Name: 심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 T-Maze를 활용 하 여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: 학습하세요 심장마비 후 뇌허혈로 인한 기능적 학습 및 기억 평가를 위한 수정된 T-미로 사용법을. 이 단순하면서도 강력한 방법은 단기 기억 결손을 측정하여 중추신경계 질환 연구에 활용됩니다.

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이 작품으로는 국립 연구소의 건강/국립 연구소의 신경 장애 지원 선 1R01NS096225-01A1 부여, 미국 심 혼 협회 보조금 AHA-13SDG1395001413, 17GRNT33660336 AHA, AHA-17POST33660174는 루이지애나 주립 대학 그랜트 원조 연구 위원회, 말 콤 Feist 심장 혈관 연구 원정대, 고 블 린 F. 일행 두뇌 연구소에서.

모든 실험 절차 했다 건강의 국가 학회의 지침에 따라 실시 하 고 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (LSU 건강 과학 센터-위조) 남성 Sprague Dawley 쥐 (의 사용에 대 한 승인 300-350 g, 9 10 주 오래 된). 쥐는 ACA 수술 전에 하룻밤 금식 했다.
1. T-maze 장치 설계 및 설정
주: 자료는 집사와 롤 린스 2006 모델31에 T-maze 디자인.
<ol><li>SketchUp32를 이용 하 여 미로의 3D 구조 디자인. T-maze의 3 차원 구조를 만들려면 시작 팔은 외부의 길이 200 m m, 3D 프린터의 인쇄 크기에 맞게 148 mm의 165 m m의 너비와 높이 생성 합니다. 5.5 m m의 벽 두께 바닥 두께 8 m m를 사용 합니다.</li>
	<li>3 차원 프린터를 사용 하 여 미로 인쇄 (재료의 표 참조)32. 실험실에서 3D 프린터를 사용할 수 없는 경우 나무, 중간 밀도 섬유판, 플라스틱 (즉, 폴 리 염화 비닐), 주택 개선 상점에서 구입할 수 있는 등 다른 재료를 사용 합니다.<ol>
<li>인쇄 영역에서 높이 제한으로 인해 두 개의 별도 3D 인쇄에 미로의 벽을 생성 하 고 미로 어셈블리에 함께 참여 (두 번째 벽 높이 280 m m의 총 벽 높이 140 mm, 높이 증가 미로 섹션에 추가 되었습니다는 즉,). 각 별도 3D 인쇄 자료 "T" 모양의 잠금 메커니즘, 한 섹션 다음에 연결 되어 있는 포함.</li>
		<li>목표 팔 시작 팔의 접합에 가입 목표 팔의 시작 팔의 폭 165 m m 다양 한 섹션을 만듭니다. 목표 팔 시작 팔;으로 비슷한 디자인 메서드를 사용 하 여 구성 그러나, 집사와 롤 린스의 디자인 당 100 mm 팔의 폭을 줄일 수 있습니다.</li>
		<li>자세한 회로도/치수는 T-maze의 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
		<li>시작 팔과 목표 팔의 접합에 있는 디자인에 중앙 파티션 포함. 목표 팔 분할 시작 팔에는 T-maze의 그리고 200 m m 뒤쪽 벽에서이 파티션을 확장 합니다. 이 파티션에 또한 미로 (그림 1)의 높이 확장합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. asphyxial 심장 마비 (ACA)
<ol><li>압력솥 수술 도구 (15 분 동안 121 ° C) 수술의 개시 전에. 수술의 사이트에 동물 머리 15 분 면도 대 한 70% 에탄올에 의해 수술 테이블을 소독. 피부 외과 수술에 대 한 표면에 betadine 솔루션을 적용 합니다.</li>
	<li>Anesthetization
	<ol>
<li>4 %isoflurane과의 혼합물으로 O2 와 N2O (300 mL/min O2 와 700 mL/min N2O) 마스크를 통해 쥐 anesthetize</li>
		<li>게 쥐 기계 환기를 위한 endotracheal 삽 관 법 (삽 관 법, 후 쥐에 연결 된 호흡).</li>
		<li>낮출 isoflurane 4%에서 2%의 O2 와 N2오 마 취의 깊이 결정 하는 핀치-응답 메서드를 사용과 혼합 하 여 마 취를 유지 합니다.</li>
		<li>마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈에 연 고를 적용 합니다. Regulae 온도 기준으로 항문 프로브 패드를가 열 하는 설치류에 의해 체온.</li>
	</ol></li>
	<li>Endotracheal 삽 관 법
	<ol>
<li>유도 실에서 쥐를 놓습니다. O2 와 N2o.의 4 %isoflurane 및과 혼합물으로 쥐를 anesthetize</li>
		<li>유도 실에서 쥐를 제거 합니다. 장소에 있는 마 취 동물 마 취 마스크 쪽으로 쥐의 얼굴로 부정사 위치.</li>
		<li>왼쪽 또는 오른쪽 왼쪽 엄지와 검지 손가락으로 동물의 혀는 부드럽게 이동합니다.</li>
		<li>14 게이지 유연 정 맥 카 테 터 (49 m m 긴) 17 게이지 무딘 팁 pipetting 바늘 (93 m m-긴 바늘의 팁에서 10도 각도)를 통해 활강. 기도에 17 게이지 무딘 팁 pipetting 바늘을 삽입 합니다.</li>
		<li>기관에서 17 게이지 pipetting 바늘에 밖으로 부드럽게 당겨. 호흡기에 14 게이지 카 테 터 허브를 연결 합니다. 0.67 mL/100 g을 60 호흡/분의 호흡 속도 환기 선 볼륨을 조정 합니다.</li>
		<li>온도 기준으로 항문 프로브 패드를가 열 하는 설치류에 의해 전체 절차 동안 37 ° C에서 머리와 몸 온도 유지 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>대 퇴 동맥 및 정 맥 도관 법
	<ol>
<li>사 타 구니 지역 (양쪽)에 머리를 면도 하 고 수술에 대 한 표면 피부에 betadine를 적용.</li>
		<li>부정사 위치에 쥐를 배치. 수술가 위로 사 타 구니 지역에서 절 개 (10 m m)를 확인 합니다.</li>
		<li>사 타 구니 인 대 노출 때까지 결합 조직 무딘 팁 겸 구분 합니다. 사 타 구니 인 대를 파악 하는 hemostat를 사용 합니다. 대 퇴 동맥 및 정 맥 인 대 사 타 구니 아래 있습니다.</li>
		<li>무딘 팁 집게를 사용 하 여 대 퇴 동맥 및 정 맥 노출까지 결합 조직 분리.</li>
		<li>부드럽게 좋은 팁 겸 통해 대 퇴 동맥을 따라 실행 되는 대 퇴 신경을 분리 합니다. 신중 하 게 대 퇴 동맥을 분리 하 고 좋은 팁 겸 통해 단위로 정 맥.</li>
		<li>좋은 팁 집게를 사용 하 여 대 퇴 동맥 정 맥에서 분리.</li>
		<li>5-0 비단 봉합 (다리와는 몸으로 다른 하나) 정 맥에서의 2 조각을 놓으십시오.</li>
		<li>시체 근처에 느슨한 매듭을 묶어. hemostat를 사용 하 여 개최 하 고 신체의 반대편 쪽으로 최대한 봉합을 당겨.</li>
		<li>다리 근처에 느슨한 매듭을 묶어. 보유 하 고 정 맥 피를 채울 수 있도록 hemostat 통해 다리 쪽으로 봉합을 당겨.</li>
		<li>마이크로 해 부가 위 (45 ° 각도)에 의해 정 맥 (약 0.1 m m)에 작은 절 개를 확인 합니다. 멸 균된 거 즈와 어떤 피를 담근 다.</li>
		<li>PE-50 카 테 터를 무딘 팁 바늘 주사기 (20 U/mL 헤 파 린과 염 분 가득한)를 연결 합니다. 20 U/mL 헤 파 린과 염 분에 PE 50 테를 채우십시오. 포인트를 만들거나 날카로운 끝을 45 ° 각도로 해 부가 위 PE 50 테를 잘라. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 부드럽게 대 퇴 정 맥에 PE 50 카 테 터를 삽입 합니다.</li>
		<li>카 테 터 삽입 완전히 후 천천히 아무 누출을 덤플링을/염 분의 0.1 mL을 관리할 수 있습니다. 타이 PE 50 카 테 터를 안정 회사 봉합 매듭 (단일-매듭). 다양 한 약물의 지속적인 정 맥 (IV) 주입을 위해 PE 50 카 테 테 르를 유지 합니다.</li>
		<li>1 mL 주사기는 23 연결 사용 절차에 걸쳐 쥐를 무력화에 대 퇴 정 맥을 통해 Luer 스텁 어댑터 vecuronium 브 로마 이드 (0.67 밀리 그램/kg, 모든 10 분 관리) 관리를 게이지.</li>
		<li>5-0 비단 봉합 (다리와는 몸으로 다른 하나) 동맥에서의 2 조각을 놓으십시오.</li>
		<li>다리 근처에 느슨한 매듭을 묶어. hemostat를 사용 하 여 개최 하 고 다리 쪽으로 최대한 봉합을 당겨.</li>
		<li>시체 근처에 느슨한 매듭을 묶어. 누른 키를 누른 채 당겨 동맥 피를 채울 수 있도록 hemostat 통해 몸으로 봉합 합니다.</li>
		<li>마이크로 해 부가 위 (45 ° 각도)에 의해 동맥 (약 0.1 m m)에 작은 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>PE-50 카 테 터를 무딘 팁 바늘 주사기 (20 U/mL 헤 파 린과 염 분 가득한)를 연결 합니다. 20 U/mL 헤 파 린과 염 분에 PE 50 테를 채우십시오. 만들 포인트 또는 날카로운 끝을 45도 각도로 해 부가 위 PE 50 테를 잘라. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 부드럽게 대 퇴 동맥에 PE 50 카 테 터를 삽입 합니다.</li>
		<li>카 테 터 삽입 완전히 후 천천히 다시 그 카 테 터는 작동 되도록 주사기에 그립니다. 타이 PE 50 카 테 터를 안정 회사 봉합 매듭 (단일-매듭). 동맥 압력 및 혈액 가스의 연속 녹음에 대 한 PE 50 카 테 테 르를 유지 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>Asphyxial 심장 마비 (ACA) 절차
	<ol>
<li>뇌졸중 볼륨, O2 또는 N2O 레벨을 변조 하 여 필요에 따라 생리 적 매개 변수 (예: 포2, pCO2, 혈압, 및 pH 값)을 조정 합니다. 정상적인 생리 적 범위의 이러한 매개 변수를 사용 하 여: 포2: 100 mmHg, pCO2: 35-40 mmHg, 혈압: 100 mmHg, 그리고 pH: 7.4.</li>
		<li>Vecuronium 브 로마 이드 (0.67 밀리 그램/kg, I.V.) 대 퇴 정 맥을 통해 관리 하 고 2 분 기다리는 23 게이지 Luer 스텁 어댑터와 연결 된 1 mL 주사기 혈압에 있는지 확인 하는 사용 하거나 약 100 mmHg ACA를 수행 하기 전에.</li>
		<li>호흡기에서 endotracheal 튜브 (카 테 터 허브 14 게이지)를 분리 하 여 가사 (6 분)를 유도. 더 완전 한 가사를 되도록 1 mL 주사기에 의해 endotracheal 튜브를 차단 합니다. 참고: 6 민 환기가 시간 호흡 단절 및 소생의 시작 사이의 기간으로 정의 됩니다. 완전 한 심장 마비는 10 mmHg 보다 낮은 평균 동맥 압력으로 정의 된다.</li>
		<li>면 무 호흡 증의 마지막 분 동안 80 호흡/분, 호흡의 호흡 속도 조정 하 고 0% N2오 2 L/분 O2 증가 이 작업은 모든 나머지 isoflurane 또는 N2O 호흡기에 남아 날 려.</li>
		<li>가사, 다음 분 endotracheal 튜브에서 1 mL 주사기를 제거 합니다. 호흡기에 endotracheal 튜브를 다시 연결 합니다.</li>
		<li>1 mL 주사기는 23 연결 사용 게이지 Luer 스텁 어댑터에 피 네 프 린 (0.005 mg/kg, I.V.) 대 퇴 정 맥을 통해 관리 하 고, 인덱스, 엄지와 중간 손가락 x 빛 원형 운동에 있는 동물의 가슴에 의해 수동 가슴 압축을 관리 하 고 z 축 (200/분) 자연 순환 (평균 동맥 압력 ≥ 50 mmHg)33,,3435의 반환까지.</li>
		<li>또 다른 1 mL 주사기는 23 연결 사용 게이지 Luer 스텁 어댑터 자연 순환에 반환 후 즉시 대 퇴 정 맥을 통해 나트륨 중 탄산염 (1 meq/kg, I.V.) 관리를 (50 mmHg 이상)33,34, 호흡 증 완화에 35 .</li>
		<li>측정 혈액의 산-염기 상태 (pH ACA 주위 7.35 7.40 있어야 후)을 결정 하는 소생 후 10 분을 다시 가스</li>
		<li>hemostat를 사용 하 여 대 퇴 동맥과 정 맥을 클램프. 천천히 그리고 부드럽게 동맥 및 정 맥 카 테 터 무딘 팁 집게를 사용 하 여 제거 합니다. 대 퇴 동맥/정 맥 출혈을 방지 하기 위해 5-0 비단 봉합 사로 선 3-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 외과 사이트 overlying 피부를 닫습니다. 상처 재개의 가능성을 최소화 하기 위해 중단된 suturing 기술을 사용 합니다.</li>
		<li>쥐 통풍 자체 (보통 30 분 소생술 후 60 분) 때까지 기다립니다, 그리고 통풍 기에서 쥐를 분리 하 고 부드럽게 endotracheal 튜브를 제거.</li>
		<li>장소 (27 ° C, 50% 습도) 아기가 인큐베이터에 쥐 하룻밤. (물에서 그들을 몸을 담글 하 여 만든) 부드럽게 음식을 놓고 밤새 아기 인큐베이터에 물.</li>
		<li>개별 케이지를 쥐를 전송 하 고 일반 차 우와 물 동물 시설에 쥐를 반환 합니다. T-maze 테스트 ACA 후 3 일을 시작합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3입니다. T-maze
<ol><li>
동물 준비
	<ol>
<li>가짜 (ACA), 수술 전 하루 5 분 동안 각 쥐를 처리 합니다. 결코 상승 쥐가 그들의 새 장 (250 m m x 200 m m, 플라스틱 투명 한 케이지 x 480)에서 때 처리 (그림 2).</li>
		<li>쥐를 처리 후 부드럽게 쥐 여 선택 한 손으로 다른 손을 지원으로 그것의 꼬리는 ' 다리. 그들은 새 장 (100 m m 높이)를 5 번 손에서 점프 하자. 그들은 음식 또는 싸움에 대 한 지배 하지 것입니다 그래서 개인 연습장으로 각 쥐를 구분 합니다.</li>
		<li>3 일 가짜 또는 ACA 수술 (그림 2), 후 첫 번째 실행의 시작 전에 조용 하 고 어두운 방으로 케이지로 쥐를 전송 합니다. 만 낮은 전력 책상 램프 켜고 최소 조도 유지 하기 위해 테스트 룸의 모서리에 놓습니다. 10 분 동안 어둠에 적응 하는 쥐를 수 있습니다.</li>
		<li>쥐 성능에 일주 변화의 어떤 효과 피하기 위해 오후에 모든 실험을 수행 합니다. 연산자는 쥐 받은 가짜 또는 ACA 수술에 조언을 하지 않습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
자발적인 교체
	<ol>
<li>미로의 전체 바닥을 커버 (~ 10 밀리미터 두꺼운) 침구의 얇은 층을 확산. 다음 장소 각의 시작 지점입니다 시작 팔 ("T"의 하단)에 쥐를 실행 하도록 쥐를 오른쪽 또는 왼쪽 목표 팔 탐험 3 분.</li>
		<li>쥐 (쥐의 모든 4 개의 발 목표 팔 입력) 특정 목표 팔을 저지른, 일단 시작 팔과 반대 목표 팔 쥐 반대 목표 팔을 입력 하지 못하도록 하려면 (그림 1) 사이 "T" 연결을 차단 합니다. 30 초 동안 미로에서 쥐를 두고 쥐를 선택 하 고 최소한의 시간 (~ 30 초)에 대 한 그것의 감 금에 다시 배치. "T" 연결 제거는 T-maze에서 (125 mm X 230 X 65 mm 3D 프린터에 의해)를 차단.</li>
		<li>시작 팔에 쥐를 놓고 3.2.2 반복 합니다. 교체로 정의 됩니다: 쥐에 비해36실행 이전 반대 팔을 입력 하면. 다음과 같이 하루 4 실행을 수행 하는 쥐가 있다: 1세인트 실행 2노스다코타 실행 10 분 휴식 3rd 실행 4번째 실행</li>
		<li>10 분 휴식 기간 동안과 향기 바이어스를 제거 하기 위해 동물 사이 침구 변경. 75% 에탄올 증류수 실험 매일의 끝에 뒤에 T-maze를 청소.</li>
		<li>3.2.1 단계를 반복 합니다. -3.2.4. 2 개의 더 일 (총에서 12 실행) 그림2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
교체 속도 사이드 기본 설정 속도 계산
	<ol>
<li>계산 % 교체 및 % 측면 기본 설정, 어디 L: 쥐 선택 왼쪽된 팔 R: 쥐 선택 오른쪽 팔 선택 수정: 실행 2nd (각 세트 포함 두 실행) 주어진된 세트에서 1세인트 와 다르다 잘못 된 선택: 쥐 같은 팔 비슷합니다 이전 실행 선택 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq1.jpg"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56694/56694eq2.jpg"> 예: 주 1: L L / L L 주 2: L L / L R 제 3 일: R L / L L 교체: 2 (올바른 선택) /6 (총 세트 수행) * 100 = 33.33% 사이드 특혜: 10 (L, 선호 쪽) /12 (총 실행 수행) * 100 = 83.33%</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 치료:
	<ol>
<li>주고 수술 후 2 일에 대 한 모든 12 h buprenorphine (0.01 mg/kg IP) 쥐. 심장 마비 후 최대 1 시간에 대 한 쥐를 관찰 합니다.</li>
		<li>Sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 환기와 난방 패드에 쥐를 연결 합니다. 수술 후 동물 들의 체온을 유지 하기 위해 아기 인큐베이터 (27 ° C, 50% 습도에서 설정)에 쥐를 놓습니다.</li>
		<li>수술 후 첫 24 시간에 대 한 동물을 부드럽게 차 (물에 몸을 담글 하 여 만든) 제공 합니다. 쥐 식 수 없었다면, bacteriostatic 염 분 관리 (100 mL/kg/일, I.P.) 동물 복구 고 식 수 자유롭게 될 때까지.</li>
		<li>모든 상처에 통증 (bacitracin 및 lidocaine 연 고) 쥐 국 소 항생제를 줄. 쥐가 다시 이동 동물 시설 후 그들은 완벽 하 게 복구 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
안락사 메서드
	<ol>
<li>5 %isoflurane 및 100% N2O 실험의 끝에 동물을 안락사를 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

집사와 롤 린스의 프로토콜31에 비해 현재 연구에서 수정 되었다. 3D 프린터는 T-maze 구축에 사용 되었다. 3D 인쇄 상용화 T-maze 저렴 하 고 비용 효율적인 대안을 제공합니다. 테스트 기간 동안 쥐 불안을 줄이기 위해, T-maze는 최소 조명 어두운 방에서 수행 되었다. 일단 쥐 목표 무기 중 하나를 입력, 우리는 부드럽게 반대 팔을 차단. 이 단두대 문을 낮추고 있는 동안 쥐의 꼬리에 가능한 손상을 뿐만 아니라 테스트, 가능한 스트레스를 피 한다. 불필요 한 스트레스 후속 실행에 쥐의 성능을 억제 됩니다. 따라서, 우리 모든 연 삭 소음 테스트 동안 플라스틱 단두대 문을 슬라이딩에서 현재 연구에 게이트 "T" 접합 블록 활용. 이 단계는 T-maze 실험 기간 동안 크게 쥐 불안을 줄일 수 있습니다.
습관 들 임은 이후 불안 쥐가 미로에 실행 하도록 동기 부여 성공적인 T-maze 연구에 대 한 중요 한 단계 이다. 따...

미국 심장 협회 (2017), 심장 마비 (CA)-유도 사망률 4 분 마다 발생 합니다 및 미국1에 있는 년 당 이상의 400000 사람들에 영향을 줍니다. 그것은 잘 문서화 된 CA 부족 한 혈액 관류2,,34결과로 신경 뇌 손상 발생할 수 있습니다. 해 마5,6,7, 학습 및 메모리8,9, 중요 한 신경에 영향을 미치는 허 혈-민감한 CA1 지역에서 캘리포니아 유도 뇌 손상 발생 10,,1112. 또한, 모 수석 등뼈 밀도, 해 마 (즉 CA1 신경), 허 혈 성 조건에서의 손실 공간 메모리 손상13,,1415에 중요 한 역할을 하고있다. CA 후 이러한 병 적인 변화, 행동 장애 등: 불안, 우울증, 외상 후 스트레스 장애, 및 기억 상실 되어 있습니다. 향상 된 CA 생존 율 연관 의료 기술 (즉, 효율적인 외래 서비스) 발전 되어, 대부분 (저체온증)를 제외 하 고 신경 치료의 CA16 후 기능적인 결과 개선 하기 위해 실패 ,17. 일반적으로 CA 생존자는 가난한 삶의 질, 있고16지출 증분 의료 부담.
행동 검사를 통해 뇌 허 혈에 대 한 인지 상태 평가 두 약물 효능을 확인 하 고 궁극적으로 성공적인 임상 시험을 개발 하는 것이 중요입니다. 1940 년, 에드워드 썬 마 기반 공간 메모리18공부 첫 동작 시험 설계. 그 후, 다른 미로 (즉 모리스 물 미로, 방사형 미로, T-또는 Y-미로, 그리고 반 즈 미로) hippocampal 기반 공간 학습 및 메모리 쥐19,20,21,22에에서 개발 되었다 ,23. 모리스 물 미로 공간 학습 검사는 더 널리 행동 테스트 중 이며 쥐에 메모리 모델24. 그러나, 모리스 물 미로 쥐를 수영 하 고 전체 모터 기능과 제어를 발휘 해야 합니다. Asphyxial 심장 마비 (ACA, CA의 쥐 모델) 모델과 같은 허 혈 실험, 대 퇴 동맥/정 맥 cannulation 중요 한 혈압, 혈액 가스 및 다양 한 약물의 도입 가져오는 데 필요 합니다. 대 퇴 동맥/정 맥 cannulation 다리 이동성 렌더링 제대로 수영 하는 쥐의 기능을 억제 하실 수 있습니다, 이후 모리스 물 미로 ACA에서 인지 장애 테스트에 가장 적합 한 않을 수 있습니다.
반 즈 미로 공간 학습 및 설치류 모델에서 메모리 검사를 다른 널리 사용 되 행동 테스트입니다. 반 즈 미로 전체 모터 기능과 제어의 분 발을 요구 하지 않는다 따라서 모리스 물 미로 보다 스트레스를 덜 하 고. 과거에는, 우리 반 즈 미로 기능 학습/메모리 차이 사이 발생을 사용 하 여 실험을 수행 제어 또는 ACA 유발 쥐 대 가짜. 데이터 동안 얻은 반 즈 미로 해상도 반 즈 미로 널리 참조 (장기) 메모리25,26을 측정 하는데 사용 되는 사실 때문에 적당 한 ACA에 약한 다음 인지 장애 테스트를 하지 않은 대 한, ACA 유도 neurocognitive 적자 더 밀접 하 게 일 (단기) 메모리27,,2829,30 반 즈 미로 덜 우리의 ACA에 메모리 기능을 평가 하기 위한 실용적 제안 관련 모델입니다.
우리는 따라서 ACA 후 (단기) 메모리 작업 평가를 자발적 교체 테스트를 사용 하 여 수정 된 T-maze를 개발 했다. 수정 된 T-maze 자발적인 교체 테스트의 주요 장점은 단순 하 고 행동 하는 다른 검사에 비해 쥐에 최소한의 스트레스 수정된 T-maze로 무거운 잘 계산으로 이전 동물 훈련을 요구 하지 않는다는 사실 때문 분석 또는 모리스 물 미로 반 즈 미로 의해 필요에 따라 하위 루틴 (예: 쥐의 비디오 영상). 여기 우리가 표시 수정된 T-maze 자발적인 교체 테스트는 간단 하 고 아직 매우 효율적인 행동 평가 패러다임 충분 한 해상도를 정확 하 게 감지 하 고 단기 기억 상실을 일으키는 원인이 되는 질병에서 hippocampal 기능 평가 제공할 수 있는 (즉, ACA)입니다.

<table><tbody><tr><td>3D 프린터</td><td>MakerBot</td><td>Replicator</td><td>5 세대</td></tr><tr><td>3D 프린터 필라멘트</td><td>해치 박스</td><td></td><td>PLA, 1.75mm 필라멘트 직경</td></tr><tr><td>200 증명 순수 에탄올</td><td>Koptec V1005SG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sani-Chips</td><td>PJ Murphy-Forest Products</td><td></td><td>크기 : 8-20 mesh; 2.2 입방 피트 / 패키지; 오토 클레이브 백</td></tr><tr><td>Rat</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Sprague-Dawley</td><td></td></tr><tr><td>Vecuronium bromide</td><td>Sun Pharmaceutical</td><td>47335-931-40</td><td>10 mg</td></tr><tr><td>에피네프린</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>42023-103-01</td><td>아드레날린 염화물 용액 1 mg/mL, 1:1000</td></tr><tr><td>부프레노르핀 염산염 주사</td><td>Pfizer</td><td>00409-2012-32</td><td>0.3mg/mL</td></tr><tr><td>SketchUp</td><td>Trimble Inc.</td><td></td><td>3D 모델링 소프트웨어</td></tr><tr><td>VentElite Small Animal Ventilator</td><td>Harvard Apparatus</td><td>55-7040</td><td>쥐에서 기니피그까지 다양한 크기의 동물 (10g에서 1kg까지)</td></tr><tr><td>PowerLab 8/35</td><td>Adinstruments</td><td>PL3508</td><td>8 아날로그 입력 채널 &ndash; 그 중 4개는 차동 모드에서 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>바이오 앰프</td><td>Adinstruments</td><td>FE132</td><td>Bio Amp는 ECG, EMG 및 EEG 기록과 같은 다양한 생물학적 신호의 측정에 최적화된 갈바닉 절연 고성능 차동 바이오 증폭기입니다.</td></tr><tr><td>쿼드 브리지 앰프</td><td></td><td>Adinstruments FE224</td><td>PowerLab을 대부분의 DC 브리지 트랜스듀서에 연결할 수 있도록 설계된 4채널 비절연 브리지 증폭기입니다.</td></tr><tr><td>LabChart 8</td><td>Adinstruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ABL80 FLEX CO-OX 혈액 가스 분석기</td><td>복사계</td><td></td><td>pH / p CO2 / p O2</td></tr><tr><td>SURFLO 테플론 I.V. 카테터</td><td>Terumo</td><td>sc-361556</td><td>유연한 얇은 벽 카테터(49mm 길이)</td></tr><tr><td>피펫/주입 바늘</td><td>Hamilton</td><td>7748-03</td><td>만 사용17 게이지; 길이 93mm; 10도 각도</td></tr><tr><td>Classic T3 기화기</td><td>SurgiVet</td><td>VCT302</td><td>Classic T3 Isoflurane 깔때기 채우기</td></tr><tr><td>ENVIRO-PURE 숯 캐니스터</td><td>SurgiVet</td><td>32373B10</td><td>폐 마취 가스</td></tr><tr><td>O2 단일 유량계</td>를 흡수하도록 설계됨 <td>SurgiVet</td><td>32375B1</td><td>0-1000 mL</td></tr><tr><td>N2O 유량계</td><td>VetEquip</td><td>401721</td><td>0-4LPM</td></tr><tr><td>Clay Adams Intramedic Luer-Stub 어댑터 (멸균)</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>427565 23 게이지</td></tr><tr><td>마이크로 펜치</td><td>블랙 및 블랙 수술</td>용 <td>B3FRC-18 RM-8</td><td>7 1/4" (18 cm), 8mm RH, 카운터웨이트 w/ 가이드 핀 2mm, 플랫폼 6 x .3 mm, 곡선.</td></tr><tr><td>Halstead 모기 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-7111</td><td>곡선형; 5" 길이, 1.3mm 팁 직경, 2.1mm 턱 너비</td></tr><tr><td>Mixter Forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-7291</td><td>5.25" 곡선형 매우 섬세한, 1.1mm 팁</td></tr><tr><td>Castroviejo Micro 해부 스프링 가위</td><td>Roboz</td><td>RS-5650</td><td>직선, 날카로운 점; 9mm 절단 가장자리; 0.15mm 팁 너비; 3 1/2" 전체 길이</td></tr><tr><td>Mayo-Stille 가위</td><td>Roboz</td><td>RS-6891</td><td>5.5" 라운드 곡선</td></tr><tr><td>Dumont #5 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-5058</td><td>45도 Dumoxel 팁 크기 .10 x .06 mm</td></tr><tr><td>Olsen-Hegar 조합 가위 및 바늘 홀더</td><td>Roboz</td><td>RS-7884</td><td>크로스 톱니 팁; 5.5" 길이</td></tr><tr><td>Moloney 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-8254</td><td>톱니; 약간의 곡선; 4.5" 길이</td></tr></tbody></table>

심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 t-maze를 활용 하 여

Utilizing the Modified T-Maze to Assess Functional Memory Outcomes After Cardiac Arrest

배경: 글로벌 대뇌 국 소 빈 혈 (즉, 심장 마비) 모델에 적당 한 인지 장애에 약한 평가 어려울 수 있습니다 불 쌍 한 운동으로 인해 수술 후. 예를 들어 쥐가 수술을 받아야 하 고 모리스 물 미로에 복종 하지 수 수영, 따라서 실험을 무효화.
새로운 방법: 수정 된 행동 자발적 교체 T-maze 테스트를 설립 했습니다. 수정된 T-maze 프로토콜의 주요 장점은 충분히 강력한 국 소 빈 혈 후 기능 학습/메모리를 평가 하는 그것의 상대적으로 간단한 디자인. 또한, 데이터 분석은 단순 하 고 간단. 우리는 쥐의 학습/메모리 적자 (6 분) asphyxial 심장 마비 (ACA) 중간에 가벼운의 유무에서 결정 하는 T-maze를 사용 합니다. 쥐 탐험을 위한 자연적인 경향이 있고 반면 hippocampal lesioned 쥐 hippocampal 관련 공개 감소 자발적인 교체 비율에 사이드-기본 설정 결과 채택 하는 경향이, T-maze에서 다른 무기를 모색할 것입니다. 기능 학습/메모리 ACA의 유무입니다.
결과: ACA 그룹 높은 쪽 기본 비율 및 제어에 비해 낮은 교대에 있다.
기존 방법을 가진 비교:는 모리스 물, 반 즈 미로 학습/메모리 기능을 평가 하기 위한 더 저명한 있습니다. 그러나, 모리스 물 미로 다른 미로 보다 더 스트레스. 반 즈 미로 널리 ACA 유도 neurocognitive 적자는 더 밀접 한 관련이 (단기) 메모리 작업 하는 동안 참조 (장기) 메모리를 측정 하는 데 사용 됩니다.
결론: 우리는 우리의 글로벌 뇌 허 혈 모델 (ACA)에서 일 하는 (단기) 메모리는 T-maze 통해 윤곽을 그리 다 하는 간단 하면서도 효과적인 전략을 개발 했습니다.

ACA (글로벌 대뇌 국 소 빈 혈)은 주로 (단기) 메모리 적자28,29일 발생 합니다. ACA 후 학습 및 메모리의 기능을 평가, 우리 사용 수정된 자발적 교체 테스트 (단기) 메모리30일. 자발적인 교체 테스트에서 결과 ACA 그룹 (26.19 ± 4.96%)에서 3 일에서 교대 율은 컨트롤 그룹 (62.96 ± 6.07%)에 비해 크게 낮은 것이 좋습니다. (* p0.05) ACA에 쥐 컨트롤에 비해 측면 바이어스 개발 사실 35 (82.14 ± 4.57%, 62.89 ± 2.86% 대 * p0.05) (그림 3a 와 3b)35<...

이 프로토콜 기능 학습/메모리 환기가 심장 마비 유발 뇌 허 혈에 평가 하는 수정 된 T-maze의 사용을 설명 합니다.

심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 T-Maze를 활용 하 여

Background: Evaluating mild to moderate cognitive impairment in a global cerebral ischemia (i.e. cardiac arrest) model can be difficult due to poor ...

이 변형된 T-미로의 전반적인 목표는 심정지로 인한 뇌허혈 후 기능적 학습과 기억을 평가하는 것입니다. 이렇게 변형된 팀 동료는 심장 마비와 같은 단기 기억력 결핍을 유발하는 질병에서 해마 기능에 대한 답변을 제공하는 데 도움이 될 수 있습니다. 수정된 T-미로의 가장 큰 장점은 디자인이 비교적 단순하다는 것입니다.이는 허혈 후 기능적 학습 기억을 측정할 수 있을 만큼 강력합니다. 또한 데이터 분석은 간단하고 간단합니다. 질식성 심정지는 주로 단기 기억력 결핍을 초래하기 때문에 변형된 T-미로는 단기 기억 결핍을 유발하는 다른 중추 신경계 질환에도 적용될 수 있습니다.알츠하이머병, 파킨슨병, 일과성 허혈성 발작 등이 있습니다. 대퇴골 및 동맥 및 정맥 카테터 삽입 후 뇌졸중 용적, 산소 또는 아산화질소 수치를 조절하여 필요에 따라 생리학적 매개변수를 조정합니다. 그런 다음 23게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 1ml 주사기를 사용하여 대퇴 정맥을 통해 베쿠로늄 브로마이드를 투여하고 2분 동안 기다립니다.혈압이 수은 100밀리미터 또는 그 안팎인지 확인하십시오. 인공호흡기에서 기관내관을 분리하여 6분 동안 무호흡을 유도합니다. 또한 1ml 주사기로 기관내관을 막아 완전한 무호흡을 보장합니다.무호흡 마지막 순간에는 인공호흡기의 호흡수를 분당 80회로 조정하고 산소를 0%의 아산화질소로 분당 2리터로 늘려 인공호흡기에 남아 있는 이소플루란 또는 아산화질소를 불어냅니다. 6분 동안 무호흡이 진행된 후 기관내관에서 1ml 주사기를 제거합니다. 기관내관을 인공호흡기에 다시 연결합니다.다음으로, 23게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 1ml 주사기를 사용하여 대퇴 정맥을 통해 에피네프린을 투여합니다. 엄지, 검지, 중지로 동물의 가슴을 X축과 Z축에서 가벼운 원을 그리며 자발적인 순환이 돌아올 때까지 수동 흉부 압박을 시행합니다. 그런 다음 23 게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 다른 1 밀리리터 주사기를 사용하여 자발적 순환으로 돌아온 직후 대퇴 정맥을 통해 중탄산 나트륨을 투여하여 호흡기 산증을 완화합니다.소생술 10분 후 혈액 가스를 다시 측정하여 산 염기 상태를 확인합니다. 지혈을 사용하여 대퇴 동맥과 정맥을 고정합니다. 뭉툭한 팁 집게를 사용하여 동맥 및 정맥 카테터를 천천히 부드럽게 제거합니다.그런 다음 출혈을 방지하기 위해 5O 실크 봉합사로 대퇴 동맥과 정맥을 접합합니다. 단속 봉합 기법을 사용하여 3O 실크 봉합사로 수술 부위 위의 피부를 봉합하여 상처가 재발할 가능성을 최소화합니다. 쥐가 스스로 숨을 쉬기 시작한 후 30-60분 후에 인공호흡기를 분리하고 기관내관을 부드럽게 제거합니다.쥐를 아기 인큐베이터에 밤새 넣으십시오. 마지막으로 쥐를 개별 케이지로 옮기고 쥐를 일반 차우와 물과 함께 동물 시설로 되돌려 보냅니다. 수술 전날에는 각 쥐를 5분 동안 다루고 다루실 때 쥐를 케이지에서 들어 올리지 마십시오.그런 다음 한 손으로는 꼬리를 잡고 다른 손으로는 다리를 받쳐 손에서 우리로 다섯 번 점프합니다. 각 쥐를 개별 우리로 분리하여 먹이를 위해 지배하거나 싸우지 않도록 합니다. 그런 다음 가짜 또는 ACA 수술 3일 후 첫 번째 실행을 시작하기 전에 케이지가 있는 쥐를 조용하고 어두운 방으로 옮깁니다.저전력 책상 램프만 켜고 최소한의 조명을 유지하기 위해 시험장 구석에 두십시오. 쥐가 10분 동안 어둠에 적응하도록 합니다. 다음으로, 미로의 바닥 전체를 덮을 침구를 얇게 깔고 쥐를 시작 팔에 놓습니다.각 쥐가 오른쪽 또는 왼쪽 골대를 탐색하도록 3분씩 시간을 줍니다. 랫트가 골 암 중 하나에 커밋한 후 쥐의 네 발이 모두 골 암에 들어갔을 때 시작 암과 상대 골 암 사이의 T 교차로를 잠궈 쥐가 상대 골 암에 들어가는 것을 방지합니다. 쥐를 30초 동안 미로에 그대로 두십시오.그런 다음 쥐를 집어 약 30초 동안 우리에 다시 넣습니다. 그런 다음 T-미로에서 T 접합 블록을 제거합니다. 쥐를 다시 시작 암에 놓고 테스트를 반복하여 자발적 교대를 확인합니다.쥐가 처음 두 번 실행 후 10분 동안 휴식을 취하면서 하루에 네 번 실행하도록 합니다. 마지막으로, 10분 휴식 시간과 동물 사이에 침구를 교체하여 냄새 편향을 제거합니다. 75% 에탄올로 T-미로를 청소한 다음 각 실험일이 끝날 때 증류수를 사용합니다.자발적 교대 테스트의 결과는 ACA 그룹에서 3일 연속의 교대율이 대조군에 비해 유의하게 낮았음을 시사합니다. 이는 ACA를 투여받은 쥐가 대조군에 비해 측면 선호도가 증가했기 때문입니다. 이 비디오를 시청한 후에는 설치류의 뇌허혈 후 단기 기억 결핍을 평가하기 위해 이 수정된 T-미로를 활용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.이 수정된 T-미로를 시도하는 동안 쥐가 목표 암 중 하나에 들어간 후 반대쪽 팔을 부드럽게 차단하는 것이 중요합니다. 또한 T-미로는 최소한의 조명으로 어두운 방에서 수행해야 하므로 쥐의 불안을 줄일 수 있습니다.

utilizing-modified-t-maze-to-assess-functional-memory-outcomes-after

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

뇌 종양의 radiotherapeutic 관리로 인한인지 장애에 부정적인 삶의 질을 영향 임상 처치하기 어려운 상태를 나타냅니다. 비판적으로 방사선 - 유발인지 감소를 ameliorating에 대한 잠재적인 개입을 평가하는 능력은 궁극적으로인지의 엄격한 양적 평가를 수행하는 기능에 따라 달라집니다.

두개골 방사선 치료에 의한인지 감소를 Quantifying

이 문서에서는 생쥐의 학습과 기억 기능을 평가하기 위해 수정된 자동화 기기를 이용한 T-미로 검사의 프로토콜을 제공합니다.

T-미로 강제 교대 및 근무와 마우스의 레퍼런스 메모리를 평가하기위한 왼쪽 오른쪽 차별 작업

팔이 여덟 개인 방사형 물 미로는 피험자가 탈출 플랫폼을 찾기 위해 미로 밖의 신호를 사용하도록 요구하고 지상 기반 방사형 팔 미로 설계에서 관찰된 한계를 해결함으로써 참조 및 작업 기억 성능을 동시에 평가하도록 설계되었습니다.

Using of a Eight-arm Radial Water Maze to assess Working and Reference Memory following Neonatal Brain Injury(신생아 뇌 손상 후 작업 및 참조 기억을 평가하기 위한 8개의 팔 방사형 물 미로 사용)

이 프로토콜의 목표는 설치류의 공간 인지를 조사하는 것입니다. double-H water maze는 새로운 테스트로, 학습, 통합 및 기억의 다양한 구성 요소와 기억 시스템의 상호 작용을 설명하는 데 특히 유용합니다.

더블 H 미로 : 설치류의 강력한 행동 학습에 대한 테스트 및 메모리

신규 모델의 병적 알츠하이머 병 (AD)과 입력 조건을 조사하기 위해, 세 가지 동작 태스크 모터 제어,인지 행동 모두를 평가하는 것이 기재되어있다. 이러한 작업은 빔 도보 작업, 실린더 작업 및 모리스 물 미로를 포함한다.

뇌졸중과 알츠하이머 병의 유전자 변형 쥐 모델에서 모터 및 해마 종속 공간 학습 및 참조 메모리 평가

여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.

방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가

외상성 뇌 손상 (TBI) 일반적으로 메모리 손상과 관련 된. 여기서는 메트릭 작업을 통해 TBI 후 공간 작업 메모리를 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 메트릭 테스트는 TBI 후 공간 작업 메모리 장애를 연구하는 유용한 도구입니다.

외상성 뇌 손상 다음 성인 쥐에서 공간 작업 메모리를 평가 하기 위한 메트릭 테스트

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

설치류에 대한 대부분의 행동 실험은 원래 쥐를 위해 고안되었습니다. 쥐와 생쥐의 행동 차이로 인해 때때로 생쥐에 대한 수정이 필요합니다. 우리는 생쥐의 공간 작업 기억을 테스트하여 작업 기억 작업 중 스트레스를 최소화하는 방법을 제시합니다.

반자동 8팔 방사형 미로에서 마우스를 위한 식욕을 유발하는 공간 작업 기억 작업, 미로에서 두려운 기억 연관성 감소

설치류의 자궁 경부 척수 손상 후 앞다리의 기능을 평가하기위한 세 가지 새로운 행동 검사 (앞다리 스텝 교대, 자세 불안정 시험, 파스타 처리 시험)에 설명되어 있습니다.

소설 작업을 사용하여 일방적 경부 SCI​​ 후 앞다리의 기능을 평가 : 사지 스텝 교대, 자세 불안정 및 파스타 처리

학습하세요 심장마비 후 뇌허혈로 인한 기능적 학습 및 기억 평가를 위한 수정된 T-미로 사용법을. 이 단순하면서도 강력한 방법은 단기 기억 결손을 측정하여 중추신경계 질환 연구에 활용됩니다.

심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 T-Maze를 활용 하 여

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