2018년 1월 5일
이 프로토콜 기능 학습/메모리 환기가 심장 마비 유발 뇌 허 혈에 평가 하는 수정 된 T-maze의 사용을 설명 합니다.
이 변형된 T-미로의 전반적인 목표는 심정지로 인한 뇌허혈 후 기능적 학습과 기억을 평가하는 것입니다. 이렇게 변형된 팀 동료는 심장 마비와 같은 단기 기억력 결핍을 유발하는 질병에서 해마 기능에 대한 답변을 제공하는 데 도움이 될 수 있습니다. 수정된 T-미로의 가장 큰 장점은 디자인이 비교적 단순하다는 것입니다.
이는 허혈 후 기능적 학습 기억을 측정할 수 있을 만큼 강력합니다. 또한 데이터 분석은 간단하고 간단합니다. 질식성 심정지는 주로 단기 기억력 결핍을 초래하기 때문에 변형된 T-미로는 단기 기억 결핍을 유발하는 다른 중추 신경계 질환에도 적용될 수 있습니다.
알츠하이머병, 파킨슨병, 일과성 허혈성 발작 등이 있습니다. 대퇴골 및 동맥 및 정맥 카테터 삽입 후 뇌졸중 용적, 산소 또는 아산화질소 수치를 조절하여 필요에 따라 생리학적 매개변수를 조정합니다. 그런 다음 23게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 1ml 주사기를 사용하여 대퇴 정맥을 통해 베쿠로늄 브로마이드를 투여하고 2분 동안 기다립니다.
혈압이 수은 100밀리미터 또는 그 안팎인지 확인하십시오. 인공호흡기에서 기관내관을 분리하여 6분 동안 무호흡을 유도합니다. 또한 1ml 주사기로 기관내관을 막아 완전한 무호흡을 보장합니다.
무호흡 마지막 순간에는 인공호흡기의 호흡수를 분당 80회로 조정하고 산소를 0%의 아산화질소로 분당 2리터로 늘려 인공호흡기에 남아 있는 이소플루란 또는 아산화질소를 불어냅니다. 6분 동안 무호흡이 진행된 후 기관내관에서 1ml 주사기를 제거합니다. 기관내관을 인공호흡기에 다시 연결합니다.
다음으로, 23게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 1ml 주사기를 사용하여 대퇴 정맥을 통해 에피네프린을 투여합니다. 엄지, 검지, 중지로 동물의 가슴을 X축과 Z축에서 가벼운 원을 그리며 자발적인 순환이 돌아올 때까지 수동 흉부 압박을 시행합니다. 그런 다음 23 게이지 루어 스터브 어댑터와 연결된 다른 1 밀리리터 주사기를 사용하여 자발적 순환으로 돌아온 직후 대퇴 정맥을 통해 중탄산 나트륨을 투여하여 호흡기 산증을 완화합니다.
소생술 10분 후 혈액 가스를 다시 측정하여 산 염기 상태를 확인합니다. 지혈을 사용하여 대퇴 동맥과 정맥을 고정합니다. 뭉툭한 팁 집게를 사용하여 동맥 및 정맥 카테터를 천천히 부드럽게 제거합니다.
그런 다음 출혈을 방지하기 위해 5O 실크 봉합사로 대퇴 동맥과 정맥을 접합합니다. 단속 봉합 기법을 사용하여 3O 실크 봉합사로 수술 부위 위의 피부를 봉합하여 상처가 재발할 가능성을 최소화합니다. 쥐가 스스로 숨을 쉬기 시작한 후 30-60분 후에 인공호흡기를 분리하고 기관내관을 부드럽게 제거합니다.
쥐를 아기 인큐베이터에 밤새 넣으십시오. 마지막으로 쥐를 개별 케이지로 옮기고 쥐를 일반 차우와 물과 함께 동물 시설로 되돌려 보냅니다. 수술 전날에는 각 쥐를 5분 동안 다루고 다루실 때 쥐를 케이지에서 들어 올리지 마십시오.
그런 다음 한 손으로는 꼬리를 잡고 다른 손으로는 다리를 받쳐 손에서 우리로 다섯 번 점프합니다. 각 쥐를 개별 우리로 분리하여 먹이를 위해 지배하거나 싸우지 않도록 합니다. 그런 다음 가짜 또는 ACA 수술 3일 후 첫 번째 실행을 시작하기 전에 케이지가 있는 쥐를 조용하고 어두운 방으로 옮깁니다.
저전력 책상 램프만 켜고 최소한의 조명을 유지하기 위해 시험장 구석에 두십시오. 쥐가 10분 동안 어둠에 적응하도록 합니다. 다음으로, 미로의 바닥 전체를 덮을 침구를 얇게 깔고 쥐를 시작 팔에 놓습니다.
각 쥐가 오른쪽 또는 왼쪽 골대를 탐색하도록 3분씩 시간을 줍니다. 랫트가 골 암 중 하나에 커밋한 후 쥐의 네 발이 모두 골 암에 들어갔을 때 시작 암과 상대 골 암 사이의 T 교차로를 잠궈 쥐가 상대 골 암에 들어가는 것을 방지합니다. 쥐를 30초 동안 미로에 그대로 두십시오.
그런 다음 쥐를 집어 약 30초 동안 우리에 다시 넣습니다. 그런 다음 T-미로에서 T 접합 블록을 제거합니다. 쥐를 다시 시작 암에 놓고 테스트를 반복하여 자발적 교대를 확인합니다.
쥐가 처음 두 번 실행 후 10분 동안 휴식을 취하면서 하루에 네 번 실행하도록 합니다. 마지막으로, 10분 휴식 시간과 동물 사이에 침구를 교체하여 냄새 편향을 제거합니다. 75% 에탄올로 T-미로를 청소한 다음 각 실험일이 끝날 때 증류수를 사용합니다.
자발적 교대 테스트의 결과는 ACA 그룹에서 3일 연속의 교대율이 대조군에 비해 유의하게 낮았음을 시사합니다. 이는 ACA를 투여받은 쥐가 대조군에 비해 측면 선호도가 증가했기 때문입니다. 이 비디오를 시청한 후에는 설치류의 뇌허혈 후 단기 기억 결핍을 평가하기 위해 이 수정된 T-미로를 활용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
이 수정된 T-미로를 시도하는 동안 쥐가 목표 암 중 하나에 들어간 후 반대쪽 팔을 부드럽게 차단하는 것이 중요합니다. 또한 T-미로는 최소한의 조명으로 어두운 방에서 수행해야 하므로 쥐의 불안을 줄일 수 있습니다.
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본 프로토콜은 심정지로 유도된 뇌허혈 이후의 기능적 학습 및 기억력을 평가하기 위해 변형된 T-미로(T-maze)를 사용하는 방법을 설명합니다. 변형된 T-미로의 설계는 단순하면서도 허혈과 관련된 기억력 결손을 측정하는 데 효과적입니다.
심정지 전임상 모델에서 단기 기억 결손을 평가하는 것은 신경 보호 치료제의 표적 검증을 뒷받침합니다. 변형된 T-미로는 해마 의존적 작업 기억을 측정할 수 있는 재현 가능하고 스트레스가 적은 방법을 제공하여, 초기 발굴 단계에서의 기전적 리스크 감소를 가능하게 합니다. 이러한 접근 방식은 허혈 후 인지 회복을 위한 화합물을 평가할 때 예측 신뢰도를 높여줍니다.
수정된 T-미로는 타겟 검증부터 리드 최적화에 이르는 발굴 연속체 내에 적합하며, 특히 허혈성 또는 신경퇴행성 적응증을 다루는 CNS 프로그램에 유용합니다.