Name: 열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: 학습하세요 쥐 하대정맥 협착술을 통한 심부정맥혈전증(DVT) 모델링 방법을. 이 기법은 혈류 장애를 모방하여 혈전 형성 메커니즘을 연구하고 치료 전략을 개발하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 영국 심장 재단 (PG/13/60/30406) 및 버밍엄의 대학에 의해 지원 되었다.

모든 동물 절차는 동물 복지의 윤리적인 검토 기관 및 영국 홈 오피스 (영국, 프로젝트 라이센스 40/3745)에 의해 승인 되었다. 마우스 C57BL/6 배경, 8-12 주 오래 된, 두 남녀의 19-25 g 몸 무게에 사용 됩니다.
1. 동물 마 취
<ol>
	<li>유도 챔버에 마우스를 놓고 5% isoflurane 100% 산소의 혼합물에 의해 마 취를 유도 합니다. 0.5 L/분의 유량 기다릴 마우스 완전히 이동 중지 될 때까지 사용 하 고 호흡의 주파수의 드문 된다.</li>
	<li>상공에서 마우스를 제거 하 고 전기 깎기로 복 부를 면도. 복에서 복 부 구멍의 오염을 피하기 위해 가능한 철저 하 게 머리를 제거 합니다.</li>
	<li>부정사 위치에 마우스를 놓고 마우스의 코 마 취 시스템에 연결 하는 콘에 배치 합니다. 2-3% (정확한 % 약간 다를 수 있습니다 동물 동물에서) isoflurane % 감소. 동물 평소 하지만 피하 헐 떡이 고 보다 낮은 되 고 그것의 호흡 속도와 자 고 있는지 확인 합니다. 경우 헐 떡이 고, 0.5 %isoflurane% 감소.
	<ol>
		<li>적절 한 anesthetization를 확인 하 고 부정적인 경우에 수술을 시작 하는 페달 반사를 확인 하십시오. 건조를 방지 하기 위해 눈에 수 의사 연 고를 적용 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>안티-살 균 솔루션 적용 (1 %Hibitane) 마우스의 복 부 고 외과 사이트 (예를 들어, 원형 패션에 밖으로 안쪽)의 잠재적인 재 오염을 제외 하는 방법에는 꽃 봉 오리는 메 마른 목화를 사용 하 여 영역에. 3 회 반복 한다.</li>
</ol>
2. 응용 IVC 협 및 마우스 복구
참고: 모든 악기 뿐만 자료 (면봉, 거 즈, 식 염 수 등)로 수술 영역을 접하는 살 균 되어야 합니다. 연산자는 수술 전에 스크럽 하 고 멸 균 장갑과 가운을 절차 중에 착용 해야 합니다. 현미경 핸들 살 균 호 일에 포장 되어야 합니다.
<ol>
	<li>수술 전에 및 전체 실험 기간 동안 마우스 방지 통증 치료를 제공 합니다. 예를 들어 buprenorphine 0.1 mg/kg 피하 30 분 전에 수술 하 고 다음 12 시간 마다 동물 안락사 될 때까지 사용 합니다. 혈전 증이 방법에서 개발로 마찬가지로 살 균 염증,는 premedication으로 항 염증 제 약물을 사용 하지 않습니다.</li>
	<li>무 균 드 레이프와 마우스를 커버 하 고 수술의 사이트 노출 드 레이프에 구멍을 만들. 가 위를 사용 하 여 복 부 중간, 흉 골에서 아래로 1.5 c m를 따라 절 개를 확인 합니다. 면봉을 사용 하 여 마우스의 왼쪽을 창 자 exteriorize 하 고 밖으로 건조 하지 않도록을 따뜻한 (37 ℃) 식 염 수에 젖은 멸 균 거 즈와 함께 그들을 커버.</li>
	<li>IVC와 함께 왼쪽된 신장 정 맥 IVC의 융합의 사이트에서 꼬리 방향으로 쪽 지점 (있을 수 있습니다 0, 1 또는 2 그들의) 확인 합니다. 7-0 불활성 Prolene 봉합으로 가능한 IVC 가까이 모든 보이는 측면 지점 선
	<ol>
		<li>하려고 하지는 집게와 측면 지점 오히려 직접 들고 한 손에 집게와 그들을 둘러싼 지방 조직의 그들을 올려 고 다른 손에 집게와 지점 아래 터널을 확인 합니다. 다시 분기를 가까이 하지 마십시오.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>집게와 주변 조직을 잡고, 당겨 최대 IVC 및 긴장 사이 IVC는 대동맥 정확 하 게 는 IVC와 왼쪽된 신장 정 맥 사이의 각도에 작은 지역에서 생산 하는 왼쪽. IVC도 2-3 mm 아래 (꼬리 방향)에서 대동맥을 분리 하는 사실상 불가능 하다는 것을 고려.</li>
	<li>에 당신의 오른손은 IVC와 대동맥 사이의 구멍 집게 팁 분기 움직임을 사용합니다. 명심에서 하십시오 더 많은 운동 했다고, 선박 손상의 더 높은 기회. 이상적으로, 3-5의 움직임의 수를 최소화 하십시오.</li>
	<li>길이 약 2 m의 7-0 불활성 Prolene 봉합의 조각을 준비. IVC 주변에서 연산자의 왼쪽에는 마우스의 복 막 구멍에 그것을 배치 합니다.</li>
	<li>당겨는 IVC와 왼쪽 다시. 팁은 IVC의 다른 쪽에 표시 오른쪽 집게 팁은 IVC와 대동맥 사이의 구멍에 삽입 합니다. (그림 3A) 구멍을 통해 봉합 및 다시 당기기를 가져가 라.</li>
	<li>임시 매듭 봉합을 하지만 그것을 닫지 마십시오. 30g 바늘 ("스페이서") 걸으로 매듭으로 구부려 놓고 지금 (그림 3B) 닫습니다.</li>
	<li>(그림 3C) 스페이서를 제거 합니다.</li>
	<li>창 자는 목화와 함께 복 막 구멍에 다시 버드와 그것에 그들을 동등 하 게 배포를 반환 합니다.</li>
	<li>연속 루프를 사용 하 여 6-0 vicryl 봉합과 복을 닫습니다. 매듭으로 처음과 마지막 루프를 닫습니다.</li>
	<li>가까운 피부 금속 물림 쇠를 사용 하 여입니다.</li>
	<li>따뜻한 (37 ° C)의 0.5 mL 마우스 주입 피하는 유기 체의 액체 균형을 복원 하려면 포도 당 염 분.</li>
	<li>따뜻한 (25 ° C) 챔버 또는 룸에는 개별으로 마우스를 배치 하 고 음식을 넣어 안에 물 젤. 마우스는 (일반적으로, 약 1 h) 완 치 될 때까지 관찰 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

여기, 혈액 흐름 왜곡, DVT에 대 한 주요 트리거 요소를 모방한 IVC 협의 프로토콜 제공 됩니다. 48 h 이내 C57BL/6 마우스의 65-100%, 2-6 h6,,823 내 쥐의 25-50%에서 혈전의 개발을 유도 하는 IVC의 협 (Brill, 게시 되지 않은 데이터, 2016). 방법의 주요 한계는 혈전 크기24 (그림 4), 단기 (6 h) 및 장기 (48 h) IVC 협 후 관찰 되는 변화. 이러한 변화에 대 한 이유 (그 같은 조건, 공백, 같은 마 취 등, 사용 하는) 무명 남아 있지만 하나 그 해부학 추측 수 있습니다 마우스 (예를 들어, 너비 IVC, 번호 및 측면 및 후면의 위치 사이 변이 지점)이이 현상을 기반이 됩니다. 혈전 크기에 변화에서 주요 결과를 혈전 증 유행 한 혈전와 쥐의 (%)를 만든다. 혈전 증 유행 우발 테이블 및 피셔의 정확한 테스트를 사용 하 여 비교할 수 있습니다. 실험 중 하나 때 예외가 podoplanin 억제 항 체의 주입 7관찰 후와 같은 혈전 증 발병 률 감소 혈전 크기.
이 방법은 정 맥 혈전 증 개시 공부 때 특히 유용 하다. 그것은 혈관 벽의 혈전 증으로 결국 이어지는 세포의 모집 등에서 초기 이벤트를 조사 하 고 있습니다. 약의 프로 또는 안티 thrombotic 효과 혈전 증 보급 되 고 기본 판독으로이 모델을 사용 하 여 평가할 수 있습니다. 48 h에 대 한 협 6 h 협 prothrombotic 표현 형 경우 사용할 수 있는 반면 안티 thrombotic 형 공개에 적용 됩니다. 혈전과 주변 IVC 벽의 조직학 분석 또한 수행할 수 있습니다.
질문 여부 측면 분기 한다 출혈 또는 특허 왼쪽 열려 남아 있습니다. 한 그룹 측 분기의 결 찰 혈전 크기를 증가 하지 않는다와 IVC 결 찰 사이트에 1.5 m m 보다 더 사이드 지점의 위치는 극적으로 혈전 개발25손상 나타났습니다. 측면 지점 폐쇄 그들에 내 피 손상을 유발 하 고 또한 수술26시간을 증가 수 있습니다. 우리의 손에서 측면 지점 폐쇄의 부족 실질적으로 혈전 증 발병 률 (최저 48 h 협; 후 10-30% 감소 가자 미, 미 출판) 따라서 우리는 모든 보이는 측면 지점 선 고.
이상적으로, 마우스 같은 배경에 하지만 서로 다른 소스에서 약간 다른 혈전 증 유행 있을 수 있습니다 littermate 컨트롤을 사용 해야 합니다. (예, 생화학) 매개 변수에 DVT 자체의 효과 공부 하는 경우 가짜 운영 하는 동물을 사용 해야 합니다. 운영 하는 가짜 쥐 같은 절차를 거쳐야 하지만 IVC 주위 합자 느슨하게 폐쇄와 협 착 증을 생산 하지 않고 거기 왼쪽.
이 프로토콜에서 가장 빈번한 실수 (중요 한 단계) 대동맥과 일반적으로 출혈 귀착되는 약간 낮은 하지만 혈관 사이의 각도로 정확 하지 IVC 분리 하는 노력 이다. 경우는 출혈, 마우스의 좋은 복구 가능성 되 고 실험을 중지 하 고 동물을 안락사 하는 것이 좋습니다. 일반적으로, 쥐 잘 복구, 안에 이동한 실질적으로 무게를 잃지 않습니다. 우리 둘 다 남성과 여성 20 g 위의 쥐를 사용 하는 것이 좋습니다 하 고 싸움 하 고 부상을 피하기 위해 실험의 끝까지 수술 후 개별 장에 동물 (특히 남성)를 유지. 그것은 남성 쥐 암컷27보다 더 큰 혈전 생성 DVT의 또 다른 (전해) 모델에 보고 되었습니다. 데이터의 분석 하지 상당한 차이 혈전 증 유행 남성 및 여성 쥐 (가자 미, 미 출판)을 공개 했다. 따라서, 연구원은 두 남녀의 쥐에 IVC 협 모델을 사용 하 여 실험을 수행 하는 것이 좋습니다.
스테이플 봉합의 몇몇 수 수 배제 하지 특히 긴 실험 (주 그리고 더 이상). 따라서, 마우스 봉합 무결성을 위해 특별히 하루에 적어도 두 번 확인 해야 하 고 케이지 침구에 혈액 자취의 외관에 특별 한 주의 주어져야 한다.
그것은, 다른 동물 모델 처럼는 IVC의 협 인간으로 번역 면에서 한계가 있다 주목 해야한다. 예를 들어 murine IVCs 필요가 없습니다 밸브, 반면 인간의 DVT 정 맥 밸브 내부 개발. 또한, 인간은 혈관에는 중요 한 메커니즘 가속 혈 되 고 근육 펌프와 수직 척추 방향이 있다. 반면, 쥐 혈액 심장에 반환을 지 원하는 근육 펌프의 척추 방향 수평 역할 있다. 이러한 한계는 인간의 질병에 마우스 데이터를 변환할 때 고려 되어야 한다.

깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 깊은 정 맥에 혈전의 개발은 일반적으로 (그러나 뿐만 아니라) 다리에. 폐 색 전 증으로 접속사에 (PE; 정 맥 혈전 색 전 증, VTE로 함께 지정) 그것은 매년 약 900000 미국에서 개발 하 고 심각한 건강 문제와 경제적인 문제1,2를 나타냅니다. PE, DVT, 합병증 발생 한 혈전 초기 위치에서 분리 되 면 호흡기 부족 및 죽음을 일으킬 수 있습니다 폐에 도달. 사망자 VTE 초과 에이즈, 유 방 암, 교통 사고, 결합 된3에서 사망 합니다.
외에 DVT를 일으키는 주요 요인 이유, 알려진 암 등 외상, 이동성 4,5의 부족 이다. 이 수술 (특히 정형 외과), 마비, 장거리 항공편 또는 다른 이유에서 발생할 수 있습니다. 혈관에 혈액의 흐름 근육 펌프에 따라 달라 집니다과 그러므로 정체 혈액에 사지 immobilization 결과 정 맥 밸브에 혈전 증에 이르게 합니다. 여기에 설명 된 방법의 목적은 이러한 혈액 흐름의 왜곡6,7을 정리 하입니다. 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)에서 부분 흐름 제한 조건 인간의 정 맥 밸브에는 혈전의 형성에서 결과 인간의 혈전6구조에 비슷한 만든 모방 합니다. 혈전의 큰 부분 빨간색 이며 적혈구, 섬유 소, 혈소판의 구성 됩니다. 혈전 작은 "흰 부분" "의 선 잔" 인간의 정 맥 혈전에 설명 된 닮는 (그림 1), 혈소판에 풍부 하 게 있다. 혈전의 두 부분 포함 또한 호 중구8, 첫 번째 셀 미래 혈전6,9의 사이트에서 모집 중입니다. 반면 흰 부분에 호 중구 그물8없는 것 빨간 부분에서 중 성구 호 중구 extracellular 함정 (그물), 추방. 마찬가지로 인간의 DVT를 마우스에 혈전 증 동반 된다 높은 플라즈마 D 이합체 수준 (그림 2). 저 분자 무게 헤 파 린 (enoxaparin), 환자에 있는 DVT 예방에 사용 되는 또한 쥐에 혈전 증을 방지 합니다. 이 방법의 중요 한 장점은 인간의 DVT10의 특징은 내 피 노출9의 부재입니다. 이 기능을 사용 하면 IVC 협 보다, 혈전 증의 예를 들어 유도 DVT의 임상으로 더 관련 모델 제 2 철 염화 물, 내 피 노출을 유도 하 고 있는 혈전 혈소판11, 의 우위 하 게 구성 하 여 12,13. IVC는에 완전 한 스테이 시스의 모델은 여러 팀14,,1516선호 합니다. 협, 잔여 흐름, 선박에서 유지 달리 스테이 시스의 응용 프로그램은 완전히 흐름 멈추고 따라서 혈전 증 사이트를 체계적으로 관리 물질의 접근을 제한 한다. 또한, 그것은 혈전 증 협 착 증 및 혈 행에 의해 유도 된 기본 메커니즘은 다른 것 같다: 협 지역의 염증의 개발에 결과 (endothelium, Weibel Palade 본문 내용의 릴리스, 면역 세포의 채용의 활성화와 혈관 벽에 혈소판) 반면에 스테이 시스가 오히려 혈전 증을 일으킬 것 "immunothrombosis"6,,917, 원인 기반, 특히 조직 요소와 다른 응고 및 fibrinolysis 관련 메커니즘18,,1920. 따라서, 협 착 증 및 스테이 시스 모델 비록 그들의 메커니즘을 확실히 겹칠 수 있습니다 정 맥 혈전 개발의 약간 다른 측면을 반영 합니다. DVT21,22 의 전해 IVC 모델 (EIM)만 부분적으로 가려지는 혈관 벽 혈전을 유도 합니다. 따라서, 혈전 성장에 다른 약물의 조직 관리의 효과 테스트 하기 위해 편리 하다. 그러나,이 모델에이 메커니즘의 병 태 생리 관련성을 적어도 명백한 만드는 전기 전류에 의해 IVC 벽 무결성 (바늘의 삽입)의 파열 및 혈전 증의 유도 가정 합니다.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 마우스</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 주령, bothe 성별</td></tr><tr><td>가위</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 겸</td>자 <td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td>스파</td><td></td><td></td></tr><tr><td>밀스왑 멸균&nbsp;</td><td>Millpledge 수의사&nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>드레이프</td><td>크루스</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>포도당 식염수-Aqupharm3</td><td>동물 관리</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>클리어 H20 하이드로겔 98% 멸균수&nbsp; </td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>국립 수의학 용품</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 기화기</td><td>일반 마취 서비스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W 흡입 증기, 액체</td><td>국립 수의학 용품</td><td></td><td></td></tr><tr><td>살균기 Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>현미경 올림푸스 SZX10</td><td>올림푸스</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 murine 모델

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 및 그것의 파괴적인 합병증, 폐 색 전 증, 높은 사망률과 심각한 건강 문제. 혈관에 혈전 형성의 메커니즘은 애매 한 남아 있다. 이동성 (예를 들어, 수술 또는 장거리 비행 후)의 부족은 DVT를 선도 하는 주요 요인 중 하나 이다. 이동성의 부족의 병 태 생리 결과 정 맥 밸브에 혈액 흐름 침체입니다. 여기, 모델은 혈전 증 운전 요인으로 이러한 흐름 소동을 설명 합니다. 이 모델에서 부분 흐름 제한 (협) 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)에서 만들어집니다. IVC 루멘 48 h에 대 한의 약 90%의 폐쇄 혈전 인간 구조적으로 유사한의 개발에 결과. 유사성은: i) 대부분의 혈전 볼륨은 빨간색, 즉, 내 피 단층 iii) 비-걸치기, iv) 높은 플라즈마 D 이합체 수준, 그리고 v) 가능성을 방지 하기 위해 적혈구와 섬유 소, 흰 부분 (잔 줄)의 ii) 존재의 구성 저 분자 무게 헤 파 린에 의해 혈전 증입니다. 혈전과 가변 크기 포함 하는 야생-타입 마우스의 일정 비율 (0-35%)는 혈전을 생성 하지 않을 수 있습니다. 시각적인 관찰 및 측정, 혈전 혈전 개발의 역학을 모니터링 수 있는 초음파 등 비-침략 적 기술에 의해 구상 될 수 있습니다. 점에서 짧은 시간 (1-6 h) intravital 현미경 직접 관찰 하는 이벤트 (예를 들면, 혈관 벽 세포의 모집)에 적용할 수 있습니다 혈전 형성을 앞. 세계의 여러 팀에서이 방법의 사용은 DVT 개시의 기본 메커니즘을 폭로 하 여 그 예방에 대 한 도움이 될 수 있는 잠재적인 대상을 식별 가능 했다.

여기에 IVC 흐름 왜곡에 의해 유도 된 DVT의 모델 설명 되어 있습니다. 유도 IVC에 협 착 증의 왜곡을 시작 및 혈액 흐름의 그리고 후에 (이 경우 48 h) 동안 침체 결과 혈전, 구조적으로 유사한 인간 DVT의 개발에 혈전 (그림 1A). 내부는 IVC 혈전의 존재는 시각적으로 쉽게 감지 (그림 1B). 모델 및 인간의 DVT 사이 중요 한 유사성은 높은 플라즈마 D 이합체 수준 (그림 2). D-이합체 섬유 소 강 직의 제품 이며 혈액의 존재는 활성 thrombotic 과정 것 나왔다.
모델은 그림 3A-C단계 제공 됩니다. IVC는 신중 하 게 노출 하 고는 IVC와 대동맥 사이의 구멍을 만든 봉합 (Prolene 7-0)는 IVC 아래 구멍을 통해 뽑아. 다음는 IVC는 출혈 봉합에 의해 스페이서 (30g 바늘, 그림 3D)에 있는 공백 제거 후. 이 절차는 약 90%에 대 한 허용 특허 나머지 10%를 떠나 IVC 루멘의 폐쇄. 그러면 결국 혈전 증으로 이어지는 혈액 흐름 침체.
그림 4 모델, 가변 혈전 크기의 주요 단점을 보여 줍니다. 이러한 혈전 동일한 실험에서 가져온 모든 동일한 근원, 나이 및 유사한 체중의 야생 타입 남성 쥐에서 수행. 비록 모든 쥐의 혈전 (혈전 증의 유 병 율 100%)을 생산, 그들의 크기는 명확 하 게 넓은 범위에서 변화 한다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
그림 1: 48 h 제한/협 후 대표적인 혈전. (A) 전형적인 혈전 후 48 h IVC 협. 참고 빨간색 (적혈구 농축)과 화이트 (혈소판 농축) 부품. (왼쪽)와 (B) IVC 또는 (오른쪽)는 혈전 없이. 스케일 바 = 2 m m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
그림 2 : IVC 협 응용 프로그램 후 D-이합체 플라즈마 레벨 상승. 마우스는 IVC 협을 받게 했다. 혈액 표시 시간 포인트에서 찍은, 3.8% 나트륨 시트르산, 플라즈마와 안정된 1:9 원심 분리 (2300 x g, 5 분)에 의해 준비 되었다 및 D 이합체 수준 제조업체의 지침에 따라 ELISA 키트에 의해 결정 되었다. 원형 지정 운영 하는 가짜 쥐, 십자가 지정 IVC 협. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
그림 3: 제한/협 쥐에 있는 DVT의 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 모델에서 흐름. 모델의 연속 단계 제공 됩니다. (A)는 IVC와 대동맥 사이의 구멍은 하 고는 봉합 주위는 IVC 통해 가져온. (B) 매듭 스페이서 (30g 바늘)에 닫힙니다. (C) 는 공백 제거: 외과 의사 보고 마우스를 닫기 전에 마지막 보기. 노란 점선은 IVC를 정합니다. 어브 왼쪽된 신장 정 맥에 대 한 의미합니다. 스케일 바 = 0.2 m m. (D) 스페이서 (30g 바늘). 스케일 바 = 2 m m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
그림 4 . 혈전 크기의 다양성 마우스는 48 h IVC 협을 받게 했다. 제시는 혈전 얻은 동일한 실험에서. 스케일 바 2. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

우리가 설명 여기에 열 등 한 베 나 정 맥 협 착 증 깊은 정 맥 혈전 증의 murine 모델. 이 모델이 혈액 흐름 제한, 인 간에 있는 정 맥 혈전 증의 주요 트리거 중 하나.

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

이 수술 절차의 전반적인 목표는 심부 정맥 혈전증을 시작하기 위해 혈류 왜곡을 모방하기 위해 하대정맥의 협착을 만드는 것입니다. 이 방법은 심부정맥 혈전증 시작 메커니즘에 대한 정맥 혈전증 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 정맥에서 혈전증이 시작되는 핵심 메커니즘인 혈류 장애를 시뮬레이션한다는 것입니다.대동맥에서 하대정맥을 분리하고 이러한 조직 사이에 구멍을 만드는 것은 말로 설명하기 어렵기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 8-12 주 된 마취 된 19-25g 마우스의 복부를 면도하고 마우스를 가열 패드에 누운 자세로 놓습니다. 멸균 면봉을 사용하여 노출된 피부를 항균 용액으로 세 번 소독합니다.발가락 꼬집음에 대한 반응이 부족하여 적절한 수준의 진정 효과를 확인하고 수술 부위에 구멍이 뚫린 멸균 드레이프로 마우스를 덮습니다. 해부 현미경으로 흉골 아래 1.5cm에서 시작하여 복부 정중선을 따라 절개하고 면봉을 사용하여 동물의 왼쪽으로 장을 외부화합니다. 섭씨 37도의 식염수에 적신 멸균 거즈로 장 조직을 덮습니다.절개 부위를 확장하기 위해 조직 견인기를 배치하고 하대정맥(IVC)과 그 옆 가지가 왼쪽 신장 정맥의 꼬리 부분을 찾습니다. 집게를 사용하여 곁가지를 둘러싼 지방 조직을 위로 당긴 다음 두 번째 집게를 사용하여 가지 아래에 터널을 뚫습니다. 그리고 7-0 불활성 프롤렌 봉합사로 모든 곁가지를 IVC에 최대한 가깝게 접합합니다.집게로 주변 조직을 잡고 IVC를 위아래로 당겨 IVC와 대동맥 사이의 작은 영역, 정확히 IVC와 왼쪽 신장 정맥 사이에 장력을 생성합니다. 대동맥과 IVC 사이에 두 번째 겸자를 삽입하고 구멍을 뚫기 위해 겸자를 3-5회 이상 열고 닫지 마십시오. IVC가 왼쪽 신장 정맥과 수렴하는 지점에 정확하게 구멍을 뚫는 것이 매우 중요합니다.왼손을 사용하여 2cm의 7-0 불활성 프롤렌 봉합사 조각을 IVC에 가까운 복막강 왼쪽에 놓고 IVC를 위아래로 다시 당깁니다. 대동맥과 IVC 사이의 구멍에 두 번째 집게를 삽입하여 팁이 IVC의 반대쪽에 나타나도록 하고 구멍을 통해 봉합사를 뒤로 당깁니다. 느슨한 임시 매듭을 만들고 고리로 구부린 30 게이지 바늘 스페이서를 매듭에 넣습니다.매듭을 조인 후 스페이서를 제거하고 면봉을 사용하여 장을 복막강으로 되돌립니다. 연속 루프를 사용하여 6-0 VICRYL 봉합사로 복막을 닫고 금속 스테이플로 피부를 닫습니다. 마우스에 섭씨 37도의 글루코살린 0.5ml를 피하주사합니다.그런 다음 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 음식과 젤 워터가 들어 있는 섭씨 25도 챔버의 개별 케이지에 마우스를 넣습니다. IVC에서 협착증이 유도되면 혈류가 뒤틀리고 정체되어 인간에서 관찰되는 심부 정맥 혈전과 구조적으로 유사하고 거시적으로 쉽게 시각화할 수 있는 혈전이 발생합니다. 또한, 이 IVC 협착증 모델의 혈장에서 피브린 분해의 산물인 상승된 D-dimer가 관찰되며, 이는 인간에서 볼 수 있는 것과 유사한 활성 혈전 과정의 존재를 나타냅니다.대부분의 실험 동물이 이 모델에서 혈전을 생성했지만 한 가지 주요 단점은 동물 간에 관찰되는 혈전 크기 내의 가변성입니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 15분 안에 완료할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 정맥 혈전증 분야의 연구자들이 마우스 모델에서 DVT의 메커니즘을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

내피 활성화 및 일부 혈액 스테이시, Virchow의 깡패의 두 가지 구성 요소로 인해 정맥 혈전 형성 유형의 하부 대정 맥 결과의 내부 표면에 내피 활성화 전해 유도.

정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 전체 스태시스 모델은 정맥 벽 조직 및 혈전의 같지는 금액을 산출. 이것은 정맥 벽과 occlusive 혈전 사이에 만성 염증으로 급성에서 진행을 평가 상호 작용을 평가하기위한 유용한 입증되었습니다.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

이 논문은 정맥 결찰을 달성하기 위해 혈관 클립을 사용하여 마우스 암 모델에서 정맥 혈전증을 평가하기 위한 최적화된 방법을 제시하는 것을 목표로 합니다. 최적화는 혈전증 관련 측정의 변동성을 최소화하고 인간 암 관련 정맥 혈전증과의 관련성을 향상시킵니다.

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

이 프로토콜은 비혈전성, 혈전성 및 혈전 후 심부 정맥에서 정맥 성형 풍선(VB) 중재를 테스트하기 위한 생존 설치류 모델을 제시합니다.

설치류 하부 정맥 Cava 정맥 성형술 풍선 모델

이 비디오에서는, 우리는 CD40 - 활성화 및 면역의 유도를 연구하는 모델 항원 제시 세포 (APC)로 사용할 수 있습니다 C57BL / 6 마​​우스 splenocytes에서 murine B 세포의 확장 프로 시저를 보여줍니다.

B 세포의 CD40 - 정품 인증 Murine 모델

손쥐 골수 이식은 인간에 이식 - 대 - 호스트 질병에 관한 면역 메커니즘을 연구 할 수있는 널리 사용되는 기술이다. T 세포 거래 패턴을 모니터링 할 수있는...

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em&gt; 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용&gt; T 셀 모니터링

알레르기 천식의 실험 마우스 모델은 질병 pathogenesis를 공부하고 새로운 치료제 개발에 새로운 가능성을 제공합니다. 이러한 모델은 잘 알레르기 면역 반응,기도 염증과 폐의 pathophysiology을 규제하는 측정 요소에 적합합니다.

알레르기 항원 유도 천식의 Murine 모델

학습하세요 쥐 하대정맥 협착술을 통한 심부정맥혈전증(DVT) 모델링 방법을. 이 기법은 혈류 장애를 모방하여 혈전 형성 메커니즘을 연구하고 치료 전략을 개발하는 데 활용됩니다.

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

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