2018년 6월 6일
Intracavernosal 압력 기록 (ICP)는 실험 동물의 발기 기능을 평가 하는 중요 한 방법입니다. 여기, 상세한 프로토콜 crura 음 경 catheterizing 하 고 다음 전기 쥐 동굴 신경을 자극 하 여 ICP의 기록 절차에 대 한 설명 했다.
이 절차의 전반적인 목표는 해면체 신경을 자극한 후 해면체 해면체에 카테터를 삽입하고 해면체 내 압력을 기록하여 쥐의 발기 기능을 테스트하는 것입니다. 이 방법은 발기 부전에 대한 치료법 및 약물 평가와 같은 남성 발기 부전 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 따라서 이 기술의 1개의 이점은 직립 기능 및 반사, 발기 반응과 관련되었던 혈류량에 있는 동적인 변화에 대한 더 정확한 평가를 제공한다 입니다.
crus corpus cavernosum의 흰색 tunica albuginea의 작은 영역으로 인해 음경 crura에 바늘을 삽입하기가 어렵기 때문에 카테터 삽입을 배우기가 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 중요합니다. 수술을 준비하기 위해 해면체 내 압력 기록을 위한 한 쌍의 양극성 전극을 만듭니다. 전극의 끝을 약간 구부리고 전극 사이의 거리를 1-2mm로 조정하십시오.
그런 다음 두 개의 악어 클램프를 사용하여 전극을 자극기에 연결합니다. 다음으로 카테터 시스템을 조립합니다. 먼저 튜브를 사용하여 피하 23게이지 바늘을 3방향 마개에 연결합니다.
그런 다음 마개를 압력 변환기에 연결합니다. 다음으로 헤파린 식염수가 적재된 10ml 주사기를 마개의 세 번째 위치에 부착합니다. 그런 다음 전체 시스템에 헤파린 식염수를 채우고 누출이 있는지 확인합니다.
그런 다음 바늘을 20cm 들어 올리고 기록 시스템을 20cm의 물로 보정합니다. 보정 후 바늘의 높이를 조정하고 기록 시스템의 정확도를 확인하십시오. 필요에 따라 정확도가 확인될 때까지 보정을 반복합니다.
다음으로, 동물 시설에서 수술실로 쥐를 옮기고 최소 30분 동안 수술실에 적응할 수 있도록 합니다. 한편, 수술 도구를 70% 에탄올로 살균하고 필요한 수술 재료를 준비합니다. 30분 후 첫 번째 쥐의 수술을 준비합니다.
펜토바르비탈나트륨으로 마취하고 5-10분 동안 기다립니다. 그런 다음 쥐의 발가락을 꼬집고 반사가 없는지 확인하여 적절한 마취를 확인합니다. 다음으로, 복부와 목의 털을 면도하고 쥐를 수술 보드에 누워 놓습니다.
이제 10% 포비돈 요오드와 70% 에탄올을 3번 번갈아 가며 스크럽하여 노출된 피부를 닦습니다. 또한 안과 연고를 발라 눈이 건조해지는 것을 방지한다. 그런 다음 수술을 진행하십시오.
해면체 신경을 분리하기 전에 텍스트 프로토콜에 따라 왼쪽 경동맥을 카테터로 삽입하십시오. 한 쌍의 집게로 복부의 피부와 근육을 들어 올려 신경 격리를 시작하십시오. 그런 다음 가위로 하복부에서 음경까지 정중선을 절개합니다.
다음으로, 장을 옆으로 부드럽게 옆으로 움직여 복강 상부로 들어간다. 그런 다음 한 쌍의 집게로 방광을 잡고 복강에서 빼냅니다. 이제 요도의 복부 부분에 위치한 전립선의 복부 엽을 찾으십시오.
다음으로, 복엽, 정낭, 정관을 뽑아 전립선의 등엽을 노출시킵니다. 이제 정관과 전립선의 접착 지점을 찾으십시오. 그런 다음 전립선과 정관 사이의 공간을 분리하십시오.
전립선과 정관의 접합점 뒤쪽에 위치한 섬유낭을 조심스럽게 노출시켜 진행합니다. 그런 다음 전립선 표면에 위치한 주요 골반 신경절과 해면체 신경을 찾으십시오. 이제 면봉이나 티슈 페이퍼로 해면체 신경 부위를 조심스럽게 말린 다음 조심스럽게 해면체 신경을 분리하고 양극성 전극으로 연결하십시오.
수술을 계속하려면 절개 가위로 음경 피부를 작게 절개한 다음 음경 샤프트의 피부를 조심스럽게 벗겨냅니다. 그런 다음 줄무늬가 있는 음경 근육 조직을 해부할 수 있을 만큼 충분한 조직을 노출시킵니다. 이제 치골의 위쪽 가지를 찾으십시오.
그런 다음 해면구를 덮고 있는 구근 해면근을 노출시킵니다. 다음으로, 구부러진 집게를 사용하여 구근 해면근과 ischiocavernosus 근육을 나눕니다. ischiocavernosus 근육을 조심스럽게 분리하여 진행합니다.
그런 다음 ischiocavernosus 근육을 잘라 crus corpus cavernosum의 흰색 tunica albuginea를 노출시킵니다. 이제 카테터 삽입을 수행합니다. 조심스럽게 crus corpus cavernosum의 해부학적 방향을 따르고 cavernosum에 흰색 tunica albuginea를 통해 바늘을 부드럽게 삽입합니다.
바늘의 위치는 수술 성공에 매우 중요하므로 테스트로 소량의 헤파린 식염수를 주입합니다. 이것은 바늘이 올바르게 삽입된 경우 약간의 음경 종양을 초래해야 합니다. 다음으로, 바늘의 위치를 변경하거나 연결 튜브를 방해하지 않고 바늘을 조심스럽게 놓습니다.
그런 다음 해당 지역에 누출이 있는지 검사합니다. 아무 것도 발견되지 않으면 신경을 자극하고 데이터를 분석합니다. 설명된 ICP 기록 검사는 발기 기능에 대한 잠재적 치료 또는 약물의 효과를 정량화하는 데 도움이 되도록 발기 기능이 있는 노화된 쥐를 구별하는 데 사용되었습니다.
발기 기능 장애 그룹의 일반적인 ICP 반응 곡선은 대조군의 곡선보다 훨씬 낮았습니다. 일반적으로 통계 분석을 위해 가장 높은 ICP가 선택되었습니다. 평균 동맥압에 대한 ICP의 비율을 계산한 후, 5마리의 쥐에서 수집한 데이터는 고령 그룹의 비율이 대조군에 비해 유의하게 감소한 것을 보여주었습니다.
이 두 가지 주요 매개 변수 외에도 피크 ICP, 고원 ICP, detumescence 시간, 반응 기간 및 곡선 아래 면적은 모두 노화 된 쥐에서 크게 감소했기 때문에 데이터는 발기 기능을 반영하는 정량적 측정으로 가득 차 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 동물에 대한 ICP 기록을 효율적으로 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차를 시도하는 동안 캐뉼라관이 막히지 않도록 하기 위해 헤파린을 사용하는 것을 기억하는 것이 중요하다는 것을 잊지 마십시오.
이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 약 2시간 안에 완료할 수 있습니다.
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본 논문은 발기 기능을 평가하기 위해 쥐의 음경해면체내압(ICP)을 측정하는 상세 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 음경해면체각에 카테터를 삽입하고 해면체 신경을 전기적으로 자극하는 과정을 포함합니다.
설치류의 해면체 내압(ICP) 측정은 발기 기능에 대한 정량적이고 생리학적으로 유의미한 평가를 제공하며, 이를 통해 전임상 발기부전(ED) 연구에서 치료 후보 물질의 기전 평가가 가능해집니다. 이 방법은 발기 반응 기전을 반영하는 동적인 혈역학적 데이터를 제공함으로써 타겟 검증 및 리드 물질 발굴을 지원하고, 대리 지표에 대한 의존도를 낮춥니다. 이러한 측정법을 발굴 워크플로우에 통합하면, 후기 단계 연구로 진행하기 전 발기부전 치료제의 위험 요소를 제거하는 데 있어 예측 신뢰도를 높일 수 있습니다.
ICP 기록은 타겟 검증부터 리드 화합물 발굴, 전임상 효능 시험에 이르는 발견 연속체(discovery continuum)의 범위에 포함되며, ED 치료제 개발의 진행 여부(go/no-go) 결정을 뒷받침하는 혈역학적 표현형 분석을 제공합니다.