Name: 카 테 테 르 배치 및 5/6 신 복 막 투 석의 Murine 모델에 대 한 수술 기법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: 배우세요 생쥐 복막 내 카테터 배치 및 5/6 신절제술을 통한 요독증 모델 수술 기법입니다. 이 방법은 유전자 변형 동물을 활용하여 복막 투석 관련 분자 메커니즘과 치료 전략을 연구하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

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저자 E. Ferrantelli, G. Liappas R. 산체스-디아스와 P5/6 신 프로토콜을 설정 하는 그들의 지원에 대 한 감사. 쥐 배려와 지원에 대 한 ureic 질소 평가, 및 E. Hevia F. 누 녜 스 지원에 대 한 마틴. 이 작품에서 "정부의 드 Economía y Competitividad" SAF2016-80648R 교부 금에 의해 지원 되었다 / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)에서 마누엘 로페스-카브 레 라와 PI 15/00598 Fondo Europeo 드 개발 지역 (MINECO/페더)-페더 기금, 하 Abelardo 아길레라입니다.

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 분자 생물학 센터 세 베로 오 초아 (마드리드, 스페인)의 위원회에 의해 승인 되었습니다.
참고: C57BL/6J 여성 쥐 세 12 ~ 14 주 하 고 연구의 시작에서 대략 20 g를 무게 사용 되었다. 모든 동물 표준 조건 하에서 지 내게 되었다 고 음식과 물 광고 libitum부여 했다. 건강 상태는 매일 체크 했다. 장갑, 드 레이프, 카 테 터, 봉합 바늘, 등 필요한 재료 살 균 해야 합니다.
1. 카 테 터를 삽입
참고: 경우에 신장은 제거 되지 않습니다, 그들은 남아 완전히 기능, 요 독 증, 따라서 고립에서 PDF 노출의 연구 허용의 효과 고려 하지 않습니다. 수술 복 막 구멍으로 카 테 터의 원심 극단만을 소개 하 고 그것에 대 한 액세스를 제공 하는 동물의 뒷면에 액세스 포트를 배치에 구성 되어 있습니다. 카 테 터를 배치 하는 절차는 다음과 같습니다.
<ol><li>유도 챔버에 마우스를 놓고 마 취를 사용 하 여 4 %isoflurane 및 산소 0.4 L/min의 유량과 righting 반사의 손실까지 제공 합니다.<ol>
<li>마 취 장치에 연결 된 nosecone 튜브를 통해 2% isoflurane 0.3 L/min의 흐름으로 100% 산소에서를 가진 동물을 유지 한다. 근육 톤과 자극에 응답을 평가 하 여 적절 한 anesthetization를 확인 합니다.</li>
		<li>속도 과정에서 호흡의 깊이 확인 합니다. 눈에 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 수 의사 연 고를 사용 합니다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고 맞은 측면 및 동물의 뒤를 면도. 동물의 온도 떨어지지 않을 것입니다 되도록 열 시스템과 수술 테이블에는 왼쪽된 측면에 가로 위치에 놓습니다.</li>
	<li>1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 본문의 오른쪽 측면에 피부에 무딘가 위로 작은 잘라 (0.5 c m)를 확인 하 고 분리 그것은 신중 하 게 인접 한 근육 층에서가 위의 도움으로 동물의 뒷면의 전체 지역 소개 수 나중에 잘 분리 되도록 쉽게 액세스 포트입니다. 절차를 수행 하는 데 필요한 자료를 보고 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
	<li>근육 층을 통해 직경 약 1 m m의 작은 절 개를 만들고 삽입 카 테 터와 첫 번째 플라스틱 링의 끝. 복 막 피해 최소화 됩니다.</li>
	<li>5.0 또는 6.0 비 흡수 성 봉합 사로 봉합 단단히 테, 주변 복 벽. 1 플라스틱 반지 다음 복 막 구멍, 그리고 근육과 피부 사이 다른 안에 위치 해 있습니다. 테 그로 인하여 피하 공간으로 새 어에서 액체를 방지 하기 위해 고정 됩니다.</li>
	<li>가려움 수 고 동물 수 긁어 그들의 피부를 비트는 피부에 수정 위치를 확보 하지 않고 마우스의 꼬리 쪽으로 피하 공간에 액세스 포트를 삽입 합니다.</li>
	<li>5.0 또는 6.0 비 흡수 봉합 사를 피부 상처를 닫습니다. 흡입 마 취를 제거 하 고 동물의 식을 복구할 수 있도록. 두지 마십시오 마우스 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 완전히 복구 하는 경우 마우스는 다른 동물의 회사를 반환할 수 있습니다. 참고: 실험은 수술 후 회복의 4 ~ 7 일 후 시작할 수 있습니다.</li>
	<li>수술 날에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/mL)의 3 mL에 용 해 하 여 진통을 제공 합니다.</li>
	<li>수술 후 기간 동안 아무 reddened 영역 피부, 억 센 머리카락이 나 상처에는 확인 매일, 동물의 건강 상태를 확인 합니다.</li>
	<li>동물 (그것은 마비) 없이 꼬리를 한 손으로 액세스 포트와 다른 바늘을 잡아 하 여 액체를 주사. 주입 하기 전에 1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 액세스 포트 (그림 1A)의 실리콘 심장 피어스 대신 부 위해 경사지는 특별 한 바늘 (후버 바늘)을 사용 하는 것이 흥미롭습니다. 40 일 동안 하루 두 주사 복 변경 (그림 3) 관찰에 충분 하다.</li>
	<li>실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경관 탈 구 마우스를 안락사.</li>
</ol>2. 5/6 신을 수행 하 고 카 테 터를 삽입
참고: 더 나은 PD 환자에서 상황을 닮은 그것은 잔여 신장 기능만을 허용 하는 5/6 신을 수행할 수 있습니다. 이 경우에, 혈 청 샘플 분석 요소 레벨 250 μ의 얼굴 정 맥을 통해 혈액을 추출 하 여 펑크, 치료 및 동물을 희생 하는 경우에 수술을 시작 하기 전에 적어도 하루에 취해야 한다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.
<ol><li>단계 1.1에서 isoflurane를 사용 하 여 쥐를 anesthetize.</li>
	<li>0.1 mg/kg Buprenorphine, 전날과는 수술 당일에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml에 용 해 하 여 동물의 목에 피하 주사의 진통 제공.</li>
	<li>수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고는 패스와 동물의 뒤를 면도.</li>
	<li>왼쪽, 왼쪽된 신장에 대 한 직접 액세스를 갈비뼈 가까이 피부에 약 0.5 c m의 절 개를 수행 합니다.</li>
	<li>복 막, 캡슐 및 아드레날린 선 제거에서 왼쪽된 신장 려 근육에 작은 절 개를 엽니다. 캡슐을 제거 하는 더 나은 신장 복 막 구멍 밖에 서 잡아 필요 합니다.</li>
	<li>점화 하 고는 cauterizer와 함께 신장의 극치를 잘라 (필요한 자료에 대 한 그림 1 참조).</li>
	<li>신장 복 막 구멍으로 다시 하 고 불용 성 5.0 또는 6.0 봉합으로는 근육과 피부에 상처를 봉합.</li>
	<li>후, 하루는 완전히 오른쪽 신장 제거 하 고 신장 제거로 같은 절 개를 사용 하 여 카 테 터를 삽입. 또, isoflurane와 마우스를 anesthetize 하 고 수술 직전 Buprenorphine의 0.1 mg/kg을 피하 주사. 또한 식 수 하루 전에 250 ml과는 수술 당일에이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml을 분해.</li>
	<li>약 0.5 cm의 피부에서 절 개 하 게 그리고가 위의 도움으로 액세스 포트 위치할 공간을 열고 근육에서 동물 뒤 피부를 분리.</li>
	<li>근육에 상처를 수행 (0.3-0.4에 대 한 cm)를 복 막 구멍 오른쪽 신장 데리고.</li>
	<li>캡슐과 아드레날린 선 신장에 더 나은 접근을 제거 합니다. 신장 정 맥, 동맥, 및 5.0 또는 6.0 봉합 비 흡수와 ureter ligate 고 신장을 완전히 제거 합니다.</li>
	<li>(1.5 단계) 전에 설명 근육 두 개의 플라스틱 링 사이 유지 해야 하는 카 테 터의 끝을 소개 하는 복 막 근육에 상처 봉합</li>
	<li>1.6와 1.7 단계에 설명 된 대로 피부를 봉합와 피하 공간으로 액세스 포트를 소개 합니다. 참고: 마우스 복 근육에 상처는 완전히 치유 하 고 액체를 주입 하는 동안 피하 공간으로 누설 될 것입니다 이러한 수술에서 적어도 10 일 동안 휴식 해야 한다. 1.10 단계에서 액체를 주사.</li>
	<li>실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경부 전위에 의해 동물 안락사.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

"시스템 닫기" 기술을 사용 하 여 PD 변경 분석 첫 번째 게시 된 데이터는 200929 에 수행 되었다. 이 닫기 시스템 전체 장치는 몸 안에 있는 액체 액세스 포트를 통해 바늘으로 주입 됩니다 의미 합니다. 카 테 터를 통해 유체 주입의 장기 동물 모델에서 가장 중요 한 기술 문제는 방해의 발생 이다. 가능한 옵션은 omentectomy 수행 또는 헤 파 린을 복 막 유착을 줄이기 위해 Pdf에 추가. 그럼에도 불구 하 고,는 omentum 방어 기관으로 작동 하 고 헤 파 린, 항 응 혈 약의 효과 제외 하 고 염증 세포 활동, 신생, 세포 외 매트릭스의 합성 및 세포의 확산 과정을 조절 한다. 2009 년에 게시 된 원래 장치의 디자인 나중 액세스 포트의 크기와 액체의 출구를 촉진 하기 위하여 카 테 터의 직경을 조정 이러한 문제를 극복 하기 위해 개선 되었습니다.
동물 모델 질병에 관련 된 경로에 대 한 조치의 타당성과 가능성...

신장 기능 및 신장 질환
신장은 항상성, 혈액 여과 및된 호르몬 생산에 필수적인 장기. 신부전, 요 독 증, 신장 기능 장애1으로 유지 하는 혈액에서 폐기물의 축적으로 인해 전신 증상의 그룹으로 정의 된의 후속 발병이 끌 다양 한 조건이 있다. 또한, homeostatic 기능에도 영향을 경우에 신부전, 이후 고혈압 볼륨 과부하 때문에 발생할 수 있습니다, 되는 또한 위험한 심장 마비1발생할 수 있습니다. 때 신장 기능 기능 10%-15%, 환자 다음 치료 옵션 중 하나를 겪어야 한다: 혈액 투 석, 복 막 투 석 (PD) 또는 신장 이식.
PD 환자 치료 또는 실질적으로 어디서 나 그들의 홈의 안락에서 따라서 자주 병원에 대 한 필요성을 피하고 방문 및 체류를 계속 수 있도록 재미 있는 옵션입니다. 경찰 기술 복 막 구멍으로 작은 독성 분자와 삼 투 액 (복 막 투 석 액, PDF)의 주입을 통해 몸2 에 의해 생성 된 과잉의 물을 제거 합니다. 이 점 복 모 세관 및 PDF, 외 (UF)로 알려진 프로세스 사이의 물과 용액의 교환에 필요한 삼 투 그라데이션을 생성 합니다.
복 막 투 석에 의해 유도 된 복 막 부상
복 막 구멍 막 (오후) 또한 몇 혈관, 섬유 아 세포, 대 식 세포와 다른 세포 인구 주택 행렬에 mesothelial 세포의 단층으로 구성 된 적용 됩니다. 불행 하 게도, 복 막 막 항상 겪고 있다 몇 가지 변경을 apoptosis와 mesothelial 세포의 손실, mesothelial (MMT) 및 내 피 (끝-몬태나) 세포, 염증 세포의 채용의 엽 과도 같은 PD 치료 동안 및 fibrocytes, 혈관 변경, 신생, lymphangiogenesis 및 섬유 증3,,45,6,7,8,9. 이러한 변경 UF 용량 오류10, 치료, 환자 (혈액 투 석 또는 신장 이식)을 대체 치료를 받아야 합니다 요구의 계속 하는 걸로 개발에 대 한 책임은 . 따라서, 이러한 환자에 대 한 지연 또는 변경이 복 막의 개발을 제어 필수적 이다.
그것은 혼자 요 독 증 염증11을 발생할 수 있습니다 하지만 가장 중요 한 지역 계수는 PDF bioincompatibility 추측 하고있다. 대부분 Pdf 염증을 일으키는 삼투성 대리인으로 포도 당을 사용 합니다. PDF 저장 시간 및 살 균, 포도 당 저하의 과정을 겪고 있다 고이 반응에서 새로운 제품 표시, 생성 더 많은 염증, MMT와 apoptosis12,13. 또한, 주입 방법 때문에 기계적 손상의 가능성도 있다. 행동을 지속적으로, 이러한 모든 요소는 지속적이 고 재발 성 염증 성 상태 만성 염증, 막 악화 하 고, 결정적으로, UF 실패 드라이브를 선도 생성할 수 있습니다. 이 피해를 감소 하 또는 피할 수 어떻게 아직도 연구의 문제 이다.
변의 개발 분석: 인간의 샘플 동물 모델에서
인간의 생체 검사 작업은 조직 샘플을 얻기에 있는 어려움 때문에 제한 요소 이다. 이 샘플만 카 테 터 고장 또는 이식, PD 치료의 년 후에 일반적으로 수행 하는 수술에서 얻어질 수 있다. 이 방법은 복 막, PDF에 노출에 의해 고통을 병 적인 변화의 분석에 유용 하지만 프로세스의 개발을 연구 하는 데 충분 하지 않습니다. 또 다른 가능성은 세포 투 석 유출에서 뽑아 분석 하 하지만이 여전히 완벽 한 시나리오를 제공 하기 위해 실패 합니다. 두 기술을 병합 동물 모델에 가능 하다. 복 막 구조는 포유류, 사이 유사 하 고 따라서 다른 동물성 종 가진 모델 있다. 양 (Rodela 외 에 따라 하는 몇 가지 연구 14 와 총구 외. 15) 토끼16,17 모델; 그러나, 작은 동물 들은 그들이 집에 쉽게 유지, 그리고는 또한 경제적으로 바람직입니다. 쥐18,19,20,,2122,,2324 를 사용 하 여 관찰 하는 데 필요한 짧은 치료 시간을 제공 나비의 기능 변경입니다. 그것은 예를 들어 BMP-7 (뼈 morphogenic 단백질-7)25 항 거리 약물의 효과 같은 다른 문제와 RAS (renin-안 시스템)26,27 를 대상으로 탐구 하는 매우 유용한 모델 대표 , 28.
그러나, murine 모델은 다른 사람 이상의 많은 혜택으로 이상적인 모델으로 떠오르고 있다. 가장 흥미로운 장점은 유전자 사용의 가능성 수정 복 막 손상의 분자와 세포질 기초 공부 하 쥐입니다. 사실, 수많은 질병의 분석에 대 한 마우스 채용 종종 다양 한 잘 알려진 유전 배경와 여러 가지 변종이 있다. 다른 장점의 실험 (동물의 더 작은 크기) 때문에, 취급의 용이성, 시 약의 가용성 및 증가 양의 쥐의 다른 긴장에 사용할 수 있는 정보 주택, 감소 된 비용에 필요한 감소 공간 이후 그들은 가장 일반적으로 사용 된 동물 연구에서 왔다.
이식된 장치를 채용 하는 마우스 기반 모델 PD29,30, 가장 최근에 설립 된 모델 되었습니다 그리고 복 막 악화 Pdf에 노출 때문에 PD 환자에 의해 고통을 모방을 보여줘 왔다. 이 모델은 병 적인 프로세스 연루31,,3233이해 협력. 또한, 그것은 장황이 면역 변조기 및 항 염증 제 약물 및 다른 반대로 거리를 사용 하 여 저하 고 콕스-2 (cyclooxygenase 2) 억제제 등의 안티-신생 에이전트에 대 한 다양 한 잠재적인 치료를 확인 하기 위해 사용 되었습니다. 34, PPAR-γ (peroxisome proliferator 활성화 수용 체-γ) 촉진제35, Tamoxifen36, Paricalcitol (는 비타민 D 수용 체 활성 제는 면역 반응을 조절 한다)37, Rapamycin38 Nebivolol 39.
이식된 카 테 터와 마우스 모델 개발
이 모델의 목표는 닮은, 가능한 만큼, 작은 동물에 PD의 확장된 처리를 수행할 수 있도록 인간의 PD 환자에서 사용 하는 기술입니다. 지금까지, 복 막으로 투 석 액의 주입에 대 한 세 가지 기술 생쥐에서 테스트 되었습니다. 첫 번째, 눈 앞의 찔린 복 벽 복 막 손상과 같은 발생할 수 있습니다 여러 위험으로 인해 논란은 출혈 하 고, 맹목적으로, 내장 펑크입니다. 두 번째 기술은 소위 "오픈 영구 시스템 이다", 액체 주입 장치 몸 밖에 서 배치 됩니다. 이 절차는 인간에서 수행 하는 가장 비슷합니다. 그러나, 그것은 감염의 기회를 증가 시킬 수 있습니다으로 장기 실험의 개발을 허용 하지 않습니다 고 일반적으로 결과 방해할 수 있는 PDF를 않도록 마 취의 사용을 요구 한다. 세 번째 기술은 "닫힌된 시스템" 이다. 이 방법을 전체 장치 액체 주입에 사용 되는 동물의 몸 안에 있습니다. 유체는 피하 배치 됩니다 액세스 포트를 통해 바늘으로 주사 된다. 이 절차는 복 막 감염 및 출혈 뿐 아니라 마 취에 대 한 필요성의 위험을 줄여줍니다.
PD에 요 독 증의 효과 연구, 최근 murine 모델 또한 되었습니다40 카 테 터와 PDF 주입 모델에 따라 부설. 이 모델 신장 기능 감소, 쥐에는 신을 수행 하는 새로운 기술에 제공 합니다. 현재 문서에서 201540 에 Ferrantelli 그 외 여러분 에 의해 고용 하는 프로토콜의 수정 개발 되었습니다. 이 새로운 프로토콜에는 신, 동안 카 테 테 르 주입 수술 동안 쏜 상처의 길이 감소 하 고 신장에 대 한 액세스를 용이 하 게 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French, 보유 구슬 및 십자형 구멍</td><td>포함 Access technologies</td>: <td>MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber 포인트 바늘 25 ga. X 1/2&acute; &급성; &nbsp;</td><td>Access Technologies</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>고온 소추 키트</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합사 6/0</td><td>Laboratorio Agar&oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>가위&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>펜치</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>클램프</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.3 mg/ml</td><td></td><td></td><td>제약 제품</td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td>제약 제품</td></tr><tr><td>Dalsy (이부프로펜) 20mg/mL 경구 현탁액</td><td>AbbVie&nbsp; S.R.L.&nbsp;</td><td></td><td>의약품</td></tr></tbody></table>

카 테 테 르 배치 및 5/6 신 복 막 투 석의 murine 모델에 대 한 수술 기법

Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

복 막 투 석 (PD)는 신장 대체 요법 관리 및 기능적으로 부족 한 신장 수는 물과 독성 대사 산물을 배출 하는 복 막 구멍에 있는 hyperosmotic 액체의 후부 복구에 일관성이 제거 합니다. 불행 하 게도,이 절차는 복 악화. 조직 손상 부상을 치료 하는 염증의 발병을 트리거합니다. 부상 지속 염증 된다 만성 경우에, 그것은 발생할 수 있습니다 섬유 증는 많은 질병에 일반적인 발생 이다. PD, 만성 염증, 섬유 증, 이러한 것 들에 관련 된 다른 특정 프로세스와 기술의 후속 정지 실패를 의미 한 용량 저하 이어질. 인간의 샘플 작업 biopsies을 얻을 기술 및 윤리적인 한계를 선물만이 악화에 대 한 정보를 제공 합니다. 동물 모델이이 악화 때문에 그들은 이러한 결점을 극복 연구에 필수적입니다.
만성 마우스 주입 모델 관련 된 메커니즘의 가능성을 열고 유전자 변형된 생쥐의 넓은 범위에서 혜택을 2008 년에 개발 되었다. 이 모델은 액세스 포트를 피하는 동물의 뒷면에 부착 된 카 테 터로 구성 된 쥐를 위한 사용자 지정된 장치를 사용 합니다. 이 절차 동안 장기 실험, 감염 및 염증 주사 복 막의 연속 펑크를 방지 합니다. 이 모델 덕분에 만성 PD 유체 노출에 의해 유도 된 복 막 손상이 특징 되어과 변조. 이 기술은 대량의 액체의 주입을 허용 하 고 있는 시간의 연장된 기간 동안 약 또는 다른 물질의 접종은 필요 다른 질병의 연구에 사용 될 수 있습니다.
이 문서는 쥐에 카 테 터의 외과 배치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, PD 환자에 신장 불충분의 상태를 모방 하는 5/6 신에 대 한 절차를 설명 합니다.

그림 1 프로토콜 섹션에서 설명 하는 절차를 수행 하는 데 필요한 모든 자료를 보여준다. 이 예제에서는 마우스 제출 또는 신 (8 동물 그룹 당) (그림 2) 일반적으로 임상 연습에 사용 하는 두 다른 Pdf의 혼합물에 40 일 (두 주사 하루, 둘 사이의 최소 2 시간 대기) 동안 노출 됐다. Extraneal (icodextrin 기반 PDF) 및 Dianeal (포도 당 기반 PDF). 염 분 솔루션 그룹 제어로 부설 되었다 (n = 6).
마우스 정수 리 복 막 조직 테의 가장 먼 지역에서 얻은 했다. 샘플은 막로 셀 존재와 mesothelial 레이어 보존 (그림 3)의 농축을 비교 하기 위하여 ...

이 문서는 복 카 테 테 르는 동물 뒤에 있던 한 액세스 포트에 연결 된 쥐에 외과 위치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, 5/6 신 PD 환자의 신부전 상태를 위한 절차를 설명 합니다.

카 테 테 르 배치 및 5/6 신 복 막 투 석의 Murine 모델에 대 한 수술 기법

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

이 방법은 요독 또는 요독이 아닌 상태에서 수액 노출에 대한 반응으로 복막 또는 전신 변화에 대한 복막 투석 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 장기간에 걸쳐 많은 양의 액체를 복강내로 주입할 수 있고 유전자 변형 동물을 사용할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 의미는 구조적 및 기능적 복막 저하의 치료 및 진단으로 확장되며, 이는 잠재력, 치료 전략 테스트 및 바이오마커 평가를 용이하게 하기 때문입니다.우리는 복막 손상과 관련된 분자 신호를 시작하기 위해 유전자 변형 마우스를 사용해야 할 필요성을 예상했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다. 카테터 삽입의 경우, 각 동물의 오른쪽 옆구리와 등을 면도한 후 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족을 확인하고 동물의 눈에 연고를 바릅니다. 다음으로, 수술대 왼쪽 측면에 있는 첫 번째 동물을 놓고 노출된 피부를 1% 클로르헥시딘 글루코네이트 용액으로 소독합니다.뭉툭한 가위를 사용하여 몸의 오른쪽 옆구리를 0.5cm 절개합니다. 그런 다음 동물의 등 전체를 덮고 있는 피부가 잘 분리될 때까지 인접한 근육층에서 피부를 조심스럽게 분리하십시오. 피부 절개를 통해 근육층을 직경 1mm 정도 절개하고 근육 절개 부위에 카테터 끝과 첫 번째 플라스틱 링을 삽입합니다.5-0 또는 6-0 비흡수성 봉합사로 카테터 주위의 복막벽을 단단히 봉합하되, 하나의 플라스틱 링은 복막강 내부에, 다른 하나는 근육과 피부 사이에 끼웁니다. 절개 전에 봉합사를 준비해야 하며 카테터를 삽입할 때까지 근육을 풀어서는 안 됩니다. 그렇지 않으면 절개 부위가 매우 작기 때문에 다시 찾기가 어려울 수 있습니다.액세스 포트를 마우스 꼬리 쪽의 피하 공간에 삽입하고 두 번째 봉합사로 상처를 봉합합니다. 그런 다음 흉골이 완전히 누운 후 동물을 우리로 되돌립니다. 4-7일 후, 복막 투석 치료를 시작하려면 먼저 주사기에 복막 투석액 2ml를 넣고 1% 클로르헥시딘 글루코네이트 용액으로 포트를 둘러싼 피부를 소독합니다.그런 다음 한 손으로 꼬리와 접근 포트로 동물을 구속하고 다른 손으로 비스듬한 바늘을 사용하여 포트에 유체를 주입합니다. 5/6 신장 절제술 및 카테터 배치의 경우, 시연된 바와 같이 동물의 수술을 준비한 후 갈비뼈 바닥에 가까운 동물의 왼쪽에 0.5cm 피부를 절개합니다. 근육을 작게 절개하여 복막에서 왼쪽 신장을 추출하고 캡슐과 부신을 제거합니다.

surgical-techniques-for-catheter-placement-56-nephrectomy-murine

Research

연구

JoVE Journal

Engineering

공학

자발 전이성 신장 세포 암종 (RCC) 질병 진행의 모델은 관련 임상 설정에서 치료를 평가하는 데 사용될 수있다. 이 프로토콜은 동소 신장 종양 세포 주입, 적절한 절제를위한 다른 절차를 설명하고, 마지막으로 전이성 부담 및 현지화의 시각 및 생물 발광 점수에 대한 부검 가이드를 간략하게 설명합니다.

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쥐 신장 이식 기술

이 원고 마우스 5/6일 부분 신 (PNx) 극 결 찰과 수행에 상세한 2 단계 수술 절차를 제공 합니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.

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신장 구조 조직 설계 기관 부족 및 투 석의 해로운 효과 위한 솔루션을 제공합니다. 여기, 우리는 마이크로 프로토콜 설명 cortico 골 수 세그먼트의 격리 murine 신장 해 부. 이 세그먼트는 신장 organoids를 형성 세포 비 계 없는 구문으로 이식.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

여기 선물이 murine 비보에 biotin과 사 세포 표면 단백질의 라벨에 대 한 프로토콜. 이 프로토콜은 마우스 신장 perfuse glomeruli, 격리 하 고, 관심사의 단백질의 생 immunoprecipitation를 수행 하는 방법에 대 한 정보를 포함 합니다.

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이 프로토콜은 변형 된 동맥 해부학 전략에 초점을 맞춘 마우스 신장 이식의 새로운 수술 기술을 제시합니다. 간단하고 안전한 요관-방광 해부학 방법을 포함하는 혈관 봉합 기술도 제시된다. 이러한 변형은 수술 시간을 단축시키고 마우스 신장 이식 절차의 성공률을 향상시킵니다.

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본 원고는 랫트 모델에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양극절제술에 의한 5/6 신절제술을 위한 표준화된 프로토콜을 소개하며, 체계적인 정밀도가 높고 기술적 오류 위험이 낮은 신실질 절제술을 통해 신부전 상태를 유도하는 것을 목표로 합니다.

5/6 쥐에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양족 절제술을 사용한 신장 절제술

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복막 투석 카테터 삽입을 위한 복강경 보조 Seldinger 기법

이 프로토콜은 안전하고 잘 내약되는 쥐 양측 신림프절반 절제술의 생존 절차를 설명합니다.

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