2018년 7월 28일
현재 프로토콜 물고기 정자 평가 정자 컴퓨터 기반 분석을 사용 하 여 및 냉각 장치에의 한 절차를 설명 합니다. 소프트웨어는 신속, 정확 및 재생산 성공을 개선 하 양식 업에 유용한 도구가 될 수 있는 정 충 운동에 따라 생선 정자 품질의 정량 분석을 제공 합니다.
이 절차의 주요 목표는 성공적인 인공 수정에 기여하기 위해 정자 운동성을 기반으로 물고기의 정자 품질을 분석하는 것입니다. 저는 발렌시아 대학의 교수이자 PROiSER R+D의 과학 책임자인 Carles Soler 박사입니다. 저는 임프레스 프로젝트(Impress Project)의 펠로우십인 카리나 칼데이라(Carina Caldeira)입니다.
CASA 기술은 컴퓨터 보조 정액 분석을 사용하여 포유류 종의 정액 분석을 위해 수십 년 전에 개발되었습니다. 물고기의 경우 두 가지를 고려해야 합니다. 첫 번째는 이 동물들이 일반적으로 약 4도의 저온에서 수정된다는 사실이며, 이러한 이유로 가정 온도에서 정액을 분석하는 것은 불가능하지만 샘플을 냉장하기 위한 특정 도구를 개발하는 데 필요합니다.
또 다른 문제는 활성화 후 운동성이 매우 빠르게 감소한다는 것인데, 이 사실을 분석하여 품질 또는 정액의 품질을 분석하기 위한 좋은 순간이 무엇인지 정의해야 합니다. 그래서 우리는 물고기 정자에 대한 분석을 보여줄 것이고, 이 프로토콜은 포유류 프로토콜의 수정이 될 것이며, 다음을 사용하여 운동성 분석을 포함할 것입니다. 물고기는 호르몬 주사를 위해 마취되고 정자 샘플은 24시간 후에 수집됩니다.
오염을 방지하기 위해 생식기 부위를 청소합니다. 정자는 부드러운 압력을 가하여 채취됩니다. 정자 샘플은 운동성 분석이 수행될 때까지 4도로 유지됩니다.
희석제와 활성제는 미리 준비되어 있습니다. 냉각기 블록을 4도로 설정하여 샘플을 일정한 온도로 유지합니다. 안정될 때까지 기다리십시오.
각 종에 대한 특정 희석제를 사용하여 정자 샘플을 희석합니다. 유럽 뱀장어의 경우 정자는 P1 배지에서 1:50의 비율로 희석됩니다. 500마이크로리터의 희석된 정자를 준비하고 450마이크로리터의 P1과 50마이크로리터의 신선한 정자 샘플을 추가합니다.
잘 섞는다. 활성제 용액의 aliquarter를 가져 와서 쿨러 블록에 놓습니다. 쿨러 스테이지를 4도로 설정합니다.
안정될 때까지 기다리십시오. motility module을 선택하고 필요한 경우 이름과 암호를 사용합니다. 속성을 선택합니다.
species를 클릭하고 fish를 선택합니다. 초당 프레임과 사용할 이미지 수를 선택합니다. 음의 대비를 사용해야 합니다.
해당 계수 챔버와 스케일을 선택합니다. 각 종에 대해 입자 면적과 연결성을 조정합니다. 유럽 뱀장어의 경우 최소 입자 면적은 2이고 연결성은 7이어야 합니다.
구성을 저장합니다. 캡처 열기를 클릭합니다. 4마이크로리터의 활성제 용액을 챔버에 넣습니다.
희석된 정자를 잘 균질화합니다. 5마이크로리터의 정자를 취하여 활성제와 혼합합니다. 덮개를 놓습니다.
샘플에 초점을 맞추고 최상의 시각적 영역을 찾습니다. 비디오 캡처를 선택하여 속도에 따라 분리된 정자 트랙을 얻습니다. 더 많은 필드를 캡처할 수 있습니다.
캡처를 선택하고 이전과 같이 진행합니다. exit를 클릭하여 모든 필드의 일반 보기를 가져옵니다. 정자 채취는 활성화 후 특정 시간 간격으로 수행되었습니다.
그러나, 정자 분석은 각 시간 간격 복제에 대해 수행되었다. 각 시간 간격에 대한 부분 보고서는 필드를 선택하고 부분을 클릭하여 얻을 수 있습니다. Excel 시트는 부분 데이터, 차트 및 정자 발자국 이미지의 평균값을 제공합니다.
다른 필드에 대해서도 동일한 절차를 반복합니다. 다른 옵션은 일반 데이터입니다. 이러한 데이터는 모든 분야의 개별 정자에 대한 운동 값을 제공합니다.
부분 보고서를 사용하면 파이 차트를 사용하여 서로 다른 시간에 대한 백분율 운동성과 진행률을 즉시 비교할 수 있습니다. 일반 데이터는 운동 매개변수를 사용하여 여러 통계 분석을 얻을 수 있는 옵션을 제공합니다. 정자 추적은 세 가지 매개변수를 제공합니다.
VCL, 곡선 속도, VSL, 누진 속도 및 VAP, 경로 속도. VCL은 가장 중요한 매개변수이며 초당 프레임 수에 따라 변경됩니다. 프레임 수를 늘리면 VCL도 증가하여 거의 완벽에 가까운 트랙 분석이 가능합니다.
최상의 프레임 속도는 종에 따라 다를 수 있습니다. 목표는 VCL의 가장 높은 값을 찾는 것이며, 그 후 계수 챔버와 같은 다른 도구와의 잠재적 차이를 관찰할 수 있습니다. 하위 모집단은 현재 정자 샘플에 대한 더 많은 정보를 제공하는 중요한 통계 분석입니다.
이것은 대서양 연어 정자 샘플의 예입니다. 다른 정자 하위 개체군은 포로 상태에서 생산된 다른 세대에서 관찰될 수 있습니다. 우리는 물고기 정자 분석을 위해 컴퓨터 시스템을 사용하는 방법과 계수 챔버, 온도 및 프레임 속도와 같은 기술적, 방법론적 측면을 최적화하는 방법을 보여주었습니다.
따라서 이 데이터를 통해 양식뿐만 아니라 보존 프로그램, 계통 발생 연구 또는 정자 개체군에 대한 지식을 늘리기 위해 어류 사육과 같은 다양한 분야에서 많은 분석을 수행할 수 있습니다. 따라서 이 프로토콜이 귀하의 학업에 도움이 되기를 바랍니다.
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이 프로토콜은 컴퓨터 보조 정자 분석(CASA) 및 냉각 장치를 통한 어류 정자 품질 평가 방법을 설명합니다. 이는 수산 양식에서 정자 운동성의 신속하고 정확한 평가를 제공하여 번식 성공률을 높이는 것을 목표로 합니다.
Accurate assessment of fish sperm motility is critical for optimizing artificial fertilization in aquaculture breeding programs. Computer-assisted sperm analysis (CASA) combined with temperature-controlled cooling devices enables rapid, quantitative evaluation of sperm quality under physiologically relevant low-temperature conditions. This approach supports predictive confidence in gamete viability and reduces biological risk in reproductive workflows for species with short motility windows.
The method integrates into aquaculture reproductive pipelines by providing motility data that informs gamete selection, breeding decisions, and conservation strategies.