Enrichment of Bacterial Lipoproteins and Preparation of N-terminal Lipopeptides for Structural Determination by Mass Spectrometry

Krista M. Armbruster; Timothy C. Meredith

doi:10.3791/56842

세균성 단백질 질량 분석에 의하여 구조 결심에 대 한 N 맨끝 Lipopeptides의 준비의 농축

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Immunology and Infection

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Enrichment of Bacterial Lipoproteins and Preparation of N-terminal Lipopeptides for Structural Determination by Mass Spectrometry

세균성 단백질 질량 분석에 의하여 구조 결심에 대 한 N 맨끝 Lipopeptides의 준비의 농축

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10:59 min

May 21, 2018

DOI: 10.3791/56842-v

Krista M. Armbruster¹, Timothy C. Meredith¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology,Pennsylvania State University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

비 이온 계면 활성 제 단계 분할 메서드를 사용 하 여 세균성 단백질의 농축 TLR 분석 실험에 직접 사용 또는 다른 응용 프로그램에 대 한 설명 합니다. 추가 단계 구조 특성에 대 한 N 맨끝 tryptic lipopeptides를 준비 하는 질량 분석에 의해 자세히 나와 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 직접 적용을 위해 박테리아 세포에서 지단백질을 추출하고 MALDI-TOF 질량 분석법에 의한 구조 분석을 위해 N-말단 리포펩타이드를 추가로 준비하는 것입니다. 이 방법은 지단백질의 N 말단 구조가 Toll-like 수용체 인식 및 신호에 영향을 미쳐 숙주의 면역 반응에 영향을 미치기 때문에 면역학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 고유한 장점은 선택적이지만 의도적인 나트륨 부가물 형성이며, 이는 진단용 디하이드로알라닐 이온으로의 단편화를 촉진하여 지단백질의 아실화 상태의 구조적 할당을 돕습니다.

15 밀리리터의 트립틱 콩 육수 또는 이와 유사한 풍부한 매체에서 박테리아를 후기 기하급수적으로 성장시킵니다. Tris-buffered saline EDTA 또는 TBSE로 한 번 세척하기 전에 원심분리로 세포를 수확합니다. 1밀리몰 PMSF와 0.5밀리리터당 밀리리터 라이소자임으로 800마이크로리터의 TBSE에 세포를 재현탁합니다.

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