Name: 생선 정자 평가 소프트웨어를 사용 하 여 및 냉각 장치 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: 학습하세요 어류 정자 품질 평가를 위한 CASA 기술과 냉각 장치 활용 방법을. 저온 환경에서 정자 운동성을 정량 분석하여 수산 양식의 인공 수정 성공률을 높이는 연구 기법입니다.

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이 프로젝트 비용 협회 로부터 자금 받았다 (음식과 농업 비용 액션 FA1205: AQUAGAMETE, 그리고 유럽 연합의 지평선 2020 연구와 혁신 프로그램 마리 Sklodowska-퀴리 아래 프로젝트 감동 (GA 없음 642893). 우리는 특히 학생에 게는 알베르토 벤드 렐 베르나,이 프로젝트의 비디오 기록에 그의 적극적인 참여에 대 한 PROiSER의 과학 팀에 게 감사 하 고 싶습니다.

절차와 관련 된 동물 주제 되었습니다 승인 (2015/VSC/완두콩/00064) 농업 생산 및 가축 Universitat Politècnica de València에서의 일반적인 방향으로.
1. 포로에서 성숙한 유럽 뱀장어에서 정자 수집
참고: 사용 유럽 장 어 남성 해 수와 일정 온도 (20 ° C)에서 재순환 시스템 탱크에서 유지. (인간의 융 생식 샘 자극 호르몬 (hCG), 물고기 몸 무게의 g 당 1.5 IU) 주간 복 주사를 통해 호르몬 치료. 해 수와 교체 뒤 점차 시작 3 일 민물 물고기 순응 (탱크에서 총 수의 1/3) 37.0 g/mL의 염 분을 도달할 때까지 매 2 일.
<ol><li>더 나은 품질의 정자 샘플을 얻기 위해 호르몬 주사 후 24 h 장 어를 anesthetize.<ol>
<li>사전에 마 취 준비: 70% 에탄올 100ml에 benzocaine의 300 밀리 그램을 추가. 잘 혼합 하 고 4 ° c.에 저장</li>
		<li>60 mg/L의 최종 농도 고 제대로 혼합 시스템 물 5 l 유연한 버킷에서 benzocaine를 희석.</li>
		<li>Benzocaine와 시스템 물 양동이에 물고기를 전송 합니다. 물고기는 진정 될 때까지 몇 분 정도 기다립니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>물으로 음부를 선택을 취소 하 고 정자 샘플 대변, 소변 또는 바닷물의 오염을 피하기 위하여 흡수 성 종이 함께 건조.</li>
	<li>복 부 지역에 부드러운 압력을 적용 하 고 15 mL 플라스틱 튜브 진공 펌프를 사용 하 여 정자 샘플을 수집. 정자 볼륨 남성에 따라 최대 6-7 mL.</li>
	<li>운동 성 분석 실시 될 때까지 적어도 1 시간에 4 ° C에서 정자 샘플을 유지.</li>
</ol>2. 냉동 및 정자 샘플을 희석
<ol><li>Diluter 솔루션을 미리 준비 합니다. 참고: 각 종족에 대 한 특정 extender 솔루션 정자 샘플을 희석 한다.<ol>
<li>장 어 정자 샘플 (P1 매체)에 대 한 비-활성 제 매체를 준비 합니다. 나트륨 중 탄산염, 염화 나트륨, 염화 마그네슘, 염화 칼륨 및 증류수 250 mL를 염화 칼슘의 0.037 g 0.56 g의 0.127 g의 1.828 g의 0.42 g을 추가 합니다. 믹스 잘 분해 하. 4 ° c.에 게</li>
	</ol>
</li>
	<li>일정 한 온도에서 샘플을 유지 하기 위해 4 ° C에서 쿨러 블록을 설정 합니다. 온도 안정화 될 때까지 기다립니다.</li>
	<li>사용 하 여 각 종족에 대 한 diluter 솔루션 특정 정자 샘플을 희석. 참고: 희석 비율 특정 종족 이며, 표준화 프로토콜을 정의 합니다. 첫째, 정자 농도 3, 4 단계에 설명 된 대로 소프트웨어를 사용 하 여 운동 성의 사전 분석에서 얻은 농도에 따라 예상 됩니다. 이 분석, 그것은 또한 운동 성의 비율에 따라 최고의 정자 샘플을 선택할 수입니다. 이 후, 연구원 최고의 샘플을 사용 하 여 정확한 농도와 실험에 대 한 데이터 수집을 시작할 수 있습니다.<ol>
<li>1시 50분의 비율로 P1 매체에서 장 어 정자 샘플을 희석. 500 µ L 희석 장 어 정자의 준비, 신선한 정자 샘플의 50 µ L과 p 1의 450 µ L를 추가 합니다. 잘 믹스.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 평가 정자 운동 성 매개 변수
<ol><li>
설정 소프트웨어의 운동 성 모듈
	<ol>
<li>4 ° C에서 쿨러 무대를 설정 하 고 안정 될 때까지 기다립니다.</li>
		<li>소프트웨어를 오픈 하 고 운동 성 모듈을 선택 합니다. 필요한 경우 사용자 이름 및 암호를 만듭니다.</li>
		<li>속성 을 선택 하 고 정자 분석을 시작 하기 전에 원하는 매개 변수를 선택 합니다.<ol>
<li>종 클릭 | 물고기.</li>
			<li>각 종족에 대 한 최고의 기술 조건에 따라 초당 프레임 및 이미지 번호를선택 합니다. 초당 120 이미지에서 두 옵션을 설정 합니다.</li>
			<li>네거티브 대비를 선택 합니다. 그것은 정 충 궤도16의 정확한 개조에 대 한 필수입니다.</li>
			<li>해당 계산 챔버 와 비디오 카메라의 규모 를 선택 합니다. 실험에 사용 된 확대 렌즈에 대 한 비디오 카메라를 보정. 세 실으로 SpermTrack10 및 10 X 규모를 설정 합니다. 참고: 일반적으로, 세 실에서 10 µ m의 깊이 10 X의 확대 렌즈는 권장된 조건 때문에 그들은 모든 정 충의 더 나은 초점을 제공 하 고 세포의 가장 높은 번호를 캡처. 그러나, 각 종족의 운동 성 분석에 대 한 최적의 조건의 이전 연구를 확인 하는 것이 좋습니다.</li>
			<li>각 종족에 대 한 입자 영역 및 연결 을 조정 합니다. 2 µ m2 와 7 µ m에서 연결 최소 입자 영역을 설정 합니다. 참고: 물고기, 2-5 µ m, 연결 사이 입자 영역 범위의 최소 값에 따라 다릅니다 정 충 속도 및 프레임 속도.</li>
			<li>설정을 저장 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>캡처를 선택 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
소프트웨어와 함께 유럽 장 어 정자를 분석
	<ol>
<li>25 ml 증류수 2 %BSA 상업 소금 0.946 g를 추가 하 여 활성 솔루션 (인공 해 수)를 준비 합니다.</li>
		<li>활성 솔루션 (인공 해 수)의 500 mL 고 쿨러 블록에. 참고: 일반적으로, 생선 정자 활성화 됩니다 삼투성 충격 이벤트, 일부 수 종에 대 한 이온 농도 또한 중요할 수 있지만. 담 수 종, 활성 매체 있어야 당뇨 osmolality 동안 해양 종 매체 고 해야 합니다.</li>
		<li>냉각 단계 아래 세 챔버를 넣고 온도 4 ° c.에 안정화 될 때까지 기다립니다</li>
		<li>활성 제와 희석된 정자 정 충을 활성화 하 고 운동 성 비디오 활성화 후 5-10 s 사이 녹화 시작을 섞는다.<ol>
<li>세 실에서 활성 솔루션 및 장소 4 µ L를 가져가 라.</li>
			<li>부드럽게 정 충 세포에 손상을 방지 하는 microcentrifuge 3 번 흔들어 희석된 정자 균질.</li>
			<li>희석의 0.5 µ L를가지고, 활성기를 함께 혼합 하 고 신속 하 게 계산 챔버에 커버를 넣어. 참고:이 단계 5 개 이상 걸리지 않을 겁니다 최대한 빨리 분석을 시작 하는 s.</li>
			<li>정 충 세포에 집중 하 고 최고의 시각적 영역, 정 충 (150 ~ 200 셀)을 피하기 위해 셀 (보충 그림 1A) 사이의 차단의 낮은 수에 의해 정의 됩니다. 속도 따라 구분 되는 정 충 트랙을 캡처 비디오 를 선택 합니다.</li>
			<li>결과에서 낮은 변화 하기 전에 진행 하는 최적의 간격을 3 ~ 7 필드를 캡처 를 선택 합니다. 세 실의 표지에 응축을 피하기 위하여 120 s 후 정품 인증까지 기록 영화.</li>
			<li>출구 는 모든 분야의 일반적인 보기를 선택 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 운동 데이터를 얻기
<ol><li>필드를 선택 | 부분 | 저장 파일 이름을 선택 하 고. 저장을 클릭 합니다. 참고: 스프레드시트 부분 데이터, 차트 및 정 충 트랙의 이미지의 평균값을 제공합니다.</li>
	<li>일반 데이터 선택 | 파일 이름 | 저장. 참고: 데이터를 개별 정 충의 모든 필드에 대 한 운동 값을 제공합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜에서 사용 하는 정자 분석 소프트웨어 사용 되었습니다 연구자에 의해 전세계 물고기를 포함 하 여 다른 종족에 대 한. 그러나, 생선 몇 가지 특정 기능을 정자 평가 영향을 미칠 수 있다. 물고기 정 충 신속 하 게 거부 하 고 활성화 후 운동 성의 짧은 시간에 지도 활성화의 순간에 높은 속도 보여주었다. 게다가, 재생산의 온도 종 종속적 이며, 어떤 경우에 약 4 ° C2,4,,812수 있습니다. 따라서, 그것은 생선 정자 분석을 위한 컴퓨터 시스템의 효율성을 개선 하기 위해 몇 가지 적응을 만들 필요가 있다. 운동 성 매개 변수의 기본 원리 수집 및 운동 정 충의 연속 이미지의 분석 이다. 대부분의 시스템 하드웨어 및 소프트웨어17,</s...

생식의 효능 두 gametes (계란과 정자)1,2의 품질에 따라 달라 집니다. 이 성공적인 수정, 허용 가능한 자손3,4의 개발에 기여 하는 주요 요소입니다. 배우자 품질의 편리한 평가 표본의 불 임 가능성을 정의 하기 위한 최고의 도구입니다.
여러 남성에서 정자를 혼합 많은 수생 상업 종4의 생산에 있는 관행 이다. 그러나, 남성 사이 정자 가변성 정자 경쟁으로 이어질 수 있습니다 그리고, 따라서, 모든 남성 동등에 기여 하는 유전자5. 이런이 의미에서 개별 정액/정 충 등의 기능 운동, 올바른 평가 잠재적인 개별 남성 불 임에 대 한 차별적인 정보를 얻기 위해 기본적 이다. 정자의 운동 성의 직접 관찰 시간과 경험, 일관성의 부족, 결과6,7의 호환성 요구 하는 때 부정확 하 고 주관적인 데이터를 생성할 수 있습니다. 그러나, 믿을 수 있는 정자 품질 분석2,4를 제공할 수 있는 많은 혁신적이 고 신속한 양적 기술이 있다.
컴퓨터 기반 정자 분석 정자 품질8에 대 한 정확한 데이터를 제공 하기 위해 개발 되었다. 이 기술은 위상 대비 현미경 정자 운동 성 평가 수와 관련 된 소프트웨어의 개발을 포함 합니다. 그러나, 운동 성 매개 변수의 제한 요소 비디오 카메라의 프레임 속도입니다. 개별 정 충 정 충을 기반으로하는 궤도 머리 중심 위치 연속 프레임에서 비디오 녹화의 flagellar 운동 패턴3,,910, 와 상관 11. 주요 운동 매개 변수 측정은 직선 속도 (VSL), 곡선 속도 (VCL)와 평균 경로 속도 (VAP). VSL 시작과 끝점 시간으로 나눈 정 충에 의해 촬영 사이의 거리입니다. 소스는 정 충에 의해 정확한 궤적을 따라 실제 속도입니다. VAP 궤적의 파생된 매끄러운된 경로 따라 속도입니다. 이러한 매개 변수는 선형성 (린), 직진도 (STR), 동요 (WOB) 및 측면 머리 운동 (ALH)와 비트 크로스 주파수 (BCF)4,10의 진폭 같은 박동 측정을 포함 한 추가 운동 정보를 수 있습니다.
정자 분석 시스템은 원래 포유류 종, 사용 되 고 시스템에 대 한 요구 사항 중 하나는 기증자 (약 37 ° C)의 온도에서 동작 하는 것입니다. 물고기 종;이 소프트웨어를 사용하실 수 있습니다. 비록, 그것은 정자 분석 결과의 오류를 줄이기 위해 몇 가지 적응을 만들 필요가 있다. Salmonids 등 장 어8,12, 일부 어 종에 수정 낮은 온도 (약 4 ° C)2,4에 발생합니다. 따라서, 냉각 장치 불편 한 작업 조건을 피하기 위해 개발 되어야 한다. 또한, 물고기 정 충은 정액에서 운동 하 고는 삼투성 충격 운동 성 활성화에 필요한. 담 수 종, 활성 매체 있어야 당뇨 osmolality 동안 해양 종 매체 고 해야 합니다. 그러나, 일부 종 salmonids로 이온 농도 또한 수 있습니다 중요 한3,,49. 활성화 후 생선 정자 운동 성 (2 분 미만)13,14 및 신뢰할 수 있는 데이터15를 최적의 프레임 속도 결정 하는 중요 한 되 고 높은 속도의 급속 한 감소에 의해 특징입니다.
이 연구의 목표는 디자인 생선 정자 샘플에 대 한 냉각 시스템을 적용 하는. 또한,이 프로토콜에는 종에 따라 표준 프로토콜의 설립에 대 한 최적의 프레임 속도 확인 하는 방법을 정의 합니다. 이 프로토콜을 사용 하는 모델로 유럽 장 어를 사용 하 여 물고기 정액 평가의 맥락에서 새로운 문을 엽니다.

<table><tbody><tr><td>인간 융모성 성선 자극 호르몬</td><td>Argent Chemical Laboratories</td><td>hCG</td><td>호르몬</td></tr><tr><td>Benzocaine</td><td>Merck</td><td>E1501 시그마</td> 마<td>취</td></tr><tr><td>중탄산 나트륨</td><td>Merck</td><td>S5761 Sigma&nbsp;</td><td>P1 미디엄</td></tr><tr><td>나트륨 염화</td>물 <td>Merck</td><td>1.06406 EMD Millipore</td><td>P1 중간</td></tr><tr><td>마그네슘 염화</td>물 <td>Merck</td><td>1374248 USP</td><td>P1 중간</td></tr><tr><td>칼륨 염화</td>물 <td>Merck</td><td>P3911-500G</td><td>P1 중간</td></tr><tr><td>칼슘 염화</td>물 <td>Merck</td><td>C7902-500G</td><td>P1 중간</td></tr><tr><td>상업용 소금</td><td>Aqua Medic&nbsp;</td><td>Meersalz</td><td>액티베이터 솔루션&nbsp;</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Merck</td><td>05470 시그마</td><td>액티베이터 솔루션&nbsp;</td></tr><tr><td>Falcon 튜브 15 ml</td><td>Merck</td><td>T1943-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 튜브</td>는 <td>Merck</td><td>R5651-5EA</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorfs</td><td>Merck</td><td>T9661-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>Micropipet 20 &micro를 지원합니다; l</td><td>길슨</td><td>PIPETMAN&reg; 클래식</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 10 &마이크로; l</td><td>Merck</td><td>Z683787-1EA</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 20 &마이크로용 팁; l</td><td>Merck</td><td>Z740030-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 10 &micro를 위한 팁; l</td><td>Merck</td><td>Z740028-2000EA</td><td></td></tr><tr><td>Spermtrack</td><td>PROiSER</td><td>카운팅 챔버</td><td></td></tr><tr><td>TruMorph</td><td>PROiSER</td><td>TruMorph</td><td></td></tr><tr><td>현미경 UB 200i 시리즈</td><td>PROiSER</td><td>현미경</td><td></td></tr><tr><td>쿨러 플레이트</td><td>PROiSER</td><td></td><td>프로토 타입</td></tr><tr><td>쿨러 블록</td><td>PROiSER</td><td></td><td>프로토 타입</td></tr><tr><td>ISAS v1</td><td>PROiSER</td><td>ISAS</td><td>소프트웨어</td></tr></tbody></table>

생선 정자 평가 소프트웨어를 사용 하 여 및 냉각 장치

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

배우자 품질 평가 대 한 양식 업에 대 한 유용한 데이터를 제공할 수 있는 혁신적이 고 빠른, 양적 기술이 있다. 정자 분석을 위한 전산화 시스템 여러 매개 변수를 측정 하기 위해 개발 되었다 이며 가장 일반적으로 측정의 한 정자 운동 성.
처음, 그것은 또한 물고기 정자 분석에 사용할 수 있지만이 컴퓨터 기술 포유류 종, 위해 설계 되었습니다. 물고기는 정자 평가 짧은 운동 시간 활성화 후, 경우에 따라 낮은 온도 적응에 영향을 미칠 수 있는 특정 기능을가지고 있습니다. 따라서, 그것은 보다 효율적으로 운동 성 분석 생선 정자 분석을 위한 소프트웨어 및 하드웨어 구성 요소를 수정 하는 데 필요한입니다. 포유류 정자에 대 한 난방 격판덮개는 정 충의 최적의 온도 유지 하는 데 사용 됩니다. 그러나, 일부 어 종에 대 한 그것은 유리를 사용 하 여 낮은 온도 때문에 정자 2 분 미만 대 한 활성 상태로 유지 운동의 기간을 연장. 따라서, 냉각 장치는 일정 온도에서 샘플 분석, 광학 현미경에 포함 하 여의 시간 동안 냉장 보관 하는 데 필요한. 이 프로토콜 물고기 정자 운동 성 정자 분석을 위한 소프트웨어를 사용 하 여 및 새로운 냉각 장치를 최적화 하는 결과의 분석을 설명 합니다.

정자의 운동 성에 시간 효과의 분석
유럽 장 어의 경우 정적 정 충의 비율 15에서 증가 120 s s 후 활성화 (24.4%에서 40.7%), 그리고 모바일 진보적인 정 충의 비율 감소 (36.9%에서 20.9%) (그림 1A 그리고 1B). 속도에 따라, 정 충 세포 감소 (그림 1C 및 1d) 시간이 지남에 속도 감소를 보였다. 빠른 속도와 정 충의 비율 (26.6% 49.4%)에서 약 23% 감소 하 고 정 충 중간 속도 비율이 약 7% 증가.
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현재 프로토콜 물고기 정자 평가 정자 컴퓨터 기반 분석을 사용 하 여 및 냉각 장치에의 한 절차를 설명 합니다. 소프트웨어는 신속, 정확 및 재생산 성공을 개선 하 양식 업에 유용한 도구가 될 수 있는 정 충 운동에 따라 생선 정자 품질의 정량 분석을 제공 합니다.

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...

이 절차의 주요 목표는 성공적인 인공 수정에 기여하기 위해 정자 운동성을 기반으로 물고기의 정자 품질을 분석하는 것입니다. 저는 발렌시아 대학의 교수이자 PROiSER R+D의 과학 책임자인 Carles Soler 박사입니다. 저는 임프레스 프로젝트(Impress Project)의 펠로우십인 카리나 칼데이라(Carina Caldeira)입니다.CASA 기술은 컴퓨터 보조 정액 분석을 사용하여 포유류 종의 정액 분석을 위해 수십 년 전에 개발되었습니다. 물고기의 경우 두 가지를 고려해야 합니다. 첫 번째는 이 동물들이 일반적으로 약 4도의 저온에서 수정된다는 사실이며, 이러한 이유로 가정 온도에서 정액을 분석하는 것은 불가능하지만 샘플을 냉장하기 위한 특정 도구를 개발하는 데 필요합니다.또 다른 문제는 활성화 후 운동성이 매우 빠르게 감소한다는 것인데, 이 사실을 분석하여 품질 또는 정액의 품질을 분석하기 위한 좋은 순간이 무엇인지 정의해야 합니다. 그래서 우리는 물고기 정자에 대한 분석을 보여줄 것이고, 이 프로토콜은 포유류 프로토콜의 수정이 될 것이며, 다음을 사용하여 운동성 분석을 포함할 것입니다. 물고기는 호르몬 주사를 위해 마취되고 정자 샘플은 24시간 후에 수집됩니다.오염을 방지하기 위해 생식기 부위를 청소합니다. 정자는 부드러운 압력을 가하여 채취됩니다. 정자 샘플은 운동성 분석이 수행될 때까지 4도로 유지됩니다.희석제와 활성제는 미리 준비되어 있습니다. 냉각기 블록을 4도로 설정하여 샘플을 일정한 온도로 유지합니다. 안정될 때까지 기다리십시오.각 종에 대한 특정 희석제를 사용하여 정자 샘플을 희석합니다. 유럽 뱀장어의 경우 정자는 P1 배지에서 1:50의 비율로 희석됩니다. 500마이크로리터의 희석된 정자를 준비하고 450마이크로리터의 P1과 50마이크로리터의 신선한 정자 샘플을 추가합니다.잘 섞는다. 활성제 용액의 aliquarter를 가져 와서 쿨러 블록에 놓습니다. 쿨러 스테이지를 4도로 설정합니다.안정될 때까지 기다리십시오. motility module을 선택하고 필요한 경우 이름과 암호를 사용합니다. 속성을 선택합니다.species를 클릭하고 fish를 선택합니다. 초당 프레임과 사용할 이미지 수를 선택합니다. 음의 대비를 사용해야 합니다.해당 계수 챔버와 스케일을 선택합니다. 각 종에 대해 입자 면적과 연결성을 조정합니다. 유럽 뱀장어의 경우 최소 입자 면적은 2이고 연결성은 7이어야 합니다.구성을 저장합니다. 캡처 열기를 클릭합니다. 4마이크로리터의 활성제 용액을 챔버에 넣습니다.희석된 정자를 잘 균질화합니다. 5마이크로리터의 정자를 취하여 활성제와 혼합합니다. 덮개를 놓습니다.샘플에 초점을 맞추고 최상의 시각적 영역을 찾습니다. 비디오 캡처를 선택하여 속도에 따라 분리된 정자 트랙을 얻습니다. 더 많은 필드를 캡처할 수 있습니다.캡처를 선택하고 이전과 같이 진행합니다. exit를 클릭하여 모든 필드의 일반 보기를 가져옵니다. 정자 채취는 활성화 후 특정 시간 간격으로 수행되었습니다.그러나, 정자 분석은 각 시간 간격 복제에 대해 수행되었다. 각 시간 간격에 대한 부분 보고서는 필드를 선택하고 부분을 클릭하여 얻을 수 있습니다. Excel 시트는 부분 데이터, 차트 및 정자 발자국 이미지의 평균값을 제공합니다.다른 필드에 대해서도 동일한 절차를 반복합니다. 다른 옵션은 일반 데이터입니다. 이러한 데이터는 모든 분야의 개별 정자에 대한 운동 값을 제공합니다.부분 보고서를 사용하면 파이 차트를 사용하여 서로 다른 시간에 대한 백분율 운동성과 진행률을 즉시 비교할 수 있습니다. 일반 데이터는 운동 매개변수를 사용하여 여러 통계 분석을 얻을 수 있는 옵션을 제공합니다. 정자 추적은 세 가지 매개변수를 제공합니다.VCL, 곡선 속도, VSL, 누진 속도 및 VAP, 경로 속도. VCL은 가장 중요한 매개변수이며 초당 프레임 수에 따라 변경됩니다. 프레임 수를 늘리면 VCL도 증가하여 거의 완벽에 가까운 트랙 분석이 가능합니다.최상의 프레임 속도는 종에 따라 다를 수 있습니다. 목표는 VCL의 가장 높은 값을 찾는 것이며, 그 후 계수 챔버와 같은 다른 도구와의 잠재적 차이를 관찰할 수 있습니다. 하위 모집단은 현재 정자 샘플에 대한 더 많은 정보를 제공하는 중요한 통계 분석입니다.이것은 대서양 연어 정자 샘플의 예입니다. 다른 정자 하위 개체군은 포로 상태에서 생산된 다른 세대에서 관찰될 수 있습니다. 우리는 물고기 정자 분석을 위해 컴퓨터 시스템을 사용하는 방법과 계수 챔버, 온도 및 프레임 속도와 같은 기술적, 방법론적 측면을 최적화하는 방법을 보여주었습니다.따라서 이 데이터를 통해 양식뿐만 아니라 보존 프로그램, 계통 발생 연구 또는 정자 개체군에 대한 지식을 늘리기 위해 어류 사육과 같은 다양한 분야에서 많은 분석을 수행할 수 있습니다. 따라서 이 프로토콜이 귀하의 학업에 도움이 되기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이것은 zebrafish에 대한 높은 처리량 정자 cryopreservation 프로토콜입니다. 정자는이 프로토콜을 사용하면 이후의 체외 수정에 25 % 다산의 평균을 가지고 있으며, 수년 동안 안정 cryopreserved.

높은 처리량 Zebrafish의 정자 Cryopreservation에 대한 방법과 체외에서 수정

달걀 주위에 계란과 세포외 코팅 자주 정자와 통신이이를 수정을 홍보 계란 그들을 안내하는 것을 펩티드, 단백질, 작은 분자를 놓습니다. 정자의 누적 assays와 정자 추적 assays - 우리가 정자 chemoattraction를 감지하는 데 사용되는 assays 두 가지 클래스를 설명하고 비교 개구리 정자를 사용하여.

감지 개구리 정자 Chemoattraction에 대한 Assays 두 종류의

유세포 분석을 사용하여 마우스 정자에 대한 정렬 전략을 설명합니다. 정자류는 둥글게(정자형성 단계 1-9), 초기신장(정자형성 단계 10-12), 후기신장(정자형성 단계 13-14) 및 길쭉한 정자류(정자형성 단계 15-16)를 포함하여 4개의 매우 순수한 개체군으로 분류됩니다. DNA 염색, 크기 및 입도는 선택 매개변수로 사용됩니다.

단계 별 마우스 정자의 정렬을 유동 세포 계측법에 의해

유럽 장 어 성숙 및 정자 cryopreservation 프로토콜 지난 수 년에 걸쳐 개선 되었습니다. 이 문서는 성숙과 메탄올 cryoprotectant로 유도 대 한 인간의 융 생식 샘 자극 호르몬 (hCG)을 사용 하 여 사용할 수 있는 최상의 프로토콜을 설명 합니다.

처리와 치료의 남성 유럽 뱀장어 (앵귈라 앵귈라) 호르몬 성숙 및 정자 Cryopreservation

여기, 우리는 spermatozoan 막 무결성, 정자의 수정 능력와 관련 된 세포 기능을 평가 하는 방법론을 제시. 우리 정자 세포 막의 fluorimetric 평가 대 한 세 가지 기술에 설명: 특정 형광 프로브, 형광 현미경 검사 법, 그리고 고급 정자 전용 cytometry 동시 얼룩. 방법론을 결합의 예제도 제공 됩니다.

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