섬유 조직/골) 골절 굳은 살에 다른 조직 같이 반자동 임계 처리를 가진 그들의 강도에 따라 세그먼트.
	<li>클릭 <ol>는 &#34; 새로운 레이블 필드 편집 &#34;, 클릭 &#34; 추가 자료 &#34;, 자료를 이름을 바꿉니다 &#34; callus &#34;. 사용 하 여과 포 강렬한 신호에 따라 주변 조직에서 굳은 살 지역 구분은 &#34; 올가미 &#34; 도구.</li>
		<li>클릭 &#34; 자료에 추가 &#34;. 클릭 &#34; 추가 자료 &#34; 자료를 이름을 바꿉니다 &#34; 연골 &#34;. 연골을 사용 하 여 세그먼트는 &#34; 임계값 &#34; 도구 및 &#34; 현재 자료만 선택 &#34;에서 &#34; callus &#34;. 클릭 &#34; 연골 &#34; 및 &#34; 물자에 추가 &#34;. 이러한 단계를 반복 하 여 &#34; 뼈 &#34; 및 &#34; 골/섬유 조직 &#34;.</li>
	</ol></li> <li>이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 조직 세분화 데이터에 따라 골절된 화관의 3D 개조를 생성. 클릭 &#34; 생성 표면 &#34;, 적용 &#34; 없음 &#34; 위한 &#34; 부드럽게 유형 &#34; 클릭 합니다 &#34; 표면 보기 &#34;. 
	참고: 매우 작은, 하이퍼 강렬한 분야는 en을 둘러싼골절된 외피가의 ds 뼈에서 부드러운 조직 전환으로 유물을 될 가능성이 있습니다. 이 지역 추가 분석에서 제외 해야 합니다. 골절 중간 하이퍼 강렬한 지역 callus 대표 연골 조직 치유 골절의 endochondral 단계. Endochondral 나오고 단계에서 뼈 간격에서 골절 굳은 살 원심 hypo-강렬한 지역 및 전체 골절 굳은 살 나중 치유 단계에 걸쳐 동일한 강도 영역 새로 형성된 된 뼈 굳은 살 조직을 나타냅니다. 이 분야는 hypo 강렬한 신호, 성숙한 뼈 (피 질)에서 신호 강도 더 낮은. 임계 처리 후 골절 굳은 살의 연골 조직과 뼈 조직에 대 한 신호 강도 표시 골으로 나머지 조직과 섬유 조직. 조직 세분화에 대 한 값: 뼈 조직 (를 포함 하 여 성숙 피 질, 배수 뼈와 뼈의 굳은 살 조직) 1-3.3 (성숙 피 질 정규화 된 신호 강도)의 범위 내에서 세그먼트는 3.4-5.4의 범위 내에서 골 수/섬유 조직 및 5.5-6.2의 범위 내에서 연골 굳은 살 조직.</li>
	<li>필요한 경우 MRI 스캔 경도 동안 반복 골절 치유 과정. 연골이 굳은 살 개발 모니터링, 10, 14, 그리고 21 일 수술 후에 마우스를 스캔. 
	참고: 시간 포인트 동물 관리 및 실험 프로토콜에 따라 달라질 수 있습니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자 로마노 Matthys RISystem AG 다보스, 스위스는 임 플 란 트를 생산 하 고이 문서에서 사용 되는 특정 악기 임 플 란 트의 직원입니다. 다른 모든 저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

수정 및 문제 해결:
이 연구의 주요 목표를 사용 하 여 MRI 호환 외부 fixator의 마우스에 대 퇴 골 뼈에 대 한 경도 endochondral 골절 치유 과정 동안 굳은 살 조직 개발을 모니터링 하는 기능에 대 한 프로토콜을 설명 했다. 외부 fixator의 삽입에 대 한 주문 품 장착 장치 디자인 반복된 검사 하는 동안 표준된 위치를 보장합니다. 자동 조직 세분화 골절 굳은 살에 섬유, 연골, 뼈 조직의 금액의 분석을 수 있습니다. 또한, MRI 이미지의 3D 복원 endochondral 골절 치유 과정에서 각 개별 마우스의 시각화를 수 있습니다.
프로토콜 내에서 중요 한 단계:
MRI-호환 외부 fixator를 사용 하 여 수술의 가장 중요 한 단계는: (1) 피하 모든 수술 하는 동안 좌 골 신경 손상, 그...

2 차 골절 치유 뼈 치유의 가장 일반적인 형태입니다. Ontogenic endochondral 나오고1,2,3의 특정 측면을 흉내 낸 복잡 한 과정 이다. 주로 초기 골절 혈은 면역 세포과 립 및 섬유 조직 구성 됩니다. 낮은 산소 긴장 및 높은 biomechanical 긴장 골절 간격에서 osteoblast 차별화를 방해 하지만 chondrocytes4,,56으로 조상 세포의 분화를 촉진. 이러한 셀 골절된 뼈의 초기 안정성을 제공 하는 연골 매트릭스를 형성 하는 상해의 사이트에 확산 하기 시작 합니다. 굳은 살 성숙 동안 chondrocytes hypertrophic, 되 받을 apoptosis, 또는 트랜스-osteoblasts로 분화. 연골 뼈 전이 영역에서 Neovascularization 제공 높은 산소 수준, 뼈 조직7의 형성. 뼈 분쇄 갭의 다리, 후 biomechanical 안정성 증가 하 고 외부 골절 굳은 살의 osteoclastic 개장 생리 뼈 윤곽 및 구조3을 얻을 수 발생 합니다. 따라서, 골절 굳은 살에 섬유, 연골, 뼈 조직 양의 뼈 치유 과정에 대 한 중요 한 정보를 제공 합니다. 굳은 살 조직 개발 모두 인간과 쥐8,9,,1011의 변경에 의해 방해 또는 지연 치유 표시 됩니다. 경도 연구 작은 동물을 사용 하 여 치료 전 임상 골절에 굳은 살 조직 개발 모니터링 기술을 사용할 수 비보에 디지털 방사선 및 µCT12,13이미징 포함 됩니다. 그러나, 두 기법 및 비 mineralized 광물 화 된 조직 사이 차별 수만 있습니다. 반면, MRI 우수한 연부 조직 대조를 제공 하 고 따라서 부드러운 조직과 연골 골절 굳은 살에 확인할 수 있을 수 있습니다.
이전 작업 intramembranous 뼈-결함 치유15동안 쥐에 사후 MRI 쥐에서 관절 골절14 그리고 vivo에서 MRI를 위한 유망한 결과 보여주었다. 그러나, 두 연구는 또한 제한 된 공간 해상도 조직 대비를 밝혔다. 우리는 이전 murine endochondral 골절 치유16동안 부드러운 굳은 살 형성의 경도 평가 대 한 고해상도 vivo에서 MRI의 타당성을 설명 했다. 여기, 우리는 굳은 살 조직 개발 endochondral 골절 치유 과정 동안 경도 모니터 하기 위해 쥐의 대 퇴 골 뼈에 대 한 MRI 호환 외부 fixator를 사용 하기 위한 프로토콜을 보고 합니다. 외부 fixator의 삽입에 대 한 주문 품 장착 장치 디자인 반복된 검사 하는 동안 표준된 위치를 보장합니다.

<table><tbody><tr><td>마취관</td><td>FMI, Seeheim, Germany</td><td>ZUA-82-ANA-TUB-마우스</td><td></td></tr><tr><td>마취기&nbsp;</td><td>FMI, Seeheim, Germany</td><td>ZUA-82-GME-MA</td><td></td></tr><tr><td>동맥 집게&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BH104R</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Systec, Wettenberg, Germany</td><td>DX-150</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브 패키징</td><td>Stericlin, Feuchtwangen, Germany</td><td>2301-04/06/10/12/16</td><td></td></tr><tr><td>Avizo software</td><td>FEI, Burlington, USA</td> <td>-</td><td>Version 8.0.1</td></tr><tr><td>BioSpec 117/16 자기공명영상시스템</td><td>Bruker Biospin, Ettlingen, Germany</td><td>117/16</td><td></td></tr><tr><td>불독 클램프&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BH 021R</td><td></td></tr><tr><td>탄소강 메스 no. 11/15</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BA211/215</td><td></td></tr><tr><td>세라믹 마운팅 핀 0.45 mm&nbsp;</td><td>RISystem, Davos, Switzerland</td><td>HS691490</td><td></td></tr><tr><td>Clindamycin (300 mg / 2ml)</td><td>Ratiopharm, Ulm, Germany</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>드레싱 펜치 115 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BD210R</td><td></td></tr><tr><td>드레싱 펜치 130 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BD025R</td><td></td></tr><tr><td>드릴 비트 코팅 0.45 mm&nbsp;</td><td>RISystem, Davos, 스위스</td><td>HS820420</td><td></td></tr><tr><td>Durogrip 바늘 홀더 125 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BM024R</td><td></td></tr><tr><td>폴리오드레이프&nbsp;</td><td>Hartmann, Heidenheim, Germany</td><td>2513026</td><td></td></tr><tr><td>Frekaderm</td><td>Fresenius, Bad Homburg, Germany</td><td>4928211</td><td></td></tr><tr><td>Gigli는 0.44mm를 보았습니다.</td><td>RISystem, Davos, Switzerland</td><td>RIS.590.110.25</td><td></td></tr><tr><td>핸드 드릴</td><td>RISystem, Davos, 스위스</td><td>RIS.390.130-01</td><td></td></tr><tr><td>가열판&nbsp;</td><td>FMI, Seeheim, Germany</td><td>IOW-3704</td><td></td></tr><tr><td>Hygonorm 장갑&nbsp;</td><td>Hygi, Telgte, Germany</td><td>2706</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbot, London, UK</td><td>포렌</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 펜치 155 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BD343R</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위 120 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>FD013R</td><td></td></tr><tr><td>마우스 FixEx L 0.7 mm&nbsp;</td><td>RISystem, Davos, 스위스</td><td>RIS.611.300-10</td><td></td></tr><tr><td>드릴용 바늘 케이스&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BL911R</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BB078R</td><td></td></tr><tr><td>Octenisept</td><td>Sch&uuml; lke, Norderstedt, Germany</td><td>121403</td><td></td></tr><tr><td>Osirix 소프트웨어</td><td>Pixmeo SARL, Bernex, 스위스</td><td>-</td><td>버전 4.0</td></tr><tr><td>산소, 의료용</td><td>MTI, Ulm, 독일</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Resolon 5/0</td><td>Resorba, N&uuml; rnberg, Germany</td><td>88143</td><td></td></tr><tr><td>식염수 0.9%</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>3570350</td><td></td></tr><tr><td>메스 핸들 125 mm</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BB073R</td><td></td></tr><tr><td>가위 150 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BC006R</td><td></td></tr><tr><td>오토클레이브 포장용 실러&nbsp;</td><td>Hawo GmbH, Obrigheim, Germany</td><td>HM500</td><td></td></tr><tr><td>Sterican 27 G&nbsp;</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>멸균 수술용 칼날 번호 11/15&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>BB511/515</td><td></td></tr><tr><td>수술용 장갑&nbsp;</td><td>Hartmann, Heidenheim, 독일</td><td>Peha-micron 9425712</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 조명&nbsp;</td><td>Maquet SA, Ardon, France</td><td>블루 라인 80</td><td></td></tr><tr><td>주사기 5 ml&nbsp;</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>Injekt 4606051V</td><td></td></tr><tr><td>조직 펜치 80 mm&nbsp;</td><td>Aesculap, Tuttlingen, Germany</td><td>OC091R</td><td></td></tr><tr><td>트라마돌 25 mg/l</td><td>Gr&uuml; nenthal, 아헨, 독일</td><td>100mg/ml</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 안전성&nbsp;</td><td>Braun, Melsungen, Germany</td><td>4268113S-01</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 5-0&nbsp;</td><td>Ethicon, Norderstedt, Germany</td><td>V30371</td><td></td></tr><tr><td>Visdisic 눈 연고&nbsp;</td><td>바우쉬 & Lomb, 베를린, 독일</td><td>3099559</td><td></td></tr></tbody></table>

vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 mri-호환 osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Endochondral 골절 치유 골절 굳은 살에 섬유, 연골, 뼈가 있는 직물의 개발을 포함 하는 복잡 한 공정 이다. 다른 조직에는 굳은 살의 금액 골절 치료 진행에 중요 한 정보를 제공 합니다. 경도 작은 동물을 사용 하 여 전 임상 골절 치유 연구에 굳은 살 조직 개발 모니터링 기술을 사용할 수 비보에 디지털 방사선 및 µCT 이미징 포함 됩니다. 그러나, 두 기법과 비 mineralized 광물 화 된 직물을 구별 수만 있습니다. 따라서, 섬유 조직에서 연골을 차별 수 아니다. 대조적으로, 자기 공명 영상 (MRI) 그들의 함량에 따라 해 부 구조를 시각화 하 고 따라서 noninvasively 부드러운 조직과 연골 골절 굳은 살에 확인할 수 있을 수 있습니다. 여기, 우리는 MRI 호환 외부 fixator 마우스 대 퇴 골에 대 한 쥐에서 뼈 재생 중 MRI 검사를 허용 하도록 사용을 보고 합니다. 실험 그는 fixator와 주문 품 장착 장치 수 있도록 반복적인 MRI 검사, 골절-굳은 살 조직 개발의 경도 분석 활성화 설명 했다.

첫째, 수술의 성공 ( 그림 2에서 예제 참조)는 MRI 검사의 분석에 의해 확인할 수 있습니다. 모든 4 개의 핀 대 퇴 축 가운데 위치 해야 합니다. 뼈 간격의 크기는 0.3-0.5 사이 여야 m m. 뼈 간격의 크기는이 값에서 크게 차이가, 마우스 추가 분석에서 제외 해야 합니다.
둘째, 골절 치유 같은 동물에서 과정 동안 경도 검사의 평가 굳은 살 조직 개발에 대 한 정보를 제공 합니다. 연골 조직 10 일째에 골절 굳은 살 중간에 표시 되는 마우스 하루 10, 14, 21 ( 그림 3에서 예를 참조)에서 검색 하는 경우 (상대 연골 영역 = 30.8%)와 하루 14 (상대 연골 영역 = 29.0%), 후 21 일까지 감소 수술 (상대 연골 영역 = ...

Endochondral 뼈 치유 하는 동안 골절 굳은 살에 조직 개발의 평가 치료 과정을 모니터링 하는 데 필수적 이다. 여기, 우리는 자기 공명 영상 (MRI)의 사용을 보고-MRI 있도록 마우스 대 퇴 골에 대 한 호환 외부 fixator 쥐에서 뼈 재생 동안 검색.

Vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 MRI-호환 Osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

이 기술의 전반적인 목표는 뼈 치유 중 쥐 골절 굳은살 발달의 종단 평가를 위해 자기 공명 영상(MRI)을 사용하는 것입니다. 이 방법은 다양한 마우스 모델에서 시간이 지남에 따라 골절 굳은살이 어떻게 발생하는지와 같은 뼈 치유 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 골절 캘러스 발달을 생체 내에서 실시간으로 모니터링할 수 있고 적용된 외부 고정 장치가 고도로 표준화된 골절 치유 모델을 제공한다는 것입니다.MRI 절차를 시연하는 것은 Small Animal Imaging Core 시설의 기술자인 Anne Subgang이 맡습니다. 절차를 시작하기 전에 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 적절한 수준의 진정 효과를 확인하고 0.9% 염화나트륨 250마이크로리터의 수액 저장고에 항생제를 1회 투여하여 마우스에 피하 주사합니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 섭씨 37도의 발열 패드에 쥐를 놓습니다.오른쪽 뒷다리의 털을 제거하고 알코올 기반 소독제로 수술 부위를 문지릅니다. 수술 부위가 노출된 상태로 동물에게 멸균 드레이프를 씌우고 멸균 장갑의 작은 조각으로 오른쪽 뒷발을 덮습니다. 소독제로 수술 부위를 3회 더 문지릅니다.그런 다음 오토클레이브 멸균 메스를 사용하여 오른쪽 대퇴골 안쪽을 따라 약 1cm의 세로 피부를 절개하고 마이크로 가위와 집게를 사용하여 대퇴 이두박근과 광대 외측 근육을 뭉툭하게 분리합니다. 좌골 신경이 보존되도록 주의하면서 뼈의 전외측 부분에 자유롭게 접근할 수 있도록 대퇴골 전자기에서 힘줄 삽입을 절단하고 외부 고정기를 대퇴골과 평행하게 배치합니다. 0.45mm 드릴 비트를 사용하여 피질을 통해 보어 구멍을 수동으로 뚫습니다.그리고 가장 근위부와 말단부의 끝부터 시작하여 세라믹 장착 핀을 구멍에 끼웁니다. 모든 핀이 배치되면 소량의 멸균 식염수로 뼈를 가습하고 0.4mm Gigli 와이어 톱을 사용하여 두 내부 핀 사이의 구멍 뼈를 통해 0.4mm 절골술을 만듭니다. 골절개 틈새를 멸균 식염수 2ml로 조심스럽게 씻어내어 골절된 두 피질 사이의 뼈 조각을 제거하고 지속적인 재흡수성 봉합사를 사용하여 근육을 적응시킨 다음 중단된 비흡수성 봉합사로 피부에 적응합니다.그런 다음 소독제로 수술 부위를 청소하고 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 마우스를 케이지로 되돌립니다. 빠르면 수술 후 3일 이내에 외부 고정 장치를 맞춤형 장착 장치에 조심스럽게 삽입하고 마취

in-vivo-evaluation-fracture-callus-development-during-bone-healing

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 문서는 수정된 Ilizarov 외부의 fixators의 적용을 기반으로 긴 뼈 골절을 안정화하는 방법을...

산만 Osteogenesis, 또는 임계 크기의 결함의 치유는 Intramembranous 골화을 평가하기위한 Rigidly 안정 골절 만들기

골절 치료에 뼈 전구 기능의 정량적 측정은 고해상도 시리얼 이미징 기술을 필요로한다. 여기에, 프로토콜은 이미지를 순차적으로 골절을 수리하는 과정에서 내생 골 형성 줄기 / 전구 세포의 이동, 증식과 분화를 정량화의 intravital 현미경과 osteo-혈통 추적을 사용하여 제공됩니다.

순차<em&gt; 생체 내</em&gt; 골절 치료시 골 형성 줄기 / 전구 세포의 이미징

황색 포도상 구균의 발광 생물 공학적 변형을 이용하여, 정형 외과 임플란트 감염 마우스 모델에서 광과 μCT 화상을 결합하여, 비 침습적으로 및 종 방향에서의 세균 감염의 역학뿐만 아니라 대응하는 염증 반응 및 해부학 적 변화를 모니터 할 수있는 기능을 구비 뼈.

결합<em&gt; 생체</em&gt; 광학 및 μCT 이미징 마우스의 정형 외과 임플란트 감염에 감염, 염증 및 뼈 해부학을 모니터링

동물 모델은 생물 의학 연구에서 심각한 뼈 손상을 모방하기 위해 자주 사용됩니다. 크기가 작기 때문에 생쥐에서 안정화된 뼈 병변을 확립하는 것은 대부분의 연구 그룹의 능력을 넘어섭니다. 여기에서는 마우스의 실험적 대퇴골 결함을 확인하고 분석하는 간단한 방법을 설명합니다.

마우스의 간단한 임계 크기의 대퇴 결함 모델

마우스 모델은 뼈 조직 공학에 매우 유용한 도구이지만, 긴 뼈 결함 모델은 드뭅니다. 이러한 필요성은 4개의 나사가 있는 잠금 플레이트와 전용 지그를 사용하여 이환율이 낮고 재현 가능한 대퇴골 임계 크기 결함을 수행하고 안정화하는 현재 프로토콜의 개발에 동기를 부여했습니다.

마우스의 분절 대퇴 임계 크기 결함 모델의 설립은 플레이트 고정술에 의해 안정화

이 프로토콜은 대퇴골 절골술의 표준화된 고정을 위해 골수내 잠금 못을 사용하는 골유합 기술을 설명하며, 이는 마우스의 정상 및 결함 있는 뼈 치유를 분석하는 데 사용할 수 있습니다.

대퇴골 절골술의 표준화 된 고정을위한 골수 내 잠금 네일은 마우스에 정상 및 결함 뼈 치유를 분석하기

이 프로토콜 분석 endochondral 뼈 쥐에서 치유 하는 데 사용할 수 있습니다 대 퇴 골 골절의 표준화 된 안정화를 위한 intramedullary 나사를 사용 하 여 최소 침 습 osteosynthesis 기술을 설명 합니다.

Endochondral 골절 표준화 된 Biomechanical 조건 하에서 쥐에서 치유를 분석 하는 최소 침 습 모델

Murine 닫힌된 대 퇴 골절 모델 골절 치유를 공부 하는 강력한 플랫폼 이며 뼈 재생을 촉진 하는 새로운 치료 전략. 이 수술 프로토콜의 목표는 일방적인 폐쇄 대 퇴 골절 대 퇴 골을 안정화 하는 intramedullary 강철 막대를 사용 하 여 마우스에 생성.

마우스에 닫힌된 대 퇴 골절의 발생: 뼈 치유 연구 모델

이 프로토콜은 성인 마우스에서 골절을 수행하고 치유 과정을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

안정화 핀을 가진 마우스 대퇴골의 횡단 골절

미세 컴퓨터 단층 촬영(μCT)은 전임상 연구에서 뼈 구조를 평가하는 데 중요한 비파괴 이미징 도구이지만 뼈 치유 캘러스를 분석하기 위한 μCT 절차에 대한 합의가 부족합니다. 이 연구는 골절 치유를 모니터링할 수 있는 단계별 μCT 프로토콜을 제공합니다.

미세 컴퓨터 단층 촬영을 이용한 골절 치유 평가

이 프로토콜은 골절 치유 연구를 위해 골수 내 와이어로 안정화된 마우스의 대퇴골에 골절 골절을 확립하기 위한 수술 절차를 설명합니다.

마우스에서 Diaphyseal 대퇴골 골절 모델 확립

학습하세요 생쥐 대퇴골 골절 치유 과정에서 MRI를 활용한 실시간 골성형 평가 방법을. 외부 고정기를 적용한 표준화된 모델로 뼈 재생을 장기간 모니터링하여 골 치유 역학에 대한 귀중한 데이터를 제공합니다.

Vivo에서 골절 뼈 쥐 마우스 대 퇴 골에 대 한 MRI-호환 Osteosynthesis 장치를 사용 하 여 치료 기간 동안 굳은 살 개발의 평가

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