Name: 유방암에서 HER2 유전자 증폭의이 질을 평가 하기 위해 높은 처리량 검열 플랫폼을 구축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: 학습하세요 고처리량 은색 현위치 하이브리드화법을 이용한 유방암 HER2 유전자 증폭 이질성 분석 방법입니다. 이 기술은 병리 아카이브의 대규모 코호트에서 종양 내 유전적 변이를 정량화하고 비교하여 임상 의사결정을 지원합니다.

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이 연구는 IRCCS Ca에서 제도적 검토 보드에 의해 승인 되었다 ' Granda 재단, 폴 병원, 밀라노, 이탈리아.
1입니다. 다양 한 환자와 조직 표본
<ol><li>모든 제공 되며 고 오신 (H & E) 및 원래 진단에서 IHC 슬라이드 포함 하 여 분석, 모든 경우의 보관 슬라이드를 검색 하 고, 있으면, 하나의 H & E의 일치 비 종양 약 유 방 조직 (예를 들어, 수술 여백) .</li>
	<li>
케이스 검토를 수행 합니다. 참고:이 작업에 대 한 유 방 병 리에 경험을 가진 적어도 2 명의 병리학 진단 슬라이드 토론 고 해야 collegially 불일치를 해결 합니다. 사용 하 여 기존의 현미경 또는 telepathology 도구 (선호 multicentric 연구에서 후자). 경우, 모든 귀에 거슬리는 경우를 제외 합니다.<ol>
<li>18유 방 종양의 세계 보건 기구 (WHO) 분류의 최신 버전에 따라 모든 경우의 조직학 재분류를 수행 합니다.</li>
		<li>그 각각의 경우에 정상적인 조직을 보관 임상 샘플에 존재 하는 경우 구성 하나 이상의 종양 약 비 터미널 ductal lobular 단위를 확인 하십시오.</li>
		<li>표시 유형이 다른 모든 종양 약 영역 식별 cytological, 건축, 또는 IHC 기능 (공동으로 수행 하는 병리학 자 고 누구는 TMAs를 건설할 것 이다 technician(s)) 밝은 분야 현미경을 사용 하 여.</li>
	</ol>
</li>
	<li>유리 슬라이드에 표시와 함께 또는 디지털 슬라이드 소프트웨어 (그림 1A)에 적절 한 도구와 개별 지형 영역을 강조 표시 합니다.</li>
	<li>선택한 슬라이드에 따라 달라 집니다, 보관 함에서 해당 FFPE 블록을 검색 합니다. 참고: TMA를 최적화 하기 위해 건설, 조직 소모를 방지 하 고 보존 TMA 펀치 구조적 무결성, 경우 < 1 mm 두께 잔여 조직을 제외 해야 합니다.</li>
</ol>2. 설계 및 TMAs Kononen 기술에 기반을 구축합니다
<ol><li>
만들기 각 케이스의 고유 영역의 레코드를 통합 새 스프레드시트 파일을 엽니다. 표 1에 exemplified 별도 열에 다음 데이터를 포함: 사례 ID, 블록 ID, 지역 ID, 조직 유형 (예, 정상 조직, 침략 적 구성 요소 histotype, 제자리에서 구성 요소 histotype), 지형 (예를 들면, 종양 코어, 침략 앞), 형태 (예를 들면, 핵 학년, 건축, mitoses, cytological 기능), 생체 상태 (즉, 에스트로겐 수용 체 (ER), 황 체 호르몬 수용 체 (홍보), Ki67, 그리고 HER2), 그리고 사용할 수 있는 모든 다른 IHC 기능.<ol>
<li>문서를 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
TMA 프로젝트를 만듭니다.
	<ol>
<li>설치 하 고 TMA 디자이너 소프트웨어를 엽니다.</li>
		<li>TMA 받는 블럭과 정의: 파일 메뉴를 통해 액세스 > 새로 만들기 > 블록 또는 CTRL + B를 사용 하 여</li>
		<li>첫 번째 필드 채우기 또는 Tab 키를 누르고 파라핀 블록의 치수 입력를 클릭: 폭 35 (mm), 높이 20 (mm). "여백" 값 (즉, 파라핀 지 m m에서에서 거리)으로 "2" 형 (그림 1B). 적절 한 버튼을 클릭 하 여 데이터를 저장 합니다. 받는 사람 블록의 새 서식 파일 지금 저장 고 새로운 조직 배열 서식 파일에서 사용할 준비가.</li>
		<li>조직 배열 프로젝트 만들기: 파일 메뉴에 액세스 > 새로운 > 조직 배열 또는 CTRL + t.를 사용 하 여</li>
		<li>조직 배열, 의견, 및 저자, 이름 입력 후 다음 클릭 합니다 "." "가져오기" 아이콘을 클릭 합니다 받는 사람 블록 이전에 만든 서식 파일을 선택 하 고 클릭 합니다 "."</li>
		<li>라운드 단추를 클릭 하 여 자리 크기 1 mm를 선택 합니다. 인근 관광 명소의 2 개의 센터 사이 공간이 자리 간격으로 500 µ m를 선택 합니다. 231 되어야 계산기 아이콘 생성, 관광 명소의 총 수를 계산을 클릭 합니다. 클릭 "다음."</li>
		<li>그것을 한 번 클릭 하 여 자리 번호 모드를 정의 합니다. 버튼을 클릭 "정의" 격자 및 하위 표를 만들려고 합니다. 중앙 선 (6 선) 삭제와 8과 15 열. 방향에 대 한 1 번 줄의 3 명소를 유지 합니다. 그림 2에 표시 최종 지도 183 명소의 총 수를 포괄 한다.</li>
		<li>조직 유형 목록 정의: 파일 메뉴를 통해 액세스 > 새로운 > 조직 유형 또는 CTRL + l.를 사용 하 여 목록</li>
		<li>이전에 정의 된 조직 설명을 삽입 합니다. 아래쪽 화살표를 누르거나 클릭 합니다 + 선 추가 버튼을.</li>
		<li>프로젝트 정의: 파일 메뉴를 통해 액세스 > 새로 만들기 > 부스터 프로젝트 또는 CTRL + p.를 사용 하 여</li>
		<li>조직 배열, 의견, 및 저자, 이름 입력 후 다음 클릭 합니다 "." 스프레드시트 파일, 조직 형식의 목록 및 이전에 적절 한 아이콘을 클릭 하 여 만든 조직 배열 모델을 가져옵니다.</li>
		<li>"모두 선택"을 클릭 하 고 각 조직 유형;에 대 한 관광 명소의 수 정의 설정을 적용 하려면 "검색" 버튼 클릭 합니다. 샘플링 되 고이 프로젝트에 있는 받는 사람 블록 전송 되는 코어의 총 수를 나열 하는 테이블에 표시 됩니다. 프로젝트를 저장 하 고 프로그램을 닫습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수락자 블럭과 (그림 1B)를 준비 합니다.
	<ol>
<li>65 ° c.에 elasticized 파라핀 정화 금속 금형 채우기</li>
		<li>금속 금형 내부 하룻밤 실 온에서 냉각 파라핀 블록을 둡니다.</li>
		<li>금속 금형에서 파라핀 블록을 추출 합니다. 균열 발생, 블록을 취소 하 고 단계 2.3.1-2.3.3를 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
TMA는 자동 또는 반자동 arrayer19를 사용 하 여 구성 합니다.
	<ol>
<li>선택한 모든 FFPE 블록과 주석으로 해당 H & E 섹션을 검색 합니다.</li>
		<li>켜고는 arrayer arrayer 회전 목마에 수락자 블럭과 삽입.</li>
		<li>Arrayer 제어 역 소프트웨어를 열고, "새로운 조직 배열"에 클릭 하 고 이전에 만든 프로젝트 (그림 1C)를 로드.</li>
		<li>"계속"을 클릭 하 고 메뉴에서 기증자 블럭과의 위치를 선택 합니다.</li>
		<li>각 받는 사람 블록에 시작 하는 위치 정의: 화살표 키를 사용 하 여 레이저 빛을 이동 하 고 받는 사람 블록의 파라핀에 왼쪽 가장자리 정렬.</li>
		<li>"다음"을 클릭 하 고 세로 맞춤에 대 한 반복 합니다.</li>
		<li>"다음" 자동으로 받는 (수락자) 블록의 이전에 정의 된 좌표에 구멍을 만들기를 클릭 합니다.</li>
		<li>빈 펀치.</li>
		<li>샘플링에 대 한 기증자 블록 놓고 관심의 이전 주석된 영역에서 조직 핵심을 제거 합니다.</li>
		<li>받는 사람 (수락자) 블록에 구멍에 기증자 조직 코어를 삽입 합니다.</li>
		<li>arrayer에서 기증자 블록을 제거 합니다.</li>
		<li>TMA를 완료 될 때까지 2.4.5-2.4.11 단계를 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>살 균 빈 슬라이드에 새로 생성 된 TMA 블록의 조직 쪽을 넣고 5 분 동안 45 ° C에서 실험실 오븐에 넣어.</li>
	<li>부드럽게 5 슬라이드에 블록을 누르십시오 s 조직 코어를 평평 하 게. 총 2 회) (한 번 반복 합니다.</li>
	<li>오븐에서 슬라이드와 TMA 블록을 제거 하 고 뒤집고, 부드럽게 슬라이드에서 블록을 분리.</li>
	<li>65 ° c.에 elasticized 파라핀의 얇은 층으로 TMA 조직 표면</li>
	<li>TMA 블록을 2 h에 대 한 실 온에 둡니다.</li>
	<li>24 h 4 ° C에서 TMA 블록을 전송 합니다. 참고: TMA 블록 저장할 수 있습니다 4 ° C에 피로까지.</li>
</ol>3. 조직화 학적인 및 Immunohistochemical 분석
<ol><li>
TMA 섹션을 잘라.
	<ol>
<li>파라핀 진정 10 분-10 ° C 표면에 파라핀 사이드와 TMA 수락자 블럭과 내려 놓습니다.</li>
		<li>초순에 채워 부양 목욕 고 열 38 ° c.에 설정</li>
		<li>새로운 블레이드를 회전 톰에 놓고 왁 스 블록 블레이드 얼굴과 수직 평면에 정렬 있도록 톰 척에 블록을 삽입 합니다.</li>
		<li>블레이드와 블록을 신중 하 게 접근 하 고 되도록 위치 정확한; 몇 얇은 섹션을 잘라 필요한 경우 조정 합니다.</li>
		<li>3 µ m 두께 섹션을 잘라.</li>
		<li>핀셋을 사용 하 여 섹션을 선택 하 고 목욕 물 표면에 떠.</li>
		<li>일반 및 IHC/분 유리 슬라이드에 물 탕 밖으로 섹션을 선택 하십시오.</li>
		<li>슬라이드를 선반에 놓고 하룻밤 45 ° c 오븐에서 그들을 저장 합니다. 참고: 일단 준비, TMA 섹션 24 시간 이내 스테인드 해야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
조직화 학적인 얼룩 (H & E) 수행 된 autostainer를 사용 하 여.
	<ol>
<li>Autostainer 선반에 슬라이드를 삽입 하 고 10 분 동안 60 ° C에 그들을 배치.</li>
		<li>Autostainer와 TMA와 선반 바깥쪽에 직면 하는 표준 H & E 클립으로 로드 스테이션 중 하나에 슬라이드 삽입의 부하 서랍을 엽니다.</li>
		<li>일단 서랍, 시스템에서 자동으로 클립을 인식 닫히고 다음 프로토콜 시작 됩니다: 오븐 역에서 37 ° C (6 분), 크 실 렌 (2 분), 크 실 렌 (2 분), 에탄올 100% (2 분), 에탄올 100% (2 분), 에탄올 95% (2 분), 에탄올 95% (2 분) 증 류 물 (4 분), Carazzi의 되며 (9 분), 저압 흐르는 물 (2 분), 오신 1% (1 분), 저압 흐르는 물 (2 분), 에탄올 95% (20 s), 에탄올 95% (20 s), 에탄올 95% (20 s), 에탄올 95% (20 s), 에탄올 100% (15 s), 에탄올 100% (15 s) 크 실 렌 (30 s), 크 실 렌 (30 s).</li>
		<li>서랍에서 선반을 언로 드 하 고 탑재와 커버 슬립 슬라이드.<ol>
<li>마운트는 피 펫의 한 방울을 수집 하 고 커버 슬라이드의 외부 가장자리에 그것을 넣어.</li>
			<li>슬라이드에 커버 슬립의 젖은 측면을 놓고 산 30 분 동안 건조 하자.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
IHC ER, PR, Ki67, HER2 얼룩 수행 자동화 된 immunostainer를 사용 하 여. 참고: 얼룩 실행을 시작 하기 전에 시스템, 시작 및 확인 소모품 시 약 병 (자료 테이블) 하 고 컨테이너를 낭비.<ol>
<li>10 분 동안 60 ° C에서 분석 TMA 슬라이드를 놓습니다.</li>
		<li>Immunostainer 계측기 및 소프트웨어를 시작 합니다.</li>
		<li>홈 보기에서 프로토콜 클릭 한 다음 만들기/편집 프로토콜을 클릭 합니다.</li>
		<li>표준 한 덩어리를 선택 (3, 3'-diaminobenzidine) 기본 서식 파일을 수정 하려면 IHC 절차.</li>
		<li>상자 목록에서 "Deparaffinization" 플래그와 매체 온도 72 ° c.에 설정</li>
		<li>Cc1 unmasking 솔루션 플래그, 95 ° C, 및 36 분 보육 시간에 매체 온도 설정 합니다.</li>
		<li>1 차적인 항 체 상자 플래그, 응급실 인라인 디스펜서 (악기 소프트웨어 시 약 회전 목마에 디스펜서를 인식할 것 이다)의 ID를 삽입 하 고 부 화 시간 16 분 설정.</li>
		<li>플래그 Counterstaining 상자, 선택 되며, 그리고 설정 부 화 시간 12 분.</li>
		<li>"다른 이름으로 저장" 버튼을 클릭 하 고 프로토콜 이름을.</li>
		<li>다음과 같은 1 차적인 항 체 외피 시간을 사용 하 여 나머지 항 체에 대 한 단계 3.3.3-3.3.9 반복: 홍보 16 분, Ki67 16 분, HER2 12 분 사용 중 희석된 준비--사용 (RTU) 항 체.</li>
		<li>홈 보기에서 레이블 만들기 버튼을 클릭 합니다.</li>
		<li>프로토콜 단추를 클릭 하 고 분석 하는 TMA의 각 ER, PR, Ki67, 그리고 HER2 프로토콜 추가.</li>
		<li>/Print 닫기 버튼을 클릭 합니다.</li>
		<li>레이블 서식 파일 나타납니다 레이블에 대 한 TMA Id를 입력 합니다.</li>
		<li>인쇄 버튼 레이블을 인쇄 하 고 다음 TMA 슬라이드에 적용을 클릭 합니다.</li>
		<li>악기 아이콘을 클릭 하 고 "준비"로 악기 시작 모드를 설정 합니다.</li>
		<li>시 약 회전 목마를 포함 하는 후드, 검출 시스템, 열고 1 차 항 체는 다음 후드를 닫습니다.</li>
		<li>로드 하 여 열, TMA 슬라이드 서랍 같은 버튼을 클릭 하 여 닫고 슬라이드 서랍에 전면 버튼을 클릭 합니다.</li>
		<li>악기 시작 모드를 "실행"으로 설정 하 고 지침을 따릅니다.</li>
		<li>TMA 악기 슬라이드 제어에 완료 슬라이드 단추와 린스 개방 모든 서랍을 누르면 슬라이드 실행된, 언로드의 끝에 그들에 따뜻한 비눗물 모든 나머지 시 약을 제거 하.</li>
		<li>저압 차가운 실행 물 아래 슬라이드를 세척, TMA 슬라이드를 탈수 하 고 유리 coverslip 각 슬라이드에 적용.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ER, PR, HER2 IHC 분석 수행는 미국 협회의 임상 종양학 (ASCO) 다음 지침, 모자 /와 Ki67 유방암 워킹 그룹 (표 2)에서 국제 Ki67의 권고에 따라. 참고:이 분석 수행 되어야 합니다 별도로 개별 조직 관광 명소에서 유 방 병리학에서 경험 병리학 자에 의해.<ol>
<li>종양 세포 핵의 ≥ 1% immunoreactive20,21,,2223있다면 긍정적으로 응급실 식을 평가 합니다.</li>
		<li>종양 세포 핵의 ≥ 1% immunoreactive20,21,,2223있다면 긍정적으로 홍보 식을 평가 합니다.</li>
		<li>HER2 식을로 평가: a) 점수 3 + 원주 막 얼룩을 완전 하 고 강렬한, b) 점수 2 + 원주 막 얼룩은 불완전 한 약한/온건 하 고 침략 적인 종양 세포의 또는 완전 한 > 10% 이내 및 원주 막 얼룩은 강렬 하 고 침략 적인 종양 세포, c ≤ 10% 이내) 점수 1 + 불완전 막 얼룩이 희미 한/거의 지각할 수 있는 고 침략 적인 종양 세포, d의 > 10% 이내) 부정적인 얼룩이 지는 존재 하는 경우 또는 막 얼룩은 불완전 하 고 희미 한/거의 지각할 수 있는 그리고 ≤ 내 침략 적인 종양의 103,24세포.</li>
		<li>임의로 적어도 1000 종양 약 세포에서 핵 얼룩과 셀의 비율 선택 10 고 전력 분야 (확대, 400 X) Ki67 인덱스 평가25.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. SISH HER2 분석
<ol><li>TMA 섹션 (반복 단계 3.1)을 잘라.</li>
	<li>
HER2 위한 SISH는 자동된 immunostainer를 사용 하 여 수행 합니다.
	<ol>
<li>10 분 동안 60 ° C에서 분석 TMA 슬라이드를 놓습니다.</li>
		<li>Immunostainer 계측기 및 소프트웨어를 시작 합니다.</li>
		<li>홈 보기에서 프로토콜 클릭 한 다음 만들기/편집 프로토콜을 클릭 합니다.</li>
		<li>기본 서식 파일을 수정 하려면 "U 듀얼 틱 CKT" 절차를 선택 합니다.</li>
		<li>"건조" 상자 목록에서 플래그 하 고 20 분 동안 63 ° C에 온도 설정 합니다.</li>
		<li>플래그 상자 목록, 다음 "셀 컨디셔닝 CC2", "셀"을 조절 하 고 4 분에 86 ° C 및 부 화 시 온도 설정 합니다.</li>
		<li>플래그 CC2 가벼운 (주기 1), 표준 (2 주기), 및 확장 (주기 3) 8 분, 12 분, 8 분, 각각.</li>
		<li>상자 목록에서 "틱-효소 3" 플래그를 16 분 보육 시간을 설정.</li>
		<li>HER2DNP 및 CHR17DIG 프로브를 선택 하 고 6 h에 보육 시간을 설정.</li>
		<li>8 분 동안 76 ° C에 세척을 설정 합니다.</li>
		<li>32 분 SISH multimer (SIL 틱 DNP HRP) 부 화 시간을 설정 합니다.</li>
		<li>4 분은 chromogen (SIL 틱 DNP CHRC) 부 화 시간을 설정 합니다.</li>
		<li>24 분 빨간 multimer (빨간 분 발굴 AP) 부 화 시간을 설정 합니다.</li>
		<li>8 분에 빨간 chromogen (빨간 분 발굴 FR) 부 화 시간을 설정 합니다.</li>
		<li>상자 목록에서 플래그 "Counterstaining" "되며 II"를 선택 하 고 8 분 보육 시간을 설정.</li>
		<li>상자 목록에 "-Counterstaining" 플래그 "청소법 시 약"을 선택 하 고 4 분에 보육 시간을 설정.</li>
		<li>3.3.11-3.3.15에서 단계를 반복 (선택 수정 U 듀얼 틱 CKT 프로토콜).</li>
		<li>오픈 후드 시 약 회전 목마를 포함 하는 세척 및 분 검출 시스템 다음 후드를 닫습니다.</li>
		<li>3.3.18-3.3.21에서 단계를 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>HER2SISH 분석 수행: HER2/CEP17이 경우 ≥2.0은 평균 HER2 복사 번호 ≥4.0 신호 셀 당 HER2 유전자 증폭으로 긍정적인 평가 및 부정적인 HER2/CEP17이 경우 < 2.0 HER2 평균 복사 번호 < 4.0 신호/셀3,24. 참고: IHC와 마찬가지로,이 분석에서에서 수행 되어야 합니다 별도로 개별 조직 명소 경험 유 방 병리학에서과 병리학 자에 의해.</li>
</ol>

<ol><li>Allison, K. H., Dintzis, S. M., Schmidt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+HER2+heterogeneity+by+fluorescence+in+situ+hybridization+according+to+CAP+expert+panel+recommendations%3A+time+for+a+new+look+at+how+to+report+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Frequency of HER2 heterogeneity by fluorescence in situ hybridization according to CAP expert panel recommendations: time for a new look at how to report heterogeneity.</a> Am J Clin Pathol. 136 (6), 864-871 (2011).</li>
<li>Montemurro, F., Scaltriti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+of+drugs+targeting+HER-family+signalling+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Biomarkers of drugs targeting HER-family signalling in cancer.</a> J Pathol. 232 (2), 219-229 (2014).</li>
<li>Wolff, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+human+epidermal+growth+factor+receptor+2+testing+in+breast+cancer%3A+American+Society+of+Clinical+Oncology%2FCollege+of+American+Pathologists+clinical+practice+guideline+update%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer: American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists clinical practice guideline update.</a> J Clin Oncol. 31 (31), 3997-4013 (2013).</li>
<li>Ng, C. K., Pemberton, H. N., Reis-Filho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+intratumor+genetic+heterogeneity%3A+causes+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Anticancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Breast cancer intratumor genetic heterogeneity: causes and implications.</a> Expert Rev Anticancer Ther. 12 (8), 1021-1032 (2012).</li>
<li>Vance, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+heterogeneity+in+HER2+testing+in+breast+cancer%3A+panel+summary+and+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Genetic heterogeneity in HER2 testing in breast cancer: panel summary and guidelines.</a> Arch Pathol Lab Med. 133 (4), 611-612 (2009).</li>
<li>Murthy, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+HER2%2FNeu+status+by+fluorescence+in+situ+hybridization+in+immunohistochemistry-equivocal+cases+of+invasive+ductal+carcinoma+and+aberrant+signal+patterns%3A+a+study+at+a+tertiary+cancer+center%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Pathol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of HER2/Neu status by fluorescence in situ hybridization in immunohistochemistry-equivocal cases of invasive ductal carcinoma and aberrant signal patterns: a study at a tertiary cancer center.</a> Indian J Pathol Microbiol. 54 (3), 532-538 (2011).</li>
<li>Ohlschlegel, C., Zahel, K., Kradolfer, D., Hell, M., Jochum, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+genetic+heterogeneity+in+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">HER2 genetic heterogeneity in breast carcinoma.</a> J Clin Pathol. 64 (12), 1112-1116 (2011).</li>
<li>Chang, M. C., Malowany, J. I., Mazurkiewicz, J., Wood, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Genetic+heterogeneity%27+in+HER2%2Fneu+testing+by+fluorescence+in+situ+hybridization%3A+a+study+of+2%2C522+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">'Genetic heterogeneity' in HER2/neu testing by fluorescence in situ hybridization: a study of 2,522 cases.</a> Mod Pathol. 25 (5), 683-688 (2012).</li>
<li>Bartlett, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+HER2+gene+amplification%3A+impact+on+patient+outcome+and+a+clinically+relevant+definition%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous HER2 gene amplification: impact on patient outcome and a clinically relevant definition.</a> Am J Clin Pathol. 136 (2), 266-274 (2011).</li>
<li>Seol, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumoral+heterogeneity+of+HER2+gene+amplification+in+breast+cancer%3A+its+clinicopathological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intratumoral heterogeneity of HER2 gene amplification in breast cancer: its clinicopathological significance.</a> Mod Pathol. 25 (7), 938-948 (2012).</li>
<li>Hanna, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+in+situ+hybridization+in+breast+cancer%3A+clinical+implications+of+polysomy+17+and+genetic+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">HER2 in situ hybridization in breast cancer: clinical implications of polysomy 17 and genetic heterogeneity.</a> Mod Pathol. 27 (1), 4-18 (2014).</li>
<li>Sanguedolce, F., Bufo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+assessment+by+silver+in+situ+hybridization%3A+where+are+we+now%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">HER2 assessment by silver in situ hybridization: where are we now?</a> Expert Rev Mol Diagn. 15 (3), 385-398 (2015).</li>
<li>Fusco, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Contrasting+Role+of+p16Ink4A+Patterns+of+Expression+in+Neuroendocrine+and+Non-Neuroendocrine+Lung+Tumors%3A+A+Comprehensive+Analysis+with+Clinicopathologic+and+Molecular+Correlations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Contrasting Role of p16Ink4A Patterns of Expression in Neuroendocrine and Non-Neuroendocrine Lung Tumors: A Comprehensive Analysis with Clinicopathologic and Molecular Correlations.</a> PLoS One. 10 (12), e0144923(2015).</li>
<li>Albanghali, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+tissue+microarrays+from+core+needle+biopsies+-+a+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Construction of tissue microarrays from core needle biopsies - a systematic literature review.</a> Histopathology. 68 (3), 323-332 (2016).</li>
<li>Navani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+evaluation+of+tissue+microarrays+in+a+high-throughput+research+project%3A+The+contribution+of+Indian+surgical+pathology+to+the+Human+Protein+Atlas+%28HPA%29+project%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Manual evaluation of tissue microarrays in a high-throughput research project: The contribution of Indian surgical pathology to the Human Protein Atlas (HPA) project.</a> Proteomics. 16 (8), 1266-1270 (2016).</li>
<li>Fusco, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+in+gastric+cancer%3A+a+digital+image+analysis+in+pre-neoplastic%2C+primary+and+metastatic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">HER2 in gastric cancer: a digital image analysis in pre-neoplastic, primary and metastatic lesions.</a> Mod Pathol. 26 (6), 816-824 (2013).</li>
<li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmin%2C+MB+%22AJCC+Cancer+Staging+Manual%22">AJCC Cancer Staging Manual</a>. , Eight, Springer International Publishing. (2017).</li>
<li>Lakhani, S. R., Ellis, I. O., Schnitt, S. J., Tan, P. H., van de Vijver, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLakhani%2C+SR+%22WHO+Classification+of+Tumours+of+the+Breast%22">WHO Classification of Tumours of the Breast</a>. , 4th, IARC press. (2012).</li>
<li>Kononen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+microarrays+for+high-throughput+molecular+profiling+of+tumor+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens.</a> Nat Med. 4 (7), 844-847 (1998).</li>
<li>Fusco, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+quandaries%3A+basaloid+adenoid+cystic+carcinoma+or+breast+cylindroma%3F+The+role+of+massively+parallel+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Resolving quandaries: basaloid adenoid cystic carcinoma or breast cylindroma? The role of massively parallel sequencing.</a> Histopathology. 68 (2), 262-271 (2016).</li>
<li>Fusco, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+events+in+the+progression+of+adenoid+cystic+carcinoma+of+the+breast+to+high-grade+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Genetic events in the progression of adenoid cystic carcinoma of the breast to high-grade triple-negative breast cancer.</a> Mod Pathol. 29 (11), 1292-1305 (2016).</li>
<li>Fusco, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+NAB2-STAT6+gene+fusions+and+oestrogen+receptor-%CE%B1+expression+in+pulmonary+adenofibromas%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Recurrent NAB2-STAT6 gene fusions and oestrogen receptor-α expression in pulmonary adenofibromas.</a> Histopathology. 70 (6), 906-917 (2017).</li>
<li>Hammond, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Society+of+Clinical+Oncology%2FCollege+Of+American+Pathologists+guideline+recommendations+for+immunohistochemical+testing+of+estrogen+and+progesterone+receptors+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">American Society of Clinical Oncology/College Of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer.</a> J Clin Oncol. 28 (16), 2784-2795 (2010).</li>
<li>Fusco, N., Bosari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+aberrations+and+heterogeneity+in+cancers+of+the+digestive+system%3A+Implications+for+pathologists+and+gastroenterologists%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">HER2 aberrations and heterogeneity in cancers of the digestive system: Implications for pathologists and gastroenterologists.</a> World J Gastroenterol. 22 (35), 7926-7937 (2016).</li>
<li>Dowsett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Ki67+in+breast+cancer%3A+recommendations+from+the+International+Ki67+in+Breast+Cancer+working+group%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Assessment of Ki67 in breast cancer: recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer working group.</a> J Natl Cancer Inst. 103 (22), 1656-1664 (2011).</li>
<li>Dekker, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+sensitivity+and+specificity+of+HER2+testing+in+breast+cancer+using+a+tissue+micro-array+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Determining sensitivity and specificity of HER2 testing in breast cancer using a tissue micro-array approach.</a> Breast Cancer Res. 14 (3), R93(2012).</li>
<li>De Sio, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+MALDI-Mass+Spectrometry+Imaging+method+applicable+to+different+formalin-fixed+paraffin-embedded+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biosyst%22%5BJournal%5D)">A MALDI-Mass Spectrometry Imaging method applicable to different formalin-fixed paraffin-embedded human tissues.</a> Mol Biosyst. 11 (6), 1507-1514 (2015).</li>
</ol>

저자는 관심의 충돌이 있다.

여기, 우리가 heterogeneously 처리 유방암의 높은 수율 TMAs HER2 유전자와 그 해당 centromere SISH 분석을 수행 하는 실험실 전략 세부. 이 방법은 비용 효율적 이며 유 방 암 검색 양식 병 리 기록 보관소의 큰 동료에서 HER2 유전자 증폭이 연구에 대 한 대부분 실험실에서 실시 될 수 있습니다.
때문에 HER2의 임상 중요성 유방암과 그것의 다른 유형의 식에 의해 생성 된 과제에서 테스트, 우리는 평가 하기 위해 내부-및 남북-tumor HER2 유전자이 높은 처리량 테스트 프로토콜을 개발 했다. 분석된 분야 특정 cytological, 건축, IHC 특징 기준 미리 침략과 침략 적 구성 요소를 포함합니다.
이 프로토콜에서 신중 하 게 관리 해야 하는 몇 가지 중요 한 단계 있다. 한 필수 단계는 관심의 영역의 선택 이다. 우리은 다양 한 접근 방...

HER2 proto-oncogene overexpressed 이며 모든 침략 적인 유 방 암1,2의 15-30%에서 증폭 이다. HER2 overexpression의 존재에 의해 유추 됩니다 > 얼룩 (3 +), 유전자 증폭 HER2/centromere 비율은 ≥2 또는 유전자 복사 번호는 ≥6 때 평가 될 수 있다 동안에 계산에 강한 막 immunohistochemical (IHC)와 10%의 셀 제자리 교 잡 (ISH)3에 의해 최소 20 셀.
내부 종양 유전자이 바이오 마커의 평가 및 치료 응답4잠재적으로 불리 한 기여자 되 고 유방암에서 널리 설명 되었습니다. 에 따르면 대학의 미국 병리학 자 (모자), HER2 이종 존재 HER2 에 증폭 하는 경우 > 5%와 < 종양 침투의 50% 세포5. 유감 스럽게도, 유방암에서 HER2 공간이 성분의 실제 발생률 남아 병리학 사이 논쟁의 주제, 몇몇 저자는 유지 그것은 대단히 드문 이벤트와 최대를 제안 하는 다른 경우의 40%는 HER2 이기종1,5,6,7,8,,910. 이 상태를 지탱 하는 생물 학적 메커니즘에도 불구 하 고는 하지 아직 완전히 명백 하 게, 내부 종양 HER2 이종의 전조 및 임상에 미치는 영향은 유 방 암 환자11에 대 한 중요 한.
최근, 밝은 분야 분자 기술이, 발 틱 (CISH) 실버 틱 (SISH), 형광 분 (물고기)12에 비해 몇 가지 장점을 함께 FFPE 직물에서 HER2이 감지 하는 신뢰할 수 있는 방법으로 등장 했습니다. 유감 스럽게도, 단일 경우의 대량 분석 대형 코 호트 연구에서 허무 남아 있습니다. 여러 그룹 histochemistry, IHC와 ISH TMA 기술과 조합 수 암 생물학13,14,,1516의 연구에 귀중 한 전략을 나타내는 제안 했다. 이 널리 채택 된 방법으로 다른 환자에서 조직 샘플 분석할 수 있습니다 동시에, 조직 및 고용 하 고 그로 인하여 경우14의 큰 시리즈의 유니폼 분석을 육성 시 약을 최소화. 그러나, 아무 프로토콜 다른 처리 시 약, 고정 배, 및 고용, 같은 보존 방법으로 보관을 받았다 여러 조직 샘플 동시 처리량이 높은 분자 특성에 대 한 사용할 수 있습니다. 블록입니다.
유방암에서 HER2 공간이 성분의 전조와 임상 의미를 감안할 때, 우리 heterogeneously 처리 경우의 큰 시리즈에 그것을 평가 하는 통합된 분자 플랫폼을 개발 했다. 여기, 우리는 생성 하 고 SISH 통해 유방암의 높은 수율 TMAs에 HER2 증폭의 내 종양이 분석 실험실 전략 묘사. 다음 프로토콜은 측정 하는 종양에 대 한 개발 되었습니다 > 5 m m (> TNM 2017에 따르면 pT1b)17. 작은 병 변, 탈모 직렬 섹션에 분석을 수행 하는 것이 좋습니다. 우리의 절차 각각의 경우에 대 한 6 가지 영역 (범위 4-8)의 의미를 포괄 최대 30 유방암의 동시 IHC 및 SISH 분석 할 수 있습니다. 모두 180 조직 코어 직경, 코어, 그리고 그리드 가장자리 사이 2 밀리미터 사이 500 µ m에서에서 1 m m의 각 TMA 블록에 대해 생성 됩니다.

<table><tbody><tr><td>Surgipath Paraplast</td><td>Leica Biosystems, Wetzlar, 독일, EU</td><td>39601006</td><td>조직 포매 매체, 56 &deg; C 융점</td></tr><tr><td>Eosin Y&nbsp; 1% 수용액</td><td>Bio Optica, 밀라노, 이탈리아, EU</td><td>510002</td><td>Eosin 황색, 수용성</td></tr><tr><td>Carazzi' s hematoxylin</td><td>Bio Optica, Milan, Italy, EU</td><td></td><td>506012 Alum hematoxylin preolified using potassium iodate</td></tr><tr><td>Diamond quality</td><td>Laboindustria, Arzergrande, Italy, EU</td><td>33533</td><td>26x76 mm microscope slides</td></tr><tr><td>Leica CV Mount</td><td>Leica Biosystems, Wetzlar, Germany, EU</td><td>14046430011</td> xylene FLEX IHC microscope <td>slides의 부틸메타크릴레이트 폴리머를 기반으로 단량체가 없는 마운팅 매체</td></tr><tr><td></td><td>애질런트 테크놀로지스(Dako),&nbsp; 미국 캘리포니아주 산타클라라</td><td>K8020</td> IHC BenchMark ULTRA Ventana 의료 시스템, 미국 애리조나주 투산에 <td>사용하기 위한 FFPE 접착용 코팅 현미경 슬라이드</td></tr><tr><td></td><td></td><td>N750-BMKU-FS</td><td>슬라이드 염색 시스템</td></tr><tr><td>CONFIRM 항에스트로겐 수용체(ER)(SP1) 토끼 단클론 1차 항체</td><td>Ventana 의료 시스템, 미국 애리조나주 투손</td><td>790-4324</td><td>1차 항체, 즉시 사용 가능</td></tr><tr><td>CONFIRM 항-프로게스테론 수용체(PR) (1E2) Rabbit Monoclonal Primary Antibody</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>790-2223</td><td>일차 항체, 즉시 사용 가능한</td></tr><tr><td>CONFIRM anti-Ki-67 (30-9) Rabbit Monoclonal Primary Antibody</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>790-4286</td><td>1차 항체, ready-to-use</td></tr><tr><td>PATHWAY HER2 (4B5) Rabbit Monoclonal Primary Antibody</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>790-4493</td><td>1차 항체, 즉시 사용 가능한</td></tr><tr><td>ultraView Universal DAB Detection Kit</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>760-500</td><td>마우스 IgG, 마우스 IgM 및 토끼 1차 항체 검출을 위한 간접, 비오틴 프리 시스템</td></tr><tr><td>INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>780-4422</td><td>INFORM HER2 Dual ISH assay - 유방암 환자의 HER2 유전자 상태를 결정하기 위한 이중 색상 현장 혼성화 FDA 승인 자동화 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>ultraView Silver ISH DNP Detection Kit</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>800-098</td><td></td></tr><tr><td>ultraView Red ISH DIG Detection Kit</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>800-505</td><td></td></tr><tr><td>ISH Protease 3</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>780-4149</td><td>ISH 공정에서 관심 대상 DNA 염기서열을 둘러싸고 있는 단백질을 제거하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td></td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>760-2021</td><td>Modified Gill's hematoxylin counterstain reagent</td></tr><tr><td>Hematoxylin II Counterstaining</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>790-2208</td><td>Modified Meyer's hematoxylin counterstain reagent</td></tr><tr><td>Bluing 시약</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>760-2037</td><td>유리 슬라이드의 헤마톡실린 염색 단면을 블루링하기 위한 완충 탄산 리튬 수용액</td></tr><tr><td>HybReady</td><td>Ventana 의료 시스템, Tucson, AZ, USA</td><td>780-4409</td><td>ISH 분석을 위한 포름아미드 기반 완충액</td></tr><tr><td>EZ Prep (10x)</td><td>Ventana 의료 시스템, Tucson, AZ, USA</td><td>950-102</td><td>IHC 및 ISH 반응 중 조직 샘플에서 파라핀 제거 및 1:10 희석을 위한 농축 용액.</td></tr><tr><td>SSC Buffer (10X)</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>950-110</td><td>염화나트륨 구연산염 완충액 용액은 엄격한 세척 및 염색 단계 사이의 슬라이드를 헹구고 현장 혼성화 반응을 위한 안정적인 수성 환경을 제공하는 데 사용됩니다. 1:5을 묽게 한다.</td></tr><tr><td>ULTRA LCS</td><td>Ventana 의료 시스템, Tucson, AZ, USA</td><td>650-210</td><td>IHC 및 ISH 반응에서 증발을 방지하기 위해 수성 시약과 공기 사이의 장벽으로 사용되는 사전 희석(즉시 사용 가능) 커버슬립 용액</td></tr><tr><td>반응 완충액(10x)</td><td>Ventana 의료 시스템, Tucson, AZ, USA</td><td>950-300</td><td>Tris 기반 완충 용액(pH 7.6 &plusmn; 0.2)으로 IHC 및 ISH 중 염색 단계 사이에 슬라이드를 헹굽니다. 1:10을 희석한다.</td></tr><tr><td>ULTRA Cell Conditioning (ULTRA CC2)</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>950-223</td><td>IHC 및 ISH 중 조직 샘플 처리의 전처리 단계. 바로 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>ULTRA Cell Conditioning (ULTRA CC1)</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>950-224</td><td></td></tr><tr><td>ultraView Silver Wash II</td><td>Ventana medical system, Tucson, AZ, USA</td><td>780-003</td><td>IHC와 ISH 염색 단계 사이의 슬라이드를 헹구기 위한 즉시 사용 가능한 솔루션</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica Biosystems, Wetzlar, Germany, EU</td><td>RM 2255</td><td>자동 회전식 마이크로톰</td></tr><tr><td>멀티스테너</td><td>Leica Biosystems, Wetzlar, Germany, EU</td><td>ST 5020</td><td>자동 염색 및 커버 슬립을 위한 워크스테이션</td></tr><tr><td>Minicore 1</td><td>Alphelys, Plaisir, France, EU</td><td>00-MICO-1</td><td>TMA Designer 2 임베디드 소프트웨어를 사용한 TMA 구축을 위한 반자동 어레이어</td></tr><tr><td>Aperio ScanScope CS2</td><td>Leica Biosystems, Wetzlar, Germany, EU</td><td>K080254</td><td>이미지 캡처 장치 - 디지털 병리학 스캐너</td></tr><tr><td>Tissue-Tek III Uni-Cassette</td><td>Sakura Finetek Europe B.V</td><td>4135</td><td>카세트</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Paraform Standard Base Mold</td><td>Sakura Finetek Europe B.V</td><td>7055</td><td>스테인리스 스틸 모재 금형</td></tr></tbody></table>

유방암에서 her2 유전자 증폭의이 질을 평가 하기 위해 높은 처리량 검열 플랫폼을 구축

Building Up a High-throughput Screening Platform to Assess the Heterogeneity of HER2 Gene Amplification in Breast Cancers

인간 표 피 성장 인자 수용 체 2 (HER2)에 대 한 표적으로 한 치료 HER2-양성 유방암 환자의 결과 근본적으로 변경. 그러나,의 경우 소수 주요 임상 과제 생성 HER2 양성 세포의 유형이 다른 분포를 표시 합니다. 날짜 하려면, 특성화 및 큰 동료에서 HER2 이기종 유전자 증폭의 정량화에 더 안정적이 고 표준화 된 프로토콜 제안 되었습니다. 여기, 우리는 동시에 여러 개의 유방암의 다른 지형 지역에 걸쳐 HER2 상태를 평가 하는 높은 처리량 방법 제시. 특히, 우리는 향상 된 조직 microarrays (TMAs) 종양의 대상된 매핑 통합을 구성 하는 실험실 절차를 설명 합니다. 모든 TMA 매개 변수는은 제자리에서 교 잡 (SISH)의 포 르 말린 고정 파라핀 포함 (FFPE) 유 방 조직에 대 한 특별히 최적화 되었습니다 했습니다. (즉, ER, PR, Ki67, 그리고 HER2) 전조 및 예측 생체의 Immunohistochemical 분석 자동화 된 절차를 사용 하 여 수행 되어야 한다. 사용자 지정된 SISH 프로토콜은 다른 고정, 처리 및 저장 프로시저를 받았다 여러 조직에 걸쳐 높은-품질 분자 분석을 수 있도록 구현 되었습니다. 이 연구에서 우리는 증거--방침의 특정 DNA 시퀀스 heterogeneously 처리 되 고 여러 가지 지형 영역에 동시에 지역화 된 유방암 효율적이 고 비용 효율적인 방법을 사용 하 여 수를 제공 합니다.

전반적으로, 444 침략 적인 유 방 암 15 TMAs 분 분석 최적화에 반영 되었습니다. 샘플링 2,664 명소 중 2,651 (99.5%) 이전에 선택한 분야의 대표 되었고 따라서 후속 분석에 대 한 순종으로 간주. 내 종양이 종양의 독특한 지형 지역에 HER2 양성 클론의 유형이 다른 배포판에 특정 초점 IHC 및 SIH, 결정 되었다. 표 3 은 다른 histotypes에서 ER, PR, Ki67, HER2 상태에 초점을 맞추고 분석, 경우의 생물 학적 특성 묘사 한다. 특히,의 경우 18%에서 HER2 양성 셀을 표시 하려면 발견 &gt; 종양 세포의 10% 따라서 HER2 양성 평가 대 한 특성을 일치 하 고. 흥미롭게도,이 값은 보고 된 발병 률 범위의 HER2 양성 유방암의 더 낮은 끝에 더 가까이. 다른 한편으로, HER2 상태는 HER2-양성, HER2 음성 유방암 (그림 3</stro...

HER2 양성 세포의 다른 유형의 배포 유방암의 하위 집합에서 관찰 될 수 있다 고 임상 딜레마를 생성 합니다. 여기, 정의 계량, HER2 내부 종양 유전자이 heterogeneously 처리 유방암의 큰 시리즈에 비교 하는 안정적이 고 비용 효율적인 프로토콜을 소개 합니다.

유방암에서 HER2 유전자 증폭의이 질을 평가 하기 위해 높은 처리량 검열 플랫폼을 구축

Targeted therapies against the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) have radically changed the outcome of patients with HER2-positive breast ...

이 실험실 절차의 전반적인 목표는 고처리량 은 제자리 혼성화를 통해 이질적으로 처리된 대규모 유방암에서 HER2 종양 내 유전적 이질성을 동시에 정의, 정량화 및 비교하는 것입니다. 이 방법은 주요 유방암 번역 및 HER2 유전자 증폭 이질성 연구, 병리학 아카이브에서 검색된 대규모 사례 코호트와 같은 연구를 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다발성 및 이질적으로 처리된 유방암의 다양한 지형 영역에서 고처리량 HER2 분열분석을 가능하게 한다는 것입니다.일반적으로 현장 혼성화를 처음 접하는 개인은 후향적 연구가 일반적으로 다른 고정, 처리 및 보관 절차를 거친 보관 샘플의 분석을 요구하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법에 대한 아이디어는 2003년 이후 기관 데이터베이스에서 모든 유방암을 재분류하기로 결정했을 때 처음 떠올랐습니다. 이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 기술자인 Giulia Ercoli가 될 것입니다.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 환자 및 조직 표본을 선택하여 이 프로토콜을 시작합니다. 새 스프레드시트 파일을 만들고 열어 각 사례의 고유한 영역에 대한 레코드를 통합합니다. 사례 ID, 블록 ID, 영역 ID, 조직 유형, 지형, 형태, 바이오마커 상태 및 사용 가능한 기타 모든 면역조직화학적 특징에 대한 별도의 열을 포함합니다.TMA 프로젝트를 만듭니다. 파일, 새로 만들기, 블록으로 이동하여 PMA 수신자 블록을 정의합니다. 채울 첫 번째 필드를 클릭하고 파라핀 블록의 치수를 입력합니다.다음으로 파일, 새로운, 조직 배열로 이동하여 조직 배열 프로젝트를 만듭니다. 가져오기 아이콘을 클릭한 다음 이전에 만든 수신자 블록의 템플릿 파일을 선택합니다. 다음을 클릭합니다.그런 다음 둥근 버튼을 클릭하여 스폿 크기로 1mm를 선택합니다. 인접 스폿의 두 중심 사이의 공간인 스폿 간격으로 500미크론을 선택합니다. 그런 다음 계산기 아이콘을 클릭하여 생성된 총 스폿 수(231)를 계산합니다.그런 다음 define 버튼을 클릭하여 그리드와 하위 그리드를 만듭니다. 8열과 15열, 그리고 중심선을 삭제합니다. 방향을 위해 라인 1의 세 지점을 유지합니다.최종 지도에는 총 183개의 지점이 포함되어야 합니다. 조직 유형 목록(file, new, list of tissue types)으로 이동하여 조직 유형 목록을 정의합니다. 그런 다음 파일, 새로운, 부스터 프로젝트로 이

building-up-high-throughput-screening-platform-to-assess

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

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여기 수량 immunofluorescence, 이미지 분석, 이질의 통계 측정을 사용하여 종양이 자료 histological 섹션에 분자 이질을 계량하는 방법을 설명합니다. 방법은 임상 biomarker 개발 및 분석에 사용하기위한 것입니다.

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전임상 시험에서 인간 대상 시험으로 전환되는 새로운 약물 표적을 식별하는 것은 과학적인 우선 순위입니다. 이를 위해 여기에서는 유전자 고갈이 암 세포주 스페로이드에 미치는 영향을 조사하기 위한 기능적 유전체학 접근 방식을 설명하며, 이는 생체 내에서 인간 암을 보다 적절하게 모델링합니다.

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핵 산 저하 보관 조직, 종양이, 그리고 신선한 냉동된 조직 표본의 부족 병 리 실험실 전세계에 암 진단 서비스를 저하 수 있습니다. 이 원고 멀티플렉스 마그네틱 비드 분석 결과 사용 하 여 유방암을 분류 하는 마커의 패널의 최적화를 설명 합니다.

유 방 암 아카이브 자료를 사용 하 여 다중 RNA 기반 식 분석 결과의 최적화

이 문서에서는 주어진 환자에게서 다른 견본 중 클론 및 subclonal 변경을 확인하는 방법을 설명합니다. 여기에서 기술된 실험은 특정 종양 모형에 집중하더라도, 접근은 그밖 고형 종양에 광범위하게 적용가능하다.

표적 시퀀싱 접근법을 통한 비교 병변 분석

순환 종양 세포(CTC)는 암 진행 및 전이 연구에 매우 중요합니다. 이 기사에서는 CTC 농축 및 단일 CTC 시퀀싱을 위한 고처리량 통합 프로토콜을 제시하여 포획 효율성과 CTC 순도를 개선하는 동시에 오염 및 시퀀싱 비용을 줄여 정밀 종양학 연구 및 임상 응용을 발전시킵니다.

미세유체공학 기반 고처리량 순환 종양 세포 분류 및 단일 세포 시퀀싱 기술

학습하세요 고처리량 은색 현위치 하이브리드화법을 이용한 유방암 HER2 유전자 증폭 이질성 분석 방법입니다. 이 기술은 병리 아카이브의 대규모 코호트에서 종양 내 유전적 변이를 정량화하고 비교하여 임상 의사결정을 지원합니다.

유방암에서 HER2 유전자 증폭의이 질을 평가 하기 위해 높은 처리량 검열 플랫폼을 구축

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