Name: 해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: 배우세요 Drosophila 번데기 난소의 해부 및 염색 방법을 통해 줄기세포 분화와 조직 발달을 연구하는 기술입니다. 맞춤형 도구를 사용하여 작고 투명한 난소를 효과적으로 분리하고 분석할 수 있습니다.

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이 연구는 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다 대표이사 (RO1 GM079351). 우리는 그녀의 원래 프로토콜에 따라 번데기 난소 해에 그녀의 유용한 조언에 대 한 Dorothea 좋음 감사 합니다. 우리는 또한 그녀의 지원 및 원고에 대 한 의견에 대 한에 이미 Reilein 감사합니다.

1입니다. EggLaying
<ol><li>결합 약 10 남자와 정상적인 풍부한 비행 음식 효 모와 보충의 유리병에 원하는 유전자의 15 여성 성인 초파리 파리. 유리병과 밀을 피하기 위해, 성관계 여성 더 이상 보다 2-4 h14에 대 한 계란을 낳을 수 없습니다.</li>
	<li>비행 음식 다른 유리병에 대 한 열기는 유리병을 활용 하 여 새로운 병으로 유리병에서 성인 전송. 계란 3-4 일 동안 실 온에서 애벌레로 개발을 허용 합니다.</li>
</ol>2. 여성 애벌레를 선택
<ol><li>소프트로 촉촉한 좋은 브러시를 사용 하 여, 잘 1 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) x 가득한 테두리에 유리를 유리병에서 방황 3 탈피 애벌레를 전송 유리병의 벽을 따라 브러시와 롤링 운동을 확인 합니다. 1 x PBS 가득 잘 다른 그들을 전송 하 여 애벌레에서 음식을 파편을 씻어.</li>
	<li>남성과 여성의 애벌레 집게를 사용 하 여 구분 합니다. 남성 애벌레, 라운드, 크고 반투명 testes의 앞쪽 끝15에서 아래로 몸 약 2/3의 측면 쪽에 뚱뚱한 몸에 포함 된의 쌍을 확인 합니다. 여성 애벌레 평균에 더 큰, 남성, 보다 덜 반투명 고 훨씬 작은 생식 선을 검출 하기가 더 어렵습니다.</li>
	<li>여성 애벌레를 수집 남성 애벌레에 대 한 선택 합니다. 우물에서 적어도 10 여성을 수집 합니다. 1 x PBS 잘 가득 별도 여성 애벌레를 놓습니다.</li>
	<li>부드럽게 신선한 비행 식품의 새로운 유리병에 여성 애벌레를 전송 집게를 사용 누 룩과 보충.</li>
	<li>Pupariation16을 촉진 하기 위하여 어두운 위치에서 여성 애벌레와 유리병을 놓습니다. 하루 동안, pupariation에 대 한 애벌레를 모니터링 합니다. 각 유 충 움직이게 하 고는 prepupa로 개발 하 고, 원형 유리병에 대 한 prepupa 고 때 처음에 prepupa 형성 하는 대략적인 시간을 기록 합니다. 앞쪽 spiracles의 돌출 및 puparium 형성17의 타이밍에 의해 prepupae를 식별 합니다. Prepupae (puparium 형성, APF 후 시간 측정) 원하는 시간 정도로 개발을 허용 합니다. 참고: 약 10 h 간격 내에서 puparium 형성을 받 다 어떤 동물 든 지 여겨질 수 있다는 prepupa. 자리를 차지 하는 내부 탈피 후 번데기 단계 puparium 형성 후 약 12 h를 시작 합니다.</li>
</ol>3. 항 체 얼룩이 Pupae 준비
<ol><li>
번데기 뚱뚱한 몸을 비운 나중 단계에서 사용 되는 얇은 유리 피펫으로 형성 합니다.
	<ol>
<li>분 젠 버너에 파스퇴르 피펫으로의 유리 팁을 녹여. 유리가 녹으면 집게를 사용 하 여 얇은 팁을 피펫으로의 나머지에서 가로로 팁을.</li>
		<li>냉각 후, 깔끔한 원형 개통을 형성을 피펫으로 팁의 일부를 끊다. 전구는 피펫으로의 다른 쪽 끝에 연결 합니다.</li>
		<li>1 x PBS와 피펫으로 로드.</li>
	</ol>
</li>
	<li>유리병의 벽에 붙어 있다, pupae 수확 번데기와 유리병 사이의 접촉 영역에 따라 물 작은 방울을 적용 합니다. 단백질 수 있도록 1-2 분을 대기 접착제를 부드럽게 촉촉한 괜 찮 브러시와 벽에서 번데기를 해제 하기 전에 해산. 1 x PBS 가득 잘 유리에 번데기를 전송 합니다. 우물과 밀을 피하기 위해 번데기 당 단일 잘을 칩니다.</li>
	<li>한 쌍의 집게와 번데기의 후부 끝을 잡고, 번데기의 머리 표시 될 때까지 신중 하 게 다른 쌍 번데기 케이스의 앞쪽 부분을 눈물.</li>
	<li>집게와 번데기 머리의 앞쪽 대부분 팁을 부드럽게 당겨 번데기는 번데기 케이스에서. 참고: 뚱뚱한 몸 부분의이 과정 밖으로 유출 수 있습니다.</li>
	<li>하 고 복 부 자루만 남아 때까지 후부 반에서 번데기의 앞쪽 절반을 삭제 합니다.</li>
	<li>
복 부 자루에서 뚱뚱한 몸 세포를 추출 합니다.
	<ol>
<li>얇은 유리 피펫으로 1 x PBS 다른 손에 가득 들고 한 손에 집게와 우물의 바닥에 대 한 복 부 자루를 파악.</li>
		<li>번데기 난소 주변의 지방 신체 세포를 씻어 하 복 부에 자루와 천천히 피펫으로 1 x PBS의 개통으로 얇은 피펫으로 팁을 목표로 합니다. 참고: 난소는 한 쌍의 작은, 반투명, 전기, 및 직사각형 구조를 복 자루 안에 남아 있어야 한다.</li>
		<li>뚱뚱한 몸 세포 지방 시체의 2/3 이상 사라질 때까지 또는 난소 복 자루의 개통의 가까이 볼 수 있습니다 때까지 씻어. 그것은 매우 천천히이 단계를 실행 하는 것이 중요 사고에 의해 복 부 로부터 난소를 씻어 수 없습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>난소 뚱뚱한 몸을 셀 세척 하는 동안 밖으로 유출가지고 확인을 잘을 검사 합니다. 난소 안에 잘 볼 수 있다면, 그들은 복 부에 남아 있다 한다. 경우 난소 밖으로 서, 새로운 번데기에 잘 놓고이 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>고정 버퍼 (1 x PBS, 4 %paraformaldehyde)으로 가득 분명 coverglass 챔버로 복 부를 전송 하 고 상단에는 뚜껑을 배치. 되도록 난소의 충분 한 수 견딜 얼룩 및 장착 과정 보다 더 많은 난소를 해 부. 주의: 고정 버퍼 paraformaldehyde 독성을 포함 합니다. 적절 한 보호 장갑, 안전 안경, 등등을 착용 하십시오.</li>
</ol>4입니다. Immunohistochemistry
<ol><li>착 색 과정을 통해 집게를 사용 하 여 부드럽게 밀어 어떤 부동 난소는 덮개 유리의 바닥에 난소 항 체 솔루션에 완전히 몰입 하는 보장 하기 위해.</li>
	<li>장소는 Nutator의 평평한 표면에 양면 테이프의 스트립 하 고 연 발된 coverglass 접착 표면에 장소.</li>
	<li>실 온에서 15 분 동안 3.7 단계에서 고정 버퍼에서 난소를 품 어.</li>
	<li>난소를 씻어 3 시간 1 %1 x PBS에 Triton X-100 5, 10, 및 45 분 (총에서 1 시간), 각각, 철저 한 permeabilization 수 있도록.</li>
	<li>1 x PBS 0.5%에서 10% 정상 염소 혈 청에서 난소를 차단 30 분 대 한 트라이 톤 X-100.</li>
	<li>600에서 난소를 밤새 품 어 선택의 1 차적인 항 체의 µ L 희석 0.5%와 1 x PBS에 적절 한 농도에 4 ° c.에 트라이 톤 X-100</li>
	<li>1 x PBS 0.5%에서 3 시간 5 분 동안 난소 린스 트라이 톤 X-100.</li>
	<li>선택의 이차 항 체의 600 µ L에 2 h 0.5%와 1 x PBS에 적절 한 농도를 희석 Triton X-100 실내 온도에 대 한 난소를 품 어.</li>
	<li>1 x PBS 0.5% 트라이 톤 X-100와 1 x PBS에 5 분 동안 한 번에에서 5 분 동안 두 번 난소를 씻어.</li>
</ol>5. 해 부하 고 번데기 난소를 장착
<ol><li>현미경 슬라이드에 1 x PBS의 작은 방울을 배치 합니다. 복 부 자루에서 연 발된 coverglass 유리 잘 전송 사용 집게 1 x PBS 가득 합니다. 우물과 밀을 피하기 위해 번데기 당 단일 잘을 칩니다.</li>
	<li>찢 어 떨어져 복 부 자루 및 모든 나머지 지방 시체 집게와. 참고: 작은, 반투명, 전기, 및 직사각형 구조는, 난소는 우물 안에 표시 되어야 합니다. 난소는 종종 밀접 하 게 지방 기관에 의해 포위, 모든 뚱뚱한 몸을 철저 하 게 늘 확인 하는 것이 중요 하다 그래서 떨어져.</li>
	<li>1 x는 집게의 끝 사이 난소의 중심을 파악 하 여 슬라이드를 현미경에 PBS의 드롭에 우물에서 난소를 전송. 그것은 매우 잃을 또는 전송 하는 동안 그들을 파괴 하는 것을 그렇게 하지 않도록 난소를 압박 하지 않고 확고 한 그립을 사용 하는 것이 중요. 솔루션을 시간이 지남에 밖으로 마르면 때 슬라이드에 1 x PBS의 몇 방울을 추가 합니다.</li>
	<li>일단 모든 난소는 해 부 하 고 현미경 슬라이드, 피펫으로 40 µ L 22 x 22 mm coverslip 장소 난소 위에 부드럽게 coverslip에 장착 매체의 전송. 슬라이드 이미징 전에 하룻밤을 건조 하 게.</li>
</ol>

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<li>Zhang, Y., Xi, Y. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/open-access/fat-body-development-and-its-function-in-energy-storage-and-nutrient-sensing-in-drosophila-melanogaster-2157-7552.1000141.php?aid=36443">Fat Body Development and its Function in Energy Storage and Nutrient Sensing in Drosophila melanogaster.</a> J Tissue Sci Eng. 6 (1), (2014).</li>
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</ol>

저자는 선언 하는 관심의 없습니다 충돌 있다.

이 프로토콜의 가장 중요 하 고 어려운 단계 고정 전에 번데기 난소의 준비를 포함 한다. 작고 뚱뚱한 몸 세포 번데기 복 부 내부에 의해 묻혀 난소 항 체와 함께 충분히 스테인드은,이 뿐만 아니라 복 부 자루에 큰 여 겸 자, 함께 눈물 하지만 방해 하는 뚱뚱한 몸을 셀 추출 하는 것이 중요 합니다 항 체에서의 난소 이 단계를 성공적으로 실행 해야 복 부 자루에서 뚱뚱한 몸 세포를 세척 하는 동안 파스퇴르 피펫으로 전구에 미묘한 압력의 응용 프로그램 (예: 1-2 지방 신체 세포가이 단계 동안 초당 복 부를 떠나야 한다). 부드러운 힘을 사용 하 여 실패 가능성이 난소는 복 부와 유리에 잘 유출 될 수 있습니다. 스스로 난소, 반투명, 작고 포 셉으로 파악 하기가 어렵습니다 때문에, 그들은 전체 얼룩 절차에 걸쳐 복 부 자루 내에서 유지 되어야 합니다. 따라서, 온다면 난소는 복 부의 고정 이전 준비 단계, 그것은 매우 어려운 검색 하 여, 얼룩, 프로토콜 중 그들을 그들의 고립 된 형태로 탑재 것 것 이다.</...

줄기 세포 연구 초파리 난소를 사용 하 여 줄기 세포 틈새1,2,,34의 첫 번째 문서부터 널리 확장 했다. 개발 도구의 계보 추적 유전자 초파리 난소 해 일반적으로 줄기 세포 계보를 연구 하는 데 사용 되었습니다 다음 하 고 줄기 세포 유지, 확산, 및 운명 줄기 세포 틈새에 경로 신호. 이러한 신호 통로의 지식 탈 선 줄기 세포 활동5,,67에서 발생 하는 암의 잠재적인 원인에 대 한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 그것은 또한 최근 여 포 줄기 세포 (FSCs)로 알려진 초파리 난소에서 체세포 줄기 세포 강하게 그들의 조직8의 여러 측면에서 포유류 장 줄기 세포를 닮은 표시 되었습니다. 이러한 이유로, 초파리 난소는 줄기 세포 행동을 공부 하기 위한 매우 유용한 모델 시스템.
이른 줄기 세포 개발 및 틈새, 마지막 줄기 세포 조직에 단서를 각각 제공 하는 애벌레와 성인 난소 번데기 난소는 생식 및 체세포 재구성 및 그들의 정체성을 확립 하는 중간 구조 9 , 10. 여러 연구 번데기 난소10,11,,1213에 조직 개발의 측면 검사, 질문 남아 있다 분화와 공간 조직에 관한 난소 세포 유형 번데기 개발 중. 특히, FSCs의 규격은이 기간 동안 발생합니다. 이 프로토콜 설명 해 부하 고 원하는 시간 지점에서 번데기 난소를 얼룩이 지는 방법-성인 단계를 자세하게는 애벌레에서 번데기 난소 개발 분석 시간 과정 실험에 사용할 수 있는 기술.
작은 크기, 반투명, 및 번데기 복 부 내에서 번데기 난소의 어려움에 대 한 계정,이 프로토콜 활용 도구 주문 품 얇은 밀고 파스퇴르 피펫으로 복 부 지방을 신체 조직에 항 체 접근을 방해를 제거 하는 난소입니다. 명확 하 고, 연 발 coverglass 번데기와 락는 "Nutator"에 난소에 gentler 플랫폼의 제공 더 큰 시야를 얼룩이 지는 항 체 중에 사용 마이몬과 Gilboa14애벌레 난소 해에 대 한 프로토콜에 따라, Triton X-100의 상대적으로 높은 농도 고용 착 절차의 초기 단계에서 세포 막 permeabilization 및 항 체에 대 한 액세스를 극대화 하는 난소 세포입니다.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5 겸자, 생물학</td>, <td>Fine Scientific Tools</td>, <td>11252-20</td><td></td></tr>, <tr><td>Nunc Lab-Tek 챔버 커버 유리</td><td>, Thermo Fisher, Scientific</td><td>155383</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td>, <td>Nikon</td><td>SMZ-10A</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td>, <td>Carl Zeiss</td>, <td>LSM 700</td><td></td></tr>, <tr><td>분석 소프트웨어</td>, <td>Carl Zeiss</td>, <td>Zen</td><td></td></tr><tr><td>9 우울증 유리 스폿 플레이트</td><td>Pyrex</td><td>7220-85</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫 전구</td><td>다양한 공급 업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>분젠 버너</td><td>다양한 공급 업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fisherfinest 프리미엄 서리 현미경 슬라이드</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>22 x 22 mm 유리 커버 슬립 No 1</td><td>VWR</td><td>48366-067</td><td></td></tr><tr><td>Dapi Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-20</td><td></td></tr><tr><td>양면 테이프</td><td>스카치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>너트 클레</td><td>이 아담스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파인 브러시 #0, #3-#5</td><td>다양한 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gilson Pipetman 스타터 키트</td><td>토마스 사이언티픽</td><td>F167300</td><td>p20, p200, p1000 포함 피펫터</td></tr><tr><td>16% 파라포름알데히드</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15710</td> 1x PBS Triton Sigma-Aldrich 9002-93-1<td>에서 4% 파라포름알데히드로 희석</td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Ambion</td><td>AM9624</td><td>1x PBS</td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>5000121</td><td>0.5% Triton 농도로 PBST에서 10% 정상 염소 혈청으로 희석</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1차 항체(프로토콜: 7G10 anti-Fasciclin III 희석 1:250, 토끼 항인히스톤 H3 희석 1:1000)</td><td>다양한 공급업체(프로토콜: Developmental Studies Hybridoma Bank, Millipore)</td><td></td><td>0.5% 트리톤 농도로 PBST에 희석</td></tr><tr><td>2차 항체(프로토콜: Alexa-546, FITC-conjugated anti-rabbit serum)</td><td>다양한 공급업체(프로토콜: Molecular Probes, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.)</td><td></td><td>0.5% 트리톤 농도로 PBST에서 희석</td></tr><tr><td>플라이 바이알</td><td>Denville Scientific</td><td>V9406</td><td></td></tr><tr><td>면봉, 와이드 바이알용</td><td>Genesee Scientific</td><td>51-102W</td><td></td></tr><tr><td>효모, Bakers Dried Active</td><td>MP Biomedicals</td><td>101400</td><td></td></tr><tr><td>플라이 식품</td><td>실험실</td><td></td><td>에서 생산물, 맥주 효모, 옥수수 가루, 당밀, 한천, EtOH, 페니실린, 메틸 4- 하이드로 벤조 에이트 및 프로피온산</td></tr><tr><td>수컷 및 암컷 Drosophila의 혼합물 (프로토콜에 사용되는 유전자형 : yw; P[Fz3-RFP, w+]/TM2)</td><td>블루밍턴 초파리 주식 센터</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩

Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries

성인 초파리 난소와 달리 번데기 난소는 상대적으로 어려운 액세스 하 여 검사 때문에 그들의 작은 크기, 반투명, 번데기 케이스 내 인. 번데기 난소를 해 부의 도전 또한 번데기 내의 그들의 물리적 위치에 속 인 다: 난소 번데기 복 부 내부 지방 신체 세포로 둘러싸여 있으며, 적절 한 항 체 얼룩이 지기 수 있도록 이러한 지방 세포를 제거 해야 합니다. 이러한 문제를 해결 하려면이 프로토콜 번데기 복 부에서 지방을 신체 세포를 추출 하는 사용자 지정 된 파스퇴르 pipets를 사용 합니다. 또한, 연 발된 coverglass 대신 사용 된다 microcentrifuge 튜브 착 과정 중 번데기의 가시성을 개선 하기 위해. 그러나, 이들과 다른 장점이이 프로토콜에 사용 되는 툴,에 불구 하 고 이러한 기술의 성공적인 실행 될 수 있습니다 여전히 번데기 난소의 작은 크기로 인해 연습의 몇 일. 이 프로토콜에서 설명 하는 기술은 난소 번데기 개발의 다양 한 단계에서 분석 하는 시간 과정 실험에 적용할 수 있습니다.

이 절차의 성공적인 실행 명확한 항 체는 그 구조와 초파리 번데기 난소의 세포 조직 얼룩 발생 한다. 이 프로토콜에서 설명 Immunohistochemistry 애벌레와 성인 난소에 얼룩진 일반적으로 셀 형식을 식별 하 사용할 수 있습니다. 셀에서 파생 된 번데기 줄기의 메뚜기 세포18 (흰색에서 Fasciclin III에 의해 제시 된)는 그림 3에 표시 됩니다. 번데기 난소의 세포 조직을 강조, 이외에 (인 히스톤 H3 그림 3에서처럼 녹색 얼룩) 등 세포 증식에 얼룩이 지는 항 체를 사용할 수 있는 줄기 세포 등의 세포 분열 패턴을 공부 mitotically 현재 셀 종류입니다. 형광 항 체 신호 confocal 현미경 검사 때 약한 경우, 그것은 가능성이 난소 항 체 번데기 복 부에 있는 부족 한 뚱...

Drosophila 난소 줄기 세포 틈새 시장 개발을 공부 하는 우수한 모델 시스템입니다. 애벌레와 성인 난소를 해 부 방법 출판 되었습니다 비록 번데기 난소 해 자세히 게시 되지 않은 다른 기술이 필요 합니다. 여기 우리는 해 부, 얼룩, 번데기 난소를 장착 한 프로토콜 개요.

Unlike adult Drosophila ovaries, pupal ovaries are relatively difficult to access and examine due to their small size, translucence, and encasing within a ...

이 절차의 전반적인 목표는 초파리 번데기 난소를 절개하고 염색하는 것입니다. 이 방법은 모델 유기체인 초파리(drosophila)의 줄기세포 분화 및 조직 발달과 관련된 것과 같은 생물학 발달의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 방법으로는 분리하기 어려운 번데기 난소의 작은 크기와 반투명한 특성을 수용하기 위해 맞춤형 도구를 사용한다는 것입니다.우리는 번데기 초파리 발달 중 난소의 줄기세포 분열을 추적하기 위해 시간 경과 실험을 수행할 때 그의 방법을 사용하자는 아이디어를 가지고 있었습니다. 프로토콜을 시작하기 위해 10마리의 수컷 초파리와 15마리의 암컷 성체 초파리 파리를 효모가 보충된 정상적인 풍부한 파리 사료 바이알에 결합합니다. 알이 3-4일 동안 실온에서 유충으로 자라도록 합니다.3-4일 후, 부드러운 칫솔모가 있는 촉촉하고 고운 브러시를 사용하여 바이알 벽을 따라 브러시로 롤링 동작을 만들고, 바이알에서 방황하는 세 번째 instar 유충을 1X 인산염 완충 식염수 또는 PBS로 가장자리까지 채워진 유리 우물로 옮깁니다. 1X PBS로 채워진 다른 우물로 옮겨 유충에서 음식물 찌꺼기를 씻어냅니다. 수컷과 암컷 유충을 집게로 분리하십시오.수컷 유충은 앞쪽 끝에서 2/3 아래쪽의 측면에있는 지방체에 박혀있는 한 쌍의 큰 원형 및 반투명 고환으로 식별합니다. 그런 다음 우물에서 최소 10마리의 암컷을 모으고 암컷 유충을 1X PBS로 채워진 별도의 우물에 넣습니다. 집게를 사용하여 암컷 유충을 효모가 보충된 신선한 파리 먹이가 담긴 새 유리병에 부드럽게 옮깁니다.번데기를 용이하게 하기 위해 암컷 유충과 함께 바이알을 어두운 곳에 놓습니다. 하루 종일 유충이 번식하는지 모니터링하십시오. 각 유충이 엽엽을 형성하고 번데기 이전으로 발달함에 따라 번데기 이전을 바이알에 대고 번데기 이전에 처음 형성되는 대략적인 시간을 기록합니다.분젠 버너 위에서 페스터 피펫의 유리 끝을 녹입니다. 유리가 녹으면 집게를 사용하여 팁을 파이펫의 나머지 부분에서 수평으로 당겨 더 얇은 팁을 만듭니다. 냉각 후 피펫 팁의 작은 부분을 떼어내어 깔끔한 원형 구멍을 만듭니다.파이펫의 다른 쪽 끝에 전구를 부착하고 파이펫에 1X PBS를 로드합니다. 바이알 벽에 붙어있는 번데기를 수확하려면 번데기와 바이알 사이의 접촉 영역을 따라 작은 물방울을 바르십시오. 단백질 접착제가 1-2분 동안 녹도록

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

틈새와 줄기 세포를 개발하는 동안 양식 얼마나 실용적인 의미가있는 중요한 질문이다.

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

Drosophila Pupal의 복부 Immunohistochemistry

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 기술의 목표는 연구자들이 모든 연령의 Drosophila melanogaster에서 번데기 안구 디스크의 해부, 면역 염색 및 장착을 수행할 수 있도록 하는 것입니다.

해부와의 설치<em&gt; 초파리</em&gt; 번데기 아이 디스크

이 프로토콜에 설명된 직립 이미징 방법을 사용하면 발달 중인 Drosophila melanogaster 난자의 극을 자세히 시각화할 수 있습니다.  이 최종 보기는 여포 상피에서 여러 세포 유형의 배열과 형태에 대한 새로운 관점을 제공합니다.

의 수직 이미지<em&gt; 초파리</em&gt; 계란 챔버

진딧물 배아에 대한 전체 마운트 면역 염색 프로토콜이 제시되며, 이 프로토콜에서는 배경 염색을 줄이고 조직 투과성을 증가시키기 위한 중요한 조건을 다룹니다. 이러한 조건은 진딧물의 배아 조직에서 단백질 발현을 효과적으로 검출하기 위해 특별히 개발되었습니다.

완두콩 진딧물 태아의 면역 염색을위한 중요한 조건의 확인 : 조직 투과성을 증가 및 배경 염색을 감소

우리는 해부, 고정, 스테로이드 호르몬 생합성과 규제 메커니즘을 연구하는 초파리 유충과 성인 여성의 steroidogenic 장기의 면역 염색을위한 프로토콜을 설명합니다. steroidogenic 기관뿐만 아니라, 우리는 배아 줄기 세포로 steroidogenic 기관의 신경 분포뿐만 아니라 steroidogenic 표적 세포를 시각화.

과일 플라이의 면역 염색과 Steroidogenic 기관 및 그들의 상호 작용하는 장기를 시각화하기위한 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em

여기서, 우리는 후기 배아 초파리 남성 생식선을 생생하게 이미지화하는 데 필요한 해부 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 정상적인 조건 하에서 또는 트랜스제닉 또는 약리학적 조작 후에 동적 세포 과정의 관찰을 허용할 것이다.

후기 배아 초파리 고나드의 해부와 라이브 이미징

이 프로토콜의 목적은 Drosophila 난소에서 세포 극체 구조의 국소화 및 역학에 산화 손상의 효력을 시각화하기 위하여 살아있는 화상 진찰을 사용하는 것입니다.

라이브 이미징을 사용하여 Drosophila 계란 챔버에 산화 손상의 효과 시각화

기저막은 발달 동안 조직 및 장기 형태 형성에 필수적입니다. 이 구조의 적절한 배치로 이어지는 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해 제시된 프로토콜은 공초점 및 초분해능 현미경을 사용하여 상피 세포에서 기저막 단백질의 세포 내 밀매 및 분비를 시각화하고 특성화하는 방법을 설명합니다.

초 파리 Oogenesis 동안 양극화 된 세포 내 밀매 및 기저막 단백질의 분비의 공초점 및 수퍼 해상도 이미징

초파리는 근발생의 기본 메커니즘을 이해하는 강력한 모델입니다. 흉부 반절편 절편을 해부 및 준비하기 위한 이 프로토콜은 번데기 및 성인 단계 모두에서 간접 비행 근육의 현미경 분석을 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 세포 형태, 단백질 국소화, 근육 구조 및 근형성의 기타 여러 측면의 공초점 이미징을 가능하게 합니다.

현미경 접근을 위한 Drosophila melanogaster 간접 비행 근육의 해부

배우세요 Drosophila 번데기 난소의 해부 및 염색 방법을 통해 줄기세포 분화와 조직 발달을 연구하는 기술입니다. 맞춤형 도구를 사용하여 작고 투명한 난소를 효과적으로 분리하고 분석할 수 있습니다.

해 부와 초파리 번데기 난소의 얼룩

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