Name: 성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 배우세요 성인 마우스 DRG explant와 해리 세포 배양법을 이용하여 신경가소성, 신경염증 및 바이러스 감염 반응을 연구하는 방법입니다. 이 기술은 뉴런-교세포 상호작용을 조사하는 데 필수적인 장기 유사 복잡성을 유지합니다.

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우리는 진심으 세포 배양 및 이미징 작업에 그들의 공헌에 대 한 이미징 핵심 시설 중서부 대학 (MWU)와 [Chanmoly 셍, 크리스토퍼 Dipollina, 대 릴 Giambalvo, 그리고 케이시 Sigerson] 학생의 그룹에 감사 합니다. 이 연구 작업은 MWU의 Intramural 교부 V.T. M.F. 및 연구 시작 자금에 의해 지원 되었다

동물의 사용을 포함 한 모든 절차는 제도적 검토 보드 승인 프로토콜 (IACUC 중서부 대학)에 의해 승인 되었습니다.
1. 마우스 배아에서 DRG 수확
<ol><li>
잘린 뒤 질 식 방법 (CO2)에 의해 성인 쥐 안락사 즉시 수술 척추 열 제거를 진행 합니다.
	<ol>
<li>Dorsally 좋은 위를 사용 하 여 피부 레이어 아래로 절단 하 여 척추 열을 노출 합니다. 동물의 나머지에서 척추 열을 구분 하는 천 골을 통해 열의 양쪽에 있는 갈비뼈를 절단 하 여 척추 열을 격리 합니다.</li>
		<li>바늘/핀을 사용 하 여 수술 매트에 척추 칼럼 (복 부 쪽)를 탑재 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>좋은 위 만들기를 사용 하 여 double 척추 운하의 복 부 측 폭로 척추의 양쪽에 잘라.</li>
	<li>현미경 수술 (배율 X 4로 설정)가 위를 사용 하 여 부드럽게 contralateral 등 쪽 척추 뿌리를 노출 하 고 주변 신경의 지 뿌리 따라 DRG를 찾으려고 편이 척수를 이동. 각 절의 척추 foramina 안에 부분적으로 숨겨집니다.</li>
	<li>DRG, 수확 한 집게 (척수와 사이 DRG) 지 루트 꼬집어 고 부드럽게 척추 구멍에서 DRG를 꺼내.</li>
	<li>DRG에 주변 척추 신경에 두 번째 집게를 배치 하 고 척추 신경 및 척추 루트 DRG를 당겨.</li>
	<li>수집된 DRG 35mm 차가운 혈 청 자유로운 미디어 (SFM)34의 3 mL를 포함 하는 배양 접시에에서 놓습니다.</li>
	<li>마른 유리 샬레에에서 각 개별 DRG 전송, 수술 현미경 청소 하 고 트림 초과 섬유와 여전히 DRG는 블레이드를 사용 하 여에 연결 하는 결합 조직. DRG는 흰색 척추 신경/루트 따라 불 룩 한 투명 구조로 쉽게 식별. 종종는 DRG를 둘러싼 혈관 발견 된다.</li>
	<li>얼음 처럼 차가운 SFM 미디어를 포함 하는 새로운 페 트리 접시에 청소 DRG를 놓습니다.</li>
	<li>젤라틴 단백질 혼합물을 희석 ( 재료의 표참조)에 얼음 처럼 차가운 SFM (1:1).</li>
	<li>DRG 비보 전 12-잘 접시에 접시 미리 젤라틴 단백질 혼합물의 10/20 µ L로 코팅 하 고 30-60 분에 대 한 37 ° C, 5% CO2 배양 기 안에 그들을 설정 합니다.</li>
	<li>부드럽게 커버 전체 explant 및 유지 조건 (37 ° C, 5% CO2) 경작에서 explants 문화 시스템에 SFM의 1.5-2 mL를 추가 합니다. 참고: 이것은 중요 한 단계는 DRG 유리 요리만 생산 젤라틴 단백질 혼합물에 의해 고정 되어 있기 때문 에입니다. 중 합 및 pipetting 능력의 시간 부동 피하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>성장 DRG 마다 72 h의 매체 변경 하 고 필요한 만큼 성장 하는 DRG를 하자.</li>
</ol>2. 격리 DRG에서 단일 셀 신경
<ol><li>모든 DRG 콜라 IV의 1.25 mg/mL를 포함 하는 F12 미디어의 1.2 mL 살 균 1.5 mL 튜브에 수집 하 고 37 ° C, 5% CO2 45 분에서 그것을 품 어 또 다른 45 분에 대 한 첫 번째 부 화 후이 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>30 분에 대 한 트립 신 (0.025%)를 포함 하는 37 ° C, 5% CO2에 콜라 IV 치료 후 즉시 F12 미디어의 2 mL와 explants 취급 합니다.</li>
	<li>15 분 동안 37 ° C, 5% CO2 태아 둔감 한 혈 청 (FBS, 33%)를 포함 된 F12 미디어 2 mL와 함께 품 어.</li>
	<li>Explants F12 미디어의 2 mL로 세 번 세척 하 고 기계적으로 해리 그들 유리 피 펫과 미디어 흐린 변할 때까지 계속 합니다. 참고:이 절차는 이전 섹션에 설명 된 대로 동물에서 청소/손질 DRG의 컬렉션을 포함 한다. Explants의 기계적 분리를 수행할 때 부드러운 고 흘림 및 작업 자료의 손실을 발생할 수 있습니다 이후 과도 한 무력을 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>0.22 μ m 필터 어떤 불순물 및 과도 결합 조직 제거를 통해 해리 세포 배양을 필터링 합니다. 필터링 된 셀 (2500 x g)에서 lysate 원심 2 분.</li>
	<li>제거는 상쾌한 고 셀 펠 릿 신경 문화 (1x), 항생제 혼합 (1x), L-글루타민 산 염 (0.5 m m)에 대 한 보충을 포함 하는 neurobasal 미디어의 500 µ L에서 resuspend 및 신경 성장 인자 (5 µ g/mL) ( 재료의 표참조).</li>
	<li>기본 셀 밀도 laminin 코팅 커버 슬라이드 (50 µ g/mL, 참조 테이블의 재료)에 천연된 셀 접시. 셀 카운터를 사용 하 여 셀 밀도 결정 합니다. 참고: 우리가 도금 25000 셀/커버 슬라이드에 세포. 이 기술은 신경 그리고 glial 위성 세포의 분리 수 있습니다. Pseudounipolar 신경와 공동 경작 glial 구성 요소 신경 생존을 위해 중요 한 역할을 한다.</li>
</ol>3. HSV-1 감염 DRG Explants의 DRG 파생 해리 셀
참고:이 작업 엄격 하 게는 우리는 완벽 하 게 갖춘된 실험실 중서부 대학 biosafety 위원회에 의해 승인 되는 biosafety 수준 2 (BSL-2) 요구에 따라 이루어졌다. HSV-1에의 KOS 스트레인이이 연구에 사용 되었다. 바이러스 긴장을 사용 하는 경우 적절 한 측정 및 현지 기관 지침에 따라 안전 조치 보시기 바랍니다.
<ol><li>확인 하 고 바이러스 감염 모델 SFM 미디어에 올바른 희석에 준비. 이 연구에 사용 된 바이러스는 HSV-1에의 KOS 긴장 했다. DRG 파생 작업 셀 해리 때 감염, 바이러스 같은 셀의 수 수를 의미에 대 한 다양 한 감염 (MOI)의 1 단위를 사용 합니다.</li>
	<li>Explants DRG를 감염 하는 경우 셀에는 explant의 정확한 수를 확인할 수 없으므로 virions (예를 들어, 10000 virions)의 수를 사용 합니다.</li>
	<li>Explant/셀 수 바이러스에 감염 된 살 균 셀 접시 또는 SFM 미디어와 바이러스의 혼합물을 포함 하는 튜브에 놓습니다. 참고: 우리는 25000 셀 (1 나)를 포함 하는 커버 슬라이드에 대 한 25000 virions를 사용. explant 감염, 우리는 10000 virions를 사용 합니다.</li>
	<li>열릴; 감염에 대 한 37 ° C에서 셀 플레이트 또는 관 배치 바이러스 노출 시간 바이러스 infectivity 따라 달라질 수 있습니다. 참고: 바이러스 항목 직교-nitrophenyl-β-galactoside (ONPG) 및 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside (X-gal) 분석 실험26사용 하 여 확인 되었다.</li>
</ol>4입니다. 면역 형광 검사
<ol><li>버퍼링 하는 인산 염 (PBS)에 4% 포 르 말린에 explants 및 단일 셀 샘플을 수정. PBS에서 3 시간 10 분 대 한 샘플을 씻으십시오.</li>
	<li>원하는 기본 항 체 (안티-β-tubulin, 안티-peripherin, 안티-heparan 황산 염 (HS), 또는 반대로 당단백질 D (gD) 항 체, 희석에 대 한 참조 테이블의 자료 ) 0.3% 버퍼 PBS에에서 희석 된 샘플을 품 어 트리톤-X (PBST) 및 10 % 정상 염소 혈 청입니다. 밤새 4 ° C에서 샘플을 저장 합니다.</li>
	<li>3 번 10 분 각 PBS 가진 대 한 샘플을 씻으십시오. 1 h 적절 한 이차 항 체에 대 한 실 온에서 샘플을 품 어 (488 또는 Cy3; 희석에 대 한 재료의 표 참조) PBS에 희석.</li>
	<li>3 번 10 분 각 PBS 가진 대 한 샘플을 씻으십시오. 설치 단계 전에 20 분에 대 한 PBS에 Hoechst 염료 (1.5 µ M)와 샘플을 품 어.</li>
	<li>형광 장착 매체와 coverslip를 사용 하 여 유리 슬라이드에 샘플을 탑재 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Muratori, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+new+neurons+in+dorsal+root+Ganglia+in+adult+rats+after+peripheral+nerve+crush+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">Generation of new neurons in dorsal root Ganglia in adult rats after peripheral nerve crush injury.</a> Neural Plast. , 860546(2015).</li>
<li>Dellarole, A., Grilli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+dorsal+root+ganglia+sensory+neurons+express+the+early+neuronal+fate+marker+doublecortin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adult dorsal root ganglia sensory neurons express the early neuronal fate marker doublecortin.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 318-328 (2008).</li>
<li>Devor, M., Govrin-Lippmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+adult+rat+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in adult rat dorsal root ganglia.</a> Neurosci Lett. 61 (1-2), 189-194 (1985).</li>
<li>Farel, P. B., Boyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+effects+of+nerve+injury+on+estimates+of+sensory+neuron+number+in+juvenile+bullfrog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Transient effects of nerve injury on estimates of sensory neuron number in juvenile bullfrog.</a> J Comp Neurol. 410 (2), 171-177 (1999).</li>
<li>Geuna, S., Borrione, P., Poncino, A., Giacobini-Robecchi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometrical+changes+in+dorsal+root+ganglion+neurons+innervating+the+regenerated+lizard+tail%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometrical changes in dorsal root ganglion neurons innervating the regenerated lizard tail.</a> Int J Dev Neurosci. 16 (2), 85-95 (1998).</li>
<li>La Forte, R. A., Melville, S., Chung, K., Coggeshall, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+neurogenesis+of+adult+rat+dorsal+root+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosens+Mot+Res%22%5BJournal%5D)">Absence of neurogenesis of adult rat dorsal root ganglion cells.</a> Somatosens Mot Res. 8 (1), 3-7 (1991).</li>
<li>Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigations+on+the+Ultrastructural+Changes+of+the+Spinal+Ganglion+Neurons+in+the+Course+of+Axon+Regeneration+and+Cell+Hypertrophy+I.+Changes+during+Axon+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Z+Zellforsch+Mikrosk+Anat%22%5BJournal%5D)">Investigations on the Ultrastructural Changes of the Spinal Ganglion Neurons in the Course of Axon Regeneration and Cell Hypertrophy I. Changes during Axon Regeneration.</a> Z Zellforsch Mikrosk Anat. 60, 711-740 (1963).</li>
<li>Popken, G. J., Farel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+neuron+number+in+neonatal+and+adult+rats+estimated+by+means+of+stereologic+and+profile-based+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sensory neuron number in neonatal and adult rats estimated by means of stereologic and profile-based methods.</a> J Comp Neurol. 386 (1), 8-15 (1997).</li>
<li>Tandrup, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+estimates+of+number+and+size+of+rat+dorsal+root+ganglion+cells+in+studies+of+structure+and+cell+survival%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Unbiased estimates of number and size of rat dorsal root ganglion cells in studies of structure and cell survival.</a> J Neurocytol. 33 (2), 173-192 (2004).</li>
<li>Sarikcioglu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+severe+crush+injury+on+axonal+regeneration%3A+a+functional+and+ultrastructural+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reconstr+Microsurg%22%5BJournal%5D)">Effect of severe crush injury on axonal regeneration: a functional and ultrastructural study.</a> J Reconstr Microsurg. 23 (3), 143-149 (2007).</li>
<li>Varejao, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J Neurotrauma. 21 (11), 1652-1670 (2004).</li>
<li>Hanack, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+blocks+pathological+but+not+acute+TRPV1+pain+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">GABA blocks pathological but not acute TRPV1 pain signals.</a> Cell. 160 (4), 759-770 (2015).</li>
<li>Pagadala, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+NR1+subunit+of+NMDARs+in+primary+sensory+neurons+leads+to+hyperexcitability+and+pain+hypersensitivity%3A+involvement+of+Ca%282%2B%29-activated+small+conductance+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Loss of NR1 subunit of NMDARs in primary sensory neurons leads to hyperexcitability and pain hypersensitivity: involvement of Ca(2+)-activated small conductance potassium channels.</a> J Neurosci. 33 (33), 13425-13430 (2013).</li>
<li>Zhang, X. L., Albers, K. M., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+increase+in+nicotinic+acetylcholine+receptor+current+in+cutaneous+nociceptive+DRG+neurons+from+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced increase in nicotinic acetylcholine receptor current in cutaneous nociceptive DRG neurons from the adult rat.</a> Neuroscience. 284, 483-499 (2015).</li>
<li>Zhu, Y., Lu, S. G., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+inflammation+increases+GABA-induced+depolarization+of+rat+cutaneous+dorsal+root+ganglion+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Persistent inflammation increases GABA-induced depolarization of rat cutaneous dorsal root ganglion neurons in vitro.</a> Neuroscience. 220, 330-340 (2012).</li>
<li>Amir, R., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cross-excitation+between+afferent+A-+and+C-neurons+in+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional cross-excitation between afferent A- and C-neurons in dorsal root ganglia.</a> Neuroscience. 95 (1), 189-195 (2000).</li>
<li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li>
<li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li>
<li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trip+of+the+tip%3A+understanding+the+growth+cone+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The trip of the tip: understanding the growth cone machinery.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (5), 332-343 (2009).</li>
<li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+axon+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298 (5600), 1959-1964 (2002).</li>
<li>Miller, C., Shanks, H., Witt, A., Rutkowski, G., Mallapragada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oriented+Schwann+cell+growth+on+micropatterned+biodegradable+polymer+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Oriented Schwann cell growth on micropatterned biodegradable polymer substrates.</a> Biomaterials. 22 (11), 1263-1269 (2001).</li>
<li>Clark, P., Connolly, P., Curtis, A. S., Dow, J. A., Wilkinson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographical+control+of+cell+behaviour%3A+II.+Multiple+grooved+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Topographical control of cell behaviour: II. Multiple grooved substrata.</a> Development. 108 (4), 635-644 (1990).</li>
<li>Antinone, S. E., Smith, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+axon+transport+of+herpes+simplex+virus+and+pseudorabies+virus%3A+a+live-cell+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retrograde axon transport of herpes simplex virus and pseudorabies virus: a live-cell comparative analysis.</a> J Virol. 84 (3), 1504-1512 (2010).</li>
<li>Holland, D. J., Miranda-Saksena, M., Boadle, R. A., Armati, P., Cunningham, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+transport+of+herpes+simplex+virus+proteins+in+axons+of+peripheral+human+fetal+neurons%3A+an+immunoelectron+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Anterograde transport of herpes simplex virus proteins in axons of peripheral human fetal neurons: an immunoelectron microscopy study.</a> J Virol. 73 (10), 8503-8511 (1999).</li>
<li>Sharthiya, H., Seng, C., Van Kuppevelt, T. H., Tiwari, V., Fornaro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HSV-1+interaction+to+3-O-sulfated+heparan+sulfate+in+mouse-derived+DRG+explant+and+profiles+of+inflammatory+markers+during+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">HSV-1 interaction to 3-O-sulfated heparan sulfate in mouse-derived DRG explant and profiles of inflammatory markers during virus infection.</a> J Neurovirol. 23 (3), 483-491 (2017).</li>
<li>Zerboni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+1+tropism+for+human+sensory+ganglion+neurons+in+the+severe+combined+immunodeficiency+mouse+model+of+neuropathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus 1 tropism for human sensory ganglion neurons in the severe combined immunodeficiency mouse model of neuropathogenesis.</a> J Virol. 87 (5), 2791-2802 (2013).</li>
<li>Koyuncu, O. O., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+infections+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Virus infections in the nervous system.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 379-393 (2013).</li>
<li>Swanson, P. A. 2nd, McGavern, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+diseases+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Viral diseases of the central nervous system.</a> Curr Opin Virol. 11, 44-54 (2015).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+viral+infections+of+the+central+nervous+system%3A+part+2%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Emerging viral infections of the central nervous system: part 2.</a> Arch Neurol. 66 (9), 1065-1074 (2009).</li>
<li>Preston, C., Efstathiou, S., et al. Ch 33. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreston%2C+C+%22Human+Herpesviruses+Biology%2C+Therapy%2C+and+Immunoprophylaxis%22">Human Herpesviruses Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis</a>. Campadelli-Fiume, G., Arvin, A., Mocarski, E., et al. , Cambridge University Press. (2007).</li>
<li>Roizman, B., Whitley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inquiry+into+the+molecular+basis+of+HSV+latency+and+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An inquiry into the molecular basis of HSV latency and reactivation.</a> Annu Rev Microbiol. 67, 355-374 (2013).</li>
<li>Arvin, A., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhitley%2C+R+%22Human+Herpesviruses%3A+Biology%2C+Therapy%2C+and+Immunoprophylaxis%22">Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis</a>. , (2007).</li>
<li>Fueshko, S., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LHRH+cells+migrate+on+peripherin+fibers+in+embryonic+olfactory+explant+cultures%3A+an+in+vitro+model+for+neurophilic+neuronal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">LHRH cells migrate on peripherin fibers in embryonic olfactory explant cultures: an in vitro model for neurophilic neuronal migration.</a> Dev Biol. 166 (1), 331-348 (1994).</li>
<li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+heparan+sulphate+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of heparan sulphate in inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 6 (9), 633-643 (2006).</li>
<li>Zhang, X., Wang, B., Li, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+heparan+sulfate+and+heparanase+in+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Implications of heparan sulfate and heparanase in neuroinflammation.</a> Matrix Biol. 35, 174-181 (2014).</li>
<li>Du, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+GABAergic+signaling+within+sensory+ganglia+controls+peripheral+nociceptive+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Local GABAergic signaling within sensory ganglia controls peripheral nociceptive transmission.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1741-1756 (2017).</li>
<li>Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%3A+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li>
</ol>

저자 없다 공개.

Ex vivo DRG 모델 두 신경 그리고 glial 대사37에 있는 microenvironment의 효과 뿐 아니라 신경 명과 상호 작용 등의 다양 한 스펙트럼을 조사 하기 위해 매우 유용 합니다. 또한, DRG 모델 병원 성 메커니즘 및 급성 만성 및 잠재성 단계 감염 또는 특정된 질병에 대 한 ex vivo 시스템 개발 하 여 마커를 관련 된 관련 된 질문을 해결 하기 위해 비용 효율적인 도구로 사용 될 수 있습니다. 또한, DRG explants에 작은 분자의 심사 도서관 약 개발이 explant 모델을 악용할 수 있습니다. 생체 외에서 모델, 특히 단일 셀 시스템, 너무 단순한 순수 관련 행사; 관련이 많습니다. vivo에서 모델을 정확 하 게 도전 하는 동안 조작, 부분적으로 부상, glial 흉터 및 금융 비용 함께 주변 ECM의 복잡성에 대 한 면역 반응 때문. 반대로, DRG explant 비보 전<...

이 원고에서 우리를 PNS 모욕 신경 폐해에서 배열에 생물학 응답의 넓은 범위를 조사 하는 보존된 조직 같은 microenvironment로 파생 된 마우스 DRG 모델 시스템의 organotypic ex vivo 모델을 받는 방법을 보고합니다 상호 작용, neuroplasticity, 염증 성 마커, 바이러스 성 감염. 또한, 우리는 더 DRG 파생 한 감각 신경 및 위성 세포의 기본 공동 문화를 만들려는 프로토콜 개발.
DRG는 위성 회색-문제-단위 척추 신경의 등 쪽 척추 뿌리 따라 중앙 신경 시스템 (CNS) 밖에 위치 해 있습니다. DRG, 척추 foramina의 근접에 있는 pseudounipolar 감각 뉴런 하며 위성 glial 세포. Pseudounipolar 신경 셀 시체 주변 대상에서 체세포와 내장 입력을 들고 주변 프로세스 및 CNS에 세포 체에서 감각 정보를 전송 하는 중앙 프로세스에 분할 단일 neurite 기능. 연결 캡슐 정의 CNS에서 신경 그리고 glial 세포의 주변이 클러스터를 분리 하 고. DRG에서 출생 후 셀 마이그레이션 없음 설명 적 이며 지방 줄기 세포 틈새 생활1에 걸쳐 발생 하는 neurogenic 이벤트에 대 한 책임. 따라서,이 모델은 특히 성체, axonogenesis, 외상 성 병 변, 및 세포 죽음2,3,,45,6,7 공부에 적합 ,,89 .
Neuroregeneration의 분야에는 DRG vivo에서 에서 수확 explanted 시험관에서 재현 axonotmesis, 신경 세포 체는 축 삭은 완전히 절단에 부상 상태 innervated 대상10에서 분리 ,11. 그것은 잘 알려져 주변 신경 상해는 DRG에 감소 및 증가 유전자 발현을 발생할 수 있습니다 및 이러한 변경의 많은 재생 프로세스의 결과 있지만 많은 비 신경 세포에서 면역 반응 또는 다른 결과 수도 있습니다. 비보 전 을 사용 하 여이 복잡성의 일부 고립 된 DRG의 시스템을 제거 하 고 기계적 경로 보다 쉽게 조사 수 있습니다.
CNS, 많은 신경 전달 물질 GABA12,13,,1415 신경 소마의 수준에서를 포함 하 여에 대 한 수용 체의 풍부에 감각 입력을 전달에 중앙의 역할 외에도 interneuronal 크로스-여기의 증거는 DRG 감각 입력16,17의 정교한 예비 통합자는 제안할 수 있습니다. 이러한 새로운 결과 부여 DRG explant에 비슷한 신경 조직 특정 organoids의 광범위 한 실험 분야에 사용 되는 다른 "미니 두뇌" 모델 및 치료 미니 신경 네트워크 시스템의 특성 신경 질환18,19에 접근. 이러한 증거는 사실은 DRG 연결 캡슐에 의해 포위 하는 신경 조직의 개별 및 잘 정의 된 클러스터 함께 비보 전 이식에 대 한 적합 한 장기 게.
자란 마우스 DRG 매력적인 다세포 옵션 종 간의 구조 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 pathophysiologies 모델을 제공 합니다. 또한, 유전자 변형 마우스 긴장의 큰 저장소 미래 기계 론 적인 연구에 매우 도움이 되는. Neurite 확장 모두 개발 및 그 이후 부상 성장 콘 및 기판20,21사이 기계적인 상호 작용을 요구 한다. 나노 및 마이크로 패턴이 기판 neurite 결과와 그들의 microenvironments에서 지형 기능에 대응 하는 자신의 능력을 보여주는 도구로 사용 되었습니다. 뉴런, 준수, 마이그레이션, 생존과 기판22,23에 홈 같은 표면 기능 탐색에 그들의 축 삭의 방향을 표시 되었습니다. 그러나, 이러한 연구는 일반적으로 교양된 셀 라인 활용 하 고 어떻게 기본 신경 세포 지 예측 하기 어려운 비보 전또는 vivo에서 잘 정의 된, 물리적 신호에 응답.
마우스 사용이 제안에 대 한 DRG explant 모델 비보 전 진짜 셀 상호 작용 및 생 화 확 적인 신호 성장 축 삭을 둘러싼 모방 합니다. 많은 다른 neuroinflammation, axonal 재생, neurosphere 생산에서에서 배열 하는 실험적인 패러다임에서 DRG explant 가운데 모델 감각 내 바이러스 성 감염 및 대기 시간 측면을 조사 하는 유용한 도구 역할을 계속합니다 중추24,25,,2627.
신경 계통 (NS)는 일반적으로 바이러스 감염28,,2930에 대 한 대상입니다. 대부분 바이러스 감염 상피 그리고 내 피 세포 표면 그리고 주변 신경 통해 ns 표면 조직에서 그들의 방법을 감각 및 모터 섬유. 특히, 포진 심 플렉스 바이러스 타입 1 (HSV-1) 상피 세포에 초기 감염 감각 중추에 선호, 평생 대기 시간을 설정 후 PNS31,32의 DRG. PNS 감염 HSV-1 neuroptropic 기능 신경 질환33에 궁극적으로 지도 한다.

<table><tbody><tr><td>성인 마우스 NIH/Swiss</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>35mm 페트리 접시</td><td>세포 치료</td><td>229635</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel ECM</td><td>시그마-알드리치</td><td>E1270</td><td>젤라틴 단백질 혼합물</td></tr><tr><td>F12 미디어</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 IV</td><td>시그마-알드리치</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>의 일부Sigma-Aldrich</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6178</td><td></td></tr><tr><td>0.22um 필터</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal media</td><td>Gibco</td><td>10888-022</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>Supplement for neuronal culture</td></tr><tr><td>PSN antibiotics</td><td>Gibco</td><td>15640-055</td><td>*Part of SFM media 항생제 혼합물</td></tr><tr><td>L-글루타메이트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td>*SFM 매체의 일부</td></tr><tr><td>NGF</td><td>Alomone Labs</td><td>N-100</td><td>신경 성장 인자</td></tr><tr><td>라미닌 코팅 커버슬라이드</td><td>호성체외</td><td>GG-14-라미닌</td><td></td></tr><tr><td>ONPG subtrate</td><td>Pierce</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>X-gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520034</td><td></td></tr><tr><td>항체 anti-B-tubulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8328</td><td>1:2000 희석</td></tr><tr><td>항체 anti-peripherin</td><td>Millipore</td><td>AB1530</td><td>1:1000 희석</td></tr><tr><td>Hoechst 염료</td><td>Thermo Fisher</td><td>62249</td><td>1.5 &micro; M 최종 농도</td></tr><tr><td>항-헤파란 황산염</td><td>US Biological</td><td>H1890-10</td><td>0.180555556</td></tr><tr><td>항 gD 항체</td><td>Virostat</td><td>196</td><td>1:10 희석</td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-100G</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>BME</td><td>Gibco</td><td>21010-046</td><td>*SFM 미디어 글루</td></tr><tr><td>코스</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>KIT (Insulin-transferrin-Selenium-A)</td><td>의 일부 Gibco</td><td>51300-044</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>Vitamin-C</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>Putrescine 파트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7505</td><td>*SFM 미디어</td></tr><tr><td>488 (염소 안티-마우스)</td><td>의 일부Life Technologies</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 (염소 안티-토끼)</td><td>Jackson Immunoresearch laboratories</td><td>111-165-003</td><td></td></tr><tr><td>일반 염소 혈청&nbsp;</td><td>벡터</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 솔루션</td><td>시그마-알드리치</td><td>HT5014-120ML</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>트리톤-X</td><td>시그마-알드리치</td><td>T9284-500ML</td><td></td></tr><tr><td>벡타쉴드</td><td>벡터</td><td>H-1500</td><td>플루레센스 마운트</td></tr><tr><td>다이아몬드 화이트 유리 커버슬라이드</td><td>글로브 사이언티픽</td><td>1380-20</td><td></td></tr></tbody></table>

성인 마우스 drg explant와 해리 셀 모델 neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

이 프로토콜 지 루트 마우스 파생 중추 (DRG) explant 및 생체 외에서 DRG 파생 공동 문화 해리 감각 신경 그리고 glial 위성 세포의 비보 전 모델을 설명합니다. 이들은 다양 한 생물학 응답 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해에서 이르는 말 초 신 경계 (PNS)의 생리 적 및 병 적인 상태와 관련 된 조사를 유용 하 고 다재 다능 한 모델 neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염입니다. DRG explant의 사용은 여러 이유로 단순한 단일 셀 모델에 비해 과학적으로 유리 하다. 예를 들어, organotypic 문화, DRG explant 비보 전 모든 신경 그리고 glial 기능에 중요 한 역할을 재생 하는 세포 외 microenvironment를 포함 하 여 전체 신경 네트워크의 전송을 수 있습니다. 또한, DRG explants 또한 유지할 수 있습니다 비보 전 위해 몇 일 및 문화 조건으로 불안정 수 있습니다 원하는. 또한, 수확된 DRG 수 수 더 해리를 생체 외에서 공동 문화에 기본 감각 신경 그리고 glial 신경 상호 작용, neuritogenesis, axonal 콘 상호는 extracellular 조사 위성 glial 세포의 microenvironment, 그리고 더 일반적으로, 신경 물질 대사와 관련 된 모든 측면. 따라서, DRG explant 시스템 유연성을 다양 한 비용 효율적인 방식으로, 생리 적, 생물 학적 및 병 적인 조건에 관련 된 이벤트를 연구의 큰 거래를 제공 합니다.

Neuroplasticity 및 신경-환경 상호 작용의 여러 측면 DRG와 단일 해리 셀 문화 모델을 사용 하 여 조사 수 있습니다. 우리는 DRG explant와 DRG 파생 해리 셀 개요로 서 그림 1에 표시를 분리 하 여 연구를 시작 했다. 조직 및 단일 셀 모델은 다양 한 면역 형광 검사, 서쪽 오 점, 게놈 분석, 실험 설계 및 목표의 성격에 따라 다른 분석 기법 등 분자 기술 사용 하 여 분석할 수 있습니다. 첫째, 우리는 axonal 성장 (그림 2)에 생 화 확 적인 큐의 효과 조사 하기 위해 우리의 DRG explant 모델을 사용. 더블 또는 트리플 면역 형광 검사에서 peripherin (그림 2A, B; 레드)와 β-tubulin (그림 2A, B; 녹색)의 차동 식 모두 신경 셀 시체와 주변 n...

이 보고서에서 organotypic 문화와 지 루트 마우스 파생 중추의 해리 주 문화의 장점 다양 한 메커니즘 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해와 관련 된 조사를 강조 표시 됩니다. neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염에 응답입니다.

성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

This protocol describes an ex vivo model of mouse-derived dorsal root ganglia (DRG) explant and in vitro DRG-derived co-culture of dissociated sensory ...

이 절차의 전반적인 목표는 등쪽 뿌리 신경절 이식 및/또는 DRG 유래 1차 해리 세포 모델의 생체 외 모델을 만들어 환경 신호에 대한 신경 반응을 조사하는 것입니다. 이 방법은 신경 가소성 또는 병원체 노출에 대한 반응으로 인한 신경 염증 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 등쪽 뿌리 신경절 외식이 특정 처리로 인해 세포 주기 및 세포 간 미세환경 변화를 시작하는 데 유용한 장기와 같은 복잡성을 유지한다는 것입니다.이 방법을 주의 깊게 시연하는 것은 매우 중요한데, DRG를 식별하는 것뿐만 아니라 DRG를 수집하는 것이 크기와 위치로 인해 매우 어려울 수 있기 때문입니다. 이 절차를 시작하려면 가는 가위를 사용하여 동물의 피부층을 잘라 척추를 노출시킵니다. 다음으로, 기둥 양쪽의 갈비뼈와 천골을 절단하여 척추를 동물의 나머지 부분과 분리하여 척추를 분리합니다.그런 다음 바늘과 핀을 사용하여 복부 쪽이 위로 향하도록 척추를 수술 매트 위에 장착합니다. 그런 다음 척추체의 양쪽을 이중 절단하여 척추관의 복부 쪽을 노출시킵니다. 외과용 현미경으로 측면의 척추 코드를 부드럽게 움직여 반대쪽 등쪽 척추근을 노출시키고 말초 신경의 등쪽 뿌리를 따라 DRG를 찾습니다.각 신경절은 추간공(intervertebral foramina) 내부에 부분적으로 숨겨져 있습니다. DRG를 채취하려면 집게 하나로 등뿌리를 꼬집고 추간공에서 DRG를 부드럽게 당겨 빼냅니다. 그런 다음 DRG의 척수 신경 말초에 두 번째 겸자를 놓고 척추 신경 및 척추근과 함께 DRG를 당깁니다.그런 다음 수집된 DRG를 35밀리리터의 얼음처럼 차가운 무혈청 배지가 들어 있는 3mm 페트리 접시에 넣습니다. 각 DRG를 건조 유리 페트리 접시에 옮깁니다. 수술용 현미경으로 블레이드를 사용하여 DRG에 아직 부착된 여분의 섬유와 결합 조직을 청소하고 잘라냅니다.DRG는 백색 척추 신경을 따라 불룩한 투명 구조로 쉽게 식별할 수 있으며, DRG를 둘러싼 혈관이 종종 발견됩니다. 그런 다음 세척된 DRG를 얼음처럼 차갑고 혈청이 없는 매체가 들어 있는 새 페트리 접시에 넣습니다. 젤라틴 단백질 혼합물을 얼음처럼 차가운 혈청이 없는 배지에 1:1 비율로 희석합니다.그런 다음 10 또는 20 마이크로리터의 젤라틴 단백질 혼합물로 사전 코팅된 12개의 웰 플레이트에 DRG를 생체 외 플레이트로 플레이트화합니다. 그리고 섭씨

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 분리된 마우스 DRG 조직을 사용하여 등쪽 신경절 또는 DRG 외식 배양 및 DRG 해리 세포 모델을 개발하는 방법을 보여줍니다. 이러한 모델은 통제된 환경에서 뉴런-아교세포 상호 작용이 있는 다양한 메커니즘을 연구하는 데 도움이 됩니다.

등뿌리 신경절 이식 및 해리된 세포 배양 생성

이 비디오는 마우스의 일차 소뇌 과립 뉴런에서 뉴런 손상 모델의 생성을 보여줍니다. 흥분성 신경전달물질 수용체 작용제인 NMDA와 공동 작용제인 글리신을 사용하여 신경 손상을 유도하는 데 필요한 단계를 설명합니다. NMDA와 글리신은 특정 신경 수용체에 결합하여 과도한 자극을 유발하고 세포 내 칼슘을 대량으로 유입시켜 신경 세포 손상과 사멸을 초래합니다.

Modeling Neuronal Injury in Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons(마우스 1차 소뇌 과립 뉴런의 뉴런 손상 모델링)

이 비디오는 마우스의 1차 소뇌 과립 뉴런에서 ROS(Reactive Oxygen Species)를 사용하여 뉴런 손상 모델을 생성하는 방법을 간략하게 설명합니다. 고농도의 과산화수소를 첨가하여 산화 스트레스를 유발하는 과정을 자세히 설명합니다. ROS 노출은 DNA 가닥 단절과 게놈 불안정성을 유발합니다. 또한 세포 단백질의 산화는 기능을 손상시키고 지질 과산화는 멤브레인 무결성을 손상시킵니다. 이 연쇄 반응은 사이토크롬 c 방출 및 카스파아제 활성화로 이어져 신경 세포 사멸을 초래합니다.

Modeling Reactive Oxygen Species-Induced Neuronal Death in Mouse Cerebellar Granule Neurons

세포 배양 모델은 환경 조건 위에 상세한 제어를 제공하고, 따라서 신경 세포 생물학의 다양한 양상을 명료하게 강력한 플랫폼을 제공한다. 우리는 병아리 배아에서 감각 신경을 분리 해리, 문화 할 수있는 신속하고 저렴하고 신뢰할 수있는 방법을 설명합니다. 하층 준비 및 면역 세포의 세부 사항도 제공됩니다.

병아리 배아에서 분리 및 해리 감각 뉴런의 문화

이 기사에서는, 구체적으로, 메인 마우스 신경생성 틈새에서 유래된 산후 마우스 신경 줄기 세포로부터의 신경구 배양물의 생성을 위한 프로토콜을 설명한다. 신경구는 전구체 세포 수의 추정을 허용하는 두뇌 조직에서 신경 줄기 세포를 확인하기 위하여 이용됩니다. 더욱이, 이 3D 구조물은 세포 운명의 연구 결과허용하는 신경, oligodendrocytes 및 성상 세포를 초래하는 분화한 조건에서 도금될 수 있습니다.

산후 (P1−3) 마우스 신경성 틈새에서 신경구의 격리 그리고 확장

풋패드 접종 모델은 생체 내에서 바이러스 유발 신경 염증 반응을 특성화하는 데 중요한 도구입니다. 특히, 말초 신경계에서 시작된 바이러스 운동 및 관련 면역 병리학 적 과정에 대한 명확한 평가를 제공한다.

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

여기에서는 마우스 CNS로부터 다중 신경교 세포 집단의 시험관 내 분리를 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 국소 미세아교세포, 희소돌기아교세포 전구체 세포 및 성상세포를 분리하여 다양한 배양 시스템에서 각각의 표현형을 연구할 수 있습니다.

여러 중추 신경계 영역에서 쥐 아교 세포의 해부 및 분리

우리는 신경 손상 후 후각 내성 glia (OEG) 신경 재생 능력을 평가하는 체외 모델을 제시한다. 그것은 RGN 축상 및 somatodritic 마커를 분석해서, OEG 단층 및 축 변성의 후속 연구 결과에 축축한 성인 망막 신경절 신경절 뉴런 (RGN)의 공동 문화를 기반으로합니다.

축 축 하 재생의 시험관 내 모델로, 후각 천시 글리아와 축 축 절 망막 신경의 공동 문화

이 프로토콜은 신경(면역)학 연구를 위해 배아 17일 마우스 뇌에서 중추 신경계 세포 배양을 생성하는 독특한 방법을 제시합니다. 이 모델은 RT-qPCR, 현미경, ELISA 및 유세포 분석을 포함한 다양한 실험 기술을 사용하여 분석할 수 있습니다.

감염 및 선천성 면역을 연구하기 위해 배아 쥐 뇌에서 혼합 신경 세포 및 신경교 세포 배양 확립

이 프로토콜은 피질 허혈성 뇌졸중 후 Neurod1의 바이러스 매개 이소성 발현을 설명합니다. Neurod1은 (1) 뇌졸중 후 아급성기(7일) 동안 야생형 마우스에서 Cre-Flex AAV 시스템을 사용하여 전달되고 (2) 뇌졸중 후 만성기(21일) 동안 조건부 리포터 마우스에서 단일 AAV 벡터를 사용하여 전달됩니다.

허혈성 뇌졸중 후 아급성 및 만성 시기에 형질도입된 세포에서 Neurod1의 이소성 발현을 조사하기 위한 AAV 시스템 및 마우스 모델

여기에서는 확장된 생체 외 실험을 위해 쥐의 눈에서 망막을 분리하는 자세한 방법론을 제공합니다. 이 프로토콜은 살아있는 조직에서 망막 신경교세포를 제자리 로 유지함으로써 제공되는 연구 방법을 활용하고자 하는 연구자가 기술적으로 까다로운 접근 방식에 접근할 수 있도록 하는 것을 강조합니다.

마우스 망막의 신경교세포(glial interactions)를 연구하기 위한 생체 외 이식 모델(Ex vivo Explant Model for Study Glial Interactions in the Mouse Retina)

배우세요 성인 마우스 DRG explant와 해리 세포 배양법을 이용하여 신경가소성, 신경염증 및 바이러스 감염 반응을 연구하는 방법입니다. 이 기술은 뉴런-교세포 상호작용을 조사하는 데 필수적인 장기 유사 복잡성을 유지합니다.

성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

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